Name: visualizing lymph node structure and cellular localization using ex-vivo confocal microscopy
Uploaded: 2019-08-09T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualizing Lymph Node Structure and Cellular Localization using Ex-Vivo Confocal Microscopy at JoVE.com

עבודה זו נתמכת על ידי ה-NIH (R01 AI43458 to H.L.W.).

הפרוטוקול אושר על ידי ועדת העמידה על בעלי חיים בבית הספר לרפואה של הרווארד ובריגהם ובית החולים לנשים, פרוטוקול 2016N000230.
1. עכברים המשמשים לניסוי
<ol><li>שימוש 8-שבוע עכברים זכר ונקבה על רקע B6 לניהול תערובת נוגדן.</li>
	<li>השתמש CX3CR1Gfp/wtCCR2rfp/wt עכברים כדי לקבוע אם לשעבר vivo של?...

<ol>
	<li>Willard-Mack, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+structure,+function,+and+histology+of+lymph+nodes.">Normal structure, function, and histology of lymph nodes.</a> Toxicologic Pathology. 34, 409-424 (2006).</li><li>Tas, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+antibody+affinity+maturation+in+germinal+centers.">Visualizing antibody affinity maturation in germinal centers.</a> Science. 351, 1048-1054 (2016).</li><li>David, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+of+Mass+Cytometry+and+Imaging+Analysis+Reveals+Origin,+Location,+and+Functional+Repopulation+of+Liver+Myeloid+Cells+in+Mice.">Combination of Mass Cytometry and Imaging Analysis Reveals Origin, Location, and Functional Repopulation of Liver Myeloid Cells in Mice.</a> Gastroenterology. 151, 1176-1191 (2016).</li><li>Rezende, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=gammadelta+T+cells+control+humoral+immune+response+by+inducing+T+follicular+helper+cell+differentiation.">gammadelta T cells control humoral immune response by inducing T follicular helper cell differentiation.</a> Nature Communications. 9, 3151 (2018).</li><li>Nakagaki, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+triple-fluorescent+mouse+strain+allows+a+dynamic+and+spatial+visualization+of+different+liver+phagocytes+in+vivo.">Generation of a triple-fluorescent mouse strain allows a dynamic and spatial visualization of different liver phagocytes in vivo.</a> Anais da Academia Brasileira de Ciencias. 91 (suppl 1), e20170317 (2019).</li><li>Ajami, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+mass+cytometry+reveals+distinct+populations+of+brain+myeloid+cells+in+mouse+neuroinflammation+and+neurodegeneration+models.">Single-cell mass cytometry reveals distinct populations of brain myeloid cells in mouse neuroinflammation and neurodegeneration models.</a> Nature Neuroscience. 21, 541-551 (2018).</li><li>Becher, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-dimensional+analysis+of+the+murine+myeloid+cell+system.">High-dimensional analysis of the murine myeloid cell system.</a> Nature Immunology. 15, 1181-1189 (2014).</li><li>McElroy, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+LYVE-1+antibody+to+image+dynamically+lymphatic+trafficking+of+cancer+cells+in+vivo.">Fluorescent LYVE-1 antibody to image dynamically lymphatic trafficking of cancer cells in vivo.</a> Journal of Surgical Research. 151, 68-73 (2009).</li><li>Gerner, M. Y., Casey, K. A., Kastenmuller, W., Germain, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cell+and+antigen+dispersal+landscapes+regulate+T+cell+immunity.">Dendritic cell and antigen dispersal landscapes regulate T cell immunity.</a> The Journal of Experimental Medicine. 214, 3105-3122 (2017).</li><li>Hauser, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Definition+of+germinal-center+B+cell+migration+in+vivo+reveals+predominant+intrazonal+circulation+patterns.">Definition of germinal-center B cell migration in vivo reveals predominant intrazonal circulation patterns.</a> Immunity. 26, 655-667 (2007).</li><li>Allen, C. D., Okada, T., Tang, H. L., Cyster, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+of+germinal+center+selection+events+during+affinity+maturation.">Imaging of germinal center selection events during affinity maturation.</a> Science. 315, 528-531 (2007).</li><li>Arnon, T. I., Horton, R. M., Grigorova, I. L., Cyster, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+splenic+marginal+zone+B-cell+shuttling+and+follicular+B-cell+egress.">Visualization of splenic marginal zone B-cell shuttling and follicular B-cell egress.</a> Nature. 493, 684-688 (2013).</li><li>Sipkins, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+specialized+bone+marrow+endothelial+microdomains+for+tumour+engraftment.">In vivo imaging of specialized bone marrow endothelial microdomains for tumour engraftment.</a> Nature. 435, 969-973 (2005).</li><li>Cinamon, G., Zachariah, M. A., Lam, O. M., Foss, F. W., Cyster, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follicular+shuttling+of+marginal+zone+B+cells+facilitates+antigen+transport.">Follicular shuttling of marginal zone B cells facilitates antigen transport.</a> Nature Immunology. 9, 54-62 (2008).</li><li>Pereira, J. P., An, J., Xu, Y., Huang, Y., Cyster, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cannabinoid+receptor+2+mediates+the+retention+of+immature+B+cells+in+bone+marrow+sinusoids.">Cannabinoid receptor 2 mediates the retention of immature B cells in bone marrow sinusoids.</a> Nature Immunology. 10, 403-411 (2009).</li><li>Nakagaki, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+and+metabolic+shifts+during+neonatal+development+reprogram+liver+identity+and+function.">Immune and metabolic shifts during neonatal development reprogram liver identity and function.</a> Journal of Hepatology. (6), 1294-1307 (2018).</li><li>Wang, H., La Russa, M., Qi, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR/Cas9+in+Genome+Editing+and+Beyond.">CRISPR/Cas9 in Genome Editing and Beyond.</a> Annual Review of Biochemistry. 85, 227-264 (2016).</li><li>Roozendaal, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conduits+mediate+transport+of+low-molecular-weight+antigen+to+lymph+node+follicles.">Conduits mediate transport of low-molecular-weight antigen to lymph node follicles.</a> Immunity. 30, 264-276 (2009).</li><li>Sarder, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=All-near-infrared+multiphoton+microscopy+interrogates+intact+tissues+at+deeper+imaging+depths+than+conventional+single-+and+two-photon+near-infrared+excitation+microscopes.">All-near-infrared multiphoton microscopy interrogates intact tissues at deeper imaging depths than conventional single- and two-photon near-infrared excitation microscopes.</a> Journal of Biomedical Optics. 18, 106012 (2013).</li></ol>

