Name: identification of nucleolar factors during hiv-1 replication through rev immunoprecipitation and mass spectrometry
Uploaded: 2019-06-26T12:30:00
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저자는 국립 보건원 (NIH) 에이즈 연구 및 참조 시약 프로그램, 에이즈의 부서, 알레르기 및 전염성 의 국립 연구소에서 제공하는 HLfB 준수 문화에 대한 박사 바바라 K. 펠버와 박사 조지 N. 파블라키스를 인정 질병 (NIAID), NIH. 저자는 또한 NIH, 그랜트 AI042552 및 AI029329에서 제공하는 금융 소스를 인정합니다.

1. 세포 배양
<ol><li>Dulbecco의 수정된 독수리 배지(DMEM)에 10% 태아 소 혈청(FBS), 2 mML-글루타민, 1 mMM 나트륨 피루브산을 조직 배양 처리된 100 mm 플레이트 내에 보충하여 HLfB를 유지합니다. 5% CO2와 함께 공급되는 가습 된 인큐베이터에서 세포배양을 37 °C로 유지하십시오. 1 x 106 세포 / mL의 세포 밀도로 통로 결합 셀.</li>
	<li>세포 배양 배지를 폐기한다. 1x 인산완식염수린(PBS)의 10 mL로 ?...

<ol>
	<li>Arizala, J. A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleolar+Localization+of+HIV-1+Rev+Is+Required,+Yet+Insufficient+for+Production+of+Infectious+Viral+Particles.">Nucleolar Localization of HIV-1 Rev Is Required, Yet Insufficient for Production of Infectious Viral Particles.</a> AIDS Research and Human Retroviruses. , (2018).</li><li>Li, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+B23+is+an+important+human+factor+for+the+nucleolar+localization+of+the+human+immunodeficiency+virus+protein+Tat.">Protein B23 is an important human factor for the nucleolar localization of the human immunodeficiency virus protein Tat.</a> Journal of Virology. 71, 4098-4102 (1997).</li><li>Szebeni, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleolar+protein+B23+stimulates+nuclear+import+of+the+HIV-1+Rev+protein+and+NLS-conjugated+albumin.">Nucleolar protein B23 stimulates nuclear import of the HIV-1 Rev protein and NLS-conjugated albumin.</a> Biochemistry. 36, 3941-3949 (1997).</li><li>Truant, R., Cullen, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+arginine-rich+domains+present+in+human+immunodeficiency+virus+type+1+Tat+and+Rev+function+as+direct+importin+beta-dependent+nuclear+localization+signals.">The arginine-rich domains present in human immunodeficiency virus type 1 Tat and Rev function as direct importin beta-dependent nuclear localization signals.</a> Molecular and Cellular Biology. 19, 1210-1217 (1999).</li><li>Eirin-Lopez, J. M., Frehlick, L. J., Ausio, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+evolution+and+functional+diversification+in+the+members+of+the+nucleophosmin/nucleoplasmin+family+of+nuclear+chaperones.">Long-term evolution and functional diversification in the members of the nucleophosmin/nucleoplasmin family of nuclear chaperones.</a> Genetics. 173, 1835-1850 (2006).</li><li>Frehlick, L. J., Eirin-Lopez, J. M., Ausio, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+nucleophosmin/nucleoplasmin+family+of+nuclear+chaperones.">New insights into the nucleophosmin/nucleoplasmin family of nuclear chaperones.</a> BioEssays. 29, 49-59 (2007).</li><li>Okuwaki, M., Matsumoto, K., Tsujimoto, M., Nagata, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Function+of+nucleophosmin/B23,+a+nucleolar+acidic+protein,+as+a+histone+chaperone.">Function of nucleophosmin/B23, a nucleolar acidic protein, as a histone chaperone.</a> FEBS Letters. 506, 272-276 (2001).</li><li>Szebeni, A., Olson, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleolar+protein+B23+has+molecular+chaperone+activities.">Nucleolar protein B23 has molecular chaperone activities.</a> Protein Science. 8, 905-912 (1999).</li><li>Hingorani, K., Szebeni, A., Olson, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+the+functional+domains+of+nucleolar+protein+B23.">Mapping the functional domains of nucleolar protein B23.</a> Journal of Biological Chemistry. 275, 24451-24457 (2000).</li><li>Borer, R. A., Lehner, C. F., Eppenberger, H. M., Nigg, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Major+nucleolar+proteins+shuttle+between+nucleus+and+cytoplasm.">Major nucleolar proteins shuttle between nucleus and cytoplasm.</a> Cell. 56, 379-390 (1989).</li><li>Yun, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleophosmin/B23+is+a+proliferate+shuttle+protein+associated+with+nuclear+matrix.">Nucleophosmin/B23 is a proliferate shuttle protein associated with nuclear matrix.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 90, 1140-1148 (2003).</li><li>Savkur, R. S., Olson, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preferential+cleavage+in+pre-ribosomal+RNA+byprotein+B23+endoribonuclease.">Preferential cleavage in pre-ribosomal RNA byprotein B23 endoribonuclease.</a> Nucleic Acids Research. 26, 4508-4515 (1998).</li><li>Herrera, J. E., Savkur, R., Olson, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ribonuclease+activity+of+nucleolar+protein+B23.">The ribonuclease activity of nucleolar protein B23.</a> Nucleic Acids Research. 23, 3974-3979 (1995).</li><li>Grisendi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+nucleophosmin+in+embryonic+development+and+tumorigenesis.">Role of nucleophosmin in embryonic development and tumorigenesis.</a> Nature. 437, 147-153 (2005).</li><li>Itahana, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+suppressor+ARF+degrades+B23,+a+nucleolar+protein+involved+in+ribosome+biogenesis+and+cell+proliferation.">Tumor suppressor ARF degrades B23, a nucleolar protein involved in ribosome biogenesis and cell proliferation.</a> Molecular Cell. 12, 1151-1164 (2003).</li><li>Ye, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleophosmin/B23,+a+multifunctional+protein+that+can+regulate+apoptosis.">Nucleophosmin/B23, a multifunctional protein that can regulate apoptosis.</a> Cancer Biology &amp; Therapy. 4, 918-923 (2005).