Name: visualizing lymph node structure and cellular localization using ex-vivo confocal microscopy
Uploaded: 2019-08-09T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualizing Lymph Node Structure and Cellular Localization using Ex-Vivo Confocal Microscopy at JoVE.com

Detta arbete stöddes av NIH (R01 AI43458 till H.L.W.).

Protokollet godkändes av ständiga kommittén för djur vid Harvard Medical School och Brigham and Women ' s Hospital, protokoll 2016N000230.
1. möss som används för experimentet
<ol><li>Använd 8-veckors gamla manliga och kvinnliga möss på B6 bakgrund för att administrera antikropps blandningen.</li>
	<li>Använd CX3CR1GFP/WTCCR2RFP/WT- möss för att avgöra om ex vivo hela LN-avbildning också kan appliceras på rapportmöss utan att administrera antikropps bl...

<ol>
	<li>Willard-Mack, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+structure,+function,+and+histology+of+lymph+nodes.">Normal structure, function, and histology of lymph nodes.</a> Toxicologic Pathology. 34, 409-424 (2006).</li><li>Tas, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+antibody+affinity+maturation+in+germinal+centers.">Visualizing antibody affinity maturation in germinal centers.</a> Science. 351, 1048-1054 (2016).</li><li>David, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+of+Mass+Cytometry+and+Imaging+Analysis+Reveals+Origin,+Location,+and+Functional+Repopulation+of+Liver+Myeloid+Cells+in+Mice.">Combination of Mass Cytometry and Imaging Analysis Reveals Origin, Location, and Functional Repopulation of Liver Myeloid Cells in Mice.</a> Gastroenterology. 151, 1176-1191 (2016).</li><li>Rezende, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=gammadelta+T+cells+control+humoral+immune+response+by+inducing+T+follicular+helper+cell+differentiation.">gammadelta T cells control humoral immune response by inducing T follicular helper cell differentiation.</a> Nature Communications. 9, 3151 (2018).</li><li>Nakagaki, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+triple-fluorescent+mouse+strain+allows+a+dynamic+and+spatial+visualization+of+different+liver+phagocytes+in+vivo.">Generation of a triple-fluorescent mouse strain allows a dynamic and spatial visualization of different liver phagocytes in vivo.</a> Anais da Academia Brasileira de Ciencias. 91 (suppl 1), e20170317 (2019).</li><li>Ajami, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+mass+cytometry+reveals+distinct+populations+of+brain+myeloid+cells+in+mouse+neuroinflammation+and+neurodegeneration+models.">Single-cell mass cytometry reveals distinct populations of brain myeloid cells in mouse neuroinflammation and neurodegeneration models.</a> Nature Neuroscience. 21, 541-551 (2018).</li><li>Becher, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-dimensional+analysis+of+the+murine+myeloid+cell+system.">High-dimensional analysis of the murine myeloid cell system.</a> Nature Immunology. 15, 1181-1189 (2014).</li><li>McElroy, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+LYVE-1+antibody+to+image+dynamically+lymphatic+trafficking+of+cancer+cells+in+vivo.">Fluorescent LYVE-1 antibody to image dynamically lymphatic trafficking of cancer cells in vivo.</a> Journal of Surgical Research. 151, 68-73 (2009).