השילוב של הדמיה עם טכניקות אחרות, כולל ביולוגיה מולקולרית מימדי החיסונית גבוהה החיסון הגדילו את היכולת שלנו לחקור את התאים החיסוניים בהקשר המקורי שלהם. למעשה, בעוד גישות אחרות עשויות לדרוש עיכול רקמות ובידוד התא – אשר יכול להוביל לאובדן שלמות רקמות-השימוש ב vivo או ex הדמיה vivo מעניקה יתרון ג...

בלוטות הלימפה (LNs) הם איברים בצורת ovoid הנוכחי ברחבי הגוף עם הפונקציה הקריטית של גישור התגובות החיסונית מולדים ואדפטיבית. LNs לסנן את הלימפה כדי לזהות חלקיקים זרים ותאים סרטניים כדי לטעון תגובה חיסונית נגדם1. אנטיגן הצגת תאים (APCs), תאים T ו-B תאים לעבוד לצד ליצור אנטיגן ספציפי נוגדנים (חסינות הומאתית) ו ציטוטוקסיקס לימפוציטים (חסינות הסלולר) כדי לחסל את החלקיקים הזר תאים סרטניים2. כך, הבנת הדינמיקה של התאים החיסוניים נוכח במערכת הלימפה יהיו השלכות חשובות על פיתוח החיסון וחיסוני סרטן.
הופעתו של מיקרוסקופים חזק-כולל קונפוקלית וקד חדש ומיקרוסקופים רזולוציה סופר-אפשרה התקדמות יוצאת דופן בהבנת איך אוכלוסיות שונות תאים החיסונית להתנהג בסביבה הטבעית שלהם3. עכשיו זה אפשרי תמונה מספר סוגי תאים בו באמצעות שילוב של רגשים עם עכברים מהונדסים גנטית לבטא חלבונים פלורסנט תחת שליטה של יעדים ספציפיים4,5. למעשה, טכניקות ממדיות גבוהות, כולל cy, המוני וניתוחי זרימה רב-פרמטרית היו חיוניים להרחבת הידע שלנו על מידור תאים חיסוניים שונה ופונקציונליות בבריאות ובמחלות6, 7. עם זאת, כדי להכין דגימות עבור טכניקות אלה, רקמות צריך עיכול ותאים מופרדים מתוך הסביבה הטבעית שלהם להיות מנותח בתא השבולים. כדי להתעלות על מגבלות אלה ולאפשר תרגום טוב יותר בביולוגיה, המטרה של הפרוטוקול המוצע כאן היא להחיל מתודולוגיה ישירה על התמונה לשעבר vivo בלוטות הלימפה כולו באמצעות קונפוקלית מניות מיקרוסקופים עם היתרון של מהירות משופרת, רקמה שימור המבנה והכדאיות התאית בהשוואה למספר החיסונית הקונבנציונלי. באמצעות גישה זו, הצלחנו להראות כי עכברים לקוי עבור γδ T תאים, סוג של לימפוציטים T מעורב ההגנה המוקדמת מוקדם נגד פתוגנים4, יש להתפשר זקיקי ו תא T אזורי לעומת עכברים סוג פראי. ממצאים אלה אפשרו לנו להמשיך במחקר שבו הדגמנו כי תאים γδ T לשחק תפקיד קריטי הומאוסטזיס של איברי הלימפה ותגובה חיסונית ומוראלית4. יתר על כן, פרוטוקול זה מספק מסלול פיזיולוגי עבור הבדיקות והנוגדנים כדי להגיע לצומת הלימפה, כפי שהם מנוהלים תת-עורי ומתפזר באמצעות זרימת הלימפה ברקמות, בנייה על דוחות הקודם המשמשים באתרו תיוג עם נוגדנים כדי להמחיש מבנים הקשורים לימפטי8,9, מרכז מונ, דינמיקה10,11,12, ומטרות נגישים בקלות כדי זרימת הדם13 ,14,15.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>BV421 anti-CD4</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>562891</td>
			<td>GK1.5; 0.2 mg mL-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BB515 anti-CD19</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>564509</td>
			<td>1D3; 0.2 mg mL-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BB515 Rat IgG2a, &#954; Isotype Control</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>564418</td>
			<td>R35-95; 0.2 mg mL-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV421 Mouse IgG2b, K Isotype Control</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>562603</td>
			<td>R35-38 0.2 mg mL-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cellview culture dish</td>
			<td>Greiner-Bio</td>
			<td>627861</td>
			<td>35x10 mm with glass bottom</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringes</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>-</td>
			<td>Insulin U-100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>Kimtech Science Brand</td>
			<td>7557</td>
			<td>size 21 x 20 cm / 100 sheets per box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgery curved forceps</td>
			<td>WEP Surgical Instruments</td>
			<td>custom made</td>
			<td>12.5 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgery curved scissors</td>
			<td>WEP Surgical Instruments</td>
			<td>custom made</td>
			<td>11.5 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle</td>
			<td>BD PrecisionGlide</td>
			<td>-</td>
			<td>30 gauge &#215; &#189; inch</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon Eclipse Te + A1R confocal head</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>-</td>
			<td>loaded with main 4 laser lines (405, 488, 543 and 647 nm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE anti-F4/80</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>565410</td>
			<td>T45-2342; 0.2 mg mL-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Rat IgG2a, &#954; Isotype Control</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>553930</td>
			<td>R35-95; 0.2 mg mL-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss LSM 710 confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>-</td>
			<td>loaded with main 4 laser lines (405, 488, 543 and 647 nm)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualizing lymph node structure and cellular localization using ex-vivo confocal microscopy