</li><li>Kuo, M. L., den Besten, W., Bertwistle, D., Roussel, M. F., Sherr, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-terminal+polyubiquitination+and+degradation+of+the+Arf+tumor+suppressor.">N-terminal polyubiquitination and degradation of the Arf tumor suppressor.</a> Genes &amp; Development. 18, 1862-1874 (2004).</li><li>Kuo, M. L., den Besten, W., Thomas, M. C., Sherr, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arf-induced+turnover+of+the+nucleolar+nucleophosmin-associated+SUMO-2/3+protease+Senp3.">Arf-induced turnover of the nucleolar nucleophosmin-associated SUMO-2/3 protease Senp3.</a> Cell Cycle. 7, 3378-3387 (2008).</li><li>Horn, H. F., Vousden, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer:+guarding+the+guardian.">Cancer: guarding the guardian.</a> Nature. 427, 110-111 (2004).</li><li>Grisendi, S., Mecucci, C., Falini, B., Pandolfi, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleophosmin+and+cancer.">Nucleophosmin and cancer.</a> Nature Reviews Cancer. 6, 493-505 (2006).</li><li>Dingwall, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleoplasmin+cDNA+sequence+reveals+polyglutamic+acid+tracts+and+a+cluster+of+sequences+homologous+to+putative+nuclear+localization+signals.">Nucleoplasmin cDNA sequence reveals polyglutamic acid tracts and a cluster of sequences homologous to putative nuclear localization signals.</a> The EMBO Journal. 6, 69-74 (1987).</li><li>Fankhauser, C., Izaurralde, E., Adachi, Y., Wingfield, P., Laemmli, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+complex+of+human+immunodeficiency+virus+type+1+rev+and+nucleolar+B23+proteins:+dissociation+by+the+Rev+response+element.">Specific complex of human immunodeficiency virus type 1 rev and nucleolar B23 proteins: dissociation by the Rev response element.</a> Molecular and Cellular Biology. 11, 2567-2575 (1991).</li><li>Valdez, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+nuclear+and+nucleolar+localization+signals+of+the+protein+p120.+Interaction+with+translocation+protein+B23.">Identification of the nuclear and nucleolar localization signals of the protein p120. Interaction with translocation protein B23.</a> Journal of Biological Chemistry. 269, 23776-23783 (1994).</li><li>Li, Y. P., Busch, R. K., Valdez, B. C., Busch, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C23+interacts+with+B23,+a+putative+nucleolar-localization-signal-binding+protein.">C23 interacts with B23, a putative nucleolar-localization-signal-binding protein.</a> European Journal of Biochemistry/FEBS. 237, 153-158 (1996).</li><li>Adachi, Y., Copeland, T. D., Hatanaka, M., Oroszlan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleolar+targeting+signal+of+Rex+protein+of+human+T-cell+leukemia+virus+type+I+specifically+binds+to+nucleolar+shuttle+protein+B-23.">Nucleolar targeting signal of Rex protein of human T-cell leukemia virus type I specifically binds to nucleolar shuttle protein B-23.</a> Journal of Biological Chemistry. 268, 13930-13934 (1993).</li><li>Szebeni, A., Herrera, J. E., Olson, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+nucleolar+protein+B23+with+peptides+related+to+nuclear+localization+signals.">Interaction of nucleolar protein B23 with peptides related to nuclear localization signals.</a> Biochemistry. 34, 8037-8042 (1995).</li><li>Tsuda, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleolar+protein+B23+interacts+with+Japanese+encephalitis+virus+core+protein+and+participates+in+viral+replication.">Nucleolar protein B23 interacts with Japanese encephalitis virus core protein and participates in viral replication.</a> Microbiology and Immunology. 50, 225-234 (2006).</li><li>Ning, B., Shih, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleolar+localization+of+human+hepatitis+B+virus+capsid+protein.">Nucleolar localization of human hepatitis B virus capsid protein.</a> Journal of Virology. 78, 13653-13668 (2004).</li><li>Lee, S. J., Shim, H. Y., Hsieh, A., Min, J. Y., Jung, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+core+interacts+with+the+host+cell+nucleolar+protein,+nucleophosmin+1.">Hepatitis B virus core interacts with the host cell nucleolar protein, nucleophosmin 1.</a> Journal of Microbiology. 47, 746-752 (2009).</li><li>Huang, W. H., Yung, B. Y., Syu, W. J., Lee, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+nucleolar+phosphoprotein+B23+interacts+with+hepatitis+delta+antigens+and+modulates+the+hepatitis+delta+virus+RNA+replication.">The nucleolar phosphoprotein B23 interacts with hepatitis delta antigens and modulates the hepatitis delta virus RNA replication.</a> Journal of Biological Chemistry. 276, 25166-25175 (2001).</li><li>Li, Y. J., Macnaughton, T., Gao, L., Lai, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA-templated+replication+of+hepatitis+delta+virus:+genomic+and+antigenomic+RNAs+associate+with+different+nuclear+bodies.">RNA-templated replication of hepatitis delta virus: genomic and antigenomic RNAs associate with different nuclear bodies.</a> Journal of Virology. 80, 6478-6486 (2006).</li><li>Yang, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+and+characterization+of+nucleolin+and+its+identification+as+a+transcription+repressor.">Purification and characterization of nucleolin and its identification as a transcription repressor.</a> Molecular and Cellular Biology. 14, 6068-6074 (1994).</li><li>Sarek, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleophosmin+phosphorylation+by+v-cyclin-CDK6+controls+KSHV+latency.">Nucleophosmin phosphorylation by v-cyclin-CDK6 controls KSHV latency.</a> PLoS Pathogens. 6, 1000818 (2010).</li></ol>