</li><li>Gerner, M. Y., Casey, K. A., Kastenmuller, W., Germain, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cell+and+antigen+dispersal+landscapes+regulate+T+cell+immunity.">Dendritic cell and antigen dispersal landscapes regulate T cell immunity.</a> The Journal of Experimental Medicine. 214, 3105-3122 (2017).</li><li>Hauser, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Definition+of+germinal-center+B+cell+migration+in+vivo+reveals+predominant+intrazonal+circulation+patterns.">Definition of germinal-center B cell migration in vivo reveals predominant intrazonal circulation patterns.</a> Immunity. 26, 655-667 (2007).</li><li>Allen, C. D., Okada, T., Tang, H. L., Cyster, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+of+germinal+center+selection+events+during+affinity+maturation.">Imaging of germinal center selection events during affinity maturation.</a> Science. 315, 528-531 (2007).</li><li>Arnon, T. I., Horton, R. M., Grigorova, I. L., Cyster, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+splenic+marginal+zone+B-cell+shuttling+and+follicular+B-cell+egress.">Visualization of splenic marginal zone B-cell shuttling and follicular B-cell egress.</a> Nature. 493, 684-688 (2013).</li><li>Sipkins, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+specialized+bone+marrow+endothelial+microdomains+for+tumour+engraftment.">In vivo imaging of specialized bone marrow endothelial microdomains for tumour engraftment.</a> Nature. 435, 969-973 (2005).</li><li>Cinamon, G., Zachariah, M. A., Lam, O. M., Foss, F. W., Cyster, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follicular+shuttling+of+marginal+zone+B+cells+facilitates+antigen+transport.">Follicular shuttling of marginal zone B cells facilitates antigen transport.</a> Nature Immunology. 9, 54-62 (2008).</li><li>Pereira, J. P., An, J., Xu, Y., Huang, Y., Cyster, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cannabinoid+receptor+2+mediates+the+retention+of+immature+B+cells+in+bone+marrow+sinusoids.">Cannabinoid receptor 2 mediates the retention of immature B cells in bone marrow sinusoids.</a> Nature Immunology. 10, 403-411 (2009).</li><li>Nakagaki, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+and+metabolic+shifts+during+neonatal+development+reprogram+liver+identity+and+function.">Immune and metabolic shifts during neonatal development reprogram liver identity and function.</a> Journal of Hepatology. (6), 1294-1307 (2018).</li><li>Wang, H., La Russa, M., Qi, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR/Cas9+in+Genome+Editing+and+Beyond.">CRISPR/Cas9 in Genome Editing and Beyond.</a> Annual Review of Biochemistry. 85, 227-264 (2016).</li><li>Roozendaal, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conduits+mediate+transport+of+low-molecular-weight+antigen+to+lymph+node+follicles.">Conduits mediate transport of low-molecular-weight antigen to lymph node follicles.</a> Immunity. 30, 264-276 (2009).</li><li>Sarder, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=All-near-infrared+multiphoton+microscopy+interrogates+intact+tissues+at+deeper+imaging+depths+than+conventional+single-+and+two-photon+near-infrared+excitation+microscopes.">All-near-infrared multiphoton microscopy interrogates intact tissues at deeper imaging depths than conventional single- and two-photon near-infrared excitation microscopes.</a> Journal of Biomedical Optics. 18, 106012 (2013).</li></ol>