בלוטות הלימפה (LNs) הם איברים התפשטות בתוך הגוף, שם התגובות החיסונית מולדים יכול להתחבר עם חסינות אדפטיבית. למעשה, LNs הם משולבת אסטרטגית בנתיב של כלי הלימפה, המאפשר מגע אינטימי של אנטיגנים רקמות עם כל התאים החיסוניים הקבועים ב-LN. כך, הבנת הרכב הסלולר, הפצה, מיקום ואינטראקציה באמצעות לשעבר vivo הדמיה מלאה יוסיף לידע על איך הגוף מתאם תגובות החיסון המקומי מערכתית. פרוטוקול זה מציג אסטרטגיה הדמיה vivo ex בעקבות בניהול vivo של נוגדנים המסומנים על ידי פלורסנט המאפשר מתודולוגיה מאוד מאוד וקלה לביצוע באמצעות קונפוקלית יקרוסקופים קונבנציונאלי ו ריאגנטים מניות. באמצעות הזרקה תת עורית של נוגדנים, ניתן לתייג אוכלוסיות תאים שונות בניקוז LNs מבלי להשפיע על מבני רקמות שעלולים להיפגע על ידי טכניקה מיקרוסקופית החיסונית קונבנציונאלי.

כתב יד זה מראה טכניקות כדי להסיר בלוטות לימפה ומבלי לפגוע במבנה שלהם בעקבות הזרקת נוגדנים המסומנים על ידי פלורסנט כדי להכתים אוכלוסיות תאים מסוימות באיברים אלה (איור 1 ואיור 2 ).
השילוב החזק של האימונויניום של תאי LN עם BV421 anti-CD4 ו BB515 anti-CD19 ו הדמי...

Watch this Scientific Journal Video about Visualizing Lymph Node Structure and Cellular Localization using Ex-Vivo Confocal Microscopy at JoVE.com

Visualizing Lymph Node Structure and Cellular Localization using Ex-Vivo Confocal Microscopy

חזותי מבנה צומת לימפה ולוקליזציה לסלולר באמצעות Ex-Vivo Confocal מיקרוסקופ

פרוטוקול זה מתאר טכניקה לתמונה אוכלוסיות תאים שונות בבלוטות לימפה ניקוז ללא שינויים במבנה האיברים.

Lymph nodes (LNs) are organs spread within the body, where the innate immune responses can connect with the adaptive immunity. In fact, LNs are ...

