Name: visualizing lymph node structure and cellular localization using ex-vivo confocal microscopy
Uploaded: 2019-08-09T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualizing Lymph Node Structure and Cellular Localization using Ex-Vivo Confocal Microscopy at JoVE.com

Bu çalışma NIH (R01 AI43458 - H.L.W.) tarafından desteklenmiştir.

Protokol Harvard Tıp Fakültesi Hayvanlar Daimi Komitesi ve Brigham ve Kadın Hastanesi, protokol 2016N000230 tarafından onaylandı.
1. Deney için kullanılan fareler
<ol><li>Antikor karışımı nı yönetmek için B6 arka planında 8 haftalık erkek ve dişi fareler kullanın.</li>
	<li>Ex vivo bütün LN görüntülemenin muhabir farelere antikor karışımı uygulanmadan uygulanıp uygulanamayacağını belirlemek ve antijen ibraz da dahil olmak üzere mononükleer hücrelerin varlı?...

<ol>
	<li>Willard-Mack, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+structure,+function,+and+histology+of+lymph+nodes.">Normal structure, function, and histology of lymph nodes.</a> Toxicologic Pathology. 34, 409-424 (2006).</li><li>Tas, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+antibody+affinity+maturation+in+germinal+centers.">Visualizing antibody affinity maturation in germinal centers.</a> Science. 351, 1048-1054 (2016).</li><li>David, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+of+Mass+Cytometry+and+Imaging+Analysis+Reveals+Origin,+Location,+and+Functional+Repopulation+of+Liver+Myeloid+Cells+in+Mice.">Combination of Mass Cytometry and Imaging Analysis Reveals Origin, Location, and Functional Repopulation of Liver Myeloid Cells in Mice.</a> Gastroenterology. 151, 1176-1191 (2016).</li><li>Rezende, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=gammadelta+T+cells+control+humoral+immune+response+by+inducing+T+follicular+helper+cell+differentiation.">gammadelta T cells control humoral immune response by inducing T follicular helper cell differentiation.</a> Nature Communications. 9, 3151 (2018).</li><li>Nakagaki, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+triple-fluorescent+mouse+strain+allows+a+dynamic+and+spatial+visualization+of+different+liver+phagocytes+in+vivo.">Generation of a triple-fluorescent mouse strain allows a dynamic and spatial visualization of different liver phagocytes in vivo.</a> Anais da Academia Brasileira de Ciencias. 91 (suppl 1), e20170317 (2019).</li><li>Ajami, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+mass+cytometry+reveals+distinct+populations+of+brain+myeloid+cells+in+mouse+neuroinflammation+and+neurodegeneration+models.">Single-cell mass cytometry reveals distinct populations of brain myeloid cells in mouse neuroinflammation and neurodegeneration models.</a> Nature Neuroscience. 21, 541-551 (2018).</li><li>Becher, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-dimensional+analysis+of+the+murine+myeloid+cell+system.">High-dimensional analysis of the murine myeloid cell system.</a> Nature Immunology. 15, 1181-1189 (2014).</li><li>McElroy, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+LYVE-1+antibody+to+image+dynamically+lymphatic+trafficking+of+cancer+cells+in+vivo.">Fluorescent LYVE-1 antibody to image dynamically lymphatic trafficking of cancer cells in vivo.</a> Journal of Surgical Research. 151, 68-73 (2009).