Kombinationen av avbildning med andra tekniker, inklusive molekylärbiologi och hög dimensionell immunophenotypning har förbättrat vår förmåga att undersöka immunceller i sitt eget sammanhang. I själva verket, medan andra metoder kan kräva vävnadsnedbrytning och cell isolering – vilket kan leda till förlust av vävnad integritet-användning av in vivo eller ex vivo avbildning ger en stor fördel i att undersöka olika cell subtyper på ett geografiskt sätt3 , <sup class="x...

Lymfkörtlar (LNs) är ovoid-formade organ brett närvarande i hela kroppen med den avgörande funktionen att överbrygga den medfödda och adaptiva immunsvar. LNs filtrera lymfa för att identifiera främmande partiklar och cancerceller att montera ett immunsvar mot dem1. Antigen presenterande celler (APCs), T-celler och B-celler fungerar parallellt för att generera antigen-specifika antikroppar (humorala immunitet) och cytotoxiska lymfocyter (cellulära immunitet) för att eliminera främmande partiklar och cancerceller2. Således, förstå dynamiken i immunceller som finns i lymfsystemet kommer att få viktiga konsekvenser för vaccinutveckling och cancer immunterapi.
Tillkomsten av kraftfulla Mikroskop-inklusive nya konfokala och super resolution Mikroskop-har tillåtit en extraordinär avancemang att förstå hur olika immunceller populationer beter sig i sin egen miljö3. Det är nu möjligt att avbilda flera samtidiga cell subtyper med hjälp av en kombination av sonder med genetiskt modifierade möss som uttrycker fluorescerande proteiner under kontroll av specifika mål4,5. I själva verket, hög dimensionell teknik, inklusive masscytometri och multi-parametriska Flödesanalys har varit avgörande för att utvidga vår kunskap om olika immun Celluppdelning och funktionalitet i hälsa och sjukdom6, 7. för att förbereda prover för dessa tekniker behöver vävnader dock matsmältningen och cellerna separeras från sin naturliga miljö för att analyseras i cellsuspensioner. För att överträffa dessa begränsningar och möjliggöra en bättre översättning i biologi, målet med det protokoll som föreslås här är att tillämpa en enkel metod för bild ex vivo hela lymfkörtlar med hjälp av lager konfokala Mikroskop med fördelen av förbättrad hastighet, vävnad struktur bevarande och cellviabilitet jämfört med konventionell immunofluorescensfärgning. Genom att använda denna metod, kunde vi visa att möss bristfällig för känner T-celler, en subtyp av T-lymfocyter inblandade i värd tidigt försvar mot patogener4, har komprometterat folliklar och T cell zoner jämfört med Wild typ möss. Dessa fynd tillät oss att fullfölja en studie där vi visade att känner T-celler spelar en avgörande roll i homeostasen av lymfoida organ och humorala immunsvar4. Dessutom ger detta protokoll en fysiologisk väg för sonder och antikroppar för att nå lymfkörtlarna, eftersom de administreras subkutant och försvinna genom vävnad lymfcirkulationen, bygger på tidigare rapporter som används i situ-märkning med antikroppar för att visualisera lymfatiska-associerade strukturer8,9, avelsmaterial Center Dynamics10,11,12, och mål lättillgängliga för blodflödet13 ,14,15.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>BV421 anti-CD4</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>562891</td>
			<td>GK1.5; 0.2 mg mL-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BB515 anti-CD19</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>564509</td>
			<td>1D3; 0.2 mg mL-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BB515 Rat IgG2a, &#954; Isotype Control</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>564418</td>
			<td>R35-95; 0.2 mg mL-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV421 Mouse IgG2b, K Isotype Control</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>562603</td>
			<td>R35-38 0.2 mg mL-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cellview culture dish</td>
			<td>Greiner-Bio</td>
			<td>627861</td>
			<td>35x10 mm with glass bottom</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringes</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>-</td>
			<td>Insulin U-100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>Kimtech Science Brand</td>
			<td>7557</td>
			<td>size 21 x 20 cm / 100 sheets per box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgery curved forceps</td>
			<td>WEP Surgical Instruments</td>
			<td>custom made</td>
			<td>12.5 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgery curved scissors</td>
			<td>WEP Surgical Instruments</td>
			<td>custom made</td>
			<td>11.5 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle</td>
			<td>BD PrecisionGlide</td>
			<td>-</td>
			<td>30 gauge &#215; &#189; inch</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon Eclipse Te + A1R confocal head</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>-</td>
			<td>loaded with main 4 laser lines (405, 488, 543 and 647 nm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE anti-F4/80</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>565410</td>
			<td>T45-2342; 0.2 mg mL-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Rat IgG2a, &#954; Isotype Control</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>553930</td>
			<td>R35-95; 0.2 mg mL-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss LSM 710 confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>-</td>
			<td>loaded with main 4 laser lines (405, 488, 543 and 647 nm)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualizing lymph node structure and cellular localization using ex-vivo confocal microscopy

Lymfkörtlar (LNs) är organ spridda i kroppen, där den medfödda immunsvaret kan ansluta med den adaptiva immunitet. I själva verket, LNS är strategiskt inföll i vägen för lymfkärlen, så intim kontakt av vävnad antigen med alla bosatta immunceller i LN. Sålunda, förstå den cellulära sammansättning, distribution, plats och interaktion med ex vivo hela LN Imaging kommer att lägga till kunskap om hur kroppen samordnar lokala och systemiska immunsvar. Detta protokoll visar en ex vivo Imaging strategi efter en in vivo administrering av fluorescerande-märkta antikroppar som möjliggör en mycket reproducerbar och lätt att utföra metodik med hjälp av konventionella konfokala Mikroskop och lager reagenser. Genom subkutan injektion av antikroppar, är det möjligt att märka olika cellpopulationer i dränering LNs utan att påverka vävnads strukturer som kan potentiellt skadas av en konventionell immunofluorescensmikroskopi teknik.

Detta manuskript visar tekniker för att ta bort ljumsk och popliteal lymfkörtlar utan att skada deras struktur efter injektion av fluorescerande-märkta antikroppar för att färga specifika cellpopulationer i dessa organ (figur 1 och figur 2 ).
Den kraftfulla kombinationen av immunolabeling av LN celler med BV421 anti-CD4 och BB515 anti-CD19 och konfokalmikroskopi Imaging analys definierade lokalisering av T-celler (CD4 +) och B-ce...

