Name: biosynthesis of a flavonol from a flavanone by establishing a one-pot bienzymatic cascade
Uploaded: 2019-08-14T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Biosynthesis of a Flavonol from a Flavanone by Establishing a One-pot Bienzymatic Cascade at JoVE.com

यह काम वित्तीय रूप से Yangzhou विश्वविद्यालय विशेष रूप से नियुक्त प्रोफेसर स्टार्ट-अप फंड, Jiangsu विशेष रूप से नियुक्त प्रोफेसर स्टार्ट-अप फंड, Jiangsu प्रांत में छह प्रतिभा चोटियों परियोजना (ग्रेंट नंबर 2014-SWYY-016) द्वारा समर्थित किया गया था, और एक परियोजना द्वारा वित्त पोषित Jiangsu उच्च शिक्षा संस्थानों (Veterinary चिकित्सा) की प्राथमिकता शैक्षणिक कार्यक्रम विकास. हम HPLC और एमएस flavonoids के विश्लेषण के लिए Yangzhou विश्वविद्यालय के परीक्षण केंद्र धन्यवाद.

1. संयंत्र के ऊतकों से कुल आरएनए अलग26,27
<ol><li>पौधे के ऊतकों को होमोजेनाइज करें।<ol>
<li>एक ताजा संयंत्र ऊतक के 100 मिलीग्राम ले लीजिए (जैसे, 4 सप्ताह के Arabidopsis thalianaसे पुराने अंकुर). तरल नाइट्रो?...

