Name: differentiation capacity of human aortic perivascular adipose progenitor cells
Uploaded: 2019-03-05T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Differentiation Capacity of Human Aortic Perivascular Adipose Progenitor Cells at JoVE.com

نعترف بالمساعدة من "التنقل للبحث" في المركز الطبي في ولاية ماين للمساعدة في شراء الأنسجة السريرية، والأنسجة وكور هيستومورفوميتري (بدعم من 1P20GM121301، L. لياو PI) في "ولاية ماين الطبي مركز البحوث" معهد تمزيقها وتلطيخ. هذا العمل كان يدعمها في المعاهد الوطنية للصحة منح R01 HL141149 (L. لياو).

استخدام الأنسجة البشرية في هذه الدراسة تم تقييمها والموافقة عليها قبل "المؤسسية استعراض المجلس لولاية ماين المركز الطبي"، وتلقى جميع موظفي التدريب المناسب قبل التجريب.
1-الأعمال التحضيرية
<ol><li>جعل الانفصال من المخزن المؤقت قبل إعادة تشكيل 50 ملغ خالية من الحيوان كولاجيناز/...

<ol>
	<li>Minteer, D., Marra, K. G., Rubin, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose-derived+mesenchymal+stem+cells:+biology+and+potential+applications.">Adipose-derived mesenchymal stem cells: biology and potential applications.</a> Advances in Biochemical Engineering/Biotechnology. 129, 59-71 (2013).</li><li>Akoumianakis, I., Tarun, A., Antoniades, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+adipose+tissue+as+a+regulator+of+vascular+disease+pathogenesis:+identifying+novel+therapeutic+targets.">Perivascular adipose tissue as a regulator of vascular disease pathogenesis: identifying novel therapeutic targets.</a> British Journal of Pharmacology. 174 (20), 3411-3424 (2017).</li><li>Brown, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+adipose+tissue+in+vascular+function+and+disease:+a+review+of+current+research+and+animal+models.">Perivascular adipose tissue in vascular function and disease: a review of current research and animal models.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 34 (8), 1621-1630 (2014).</li><li>Bunnell, B. A., Estes, B. T., Guilak, F., Gimble, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+adipose+stem+cells.">Differentiation of adipose stem cells.</a> Methods in Molecular Biology. , 155-171 (2008).</li><li>Scott, M. A., Nguyen, V. T., Levi, B., James, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+methods+of+adipogenic+differentiation+of+mesenchymal+stem+cells.">Current methods of adipogenic differentiation of mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells and Development. 20 (10), 1793-1804 (2011).</li><li>Boucher, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rab27a+Regulates+Human+Perivascular+Adipose+Progenitor+Cell+Differentiation.">Rab27a Regulates Human Perivascular Adipose Progenitor Cell Differentiation.</a> Cardiovascular Drugs and Therapy. 32 (5), 519-530 (2018).</li><li>Nosalski, R., Guzik, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+adipose+tissue+inflammation+in+vascular+disease.">Perivascular adipose tissue inflammation in vascular disease.</a> British Journal of Pharmacology. 174 (20), 3496-3513 (2017).</li><li>Nadri, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+method+for+isolation+of+murine+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells.">An efficient method for isolation of murine bone marrow mesenchymal stem cells.</a> The International Journal of Developmental Biology. 51 (8), 723-729 (2007).</li><li>Cleal, L., Aldea, T., Chau, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fifty+shades+of+white:+Understanding+heterogeneity+in+white+adipose+stem+cells.">Fifty shades of white: Understanding heterogeneity in white adipose stem cells.</a> Adipocyte. 6 (3), 205-216 (2017).</li><li>de Souza, L. E., Malta, T. M., Kashima Haddad, S., Covas, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+Stem+Cells+and+Pericytes:+To+What+Extent+Are+They+Related.">Mesenchymal Stem Cells and Pericytes: To What Extent Are They Related.</a> Stem Cells and Development. 25 (24), 1843-1852 (2016).</li><li>Majesky, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adventitia+and+perivascular+cells.">Adventitia and perivascular cells.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 35 (8), e31-e35 (2015).</li><li>Miana, V. V., Gonzalez, E. A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+tissue+stem+cells+in+regenerative+medicine.">Adipose tissue stem cells in regenerative medicine.</a> Ecancermedicalscience. 12, 822 (2018).</li><li>Frese, L., Dijkman, P. E., Hoerstrup, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+Tissue-Derived+Stem+Cells+in+Regenerative+Medicine.">Adipose Tissue-Derived Stem Cells in Regenerative Medicine.</a> Transfusion Medicine and Hemotherapy. 43 (4), 268-274 (2016).</li><li>Mizuno, H., Tobita, M., Uysal, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concise+review:+Adipose-derived+stem+cells+as+a+novel+tool+for+future+regenerative+medicine.">Concise review: Adipose-derived stem cells as a novel tool for future regenerative medicine.</a> Stem Cells. 30 (5), 804-810 (2012).</li><li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multilineage+cells+from+human+adipose+tissue:+implications+for+cell-based+therapies.">Multilineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies.</a> Tissue Engineering. 7 (2), 211-228 (2001).</li><li>Safford, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenic+differentiation+of+murine+and+human+adipose-derived+stromal+cells.">Neurogenic differentiation of murine and human adipose-derived stromal cells.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 294 (2), 371-379 (2002).</li><li>Ashjian, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+differentiation+of+human+processed+lipoaspirate+cells+into+early+neural+progenitors.">In vitro differentiation of human processed lipoaspirate cells into early neural progenitors.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 111 (6), 1922-1931 (2003).</li><li>Trottier, V., Marceau-Fortier, G., Germain, L., Vincent, C., Fradette, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IFATS+collection:+Using+human+adipose-derived+stem/stromal+cells+for+the+production+of+new+skin+substitutes.">IFATS collection: Using human adipose-derived stem/stromal cells for the production of new skin substitutes.</a> Stem Cells. 26 (10), 2713-2723 (2008).</li><li>Thelen, K., Ayala-Lopez, N., Watts, S. W., Contreras, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+and+Adipogenesis+Induction+of+Adipocyte+Progenitors+from+Perivascular+Adipose+Tissue+Isolated+by+Magnetic+Activated+Cell+Sorting.">Expansion and Adipogenesis Induction of Adipocyte Progenitors from Perivascular Adipose Tissue Isolated by Magnetic Activated Cell Sorting.</a> Journal of Visualized Experiments. (124), (2017).</li></ol>