Watch this Scientific Journal Video about Visualizing Lymph Node Structure and Cellular Localization using Ex-Vivo Confocal Microscopy at JoVE.com

Visualizing Lymph Node Structure and Cellular Localization using Ex-Vivo Confocal Microscopy

Visualisera lymfkörtel struktur och cellulär lokalisering med ex-vivo konfokalmikroskopi

Detta protokoll beskriver en teknik för att avbilda olika cellpopulationer i dränerande lymfkörtlar utan förändringar i orgel strukturen.

Lymph nodes (LNs) are organs spread within the body, where the innate immune responses can connect with the adaptive immunity. In fact, LNs are ...

Detta reproducerbara och lätt att utföra protokoll använder en ex-vivo lymfkörtel imaging strategi för att spåra dränering av in-vivo administreras fluorescerande märkta antikroppar till lokala sekundära lymfoida organ. Demonstrera denna teknik möjliggör en specifik visualisering av förfarandet, som kan underlätta en lyckad körning av protokollet. Detta är en mycket enkel och okomplicerad teknik som kan utföras av vem som helst.Den enda utmanande aspekten är mushanteringen, vilket kräver viss träning. Denna teknik har nytta av en förbättrad hastighet vävnad ansträngning bevarande och cellen livskraft jämfört med de konventionella fluorescerande färgning metoder. Utbildning förfarandet skulle vara Bruna Tatematsu, en tekniker från laboratoriet.Späd antikropparna av intresse, konjugerade till lämpliga fluoroforer, i 100 mikroliter pbs för inguinal lymfkörtel avbildning, eller 50 mikroliter pbs för popliteal lymfkörtel avbildning. För inguinal lymfkörtel avbildning, ladda 100 mikroliter av antikroppscocktail i en en milliliter insulinspruta, utrustad med en 30 gauge med halv tum nål, och subkutant injicera antikropparna i det inre låret av den experimentella musen. För popliteal lymfkörtel node imaging, injicera 50 mikroliter av antikroppen cocktail subkutant i en tass pad av det experimentella djuret.Sedan tillbaka djuret till sitt hem låda. För inguinal dränerande lymfkörtel, efter att ha väntat minst tre timmar från injektionen, immobilisera musen på akrylstadiet med tejp och applicera mineralolja på bukhuden. Använd standard mikrokirurgi sax och mikrokirurgi böjda tlyktor för att göra en mittlinjen hud snitt i buken från pubis till xyphoid processen, och dissociate buken muskulatur från huden.Gör horisontella hud snitt i toppen och botten av den vertikala snitt linjen, för att skapa hudflikar på sidan av injektion, och dra tillbaka huden för att visualisera lymfkörtdelen. Säkra huden flik till akrylplattan, och använda tlyckorna för att ta bort den genomskinliga, vanligtvis bilobular sfäriska inguinal dränerande lymfkörteln. För popliteal dränerande lymfkörtel, minst 12 timmar efter injektionen, immobilisera musen i utsatt position på ett akryl stadium.Applicera mineralolja på vaden och knäet på den injicerade sidan av djuret. Därefter gör en mittlinjen snitt i vaden från hälen till knäet, och dissociate kalven muskulatur från huden. Exponera poplitalfossa.Den popliteala lymfkörtknuten kommer att visas som en genomskinlig sfär i fossa. Sedan, ta bort lymfkörtel med mikrokirurgi böjda tlymfknutor. För att förbereda lymfkörtdelen för avbildning, placera hela organen i en 35 med 10 millimeters odlingsfat med en glasbotten och använd forceps för att ta bort eventuellt fett som omger vävnaden.Centrera organet i mitten av skålen, och täck vävnaden med en bit saltlösning-indränkt delikat uppgift torkare. För ex vivo-avbildning, placera skålen i den inverterade confocal mikroskopplatsen och använd det konventionella ljuset från konfokalmikroskopet och målsättningen 4-10X för att erhålla rätt fokus. Ändra från ljusfunktionen till laserläget och använd ett isotopfärgat, icke-färgat eller icke-fluorescerande prov för att justera lasereffekten, förskjutningen och förstärkningen för att avlägsna autofluorescensen och eventuell ospecificerad färgning.Skaffa bilder under 4, 10 och 20X mål med fokus på lymfkörtel struktur och cellulär distribution och med hjälp av en 1024 av 1024 pixel definition. Sedan använder en lämplig bildframställning program för analys för att separera kanalerna, för att lägga till skala och färger av intresse, och att rekonstruera 3D-vyn. Den kraftfulla kombinationen av immunolabeling av lymfkörtel celler med anti-CD4 och anti-CD19 antikroppar och confocal bildframställning analys gör att lokalisering av T och B-celler inom inguinal lymfkörtlarna.I de popliteala lymfkörtlarna, som i inguinalvävnaden, är B-cellens folliklar omgivna av T-cellpopulationer, ett kännetecken för lymfkörtelns struktur. Som observerats i dessa bilder internaliserar inte fagocyter de injicerade antikropparna, vilket indikerar att B- och T-cellfärgningen är specifik. Vidare rekonstruktion av märkningen tyder dessutom på att T- och B-cellfärgningen inte överlappar varandra, vilket ytterligare bekräftar färgningens specificitet.Monocellulära celler observeras i hela inguinal lymfkörtknuten, inklusive subcapsular sinus. Med majoriteten av de mononukleära cellerna som uttrycker CX3XR1, följt av CCR2 och CXCR31CCR2 dubbla positiva celler. Samma mönster av cellfördelning och cell fenotyper observeras i popliteal lymfkörtel.Båda lymfkörtlar uppvisar också mörka regioner utan mononuclear cell receptor uttryck som är upptagna av lymfocyter. Dessutom är mononukleära celler knappa inom det inre området av lymfkörtlarna, återstående koncentreras i de yttre områdena av vävnaden, vilket tyder på att dessa celler främst upptar lymfkörteln subcapsular sinus. Antikroppsblandningen behöver injiceras exakt i den subkutana vävnaden för att lymfsystemet ska kunna dränera antikropparna mot lymfkörtknutret på rätt sätt.Denna metod kan tillämpas på biodistribution av fluorescerande märkta läkemedel, och på cellinriktningsstudier av fluorescerande märkta nanopartiklar.