HIV-1의 존재 에서 Rev-NoLS 돌연변이 및 WT Rev를 비교한 질량 분광 분석은 바이러스 복제 주기에서 관련시킨 뉴클레오요인을 이해하기 위하여 평가되었다. 이것은 바이러스성 감염에 필요한 핵성분을 확인할 것입니다. 뉴클레올러 B23은 Rev-NoLS에 대한 높은 친화력을 가지며, 레브-바운드 HIV mRNAs22의레브-NoLS 및 뉴클레오라국소화 및 뉴클레오세포국질 수송에서의 기능을 가지고 있다.<...

핵약은 바이러스 복제에 필요한 다양한 세포 숙주 및 바이러스 인자의 상호 작용 접지로 가정됩니다. 핵소종은 세 개의 서로 다른 구획으로 세분화된 복잡한 구조입니다: 섬유실, 조밀한 섬유실 및 과립 구획. HIV-1 Rev 단백질은 특히 세분화된 구획 내에서 국소화됩니다. 그러나 이 지역화 패턴에 대한 이유는 알 수 없습니다. NoLS 서열(Rev 돌연변이 4, 5 및 6) 내의 단일 점 돌연변이가 있는 경우, Rev는 뉴클레올러 패턴을 유지하고 이전에 HIV-1HXB2 복제를 구출하는 것으로 나타났지만 WT Rev 1에 비해 효율성이 감소했습니다. . 모든 단점 돌연변이는 HIV-1NL4-3 전염주기를 지탱할 수 없습니다. NoLS 서열(Rev-NoLS 돌연변이 2 및 9) 내에서 다중 단일 점 돌연변이의 존재에서, Rev는 핵 및 세포질 전반에 걸쳐 분산되는 것으로 관찰되었으며HIV-1HXB2 복제 1을 구출할 수 없었다. 이 proteomics 연구 결과의 목표는 Rev 중재한 HIV-1 전염하는 통로에서 관련시킨 비핵구세포 세포 요인 뿐만 아니라 핵을 해독하는 것입니다. 레브 면역 침전 조건은 이전에 뉴클레오체 돌연변이의 존재하에서 Rev와의 상호 작용을 잃는 것으로 나타난 뉴클레올러 B23 인단백질과의 상호작용을 통해 최적화된다.
레브 세포 요인은 광범위하게 과거에 공부하고있다; 그러나, 이것은 바이러스성 병인의 부재에서 행해졌습니다. 특히, HIV-1 복제 시 레브 상호작용을 통한 본 연구에서 특징인 단백질 중 하나는 핵포포스민(NPM), 누마티스민 또는 NO38이라고도 불리는 핵포단백질 B23이며, 양서류 2, 3, 4. B23은 3개의 이소폼(NPM1, NPM2 및 NPM3)-핵공포증/핵샤페론 패밀리의 모든 구성원5,6으로표현된다. NPM1 분자 샤페론은 크로마틴 고차 구조에 관여하는 단백질/핵산 복합체의 형성에서 뉴클레오좀의 적절한조립에서 기능7,8,및 응집 방지 및 N-말단 코어 도메인(잔기 1-120)을 통해 표적 단백질의오실링(잔기 1-120)을 9. NPM1 기능은 핵과 세포질 사이의 프리보솜 입자의 수송을 통해 리보솜 기원으로 확장10,11,내부 전사 스페이서 서열에서 프리보솜 RNA의 처리 도 12,13,리보좀 어셈블리 동안 단백질의 뉴클레오체 응집을 체포14,15. NPM1은 세포자멸(16)의 억제및 종양 억제제 ARF17,18 및 p5319의안정화에 연루되어, 종양발생 인자 및 종양 억제제로서의 이중적 역할을 드러낸다. NPM1은 게놈 안정성, 중심도 복제 및 전사의 세포 활동에 참여한다. NPM1은 유사분열 동안 염색체 주변을 따라 세포 주기 간, 유사분열의 결론에 있는 프리뉴클레오체 체(PNB)에서 발견된다. NPM2 및 NPM3는 악성 20 동안 변경된 발현 수준을 겪는NPM1로 잘 연구되지 않습니다.
NPM1은 내부 NES 및 NLS9,21을 통해 다양한 핵/뉴클레오라단백질의 핵세포질 차단에 문서화되어 있으며 이전에 HIV-1 Tat 및 Rev 단백질의 핵 수입을 유도하는 것으로 보고되었다. B23 결합-도메인-β-갈락토시다아제 융합 단백질의 존재하에서, Tat는 세포질 내의 국소화하고 과활성화 활성을 잃는다; 이것은 B23 2에 대한 Tat의강한 친화력을 보여줍니다. 또 다른 연구는 RRE 함유 mRNA의 부재에 있는 Rev/B23 안정한 복합체를 설치했습니다. RRE mRNA의 존재에서, 레브는 B23로부터 해리되고 바람직하게는 HIV RRE에 결합하여, B2322의변위를 이끌어 내다. 그것은 어디 알 수 없습니다., 핵 수준에서, Tat 트랜스 활성화 및 HIV mRNA에 대 한 B23의 Rev 교환 프로세스가 일어나는. 두 단백질은 B23 상호 작용을 통해 동시에 핵균을 입력하는 가정. HIV 뉴클레올러 경로에서 다른 숙주 세포 단백질의 참여가 예상된다. 이 proteomics 조사에 기술된 방법은 HIV-1 병인성 도중 관련시킨 호스트 세포 요인과 핵소동의 상호 작용을 설명하는 것을 도울 것입니다.
프로테오믹스 조사는 HIV-1HXB2 생산을 위한 Rev NoLS 단점 돌연변이 (M4, M5 및 M6) 및 다중 아르기닌 치환 (M2 및 M9)의 발현을 통해 시작되었다. 이 모델에서, Rev 결핍 HIV-1 HXB2(HLfB)를 안정적으로 발현하는 HeLa 세포주들은 3' 말단에 플래그 태그를 함유하는 WT Rev 및 Rev 뉴클레올라 돌연변이로 형질이 된다. WT Rev의 존재는 레브 결핍(M2 및 M9)을 구출하지 않는 Rev-NoLS 돌연변이에 비해 HLfB 배양물에서 바이러스 복제가 발생하도록 허용하거나, 바이러스 복제가 WTRev(M4, M5 및 M6)만큼 효율적이지는 않지만 발생하도록 허용한다 1. 세포 용해는 Rev 발현의 존재에서 바이러스 증식 후 48 시간 후에 수집되고 Rev/B23 상호작용에 최적화된 용해 완충액으로 면역 침전을 행하였다. 다양한 염 농도를 이용한 용해 완충최적화가 설명되고, HIV-1 Rev에 대한 단백질 용출 방법을 은염색 또는 쿠마시 스테인드 SDS-PAGE 겔로 비교 및 분석한다. 첫번째 proteomics 접근은 탠덤 질량 분광법에 의하여 표현된 WT Rev, M2, M6 및 M9에서 용출된 견본의 직접적인 분석을 관련시킵니다. WT Rev, M4, M5 및 M6의 용출액이 겔 추출 과정을 거치는 제2 접근법은 제1 접근법과 비교된다. 펩티드 친화성은 WT 레브에 비해 Rev-NoLS 돌연변이에 대한 단백질 동정 확률이 표시된다. 이 접근은 HIV-1 mRNA 수송에 참여하고 HIV-1 복제 도중 Rev를 가진 접합하는 잠재적인 요인 (핵소와 비핵볼라)를 밝힙니다. 전반적으로, 기술된 세포 용해, IP 및 용출 조건은 감염경로를 활성화하고 조절하는 숙주 세포 인자의 이해를 위해 관심 있는 바이러스 성 단백질에 적용가능하다. 이것은 또한 다양한 질병 모델의 지속성에 필요한 세포 숙주 인자의 연구에 적용 가능하다. 이 프로테오믹스 모델에서, HIV-1 Rev IP는 B23 상호작용에 최적화되어 핵세포질 차단 활성 및 HIV-1 mRNA 결합에 관여하는 핵세포 인자를 해명한다. 추가적으로, 관심 있는 중요한 단백질을 위한 결핍되는 감염성 질병 모형을 안정적으로 표현하는 세포주는 관심있는 감염통로를 공부하기 위하여 HLfB 세포주와 유사하게, 개발될 수 있습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:964px;" width="964">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">Acetic acid</td>
			<td style="width:321px;">Fisher Chemical</td>
			<td style="width:119px;">A38S-212</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">Acetonitrile</td>
			<td style="width:321px;">Fisher Chemical</td>
			<td style="width:119px;">A955-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">Acrylamide:Bisacrylamide</td>
			<td style="width:321px;">BioRad</td>
			<td style="width:119px;">1610158</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">Ammonium bicarbonate</td>
			<td style="width:321px;">Fisher Chemical</td>
			<td style="width:119px;">A643-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">Ammonium persulfate</td>
			<td style="width:321px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">7727-54-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">ANTI-Flag M2 affinity gel</td>
			<td style="width:321px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">A2220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">anti-Flag M2 mouse monoclonal IgG</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F3165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">BioMax MS film</td>
			<td style="width:321px;">Carestream</td>
			<td style="width:119px;">8294985</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:357px;">Bio-Rad Protein Assay Dye Reagent Concentrate, 450 mL</td>
			<td style="width:321px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:119px;">5000006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">B23 mouse monoclonal IgG</td>
			<td style="width:321px;">Santa Cruz Biotechnologies</td>
			<td style="width:119px;">sc-47725</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">Bromophenol blue</td>