<ol>
	<li>Falcone Ferreyra, M. L., Rius, S. P., Casati, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flavonoids:+biosynthesis,+biological+functions,+and+biotechnological+applications.">Flavonoids: biosynthesis, biological functions, and biotechnological applications.</a> Frontiers in Plant Science. 3, 222 (2012).</li><li>Fang, F., Tang, K., Huang, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+of+flavonol+synthase+and+flavonol+contents+during+grape+berry+development.">Changes of flavonol synthase and flavonol contents during grape berry development.</a> European Food Research and Technology. 237 (4), 529-540 (2013).</li><li>Cui, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthocyanins+and+flavonols+are+responsible+for+purple+color+of+Lablab+purpureus+(L.)+sweet+pods.">Anthocyanins and flavonols are responsible for purple color of Lablab purpureus (L.) sweet pods.</a> Plant Physiology and Biochemistry. 103, 183-190 (2016).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+class+of+flavonol-based+anti-prostate+cancer+agents:+Design,+synthesis,+and+evaluation+in+cell+models.">A new class of flavonol-based anti-prostate cancer agents: Design, synthesis, and evaluation in cell models.</a> Bioorganic &amp; Medicinal Chemistry Letters. 26 (17), 4241-4245 (2016).</li><li>Kim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+Wnt+signaling+activity+for+growth+suppression+induced+by+quercetin+in+4T1+murine+mammary+cancer+cells.">Regulation of Wnt signaling activity for growth suppression induced by quercetin in 4T1 murine mammary cancer cells.</a> International Journal of Oncology. 43 (4), 1319-1325 (2013).</li><li>Kimura, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antioxidant+activities+and+structural+characterization+of+flavonol+O-glycosides+from+seeds+of+Japanese+horse+chestnut+(Aesculus+turbinata+BLUME).">Antioxidant activities and structural characterization of flavonol O-glycosides from seeds of Japanese horse chestnut (Aesculus turbinata BLUME).</a> Food Chemistry. 228, 348-355 (2017).</li><li>Cassidy, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Higher+dietary+anthocyanin+and+flavonol+intakes+are+associated+with+anti-inflammatory+effects+in+a+population+of+US+adults.">Higher dietary anthocyanin and flavonol intakes are associated with anti-inflammatory effects in a population of US adults.</a> The American Journal of Clinical Nutrition. 102 (1), 172-181 (2015).</li><li>Chao, H. C., Tsai, P. F., Lee, S. C., Lin, Y. S., Wu, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Myricetin-Containing+Ethanol+Solution+on+High-Fat+Diet+Induced+Obese+Rats.">Effects of Myricetin-Containing Ethanol Solution on High-Fat Diet Induced Obese Rats.</a> Journal of Food Science. 82 (8), 1947-1952 (2017).</li><li>Serban, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Quercetin+on+Blood+Pressure:+A+Systematic+Review+and+Meta-Analysis+of+Randomized+Controlled+Trials.">Effects of Quercetin on Blood Pressure: A Systematic Review and Meta-Analysis of Randomized Controlled Trials.</a> Journal of the American Heart Association. 5 (7), (2016).</li><li>Nakagawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvement+of+memory+recall+by+quercetin+in+rodent+contextual+fear+conditioning+and+human+early-stage+Alzheimer's+disease+patients.">Improvement of memory recall by quercetin in rodent contextual fear conditioning and human early-stage Alzheimer's disease patients.</a> Neuroreport. 27 (9), 671-676 (2016).</li><li>Muthukrishnan, S. D., Kaliyaperumal, A., Subramaniyan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+determination+of+flavonoids,+carotenoids+and+chlorophyll+concentration+in+Cynodon+dactylon+(L.)+by+HPLC+analysis.">Identification and determination of flavonoids, carotenoids and chlorophyll concentration in Cynodon dactylon (L.) by HPLC analysis.</a> Natural Product Research. 29 (8), 785-790 (2015).</li><li>Agar, O. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+Studies+on+Phenolic+Composition,+Antioxidant,+Wound+Healing+and+Cytotoxic+Activities+of+Selected+Achillea+L.+Species+Growing+in+Turkey.">Comparative Studies on Phenolic Composition, Antioxidant, Wound Healing and Cytotoxic Activities of Selected Achillea L. Species Growing in Turkey.</a> Molecules. 20 (10), 17976-18000 (2015).</li><li>Yang, R. Y., Lin, S., Kuo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Content+and+distribution+of+flavonoids+among+91+edible+plant+species.">Content and distribution of flavonoids among 91 edible plant species.</a> Asia Pacific Journal of Clinical Nutrition. 17, 275-279 (2008).</li><li>Tang, L. J., Zhang, S. F., Yang, J. Z., Gao, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+Synthetic+Methods+of+Flavones.">New Synthetic Methods of Flavones.</a> Chinese Journal of Organic Chemistry. 24 (8), 882-889 (2004).</li><li>Lu, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+luteolin+and+kaempferol+(author's+transl).">Synthesis of luteolin and kaempferol (author's transl).</a> Yao Xue Xue Bao. 15 (8), 477-481 (1980).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+Optimization+of+an+In+vitro+Multienzyme+Synthetic+System+for+Production+of+Kaempferol+from+Naringenin.">Development and Optimization of an In vitro Multienzyme Synthetic System for Production of Kaempferol from Naringenin.