</li><li>Gerner, M. Y., Casey, K. A., Kastenmuller, W., Germain, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cell+and+antigen+dispersal+landscapes+regulate+T+cell+immunity.">Dendritic cell and antigen dispersal landscapes regulate T cell immunity.</a> The Journal of Experimental Medicine. 214, 3105-3122 (2017).</li><li>Hauser, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Definition+of+germinal-center+B+cell+migration+in+vivo+reveals+predominant+intrazonal+circulation+patterns.">Definition of germinal-center B cell migration in vivo reveals predominant intrazonal circulation patterns.</a> Immunity. 26, 655-667 (2007).</li><li>Allen, C. D., Okada, T., Tang, H. L., Cyster, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+of+germinal+center+selection+events+during+affinity+maturation.">Imaging of germinal center selection events during affinity maturation.</a> Science. 315, 528-531 (2007).</li><li>Arnon, T. I., Horton, R. M., Grigorova, I. L., Cyster, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+splenic+marginal+zone+B-cell+shuttling+and+follicular+B-cell+egress.">Visualization of splenic marginal zone B-cell shuttling and follicular B-cell egress.</a> Nature. 493, 684-688 (2013).</li><li>Sipkins, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+specialized+bone+marrow+endothelial+microdomains+for+tumour+engraftment.">In vivo imaging of specialized bone marrow endothelial microdomains for tumour engraftment.</a> Nature. 435, 969-973 (2005).</li><li>Cinamon, G., Zachariah, M. A., Lam, O. M., Foss, F. W., Cyster, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follicular+shuttling+of+marginal+zone+B+cells+facilitates+antigen+transport.">Follicular shuttling of marginal zone B cells facilitates antigen transport.</a> Nature Immunology. 9, 54-62 (2008).</li><li>Pereira, J. P., An, J., Xu, Y., Huang, Y., Cyster, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cannabinoid+receptor+2+mediates+the+retention+of+immature+B+cells+in+bone+marrow+sinusoids.">Cannabinoid receptor 2 mediates the retention of immature B cells in bone marrow sinusoids.</a> Nature Immunology. 10, 403-411 (2009).</li><li>Nakagaki, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+and+metabolic+shifts+during+neonatal+development+reprogram+liver+identity+and+function.">Immune and metabolic shifts during neonatal development reprogram liver identity and function.</a> Journal of Hepatology. (6), 1294-1307 (2018).</li><li>Wang, H., La Russa, M., Qi, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR/Cas9+in+Genome+Editing+and+Beyond.">CRISPR/Cas9 in Genome Editing and Beyond.</a> Annual Review of Biochemistry. 85, 227-264 (2016).</li><li>Roozendaal, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conduits+mediate+transport+of+low-molecular-weight+antigen+to+lymph+node+follicles.">Conduits mediate transport of low-molecular-weight antigen to lymph node follicles.</a> Immunity. 30, 264-276 (2009).</li><li>Sarder, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=All-near-infrared+multiphoton+microscopy+interrogates+intact+tissues+at+deeper+imaging+depths+than+conventional+single-+and+two-photon+near-infrared+excitation+microscopes.">All-near-infrared multiphoton microscopy interrogates intact tissues at deeper imaging depths than conventional single- and two-photon near-infrared excitation microscopes.</a> Journal of Biomedical Optics. 18, 106012 (2013).</li></ol>