Research

JoVE Journal

Biology

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

Visualisera RNA lokalisering i Xenopus Oocyter

RNA localization is a conserved mechanism of establishing cell polarity.  Vg1 mRNA localizes to the vegetal pole of Xenopus laevis oocytes and acts to ...

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-medierad Knockdown Under Ex vivo Erytropoes av mänskliga hematopoetiska stamceller

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

Ett system för<em&gt; Ex vivo</em&gt; Odling av embryonala Pancreas

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

Nano-fEM: Protein Localization Using Photo-activated Localization Microscopy and Electron Microscopy

Nano-Fem: proteinlokalisering Använda Photo-aktiverad lokalisering Mikroskopi och elektronmikroskopi

Mapping the distribution of proteins is essential for understanding the function of proteins in a cell. Fluorescence microscopy is extensively used for ...

Visualizing Bacteria in Nematodes using Fluorescent Microscopy

Visualisering Bakterier i Nematoder med fluorescensmikroskopi

 
Symbioses, the living together of two or more organisms, are widespread throughout all kingdoms of life. As two of the most ubiquitous organisms on ...

Analyzing Craniofacial Morphogenesis in Zebrafish Using 4D Confocal Microscopy

Analysera Kraniofaciala Morphogenesis i Zebrafish Använda 4D konfokalmikroskopi

Time-lapse imaging is a technique that allows for the direct observation of the process of morphogenesis, or the generation of shape. Due to their optical ...

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

In vivo Klon Spårning av hematopoetiska stam och progenitorceller märkta med fem fluorescerande proteiner med hjälp Konfokal och multifoton mikroskopi

We developed and validated a fluorescent marking methodology for clonal tracking of hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) with high spatial and ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Mätning av styvheten hos<em&gt; Ex vivo</em&gt; Mus Aorta Använda atomkraftsmikroskopi

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

Visualizing Stromule Frequency with Fluorescence Microscopy

Visualisering Stromule frekvens med fluorescensmikroskopi

Stromules, or "stroma-filled tubules", are narrow, tubular extensions from the surface of the chloroplast that are universally observed in plant cells but ...

Cellular Redox Profiling Using High-content Microscopy

Cellulär redoxprofilering med hög innehållsmikroskopi

Reactive oxygen species (ROS) regulate essential cellular processes including gene expression, migration, differentiation and proliferation. However, ...