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 66 (31), 8272-8279 (2018).</li><li>Malla, S., Pandey, R. P., Kim, B. G., Sohng, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regiospecific+modifications+of+naringenin+for+astragalin+production+in+Escherichia+coli.">Regiospecific modifications of naringenin for astragalin production in Escherichia coli.</a> Biotechnology and Bioengineering. 110 (9), 2525-2535 (2013).</li><li>Zhu, S., Wu, J., Du, G., Zhou, J., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+synthesis+of+eriodictyol+from+L-tyrosine+in+Escherichia+coli.">Efficient synthesis of eriodictyol from L-tyrosine in Escherichia coli.</a> Applied and Environmental Microbiology. 80 (10), 3072-3080 (2014).</li><li>Trantas, E., Panopoulos, N., Ververidis, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+engineering+of+the+complete+pathway+leading+to+heterologous+biosynthesis+of+various+flavonoids+and+stilbenoids+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Metabolic engineering of the complete pathway leading to heterologous biosynthesis of various flavonoids and stilbenoids in Saccharomyces cerevisiae.</a> Metabolic Engineering. 11 (6), 355-366 (2009).</li><li>Miyahisa, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combinatorial+biosynthesis+of+flavones+and+flavonols+in+Escherichia+coli.">Combinatorial biosynthesis of flavones and flavonols in Escherichia coli.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 71 (1), 53-58 (2006).</li><li>Leonard, E., Yan, Y., Koffas, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+expression+of+a+P450+flavonoid+hydroxylase+for+the+biosynthesis+of+plant-specific+hydroxylated+flavonols+in+Escherichia+coli.">Functional expression of a P450 flavonoid hydroxylase for the biosynthesis of plant-specific hydroxylated flavonols in Escherichia coli.</a> Metabolic Engineering. 8 (2), 172-181 (2006).</li><li>Koopman, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=De+novo+production+of+the+flavonoid+naringenin+in+engineered+Saccharomyces+cerevisiae.">De novo production of the flavonoid naringenin in engineered Saccharomyces cerevisiae.</a> Microbial Cell Factories. 11, 155 (2012).</li><li>Winkel-Shirley, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flavonoid+biosynthesis.+A+colorful+model+for+genetics,+biochemistry,+cell+biology,+and+biotechnology.">Flavonoid biosynthesis. A colorful model for genetics, biochemistry, cell biology, and biotechnology.</a> Plant Physiology. 126 (2), 485-493 (2001).</li><li>Duan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biosynthesis+and+engineering+of+kaempferol+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Biosynthesis and engineering of kaempferol in Saccharomyces cerevisiae.</a> Microbial Cell Factories. 16 (1), 165 (2017).</li><li>Cheng, Q., Xiang, L., Izumikawa, M., Meluzzi, D., Moore, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enzymatic+total+synthesis+of+enterocin+polyketides.">Enzymatic total synthesis of enterocin polyketides.</a> Nature Chemical Biology. 3 (9), 557-558 (2007).</li><li>Connolly, M. A., Clausen, P. A., Lazar, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+RNA+from+plant+tissue+using+trizol.">Preparation of RNA from plant tissue using trizol.</a> Cold Spring Harbor Protocols. (1), (2006).</li><li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+RNA+from+cells+and+tissues+by+Acid+phenol-guanidinium+thiocyanate-chloroform+extraction.">Purification of RNA from cells and tissues by Acid phenol-guanidinium thiocyanate-chloroform extraction.</a> Cold Spring Harbor Protocols. (1), (2006).</li><li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Construction+of+cDNA+Libraries+Stage+1:+Synthesis+of+First-strand+cDNA+Catalyzed+by+Reverse+Transcriptase.">Construction of cDNA Libraries Stage 1: Synthesis of First-strand cDNA Catalyzed by Reverse Transcriptase.</a> Cold Spring Harbor Protocols. (1), (2006).</li><li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directional+cloning+into+plasmid+vectors.">Directional cloning into plasmid vectors.</a> Cold Spring Harbor Protocols. (1), (2006).</li><li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+Cloned+Genes+in+E.+coli+Using+IPTG-inducible+Promoters.">Expression of Cloned Genes in E. coli Using IPTG-inducible Promoters.</a> Cold Spring Harbor Protocols. (1), (2006).</li><li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+Histidine-tagged+Proteins+by+Immobilized+Ni2++Absorption+Chromatography.">Purification of Histidine-tagged Proteins by Immobilized Ni2+ Absorption Chromatography.</a> Cold Spring Harbor Protocols. (1), (2006).</li><li>Halbwirth, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+flavonoid+enzyme+activities+in+tissues+of+fruit+species.">Measuring flavonoid enzyme activities in tissues of fruit species.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 57 (11), 4983-4987 (2009).</li><li>Prescott, A. G., Stamford, N. P., Wheeler, G., Firmin, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+properties+of+a+recombinant+flavonol+synthase+from+Arabidopsis+thaliana.">In vitro properties of a recombinant flavonol synthase from Arabidopsis thaliana.</a> Phytochemistry. 60 (6), 589-593 (2002).</li></ol>