Moleküler biyoloji ve yüksek boyutlu immünofenotiotipleme de dahil olmak üzere diğer teknikler ile görüntüleme kombinasyonu kendi doğal bağlamda bağışıklık hücrelerini araştırmak için yeteneğimizi geliştirdi. Aslında, diğer yaklaşımlar doku sindirimi ve hücre izolasyonu gerektirebilir iken - doku bütünlüğünün kaybına yol açabilir - in vivo veya ex vivo görüntüleme kullanımı coğrafi bir şekilde farklı hücre alt tipleri araştırmada büyük bir avantaj sağlar3<...

Lenf düğümleri (LNs) doğuştan gelen ve adaptif bağışıklık yanıtları köprü önemli işlevi ile vücutta yaygın olarak mevcut oval şekilli organlardır. NNs yabancı parçacıklar ve kanserli hücreleri tanımlamak için onlara karşı bir bağışıklık yanıtı monte etmek için lenf filtre1. Antijen sunan hücreler (AAP' ler), T hücreleri ve B hücreleri yabancı parçacıkları ve kanserli hücreleri ortadan kaldırmak için antijene özgü antikorlar (humoral bağışıklık) ve sitotoksik lenfositler (hücresel bağışıklık) oluşturmak için birlikte çalışır2. Böylece, lenfatik sistemde mevcut bağışıklık hücrelerinin dinamikleri anlamak aşı gelişimi ve kanser immünoterapisi için önemli etkileri olacaktır.
Yeni konfokal ve süper çözünürlüklü mikroskoplar da dahil olmak üzere güçlü mikroskopların ortaya çıkışı, farklı bağışıklıkhücre popülasyonlarının doğal ortamlarında nasıl davranışlarını anlamada olağanüstü bir ilerleme sağladı 3. Floresan proteinleri belirlihedeflerinkontrolü altında ifade eden genetiği değiştirilmiş farelerle sondaların bir kombinasyonunu kullanarak birkaç eşzamanlı hücre alt tipini görüntülemek artık mümkün . Aslında, kitle sitometri ve multi-parametrik akış analizi de dahil olmak üzere yüksek boyutlu teknikler, sağlık ve hastalık 6 farklı bağışıklık hücresi bölümleme ve işlevsellik hakkındaki bilgimizi genişletmek için çok önemli olmuştur6, 7. Ancak, bu teknikler için örnek hazırlamak için, dokular sindirim gerekir ve hücreler hücre süspansiyonları analiz edilecek doğal ortamdan ayrılır. Bu sınırlamaları aşmak ve biyolojide daha iyi bir çeviri sağlamak için, burada önerilen protokolün amacı gelişmiş hız, doku yararı ile stok konfokal mikroskoplar kullanarak ex vivo bütün lenf düğümleri görüntü için basit bir metodoloji uygulamaktır konvansiyonel immünoffloresan boyama ile karşılaştırıldığında yapı koruma ve hücre canlılığı. Bu yaklaşımı kullanarak, γδ T hücreleri için eksik fareler göstermek başardık, Patojenlere karşı konak erken savunmadahil T lenfosit bir alt türü 4, yabani tip fareler ile karşılaştırıldığında folikülleri ve T hücre bölgeleri tehlikeye var. Bu bulgular, γδ T hücrelerinin lenfoid organların homeostazında ve humoral immün yanıtta kritik bir rol oynadığını gösterdiğimiz bir çalışma sürdürmemizi sağladı4. Ayrıca, bu protokol, sondalar ve antikorlar lenf düğümü ulaşmak için fizyolojik bir yol sağlar, onlar deri altı uygulanır ve doku lenfatik dolaşım yoluyla dağıtmak gibi, yerinde etiketleme kullanılan önceki raporlar üzerine bina lenfatik ilişkili yapıları görselleştirmek için antikorlar ile8,9, germinal merkezi dinamikleri10,11,12, ve hedefleri kolayca kan akışı için erişilebilir13 ,14,15.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>BV421 anti-CD4</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>562891</td>
			<td>GK1.5; 0.2 mg mL-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BB515 anti-CD19</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>564509</td>
			<td>1D3; 0.2 mg mL-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BB515 Rat IgG2a, &#954; Isotype Control</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>564418</td>
			<td>R35-95; 0.2 mg mL-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV421 Mouse IgG2b, K Isotype Control</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>562603</td>
			<td>R35-38 0.2 mg mL-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cellview culture dish</td>
			<td>Greiner-Bio</td>
			<td>627861</td>
			<td>35x10 mm with glass bottom</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringes</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>-</td>
			<td>Insulin U-100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>Kimtech Science Brand</td>
			<td>7557</td>
			<td>size 21 x 20 cm / 100 sheets per box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgery curved forceps</td>
			<td>WEP Surgical Instruments</td>
			<td>custom made</td>
			<td>12.5 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgery curved scissors</td>
			<td>WEP Surgical Instruments</td>
			<td>custom made</td>
			<td>11.5 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle</td>
			<td>BD PrecisionGlide</td>
			<td>-</td>
			<td>30 gauge &#215; &#189; inch</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon Eclipse Te + A1R confocal head</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>-</td>
			<td>loaded with main 4 laser lines (405, 488, 543 and 647 nm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE anti-F4/80</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>565410</td>
			<td>T45-2342; 0.2 mg mL-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Rat IgG2a, &#954; Isotype Control</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>553930</td>
			<td>R35-95; 0.2 mg mL-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss LSM 710 confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>-</td>
			<td>loaded with main 4 laser lines (405, 488, 543 and 647 nm)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualizing lymph node structure and cellular localization using ex-vivo confocal microscopy