			<td style="width:321px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">B0126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">Carnation non-fat powdered milk</td>
			<td style="width:321px;">Nestle</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">Cell scraper</td>
			<td style="width:321px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">179693PK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">C18IonKey nanoTile column</td>
			<td style="width:321px;">Waters</td>
			<td>186003763</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Corning 100-mm TC-treated culture dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dithiothreitol</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>J1539714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">1 x DPBS</td>
			<td style="width:321px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">21-030-CVRS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">ECL Estern blotting substrate</td>
			<td style="width:321px;">Pierce</td>
			<td style="width:119px;">32106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">Ethanol, 200 proof</td>
			<td style="width:321px;">Fisher Chemical</td>
			<td style="width:119px;">A409-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">FBS</td>
			<td style="width:321px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">16000044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">Formic Acid</td>
			<td style="width:321px;">Fisher Chemical</td>
			<td style="width:119px;">A117-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">GelCode blue stain reagent</td>
			<td style="width:321px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:119px;">24590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">Glycerol</td>
			<td style="width:321px;">Fisher Chemical</td>
			<td style="width:119px;">56-81-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">goat-anti-mouse IgG-HRP</td>
			<td style="width:321px;">Santa Cruz Biotechnologies</td>
			<td style="width:119px;">sc-2005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">Iodoacetamide</td>
			<td style="width:321px;">ACROS Organics</td>
			<td style="width:119px;">122270050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">KimWipe delicate task wiper</td>
			<td style="width:321px;">Kimberly Clark Professional</td>
			<td style="width:119px;">34120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">L-glutamine</td>
			<td style="width:321px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">25030081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">Methanol</td>
			<td style="width:321px;">Fisher Chemical</td>
			<td style="width:119px;">67-56-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">NanoAcuity UPLC</td>
			<td style="width:321px;">Waters</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">Pierce Silver Stain Kit</td>
			<td style="width:321px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">24600df</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">15-mL Polypropylene conical tube</td>
			<td style="width:321px;">Falcon</td>
			<td style="width:119px;">352097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">Prestained Protein Ladder, 10 to 180 kDa</td>
			<td style="width:321px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">26616</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">Protease inhibitor cocktail</td>
			<td style="width:321px;">Roche</td>
			<td style="width:119px;">4693132001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">Purified BSA</td>
			<td style="width:321px;">New England Biolabs</td>
			<td style="width:119px;">B9001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">PVDF&#160; Western blotting membrane</td>
			<td style="width:321px;">Roche</td>
			<td style="width:119px;">3010040001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">Sodium Pyruvate</td>
			<td style="width:321px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">11360070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">10 x TBS</td>
			<td style="width:321px;">Fisher Bioreagents</td>
			<td style="width:119px;">BP2471500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">TEMED</td>
			<td style="width:321px;">BioRad</td>
			<td style="width:119px;">1610880edu</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">Triton X-100 detergent solution</td>
			<td style="width:321px;">BioRad</td>
			<td style="width:119px;">1610407</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trizaic source</td>
			<td style="width:321px;">Waters</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">trypsin-EDTA</td>
			<td style="width:321px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">25-051-CIS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">Tween 20</td>
			<td style="width:321px;">BioRad</td>
			<td style="width:119px;">1706531</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">Synapt G2 mass spectrometer</td>
			<td style="width:321px;">Waters</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">Whatman filter paper</td>
			<td style="width:321px;">Tisch Scientific</td>
			<td>10427813</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification of nucleolar factors during hiv-1 replication through rev immunoprecipitation and mass spectrometry