काफी अध्ययन के एक नंबर स्वास्थ्य देखभाल और खाद्य उद्योग में उनके संभावित आवेदन के कारण flavonols के व्युत्पत्ति पर ध्यान केंद्रित कर रहे हैं. हालांकि, कार्बनिक सॉल्वैंट्स और रासायनिक संश्लेषण का उपयोग कर प?...

फ्लेवोनोलपाद पादप फ्लेवोनोइड्स का एक प्रमुख उपवर्ग है और यह पादप विकास तथा रंजकता1,2,3में शामिल है . इससे भी महत्वपूर्ण बात, इन यौगिकों में स्वास्थ्य-लाभदायक गतिविधियों की एक विस्तृत श्रृंखला है, जैसे कि एंटी-कैंसर4,5, एंटी-ऑक्सीडेटिव6, एंटी-इंफ्लेमेटरी7, एंटीबेसिटी8, एंटी-हाइपरटेंसिव9 , और स्मृति याद गुण10, इन संयंत्र व्युत्पन्न माध्यमिक चयापचयों पर अध्ययन की एक बड़ी संख्या के लिए अग्रणी. परंपरागत रूप से, इन यौगिकों मुख्य रूप से कार्बनिक सॉल्वैंट्स का उपयोग कर संयंत्र निष्कर्षण से प्राप्त कर रहे हैं। हालांकि, पौधों में उनकी बहुत कम सामग्री के कारण11,12,13, सबसे flavonols के लिए उत्पादन लागत उच्च रहता है, जो स्वास्थ्य देखभाल और भोजन में उनके आवेदन पर काफी प्रतिबंध लगाता है उद्योग.
पिछले दशकों के दौरान वैज्ञानिकों ने फ्लेवोनोइड्स14,15को प्राप्त करने के लिए अनेक तरीके विकसित किए हैं . तथापि, इन जटिल अणुओं के रासायनिक संश्लेषण में विभिन्न प्रकार के आंतरिक नुकसानहोतेहैं। यह न केवल विषाक्त अभिकर्मकों और चरम प्रतिक्रिया की स्थिति की आवश्यकता है , लेकिन यह भी कई कदम एक लक्ष्य flavonoid यौगिक14,17का उत्पादन करने के लिए . इसके अलावा, इस रणनीति में एक और महत्वपूर्ण चुनौती सक्रिय flavonoid अणुओं के चिरल संश्लेषण है. अतः रासायनिक संश्लेषण16,17के माध्यम से वाणिज्यिक स्तर पर फ्लेवोनोइड्स का उत्पादन करना कोई आदर्श कार्यनीति नहीं है।
हाल ही में, वैज्ञानिकों ने इन जटिल प्राकृतिक यौगिकों का उत्पादन करने के लिए एक आशाजनक वैकल्पिक रणनीति विकसित की है, जिसमें फ्लैवोनॉयड बायोसिंथेसिस18,19,20, 21 , 22, जिसे23पौधों में सफलतापूर्वक समझा गया है . उदाहरण के लिए, Duan एट अल. नवोदित खमीर Saccharomyces cerevisiae में एक जैव संश्लेषण मार्ग की शुरुआत केलिएम्पफेरॉल (KMF)24का उत्पादन करने के लिए . मल्ल एट अल. का उत्पादन एस्ट्रागैलिन, एक ग्लाइकोसिलेटिड फ्लेवोनोल,flavanone 3-hydroxylase (f3h), flavonol synthase(fla1),और UDP-ग्लूकोज:flavonoid 3-O-glucosyltransferase UGT78K1 जीन में शुरू करने से Escherichia कोलाईBL21(DE3)17| हालांकि वहाँ काफी कुछ प्रतिमान हैं, नहीं सभी आनुवंशिक रूप से इंजीनियर रोगाणुओं एक सेलुलर मंच की जटिलता के कारण ब्याज के उत्पादों का उत्पादन, कृत्रिम रूप से संश्लेषित आनुवंशिक तत्वों और मेजबानों के बीच असंगति, निरोधात्मक मेजबान कोशिकाओं के खिलाफ लक्ष्य उत्पादों का प्रभाव, और एक इंजीनियर सेलुलर प्रणाली की अस्थिरता ही16.
flavonoid उत्पादन के लिए एक और आशाजनक वैकल्पिक रणनीति इन विट्रो में एक multienzymatic झरना स्थापित करने के लिए है. चेंग एट अल की सूचना दी है कि enterocin polyketides सफलतापूर्वक एक बर्तन25में एक पूर्ण एंजाइमी मार्ग कोडांतरण द्वारा संश्लेषित किया जा सकता है. यह सेल-मुक्त संश्लेषी कार्यनीति माइक्रोबियल उत्पादन कारखाने के प्रतिबंधों को दरकिनारकरती है और इस प्रकार बड़ी मात्रा में कुछ फ्लेवोनोइड्स के उत्पादन के लिए संभव है 16 .
हाल ही में, हमने एक बर्तन16में नारिनजेनिन (एनआरएन) को केएमएफ में परिवर्तित करने के लिए एक द्विएंजाइम संश्लेषक प्रणाली सफलतापूर्वक विकसित की है। यहाँ, हम महान विवरण और उत्पादों का विश्लेषण करने में शामिल तरीकों में इस प्रणाली का वर्णन. हम भी दो उदाहरण है कि इस प्रणाली का उपयोग NRN और क्वेरसेटिन से KMF का उत्पादन (QRC) eriodictyol (ERD) से प्रस्तुत करते हैं. इसके अलावा, हम flavonoids के biosynthesis में इस विधि और भविष्य के अनुसंधान दिशाओं के महत्वपूर्ण चरणों पर चर्चा.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>2&#215; Pfu MasterMix</td>
			<td>Beijing CoWin Biotech Co., Ltd</td>
			<td>CW0717A</td>
			<td>PCR amplification of genes with high fidelity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 1200 Series RRLC system with an Agilent 6460 Triple Quadrupole LC/MS system</td>
			<td>Agilent Technologies, Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td>an equipment for analysis of flavonoids by HPLC/MS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent MassHunter Workstation (version B.03.01)</td>
			<td>Agilent Technologies, Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td>a software for collection of the data from the Agilent 1200 Series RRLC system with an Agilent 6460 Triple Quadrupole LC/MS system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dihydrokaempferol</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC</td>
			<td>91216</td>
			<td>intermediate product for producing kaempferol from naringenin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dihydroquercetin</td>
			<td>Sichuan Provincial Standard Substance Center for Chinese Herbal Medicine</td>
			<td>PCS0371</td>
			<td>intermediate product for producing quercetin from eriodictyol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA Clean-up Kit</td>
			<td>Beijing CoWin Biotech Co., Ltd</td>
			<td>CW2301</td>
			<td>purification of PCR-amplified or gel-purified DNA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eriodictyol</td>
			<td>Shanghai Yuan Ye Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>B21160</td>
			<td>substrate for producing quercetin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Escherichia coli BL21(DE3)</td>
			<td>Beijing CoWin Biotech Co., Ltd</td>
			<td>CW0809</td>
			<td>bacteria strain for expressing target genes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Escherichia coli DH5&#945;</td>
			<td>Beijing CoWin Biotech Co., Ltd</td>
			<td>CW0808</td>
			<td>bacteria strain for plasmid proliferation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FreeZone 1 Liter Benchtop Freeze-Dry System</td>
			<td>Labconco Corporation</td>
			<td>7740020</td>
			<td>an equipment for freeze-drying of flavonoids dissolved in organic solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel Extraction Kit</td>
			<td>Beijing CoWin Biotech Co., Ltd</td>
			<td>CW2302</td>
			<td>purification of a DNA band from an agarose gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel Imaging System</td>
			<td>Shanghai Tanon Science &#38; Technology Co. Ltd.</td>
			<td>Tanon- 
			2500</td>
			<td>an equipment for visualization of DNA band on an agarose gel or flavonoid spot on a polyamide TLC plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GenElute Plasmid Miniprep Kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC</td>
			<td>PLN350-1KT</td>
			<td>minipreparation of plasmids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>kaempferol</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC</td>
			<td>60010</td>
			<td>final reaction product and standard substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MassHunter Quanlitative Analysis (version B.01.04)</td>
			<td>Agilent Technologies, Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td>a software for analysis of HPLC/LC/MS data</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop Microvolume UV-Vis Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ND-8000-GL</td>
			<td>an equipment for determination of DNA/RNA concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>naringenin</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC</td>
			<td>N5893</td>
			<td>substrate for producing kaempferol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ni-IDA Agarose Resin</td>
			<td>Beijing CoWin Biotech Co., Ltd</td>
			<td>CW0010</td>
			<td>purification of His-tagged fusion proteins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pET-32a(+)</td>
			<td>Novagen</td>
			<td>69015-3</td>
			<td>plasmid for cloning and expressing target genes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plasmid sequencing</td>
			<td>GENEWIZ Suzhou</td>
			<td>N/A</td>
			<td>sequencing of recombinant plasmids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>primer synthesis</td>
			<td>GENEWIZ Suzhou</td>
			<td>N/A</td>
			<td>synthesis of PCR primers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>quercetin</td>
			<td>Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>Q111273</td>
			<td>final reaction product and standard substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperRT cDNA Synthesis Kit</td>
			<td>Beijing CoWin Biotech Co., Ltd</td>
			<td>CW0741</td>
			<td>synthesis of the first strand of cDNA from total RNA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 DNA Ligase</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>EL0016</td>
			<td>ligation of an insert into a linearized vector DNA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizol</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15596018</td>
			<td>isolation of total RNA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vector NTI Advance</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12605099</td>
			<td>a software for PCR primer design and DNA sequence analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xcalibur v2.0.7</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>N/A</td>
			<td>a software for analysis of HPLC data</td>
		</tr>
	</tbody>
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biosynthesis of a flavonol from a flavanone by establishing a one-pot bienzymatic cascade