Lenf düğümleri (LNs) organlar vücuda yayılmış, doğuştan gelen bağışıklık yanıtları adaptif bağışıklık ile bağlayabilirsiniz nerede. Aslında, LNs stratejik lenfdamarların yolunda interposed, LN tüm yerleşik bağışıklık hücreleri ile doku antijenleri samimi temas sağlayan. Böylece, hücresel kompozisyon, dağılım, yer ve etkileşim ex vivo bütün LN görüntüleme kullanarak anlamak vücudun yerel ve sistemik bağışıklık yanıtları koordine nasıl bilgi katacak. Bu protokol, geleneksel konfokal mikroskoplar ve stok reaktifleri kullanılarak çok tekrarlanabilir ve kolay bir metodoloji sağlayan floresan etiketli antikorların in vivo uygulamasının ardından bir ex vivo görüntüleme stratejisi göstermektedir. Antikorların deri altı enjeksiyonu ile, geleneksel immünoreskans mikroskobu tekniği ile potansiyel olarak zarar görebilir doku yapılarını etkilemeden, nn'lerin boşaltılmasında farklı hücre popülasyonlarının etiketedilmesi mümkündür.

Bu el yazması, bu organlardaki belirli hücre popülasyonlarını lekelemek için floresan etiketli antikorların enjeksiyonundan sonra yapılarına zarar vermeden inguinal ve popliteal lenf düğümlerini çıkarma tekniklerini göstermektedir (Şekil1 ve Şekil 2 ).
BV421 anti-CD4 ve BB515 anti-CD19 ve konfokal görüntüleme analizi ile LN hücrelerinin immünetiketleme güçlü kombinasyonu inguinal ve popliteal NNs T hücrelerin...

Watch this Scientific Journal Video about Visualizing Lymph Node Structure and Cellular Localization using Ex-Vivo Confocal Microscopy at JoVE.com

Visualizing Lymph Node Structure and Cellular Localization using Ex-Vivo Confocal Microscopy

Ex-Vivo Konfokal Mikroskopi ile Lenf Nodal Yapısı nın Ve Hücresel Lokalizasyonun Görselleştirilmesi

Bu protokol, organ yapısında değişiklik olmadan lenf düğümlerini boşaltmada farklı hücre popülasyonlarını görüntüleyen bir tekniği tanımlar.

Lymph nodes (LNs) are organs spread within the body, where the innate immune responses can connect with the adaptive immunity. In fact, LNs are ...