الخلايا الدهنية السلف من مستودعات مختلفة اختلافاً كبيرا في النمط الظاهري والتمايز المحتمل9. استزراع المتكفل بفات المستمدة من مانح واحد مريض في تحريض متزامنة أسفل ثلاثة مختلفة الأنساب، أديبوجينيك، أوستيوجينيك، وتشوندروجينيك، يسمح بإجراء تحقيق القدرة pluripotent هذه الرواية الت?...

الأنسجة الدهنية مصدر غنى قوية متعددة الخلايا الجذعية الوسيطة (MSC) قادر على التفريق في أوستيوجينيك، أديبوجينيك، وتشوندروجينيك الأنساب1. يوسع هذا النسيج من خلال تضخم adipocytes ناضجة وتمايز نوفو دي ماجستير المقيمين في adipocytes. الأنسجة الدهنية ارتشاح (بفات) يحيط بالأوعية الدموية وينظم وظيفة الأوعية الدموية2،3. توسيع بفات الناجمة عن السمنة يؤدي إلى تفاقم أمراض القلب والأوعية الدموية. بينما كانت إمكانات لجنة السلامة البحرية مولتيبوتينت من المستودعات الدهنية تحت الجلد البشري جيدا درس4،5، أي دراسات اكسبلانتيد وتقييم قدرة الخلايا البشرية السلف المستمدة من بفات، يحتمل نظراً للتمايز اختزاع للمشتريات. وهكذا، والهدف من هذا العمل تقديم منهجية explant ونشر الخلايا السلف من البشرية بفات الابهري من المرضى الذين يعانون من أمراض القلب والأوعية الدموية واختبار الميل إلى التفريق إلى أوستيوجينيك، تشوندروجينيك، والأنساب أديبوجينيك. لدينا مصدر بفات من الموقع لملامسة للاختلاس الالتفافية في ترتيب تصاعدي الشريان الاورطي للمرضى الذين يعانون من السمنة المفرطة يخضعون للاختلاس الشريان التاجي سيخضع لعملية جراحية. بفات طازجة-المعزولة انزيماتيكالي نات والكسر والأوعية الدموية stromal معزولة ويتم نشرها في المختبر، مما مكننا من اختبار قدرة التمايز للخلايا البشرية السلف المستمدة من بفات للمرة الأولى.
استخدام الأولية مثقف البشرية بفات stromal الأوعية الدموية الكسر، اختبرنا ثلاث فحوصات مصممة لحمل الخلايا الجذعية/السلف للتمييز تجاه أديبوجينيك، أوستيوجينيك، أو تشوندروجينيك الأنساب. دراستنا السابقة حددت عدد سكان من CD73 + CD105 + و + PDGFRa (CD140a) الخلايا التي يمكن التفريق بين قوة في adipocytes6، على الرغم من أن لا تم اختبارها على مولتيبوتينسي. وينظم بفات مباشرة7لهجة والتهاب الأوعية الدموية. والأساس المنطقي لاختبار إمكانيات التمايز هذه الخلية رواية السكان هو البدء في فهم تأثير المتخصصة بفات في وظيفة الأوعية الدموية، والآليات لتوسيع بفات خلال السمنة. هذه المنهجية ويعزز فهمنا لوظائف خلايا الأنسجة الدهنية المشتقة السلف، وتمكننا من تحديد ومقارنة أوجه الشبه والاختلاف للخلايا السلف من مصادر مختلفة من الأنسجة. ونحن بناء على النهج المتبعة وتم التحقق من صحتها لعزل والتفريق بين لجنة السلامة البحرية نحو الأنساب المختلفة وتحسين الإجراءات إلى أقصى حد ممكن بقاء الخلايا البشرية السلف المستمدة من بفات. هذه التقنيات لها تطبيقات واسعة في ميادين الجذعية والسلف تنمية البحوث والأنسجة الدهنية للخلية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:884px;" width="884">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">animal-free collagenase/dispase blend I &#160;</td>
			<td style="width:139px;">Millipore-Sigma</td>
			<td style="width:148px;">SCR139</td>
			<td style="width:299px;">50mg</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Alcian Blue</td>
			<td style="width:139px;">NewComerSupply</td>
			<td style="width:148px;">1003A</td>
			<td>1% Aqueous solution pH 2.5</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Alizarin Red</td>
			<td style="width:139px;">Amresco</td>
			<td style="width:148px;">9436-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">alpha-MEM</td>
			<td style="width:139px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:148px;">12561056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Aniline Blue</td>
			<td style="width:139px;">NewComerSupply</td>