Flavonols जैविक और औषधीय गतिविधियों की एक किस्म के साथ flavonoids का एक प्रमुख उपवर्ग हैं. यहाँ, हम एक flavonol के इन विट्रो एंजाइमी संश्लेषण के लिए एक विधि प्रदान करते हैं. इस विधि में, एट्फ3ह और एफ्ल्स1, फ्लेवोनोल्स के जैव संश्लेषी मार्ग में दो प्रमुख जीन, एशेरीचिया कोलीमें क्लोन और अतिसंह ित किए जाते हैं. रिकॉमबिनेंट एंजाइमों एक संबंध स्तंभ के माध्यम से शुद्ध कर रहे हैं और फिर एक bienzymatic झरना एक विशिष्ट सिंथेटिक बफर में स्थापित किया गया है. दो flavonols उदाहरण के रूप में इस प्रणाली में संश्लेषित कर रहे हैं और टीएलसी और HPLC/LC/MS विश्लेषण द्वारा निर्धारित. विधि अन्य दृष्टिकोण पर flavonols के व्युत्पत्ति में स्पष्ट लाभ प्रदर्शित करता है. यह समय और श्रम की बचत और अत्यधिक लागत प्रभावी है. प्रतिक्रिया को सही ढंग से नियंत्रित किया जा आसान है और इस प्रकार बड़े पैमाने पर उत्पादन के लिए बढ़ाया. लक्ष्य उत्पाद प्रणाली में सरल घटकों के कारण आसानी से शुद्ध किया जा सकता है. हालांकि, इस प्रणाली को आम तौर पर एक flavanone से एक flavonol के उत्पादन के लिए प्रतिबंधित है.

एफ 3 एच और एफएलएस1 एक फ्लेवनोन को पौधों में फ्लेवोनोल में परिवर्तित करने में दो महत्वपूर्ण एंजाइम हैं जैसा कि चित्र 1में दर्शाया गया है। एक flavanone, Atf3h (GenBank accession No. से एक flavonol के उत्पादन ?...

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Biosynthesis of a Flavonol from a Flavanone by Establishing a One-pot Bienzymatic Cascade

एक flavonol के व्युत्पत्ति स्वास्थ्य देखभाल और खाद्य उद्योग में अपने आवेदन के लिए महत्वपूर्ण है. यहाँ, हम एक flavanone से एक flavonol के biosynthesis के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं और महत्वपूर्ण कदम और अन्य दृष्टिकोण पर इसके लाभ पर चर्चा.

एक एक पॉट Bienzymatic Cascade की स्थापना के द्वारा एक Flavanone से एक Flavonol के Biosynthesis

Flavonols are a major subclass of flavonoids with a variety of biological and pharmacological activities. Here, we provide a method for the in vitro ...