Bu tekrarlanabilir ve protokolü gerçekleştirmek kolay in-vivo lenf düğümü görüntüleme stratejisi lokal sekonder lenfoid organlara floresan etiketli antikorların drenaj izlemek için kullanır. Bu tekniğin gösterilmesi, protokolün başarılı bir şekilde yürütülmesini kolaylaştıracak yordamın belirli bir görselleştirmesine olanak tanır. Bu herkes tarafından yapılabilir çok basit ve basit bir tekniktir.Tek zorlu yönü bazı eğitim gerektiren fare işleme, . Bu teknik, geleneksel floresan boyama yöntemlerine göre geliştirilmiş bir hız dokusu eforunun korunması ve hücre canlılığının yararınadır. Prosedürü niçin eğitime tabi tutulacağı, laboratuvarteknisyeni Bruna Tatematsu olacak.İlgi antikorları seyreltmek, uygun florofores konjuge, inguinal lenf nodu görüntüleme için PBS 100 mikrolitre, ya da popliteal lenf nodu görüntüleme için PBS 50 mikrolitre. Inguinal lenf nod görüntüleme için, bir mililitre insülin şırınga içine antikor kokteyl 100 mikrolitre yük, yarım inç iğne 30 gauge ile donatılmış, ve subkutan deneysel farenin iç uyluk içine antikorenjekte. Popliteal lenf nod görüntüleme için, deneysel hayvanın bir pençe ped içine subkutan olarak antikor kokteyl 50 mikrolitre enjekte.Sonra hayvanı ev kutusuna geri ver. Inguinal drenaj lenf düğümü hasat için, enjeksiyondan en az üç saat bekledikten sonra, yapışkan bant ile akrilik aşamada fare immobilize ve karın cilde mineral yağ uygulayın. Standart mikrocerrahi makas ve mikrocerrahi kavisli forceps pubis gelen ksifoid sürecine karın bir orta hat deri kesi yapmak ve deriden karın kas ayrıştırmak için kullanın.Enjeksiyon tarafında cilt flepleri oluşturmak için dikey kesi hattının üst ve alt kısmında yatay deri kesiler yapmak ve lenf düğümü görselleştirmek için cilt geri çekmek. Cilt flebini akrilik plakaya sabitle ve yarı saydam, genellikle bilobular küresel inguinal drenaj lenf nodu çıkarmak için forseps kullanın. Popliteal drenaj lenf düğümü hasat için, enjeksiyondan en az 12 saat sonra, akrilik aşamada eğilimli pozisyonda fare immobilize.Hayvanın enjekte edilen tarafında buzağı ve diz mineral yağ uygulayın. Daha sonra, topuktan diz e doğru baldırda bir orta hat kesi yapın ve baldır kaslarını deriden ayırın. Popliteal fossa ortaya çıkarmak.Popliteal lenf düğümü fossa içinde yarı saydam bir küre olarak görünür. Sonra, mikrocerrahi kavisli forseps ile lenf düğümü çıkarın. Görüntüleme için lenf düğümü hazırlamak için, bir cam alt ile 35 tarafından 10 milimetrelik kültür çanak tüm organları yerleştirin ve doku çevreleyen herhangi bir yağ kaldırmak için forseps kullanın.Yemeğin ortasında organ ortalayın ve tuzlu batırılmış hassas görev silecek bir parça ile doku kapağı. Ex vivo görüntüleme için, ters konfokal mikroskop yuvasında çanak konumlandırmak ve doğru odak elde etmek için konfokal mikroskop ve 4-10X objektif konvansiyonel ışık kullanın. Işık işlevinden lazer moduna geçin ve lazer gücünü ayarlamak için izotop lekeli, lekesiz veya floresan olmayan bir örnek kullanın, ofset, ve otomatik floresan ve herhangi bir belirtilmemiş boyama kaldırmak için kazanç.Lenf nodül yapısına ve hücresel dağılıma odaklanan ve 1024 x 1024 piksel tanımı nı kullanan 4, 10 ve 20X hedefleri altında görüntüler edinin. Ardından, kanalları ayırmak, ilgi alanı nın ölçeğini ve renklerini eklemek ve 3B görünümü yeniden oluşturmak için uygun bir görüntüleme analizi yazılımı programı kullanın. Anti-CD4 ve anti-CD19 antikorları ve konfokal görüntüleme analizi ile lenf nodül hücrelerinin immünetiketleme güçlü kombinasyonu inguinal lenf düğümleri içinde T ve B hücrelerinin lokalizasyonu sağlar.Popliteal lenf düğümlerinde, inguinal dokuda olduğu gibi, B hücre folikülleri T hücre popülasyonları ile çevrilidir, lenf nodunun bir özelliği. Bu görüntülerde de görüldüğü gibi fagositler enjekte edilen antikorları içselleştirmez, bu da B ve T hücre boyamasının spesifik olduğunu gösterir. Ayrıca, etiketlemenin yeniden rekonstrüksiyonu, T ve B hücre boyamanın örtüşmediğini gösterir ve bu da boyamanın özgüllüğünü doğrular.Monosellüler hücreler inguinal lenf düğümü boyunca gözlenir, subkapsüler sinüs de dahil olmak üzere. CX3XR1 ifade mononükleer hücrelerin çoğunluğu ile, CCR2 ve CXCR31CCR2 çift pozitif hücreleri izledi. Popliteal lenf nodunda hücre dağılımı ve hücre fenotiplerinin aynı paterni gözlenir.Her iki lenf düğümleri de lenfositler tarafından işgal mononükleer hücre reseptör ekspresyonu olmadan karanlık bölgeler sergiler. Ayrıca, mononükleer hücreler lenf düğümlerinin iç bölgesinde kıt, bu hücrelerin öncelikle lenf düğümü subkapsüler sinüs işgal gösteren, dokunun dış bölgelerinde konsantre kalan. Antikor karışımı tam olarak lenfatik sistem için deri altı doku içine enjekte edilmesi gerekir düzgün lenf düğümü ne antikorları drenaj.Bu yöntem floresan etiketli ilaçların biyodağıtımına ve floresan etiketli nano partiküllerin hücre hedefleme çalışmalarına uygulanabilir.