HIV-1 전염주기는 바이러스 복제, 포장 및 방출을 촉진하기 위해 호스트 인자와의 바이러스 성 단백질 상호 작용을 필요로합니다. 전염주기는 더 접합을 통제하고 뉴클레오세포 수송을 가능하게 하기 위하여 HIV-1 RNA를 가진 바이러스성/호스트 단백질 복합체의 대형을 요구합니다. HIV-1 Rev 단백질은 인트로닉 시스-연기 표적-레브 반응 요소(RRE)를 가진 다중 병합을 통해 HIV-1 mRNAs의 핵 수출을 달성한다. 핵국화 신호(NoLS)는 레브 아르기닌이 풍부한 모티프(ARM)의 COOH 말단 내에 존재하며, 핵소체내의 Rev/RRE 복합체의 축적을 허용한다. 핵균 요인은 mRNA 독립적인 핵 수출 및 접합을 중재하는 것 이외에 각종 그밖 기능을 통해 HIV-1 전염주기를 지원하기 위하여 추측됩니다. 우리는 질량 분광법을 위한 HIV-1 복제의 존재에 있는 Rev 뉴클레올라 돌연변이 (삭제 및 단점 Rev-NoLS 돌연변이)에 비교된 야생형 (WT) Rev의 면역 침전 방법을 기술합니다. 뉴클레오세포 인자 (뉴클레오포스민 B23 및 뉴클레오린 C23)뿐만 아니라 세포 접합 인자에 연루된 핵세포 인자는 Rev-NoLS 돌연변이의 존재에서 Rev와의 상호 작용을 잃게된다. snoRNA C/D 상자 58와 같은 각종 그밖 핵포 요인은, Rev 돌연변이와의 상호 작용을 분실하기 위하여 확인됩니다, 그러나 HIV-1 복제 주기에 있는 그들의 기능은 알려지지 않은 남아 있습니다. 여기에 제시된 결과는 HIV-1 전염주기를 유지하는 바이러스성/호스트 뉴클레올라 요인의 확인을 위한 이 접근의 사용을 보여줍니다. 이 접근에 사용된 개념은 연구되지 않은 통로의 특성화를 요구하는 그밖 바이러스성 및 질병 모형에 적용가능합니다.