इस प्रोटोकॉल का उपयोग करके, हम आसानी से एक बर्तन में फ्लेवेन्स से काफी संख्या में फ्लेवोनॉल का उत्पादन कर सकते हैं। यह तकनीक श्रम और समय की बचत, अत्यधिक लागत प्रभावी और नियंत्रित करने में आसान है, इसलिए इसमें विशाल औद्योगीकरण की क्षमता है। हां, यह विधि अन्य माध्यमिक मेटाबोलाइट्स के आर्थिक उत्पादन में अंतर्दृष्टि प्रदान कर सकती है, लेकिन इसे लागू करने पर कुछ संशोधनों की आवश्यकता होती है।उसे आमतौर पर कुछ भी या बहुत कम उपज नहीं मिलेगी । मेरी सलाह बर्फ पर रिकॉम्बिनेंट एंजाइमों को संभालना और एंजाइमों के स्टॉक समाधान में 10% ग्लिसरीन जोड़ना है। ऐसा इसलिए है क्योंकि केवल दृश्य प्रदर्शन के माध्यम से एक नया हाथ महत्वपूर्ण विवरण और प्रयोग के सफल निष्पादन को प्रभावित करने वाली सच्चाई को समझ सकता है।सबसे पहले बफर तैयार करें। ट्रास-बेस, सोडियम एस्कॉर्बेट, अल्फा केटोग्लूटारिक एसिड की उचित मात्रा को डी-आयनित पानी में भंग करके दो बार सिंथेटिक बफर बनाएं, और समाधान के लिए ग्लाइस्रोल की उचित मात्रा में पिपेट करें। पीएच को 7.2 में समायोजित करने के लिए हाइड्रोक्लोरिक एसिड जोड़ने के लिए एक पिपेट का उपयोग करें, और डी-आयनित पानी जोड़कर मात्रा को समायोजित करें।भविष्य के उपयोग के लिए दो बार सिंथेटिक बफर को चार डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें। इसके बाद डिवोनाइज्ड वॉटर में फेरस सल्फेट हेप्टाहाइड्रेट को घोलकर 100 गुना स्टॉक सॉल्यूशन बनाएं। मेथनॉल में फ्लेवोनॉइड को भंग करके 25 मिलीमोलर फ्लेवोनॉइड का स्टॉक सॉल्यूशन बनाएं और घोल को माइनस 20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।सबसे महत्वपूर्ण कदम एक सिंथेटिक प्रणाली स्थापित करने के लिए है । फ्लावनोन से फ्लैवनॉल पैदा करने के लिए सिंथेटिक सिस्टम स्थापित करने के लिए सबसे पहले इस टेबल में सूचीबद्ध रिएजेंट्स के मुताबिक सिंथेटिक सिस्टम को दो मिलीलीटर ट्यूब में तैयार करें। चालीस मिनट के लिए 600 आरपीएम पर, 40 डिग्री सेल्सियस पर एक मिलाते हुए गर्मी ब्लॉक में खुली ट्यूब रखें।उसके बाद, एसिटिक एसिड के 10 माइक्रोलीटर और एथिल एसीटेट के 100 माइक्रोलीटर जोड़कर प्रतिक्रिया समाप्त करें। दो घंटे बाद, एक पिपेट का उपयोग 1.5 मिलीलीटर ट्यूब के शीर्ष कार्बनिक चरण को ट्रांफर करने के लिए करें, और ट्यूब को कमरे के तापमान पर हवा सुखाने के लिए एक हुड में रखें। टीएलसी विश्लेषण करने के लिए, पहले हुड से ट्यूबों को पुनः प्राप्त करें, और एक ट्यूब में मेथनॉल के 160 माइक्रोलीटर में फ्लेवेनॉयड पाउडर को फिर से अलग करें।मेथनॉल में 25 मिलीमोलर फ्लेवोनॉइड स्टॉक समाधान को कमजोर करके धारावाहिक सांद्रता के साथ प्रामाणिक फ्लेवोनॉइड नमूने तैयार करें। रेडिसप्लिक रिएक्शन सैंपल का एक माइक्रोलीटर लोड करें, और एक पॉलीमाइड प्लेट पर प्रामाणिक फ्लेवोनॉइड नमूने का एक माइक्रोलीटर लोड करें। एक ही प्लेट पर प्रामाणिक फ्लेवोनॉइड की अन्य सांद्रता के लिए भी ऐसा ही करें।फिर धूम हुड में, एक सॉल्वेंट सिस्टम से भरे क्रोमेटोग्राफी सिलेंडर में नमूना भरी हुई प्लेट डाल दें। सिलेंडर के नीचे प्लेट संलग्न करें, और 20 मिनट के लिए सॉल्वेंट सिस्टम में प्लेट चलाएं। हवा कमरे के तापमान पर प्लेटों को सुखाती है।एक स्प्रेयर बोतल के साथ, एल्यूमीनियम क्लोराइड के 1% इथेनॉल समाधान के साथ प्लेटों स्प्रे, 30 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर फिर से हवा सुखाने के बाद । 254 नैनोमीटर पर एक यूवी प्रकाश के तहत प्लेटों पर धब्बे कल्पना करें, और छवियों को लें, फिर कंप्यूटर पर, सॉफ्टवेयर इमेजजे खोलें। फ़ाइल पर क्लिक करें, खुला, छवि को खोलने के लिए विश्लेषण किया जाएगा ।इमेजजे यूजर इंटरफेस में लेफ्ट मोस्ट आयताकार चयन टूल पर क्लिक करें। माउस के साथ छवि में आरओआई की रूपरेखा तैयार करें, और पहले आरओआई को लेबल करने के लिए एक दबाए। अगले आरओआई के लिए माउस के अधिकार के साथ आयताकार चयन ले जाएँ, और दूसरे आरओआई लेबल करने के लिए दो प्रेस।दो दबाकर अन्य सभी आरओआई लेबल करने के लिए दोहराएं। एक पॉप-अप विंडो में, सभी आरओआई के लिए प्रोफ़ाइल भूखंड उत्पन्न करने के लिए तीन दबाएं। फिर, बेसलाइन छोड़ने के लिए सीधे लाइन चयन उपकरण का उपयोग करें ताकि ब्याज के प्रत्येक शिखर के लिए एक बंद क्षेत्र को परिभाषित किया जा सके।