זה לשכפל וקל לבצע פרוטוקול משתמשת לשעבר vivo הלימפה צומת הדמיה אסטרטגיה כדי לעקוב אחר ניקוז של in-vivo מנוהל נוגדנים פלואורסצנטיים שכותרתו לאיברים מקומיים משניים הלימפה. הדגמת טכניקה זו מאפשרת הדמיה ספציפית של ההליך, אשר יכול להקל על ביצוע מוצלח של הפרוטוקול. זוהי טכניקה פשוטה מאוד פשוטה שיכולה להתבצע על ידי כל אחד.ההיבט המאתגר היחיד הוא הטיפול בעכבר, הדורש הכשרה מסוימת. טכניקה זו יש את היתרון של שימור מאמץ רקמת מהירות משופרת וכדאיות התא בהשוואה לשיטות הכתם פלואורסצנטי קונבנציונלי. הכשרת ההליך תהיה ברונה טייטמטסו, טכנאית מהמעבדה.לדלל את הנוגדנים של עניין, גדמו פלואורופורים המתאימים, ב 100 microliters של PBS עבור הדמיית בלוטות הלימפה inguinal, או 50 microliters של PBS עבור הדמיית לימפה popliteal. להדמיית בלוטות לימפה אינguinal, לטעון 100 microliters של קוקטייל הנוגדן לתוך מזרק אינסולין מיליליטר אחד, מצויד מד 30 על ידי מחט חצי אינץ ', ו תת עורית להזריק את הנוגדנים לתוך הירך הפנימית של העכבר הניסיוני. להדמיית בלוטות לימפה פופליטיות, הזריקו 50 מיקרוליטרים של קוקטייל הנוגדנים תת עורית לתוך כרית כפות רגליים אחת של החיה הניסיונית.ואז להחזיר את החיה לקופסת הבית שלה. עבור קציר לימפה ניקוז inguinal, לאחר המתנה של לפחות שלוש שעות מן הזריקה, לשתק את העכבר על הבמה האקרילית עם סרט דבק ולהחיל שמן מינרלי על עור הבטן. השתמש במספריים מיקרו-כירורגיים סטנדרטיים ומקלפים מעוגלים מיקרו-כירורגיים כדי לבצע חתך בעור קו האמצע בבטן מהעווית לתהליך הקסיפואיד, ולנתק את שריר הבטן מהעור.בצע חתכים אופקיים בעור בחלק העליון והתחתון של קו החתך האנכי, כדי ליצור מדפים בעור בצד ההזרקה, ולחזור בו העור כדי לדמיין את צומת הלימפה. אבטחו את דש העור לצלחת האקרילית, ולהשתמש במקלות כדי להסיר את צומת הלימפה הכדורי השקוף, בדרך כלל כדורי. עבור קציר בלוטות לימפה ניקוז popliteal, לפחות 12 שעות לאחר הזריקה, לשתק את העכבר במצב נוטה על שלב אקרילי.החל שמן מינרלי על העגל והברך בצד המוזרק של החיה. לאחר מכן, לעשות חתך קו האמצע בעגל מן העקב אל הברך, ולנתק את השרירים עגל מן העור. חשוף את האפוסה הפופליטית.בלוטות הלימפה הפופליטיות יופיעו כתחום שקוף בתוך הפוסה. לאחר מכן, להסיר את בלוטות הלימפה עם מדפים מעוגלים מיקרוכירורגיה. כדי להכין את בלוטות הלימפה להדמיה, מניחים את כל האיברים בצלחת תרבות 35 על 10 מילימטר עם תחתית זכוכית, ולהשתמש במטלות כדי להסיר את כל השומן המקיף את הרקמה.