Rev-NoLS 단일 및 다중 점 아르기닌 돌연변이, 다양한 세포 국소화 패턴에 대응하는, WT Rev. Rev-3'flag 및 pcDNA-flag에 비해 세포 숙주 인자와 상호 작용하는 능력에서 조사되었다. 벡터는 HLfB 배양체로 발현되었다. 단백질 복합체는 총 세포 포해액에서 처리하고 은 얼룩 시약으로 염색되었습니다. Rev-NoLS-3'flag는 도1에서 NaCl(137 mM, 200 mM, 및 300 mM)의 다양한 농도를 포함하는 3가?...

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Identification of Nucleolar Factors During HIV-1 Replication Through Rev Immunoprecipitation and Mass Spectrometry

여기에서 우리는 질량 분광법을 위한 HIV-1 복제의 존재에 있는 Rev 면역 침전을 기술합니다. 기재된 방법은 HIV-1 감염 주기에 관여하는 뉴클레올러 인자의 식별을 위해 사용될 수 있으며, 연구되지 않은 경로의 특성화를 위한 다른 질병 모델에 적용가능하다.

레브 면역 침전 및 질량 분광법을 통한 HIV-1 복제 중 핵균 요인 식별

The HIV-1 infectious cycle requires viral protein interactions with host factors to facilitate viral replication, packaging, and release. The infectious ...