इमेजजे यूजर इंटरफेस में इसी आइकन पर क्लिक करके छड़ी टूल को सक्रिय करें। एक पॉप-अप विंडो में सभी चोटियों के लिए परिणाम प्रदर्शित करने के लिए चोटी के अंदर क्लिक करें। इसके बाद, एक्सेल में, प्रामाणिक फ्लेवोनॉइड के टीएलसी आधारित मानक वक्र बनाने के लिए, इसी फ्लेवोनॉइड सांद्रता के खिलाफ पॉप-अप विंडो से ग्रे मूल्यों को प्लॉट करें।फिर परिणामी सूत्र के अनुसार, इस प्रोटोकॉल में उत्पादित ब्याज के फ्लेवोनॉइड की उपज की गणना करें। 0.45 माइक्रोमीटर और 0.22 माइक्रोमीटर फिल्टर के माध्यम से प्रत्येक नमूने को क्रमिक रूप से संसाधित करने के लिए एक सिरिंज का उपयोग करें। नमूनों को सक्शन नोजल के माध्यम से एचपीएलसी-एमएस प्रणाली में लोड करें, और सी 18 कॉलम का उपयोग करके नमूनों को 30 डिग्री सेल्सियस पर अलग करें।पानी में 10 से 85 वॉल्यूम प्रतिशत एसीटाइल नाइट्राइल के ढाल द्वारा प्रति मिनट एक मिलीलीटर पर कॉलम को एल्यूट करें, और 200 से 800 नैनोमीटर तक एलुएट के अवशोषण की निगरानी करें। एलसी-एमएस विश्लेषण को नकारात्मक आयन मोड में करें, 300 डिग्री सेल्सियस पर 10 लीटर प्रति मिनट के सूखे नाइट्रोजन प्रवाह के साथ, 250 डिग्री सेल्सियस पर सात लीटर प्रति मिनट के म्यान गैस प्रवाह में, और सॉफ्टवेयर में निर्मित का उपयोग करके डेटा एकत्र करें। एकल तरंगदैर्ध्य क्रोमेग्राफ निकालने के लिए, गुणात्मक विश्लेषण कार्यक्रम खोलें, और फ़ाइल पर क्लिक करें, डेटाफाइल खोलें।खुली डेटा फ़ाइल विंडो में विश्लेषण करने के लिए फ़ाइल का चयन करें, और फ़ाइल खोलने के लिए खुले क्लिक करें। क्रोमेटोग्राम परिणाम खिड़की में माउस पर सही क्लिक करें और फिर एक पॉप-अप मेनू में क्रोमोग्राम निकालें। टाइप लिस्ट में अन्य क्रोमेटोग्राम पर क्लिक करें।डिटेक्टर कॉम्बो बॉक्स में, DAD1 का चयन करें, फिर क्रोमेटोग्राम परिणाम विंडो में एचपीएलसी परिणाम प्रदर्शित करने के लिए ठीक क्लिक करें। क्रोमेटोग्राम परिणाम विंडो के शीर्ष पर डॉक किए गए मैनुअल इंटीग्रेशन आइकन पर क्लिक करें। माउस के साथ मैनुअल एकीकरण विश्लेषण के लिए आवश्यक चोटी के लिए बेसलाइन ड्रा करें।परिणाम प्रदर्शित करने के लिए देखें, एकीकरण पीक सूची पर क्लिक करें । एक्सेल के लिए पीक क्षेत्रों के परिणामों की प्रतिलिपि, और इसी फ्लेवोनॉइड सांद्रता के खिलाफ प्रामाणिक फ्लेवोनॉइड के एक एचपीएलसी आधारित मानक वक्र साजिश है, तो परिणामी सूत्र के अनुसार इस प्रोटोकॉल में उत्पादित ब्याज की फ्लेवोनॉइड की उपज की गणना । फिर फ्लेवोनॉइड यौगिकों के सटीक द्रव्यमान के लिए एमएस डेटा का विश्लेषण करने के लिए एकल तरंगदैर्ध्य क्रोमाटोग्राम निकालने के लिए एक ही प्रक्रिया दोहराएं।क्रोमेटोग्राम परिणाम टूलबार पर रेंज चुनिंदा आइकन पर क्लिक करें। ब्याज की चोटी का चयन करें। चयनित रेंज में माउस पर सही क्लिक करें, और एमएस स्पेक्ट्रम परिणाम खिड़की में परिणाम प्रदर्शित करने के लिए पॉप-अप मेनू में निकालने एमएस स्पेक्ट्रम पर क्लिक करें।यह निर्धारित करने के लिए कि क्या इस इन-विट्रो सिस्टम का उपयोग फ्लेवोनोन के फ्लेवोनॉल में रूपांतरण के लिए किया जा सकता है, एनआरएन को सिस्टम में जोड़ा गया था। एक पॉलीमाइड टीएलसी प्लेट पर दो नए स्पॉट उभरे थे । एक स्थान पर एक प्रवास दूरी DHK के समान दिखाया, और दूसरों केएमएफ के समान है ।एचपीएलसी और एलसी-एमएस द्वारा आगे के विश्लेषण से पता चला है कि नए रसायन ने क्रमशः 12 मिनट और 20 मिनट का अवधारण समय दिखाया, जेड पर एक अर्ध-आणविक आयन पीक एम में २८७ और २८५ जो DHK और KMF के समान थे । यह निर्धारित करने के लिए कि क्या सिस्टम का उपयोग अन्य फ्लेवेन्स के रूपांतरण के लिए उनके संबंधित फ्लेवोनॉल में किया जा सकता है, ईआरडी को सिस्टम में जोड़ा गया था। पॉलीमाइड टीएलसी प्लेट पर दो नए स्पॉट में क्रमशः डीएचक्यू और क्यूआरसी के समान माइग्रेशन दूरी प्रदर्शित की गई ।एचपीएलसी और एलसी-एमएस विश्लेषणों से पता चला है कि इन नए रसायनों ने क्रमशः 10 मिनट और 16 मिनट का प्रतिधारण समय और ३०३ और ३०१ पर जेड पर एक अर्ध-आणविक आयन पीक एम का पता चला, जो वास्तव में DHQ और QRC के लोगों से मेल खाती है । सिंथेटिक सिस्टम तैयार करते समय, आपको एंजाइम को आखिरी में जोड़ना चाहिए, और पिछले सेकंड में फेरस सल्फेट जोड़ना चाहिए। हां, यह अन्य माध्यमिक मेटाबोलाइट्स के किफायती उत्पादन के लिए एक गाइड प्रदान करता है।