Research

JoVE Journal

Biology

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

Görselleştirme RNA Yerelleştirme Xenopus Oosit

RNA localization is a conserved mechanism of establishing cell polarity.  Vg1 mRNA localizes to the vegetal pole of Xenopus laevis oocytes and acts to ...

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral aracılı demonte sırasında Ex vivo İnsan Hematopoetik Kök Hücre Eritropoiesis

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

Için bir sistem<em&gt; Ex vivo</emEmbriyonik Pankreas&gt; ekimi

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

Nano-fEM: Protein Localization Using Photo-activated Localization Microscopy and Electron Microscopy

Nano-fem: Foto-aktif Yerelleştirme Mikroskobu ve Elektron Mikroskop Kullanarak Protein Yerelleştirme

Mapping the distribution of proteins is essential for understanding the function of proteins in a cell. Fluorescence microscopy is extensively used for ...

Visualizing Bacteria in Nematodes using Fluorescent Microscopy

Floresan Mikroskobu kullanılarak Nematodlar Bakteriler görselleştirme

 
Symbioses, the living together of two or more organisms, are widespread throughout all kingdoms of life. As two of the most ubiquitous organisms on ...

Analyzing Craniofacial Morphogenesis in Zebrafish Using 4D Confocal Microscopy

4D konfokal mikroskopi kullanılarak Zebra balığı Kranyofasiyel morfogenez Analizi

Time-lapse imaging is a technique that allows for the direct observation of the process of morphogenesis, or the generation of shape. Due to their optical ...

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

Eşodaklı ve multiphoton Mikroskopi kullanarak beş Floresan Proteinleri ile işaretlenmiş Hematopoetik kök hücrelerin in vivo klonal Takip

We developed and validated a fluorescent marking methodology for clonal tracking of hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) with high spatial and ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

sertliği ölçme<em&gt; Ex Vivo</emAtomik Kuvvet Mikroskobu Kullanma&gt; Fare aorta

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

Visualizing Stromule Frequency with Fluorescence Microscopy

Floresan Mikroskopi ile Stromule Frekansı görselleştirme

Stromules, or "stroma-filled tubules", are narrow, tubular extensions from the surface of the chloroplast that are universally observed in plant cells but ...

Cellular Redox Profiling Using High-content Microscopy

Yüksek İçerikli Mikroskopi Kullanılarak Hücresel Redoks Profillemesi

Reactive oxygen species (ROS) regulate essential cellular processes including gene expression, migration, differentiation and proliferation. However, ...