우리의 프로토콜은 HIV-1 전염성 주기를 유지하는 바이러스성, 뉴클레오및 비뉴클레오라 숙주 인자의 식별 및 특성화를 위한 대체 방법을 제공합니다. 이 접근법에 사용된 개념은 연구되지 않은 통로의 특성화를 요구하는 그밖 바이러스성 및 질병 모형에 적용됩니다. 문제 해결 기술은 다른 단백질 모델의 변형을 위해 설명됩니다.절차를 시연하는 것은 하이탕 리와 프리차나 Chomchan, 희망의 도시에 있는 베크만 연구소에 분자 및 세포 생물학 부의 과학자, 그리고 로저 무어, 희망 의 도시 Proteomics 코어및 분자 면역학의 부의 일원일 것입니다. HLfB를 3개, 100mm 배양 판에서 밀리리터당 2배-10-6세포-세포-밀도로 안정적으로 발현하는 HLfB를 성장시킴으로써 시작하십시오. 세포가 적절한 농도에 도달하면, 15 밀리리터 튜브에 TE 79/10의 1.76 밀리리터와 관심의 3-주요 플래그 돌연변이를 포함하는 플라스미드의 20 마이크로그램을 혼합하고, 철저한 혼합과 함께 2개의 어금니 칼슘 염화칼슘240 마이크로리터를 첨가한다.다음으로, 튜브의 내용을 2x HBS의 2밀리리터를 포함하는 새로운 15 밀리리터 튜브로 옮기고, 이어서 소용돌이 기계에 혼합한다. 실온에서 30 분 후, 강수량을 소용돌이. 배지를 부드럽게 소용돌이치면서 3개의 100mm HLfB 배양 플레이트에 서스펜션 1밀리리터를 드롭방향으로 넣습니다.세포 배양 배양인 배양기에서 6시간 배양 후, 트랜스퍼레이션 혼합물을 신선한 배양 배지의 10밀리리터로 대체하고 세포를 인큐베이터로 42시간 동안 되돌려 보도록 한다. 트랜스펙트 후 48시간, 각 플레이트를 생물학적 위험 수준 2조직 배양 후드 내에 얼음 침대에 놓습니다. 세포 배양 매체를 제거하고 세포 층을 방해하지 않고 10 밀리리터의 미리 냉각된 PBS로 세포를 부드럽게 헹구십시오.세포를 헹구고 PBS를 폐기합니다. 다음으로, 용해 버퍼의 1 밀리리터로 세포를 치료, 프로테아제 억제제 칵테일으로 보충, 접시 당. 플레이트를 기울여 셀을 풀로 모으고 셀 스크레이퍼를 사용하여 레이어를 수동으로 방해합니다.1, 000 마이크로파이프를 사용하여 각 플레이트의 용액을 얼음 에 15분 간 배양하고 5분마다 소용돌이를 가꾸어 줍니다. 인큐베이션의 끝에서, 알리엇은 3개의, 1.5 밀리리터 미세원심분리기 튜브로 lysates를 인용하고, 원심분리에 의하여 용액을 수집합니다. 새로운 15 밀리리터 튜브로 상체를 전송하고, 원고에 설명된 바와 같이 바이러스 성 단백질 용액 농도를 얻는다.Rev 뉴클레오라 국소화 신호 3-프라임 플래그의 공존 침전을 위해, M2 친화성 젤 비드의 25 마이크로리터를 3회 헹구고 500마이크로리터의 신선한 용해 완충제와 함께 세척당 보충한다. 차가운 방이나 얼음 시약으로 이러한 단계를 수행하십시오. 마지막 헹구기 후에, 용해 완충제의 5 밀리리터의 최종 부피에 헹구는 비드에 바이러스 성 단백질 용액의 밀리그램 당 1 밀리그램 농도를 추가합니다.회전과 섭씨 4도에서 3 시간 동안 반응을 배양합니다. 인큐베이션의 끝에서, 원심분리에 의해 바이러스 성 단백질 lysate-conjugated 구슬을 펠릿. 면역 후 침전성 용해 단백질 농도의 측정을 위한 상체를 수집합니다.샘플 저장 지침은 원고를 참조하십시오. 750 마이크로리터의 용해 완충제를 바이러스 성 단백질 리제액-컨쥬게이드 비드 펠릿에 넣고 구슬을 1.5밀리리터 미세센심분리기 튜브로 옮기고, 섭씨 4도에서 5분간 회전자에 구슬을 세척합니다. 방금 입증된 대로 회전기에 두 개의 세설을 원심분리하여 구슬을 수집합니다.마지막 세척 후 꼬집고 긴 젤 로딩 팁을 사용하여 비드-코임무누노침전 복합체에서 용해 버퍼의 흔적을 제거하십시오. 2배 적재 버퍼의 55마이크로리터에서 구슬을 다시 분리합니다. 그런 다음 샘플을 섭씨 95도에서 10분 동안 끓입니다.1개의 서쪽 블롯 젤에 용루제 25 마이크로리터와 1개의 쿠마시 염색 SDS-PAGE 젤을 적재합니다. SDS-PAGE 젤 전기포고증이 완성된 후, 15분 동안 초순수 25밀리리터에서 젤을 세 번 헹구세요. 마지막 세척 후, 젤에 쿠마시 얼룩 시약 100 밀리리터를 추가합니다.전체 염색 프로토콜에 대한 원고를 참조하십시오. 젤 밴드의 소화를 위해 먼저 깨끗한 면도날을 사용하여 젤의 전체 차선에서 젤 밴드를 잘라내어 각 돌연변이를 약 5mm 큐브로 자웁갑시다. 각 밴드를 깨끗한 0.5 밀리리터 미세 원심 분리기 튜브에 놓습니다.100밀리알라 암모늄 중탄산염으로 1-1대 1의 아세토닐-투-워터 용액으로 15분간 실온에서 15분간 밴드를 두 번 커버합니다. 그런 다음 진공 원심 분리기에서 젤 조각을 5 분간 건조시하십시오. 단백질을 줄이기 위해 말린 젤 조각을 10밀리머 디티오트레이톨100밀리머 암모늄 중탄산염으로 56도에서 1시간 동안 배양한 다음, 어두운 실내 온도에서 1시간 동안 100밀리알라 요오도아세타미드를 물에 담그고 있습니다.다음으로, 아세토닐릴로 젤 조각을 두 번 수축하고, 100밀리알라 암모늄 중탄산염이 15분 동안 실온에서 부드럽게 흔들리며 수축하고 젤 조각을 잔류합니다. 두 번째 재붓 후, 진공 원심 분리기에서 5 분 동안 젤 조각을 건조. 100 밀리알라 암모늄 중탄산염에 시퀀싱 등급 수정 트립신의 마이크로리터 당 50 나노 그램젤 조각을 팽창.5분 후, 100밀리알라 암모늄 중탄산염으로 젤 조각을 덮고 완전히 레웰할 수 있도록 하여 100밀리알라 암모늄 중탄산염을 추가하여 부어오른 젤 조각을 완전히 덮습니다. 이어서, 젤 조각을 섭씨 37도에서 하룻밤 동안 배양하고, 다음날 아침 물 속에서 10%의 포믹산으로 시료의 부피의 1/10으로 반응을 멈추고, 각 튜브에서 상퍼를 수집한다. Rev 뉴클레올라 국소화 신호 3-프라임 플래그는 염화 나트륨의 다양한 농도를 포함하는 3개의 상이한 리시스 완충조건 하에서 검출할 수 있다.B23은 또한 낮은 염 농도를 함유하는 리시스 버퍼에서 검출가능하며, 중염 농도를 함유하는 리시스 버퍼에서 거의 검출할 수 없으며, 높은 염 농도를 함유한 리시스 버퍼에서 검출할 수 없다. B23 검출은 야생형 Rev 3-프라임 플래그를 사용하여 낮은 염화 나트륨 농도를 함유하는 용해 완충제에 최적이며, Rev 뉴클레올라 국소화 신호 M1 3-프라임 플래그와의 친화성을 상실한다. 야생형 Rev 3-프라임 플래그와의 B23 선호도도 염 농도가 높은 것으로 감소하며, pcDNA 음성 제어는 두 리시스 완충조건 하에서 면역침전 후 비특이적 면역검출을 하지 않는다.Rev 뉴클레올라 국소화 신호 3-프라임 플래그는 2배 샘플 로딩 버퍼에서 끓는 것을 통해 용출 후 가장 검출할 수 있으며 B23은 37도 및 95도 샘플 버퍼 인큐베이션 조건에서 모두 검출할 수 있습니다. 면역 침전 및 은 염색 후, 입증된 바와 같이, 야생형 Rev 및 Rev 뉴클레올라 국소화 신호 M2, M6 및 M9는 18킬로달톤에서 검출된다. B23 단백질에 대응하는 밴드는 또한 37킬로달톤 마커에서 관찰된다.Coomassie 시약으로 염색하는 것은 18킬로달톤에서 돌연변이의 존재와 부재에서 Rev 뉴클레올라 국소화 신호 3-프라임 플래그의 검출가능성을 더욱 보여줍니다. 잠재적인 결합 요인에 대한 문제 해결 및 스크리닝 과정에서 질병 모델과 관련된 참조에 필요에 따라 양수 및 음수 모두 많은 컨트롤을 사용합니다. 모든 삭제 및 단일 점 돌연변이는 야생 형 Rev를 가진 다중 머화를 통해 지배적 인 부정적인 활성을 검사하고 HIV-1 복제의 체포에 활용 될 수있다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Specific Marking of HIV-1 Positive Cells using a Rev-dependent Lentiviral Vector Expressing the Green Fluorescent Protein