Research

JoVE Journal

Biochemistry

A Tailored HPLC Purification Protocol That Yields High-purity Amyloid Beta 42 and Amyloid Beta 40 Peptides, Capable of Oligomer Formation

एक सिलवाया एचपीएलसी शुद्धि प्रोटोकॉल कि पैदावार उच्च शुद्धता amyloid बीटा 42 और 40 amyloid बीटा पेप्टाइड्स, Oligomer गठन के लिए सक्षम

Amyloidogenic peptides such as the Alzheimer's disease-implicated Amyloid beta (A&#946;), can present a significant challenge when trying to obtain high ...

Measuring Protein Binding to F-actin by Co-sedimentation

सह-अवसादन द्वारा एफ-एक्टिन के लिए प्रोटीन बाध्यकारी मापना

Filamentous actin (F-actin) organization within cells is regulated by a large number of actin-binding proteins that control actin nucleation, growth, ...

Hydrolysis of a Ni-Schiff-Base Complex Using Conditions Suitable for Retention of Acid-labile Protecting Groups

एक नी-शिफ़-बेस की हाइड्रोलिसिस परिसर का उपयोग स्थितियां एसिड अस्थायी रक्षा समूह की अवधारण के लिए उपयुक्त

Unnatural amino acids, amino acids containing side-chain functionalities not commonly seen in nature, are increasingly found in synthetic peptide ...

Protein Film Infrared Electrochemistry Demonstrated for Study of H2 Oxidation by a [NiFe] Hydrogenase

Protein Film Infrared Electrochemistry Demonstrated for Study of H2 Oxidation by a [NiFe] Hydrogenase

प्रोटीन फिल्म अवरक्त Electrochemistry एक [नाईफ] Hydrogenase द्वारा एच2 ऑक्सीकरण के अध्ययन के लिए प्रदर्शन किया

Understanding the chemistry of redox proteins demands methods that provide precise control over redox centers within the protein. The technique of protein ...

A Yeast 2-Hybrid Screen in Batch to Compare Protein Interactions

एक खमीर 2-बैच में संकर स्क्रीन प्रोटीन बातचीत की तुलना करने के लिए

Screening for protein-protein interactions using the yeast 2-hybrid assay has long been an effective tool, but its use has largely been limited to the ...

Detection of Protein Ubiquitination Sites by Peptide Enrichment and Mass Spectrometry

पेप्टाइड संवर्धन और मास स्पेक्ट्रोमेट्री द्वारा प्रोटीन सर्वव्यापकता साइटों का पता लगाना

The posttranslational modification of proteins by the small protein ubiquitin is involved in many cellular events. After tryptic digestion of ...

Isolation of Lipoprotein Particles from Chicken Egg Yolk for the Study of Bacterial Pathogen Fatty Acid Incorporation into Membrane Phospholipids

जीवाणु रोगजनक फैटी एसिड समावेश के अध्ययन के लिए चिकन अंडे Yolk से लाइपोप्रोटीन कणों का अलगाव झिल्ली Phospholipids में शामिल

Staphylococcus aureus and other Gram-positive pathogens incorporate fatty acids from the environment into membrane phospholipids. During infection, the ...

Detergent-assisted Reconstitution of Recombinant Drosophila Atlastin into Liposomes for Lipid-mixing Assays

Detergent-assisted Reconstitution of Recombinant Drosophila Atlastin into Liposomes for Lipid-mixing Assays

लिपिड-मिश्रण परख के लिए Liposomes में रिकॉमबिनेंट Drosophila Atlastin के डिटर्जेंट की मदद से पुनर्गठन

Membrane fusion is a crucial process in the eukaryotic cell. Specialized proteins are necessary to catalyze fusion. Atlastins are endoplasmic reticulum ...

Single Cell Analysis Of Transcriptionally Active Alleles By Single Molecule FISH

एकल अणु मछली द्वारा ट्रांसक्रिप्शनल एक्टिव एलील्स का एकल सेल विश्लेषण

Gene transcription is an essential process in cell biology, and allows cells to interpret and respond to internal and external cues. Traditional bulk ...

Removal and Replacement of Endogenous Ligands from Lipid-Bound Proteins and Allergens

लिपिड-बाउंड प्रोटीन और एलर्जेंस से एंडोजेनस लिगांड को हटाना और प्रतिस्थापन

Many major allergens bind to hydrophobic lipid-like molecules, including Mus m 1, Bet v 1, Der p 2, and Fel d 1. These ligands are strongly retained and ...