מרכזים את האיבר באמצע המנה, ומכסים את הרקמה בחתיכת מגב משימה עדין ספוג מלוחים. להדמיית אקס ויוו, מקם את המנה בחריץ המיקרוסקופ הקונפוקל ההפוך ולהשתמש באור הקונבנציונלי של מיקרוסקופ הקונפוקל ובמטרה 4-10X כדי להשיג את המיקוד הנכון. עבור מתפקוד האור למצב לייזר ולהשתמש בדגימה מוכתמת איזוטופים, לא מוכתמת או לא פלואורסצנטית כדי להתאים את כוח הלייזר, לקזז ולהשיג כדי להסיר את הפלואורסצנטיות האוטומטית ואת כל הכתמים שלא צוינו.לרכוש תמונות תחת 4, 10 ו 20X מטרות התמקדות מבנה בלוטות הלימפה והפצה הסלולר באמצעות הגדרת 1024 על ידי 1024 פיקסל. לאחר מכן, השתמש בתוכנה מתאימה לניתוח דימות כדי להפריד בין הערוצים, כדי להוסיף את קנה המידה והצבעים המעניינים, ולבנות מחדש את התצוגה תלת-ממדית. השילוב רב העוצמה של immunolabeling של תאי בלוטות הלימפה עם נוגדנים נגד CD4 ואנטי CD19 וניתוח הדמיה קונפוקלים מאפשר לוקליזציה של תאי T ו- B בתוך בלוטות הלימפה inguinal.בבלוטות הלימפה popliteal, כמו ברקמה inguinal, זקיקי תא B מוקפים אוכלוסיות תא T, סימן ההיכר של מבנה בלוטות הלימפה. כפי שנצפה בתמונות אלה, phagocytes אינם מפנימים את הנוגדנים מוזרק, המציין כי הכתמת תא B ו- T הוא ספציפי. יתר על כן, שחזור מחדש של התיוג מציין כי כתמי תא T ו- B אינם חופפים, ומאשרים עוד יותר את הספציפיות של הכתמים.תאים חד תאיים נצפו לאורך כל הצומת הלימפה inguinal, כולל סינוס subcapsular. עם רוב התאים המונונוקלריים המבטאים CX3XR1, ואחריו CCR2 ו- CXCR31CCR2 תאים חיוביים כפולים. אותה תבנית של התפלגות תאים ופנוטיפים של תאים נצפתה בצומת הלימפה popliteal.שתי בלוטות הלימפה גם להפגין אזורים כהים ללא ביטוי קולטן תאים mononuclear כי הם תפוסים על ידי לימפוציטים. יתר על כן, תאים mononuclear הם נדירים בתוך האזור הפנימי של בלוטות הלימפה, נשאר מרוכז באזורים החיצוניים של הרקמה, המציין כי תאים אלה בעיקר לכבוש את הסינוס subcapsular צומת הלימפה. תערובת הנוגדנים צריכה להיות מוזרקת במדויק לתוך הרקמה התת עורית עבור מערכת הלימפה כדי לנקז כראוי את הנוגדנים לבלוטות הלימפה.שיטה זו יכולה להיות מיושמת על פיזור ביולוגי של תרופות עם תווית פלואורסצנטית, ועל מחקרי מיקוד תאים של חלקיקים פלואורסצנטיים מסומנים.