그린 형광 단백질을 표현 레브 종속 Lentiviral 벡터를 사용하여 HIV - 1 양성 세포의 특정 마킹

Most of HIV-responsive expression vectors are based on the HIV promoter, the long terminal repeat (LTR). While responsive to an early HIV protein, Tat, ...

연구

면역학 및 감염병학

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

V3의 HIV - 1 Tropism의 Genotypic 추론 사용 인구를 기반 시퀀싱

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

In vitro Uncoating of HIV-1 Cores

In vitro Uncoating of HIV-1 Cores

HIV - 1 코어의 시험 관내 Uncoating에서

The genome of the retroviruses is encased in a capsid surrounded by a lipid envelope. For lentiviruses, such as HIV-1, the conical capsid shell is ...

New Tools to Expand Regulatory T Cells from HIV-1-infected Individuals

새로운 도구는 HIV-1에 감염된 개인으로부터 규제 T 세포를 확장하려면

CD4+ Regulatory T cells (Tregs) are potent immune modulators and serve an important function in human immune homeostasis. Depletion of Tregs has led to ...

A Restriction Enzyme Based Cloning Method to Assess the In vitro Replication Capacity of HIV-1 Subtype C Gag-MJ4 Chimeric Viruses

A Restriction Enzyme Based Cloning Method to Assess the In vitro Replication Capacity of HIV-1 Subtype C Gag-MJ4 Chimeric Viruses

제한 효소 기반의 복제 방법을 평가하기 위해<em&gt; 시험관</em&gt; HIV-1 서브 타입 C 개그 - MJ4 키메라 바이러스의 복제 능력

The protective effect of many HLA class I alleles on HIV-1 pathogenesis and disease progression is, in part, attributed to their ability to target ...

Rapid Identification of Gram Negative Bacteria from Blood Culture Broth Using MALDI-TOF Mass Spectrometry

MALDI-TOF 질량 분석기를 사용하여 혈액 배양액에서 그람 음성 박테리아의 빠른 확인

An important role of the clinical microbiology laboratory is to provide rapid identification of bacteria causing bloodstream infection. Traditional ...

Conformational Evaluation of HIV-1 Trimeric Envelope Glycoproteins Using a Cell-based ELISA Assay

셀 기반의 ELISA 분석을 사용하여 HIV-1 삼량 봉투 당 단백질의 구조적 평가

HIV-1 envelope glycoproteins (Env) mediate viral entry into target cells and are essential to the infectious cycle. Understanding how those glycoproteins ...

Nucleocapsid Annealing-Mediated Electrophoresis (NAME) Assay Allows the Rapid Identification of HIV-1 Nucleocapsid Inhibitors

Nucleocapsid Annealing-Mediated Electrophoresis NAME Assay Allows the Rapid Identification of HIV-1 Nucleocapsid Inhibitors

뉴 클레오 캡시드 소둔 매개 전기 영동 (NAME) 분석은 HIV-1 뉴 클레오 캡시드 억제제의 신속한 식별을 할 수 있습니다

RNA or DNA folded in stable tridimensional folding are interesting targets in the development of antitumor or antiviral drugs. In the case of HIV-1, viral ...

Isolation of Exosomes from the Plasma of HIV-1 Positive Individuals

HIV-1 양성 개인의 플라즈마에서 엑소 좀의 분리

Exosomes are small vesicles ranging in size from 30 nm to 100 nm that are released both constitutively and upon stimulation from a variety of cell types. ...

Visualization of HIV-1 Gag Binding to Giant Unilamellar Vesicle (GUV) Membranes

Visualization of HIV-1 Gag Binding to Giant Unilamellar Vesicle GUV Membranes

거대한 단일 층 소포 (GUV) 막 바인딩 HIV-1 개그의 시각화

The structural protein of HIV-1, Pr55Gag (or Gag), binds to the plasma membrane in cells during the virus assembly process. Membrane binding of Gag is an ...