Research

JoVE Journal

Biology

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

הדמיה ב-RNA לוקליזציה Xenopus ביציות

RNA localization is a conserved mechanism of establishing cell polarity.  Vg1 mRNA localizes to the vegetal pole of Xenopus laevis oocytes and acts to ...

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral בתיווך מציאה במהלך Ex Vivo Erythropoiesis של אדם בתאי גזע hematopoietic

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

מערכת ל<em&gt; Vivo לשעבר</em&gt; Culturing של לבלב עוברי

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

Nano-fEM: Protein Localization Using Photo-activated Localization Microscopy and Electron Microscopy

ננו פאם: לוקליזציה חלבון באמצעות מיקרוסקופ לוקליזציה תמונה מופעלת ומיקרוסקופי אלקטרונים

Mapping the distribution of proteins is essential for understanding the function of proteins in a cell. Fluorescence microscopy is extensively used for ...

Visualizing Bacteria in Nematodes using Fluorescent Microscopy

Visualizing חיידקים בנמטודות באמצעות מיקרוסקופיה פלורסנט

 
Symbioses, the living together of two or more organisms, are widespread throughout all kingdoms of life. As two of the most ubiquitous organisms on ...

Analyzing Craniofacial Morphogenesis in Zebrafish Using 4D Confocal Microscopy

ניתוח Craniofacial המורפוגנזה בדג הזברה שימוש 4D מיקרוסקופיה confocal

Time-lapse imaging is a technique that allows for the direct observation of the process of morphogenesis, or the generation of shape. Due to their optical ...

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

במשובט מעקב vivo של גזע hematopoietic ובתאים המסומנים על ידי חמישה חלבונים ניאון באמצעות Confocal וmultiphoton מיקרוסקופית

We developed and validated a fluorescent marking methodology for clonal tracking of hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) with high spatial and ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

מדידת הקשיחות של<em&gt; Ex Vivo</em&gt; עכבר Aortas באמצעות מיקרוסקופ כוח אטומי

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

Visualizing Stromule Frequency with Fluorescence Microscopy

חזותי תדר Stromule עם מיקרוסקופ פלואורסצנטי

Stromules, or "stroma-filled tubules", are narrow, tubular extensions from the surface of the chloroplast that are universally observed in plant cells but ...

Cellular Redox Profiling Using High-content Microscopy

התאוששות נייד באמצעות פרופילים תוכן גבוהה מיקרוסקופית

Reactive oxygen species (ROS) regulate essential cellular processes including gene expression, migration, differentiation and proliferation. However, ...