			<td style="width:148px;">10073C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">antibiotic/antimycotic</td>
			<td style="width:139px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:148px;">15240062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Beibrich&#39;s scarlet acid fuchsin</td>
			<td style="width:139px;">Millipore-Sigma</td>
			<td style="width:148px;">A3908-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">b-glycerophosphate</td>
			<td style="width:139px;">Millipore-Sigma</td>
			<td style="width:148px;">G9422-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Biebrich Scarlet</td>
			<td style="width:139px;">EKI</td>
			<td style="width:148px;">2248-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">biotin</td>
			<td style="width:139px;">Millipore-Sigma</td>
			<td style="width:148px;">B4501-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Bouin&#39;s fixative</td>
			<td style="width:139px;">NewComerSupply</td>
			<td style="width:148px;">1020A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">bovine serum albumin</td>
			<td style="width:139px;">Calbiochem</td>
			<td style="width:148px;">12659</td>
			<td>stored at 4C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Cell detachment solution</td>
			<td style="width:139px;">Accutase</td>
			<td style="width:148px;">AT104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">cell strainer (70mm)</td>
			<td style="width:139px;">Corning</td>
			<td style="width:148px;">352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">dexamethasone</td>
			<td style="width:139px;">Millipore-Sigma</td>
			<td style="width:148px;">D4902-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">DMEM</td>
			<td style="width:139px;">Corning</td>
			<td style="width:148px;">10-013-CV</td>
			<td>4.5g/L glucose, L-glut and pyruvate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">DMEM/F12 medium</td>
			<td style="width:139px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:148px;">10565-042</td>
			<td>high glucose, glutamax, sodium bicarbinate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">DMSO</td>
			<td style="width:139px;">Millipore-Sigma</td>
			<td style="width:148px;">D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">fetal bovine serum</td>
			<td style="width:139px;">Atlanta Biologicals&#160;</td>
			<td style="width:148px;">S11550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">FGF2</td>
			<td style="width:139px;">Peprotech</td>
			<td style="width:148px;">100-18B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">formalin</td>
			<td style="width:139px;">NewComerSupply</td>
			<td style="width:148px;">1090</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">gelatin, bovine skin</td>
			<td style="width:139px;">Millipore-Sigma</td>
			<td style="width:148px;">G9391-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">glutamax</td>
			<td style="width:139px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:148px;">35050061</td>
			<td>glutamine supplement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">HBSS</td>
			<td style="width:139px;">Lonza</td>
			<td style="width:148px;">10-547F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">IBMX</td>
			<td style="width:139px;">Millipore-Sigma</td>
			<td style="width:148px;">I5879-250MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">insulin solution</td>
			<td style="width:139px;">Millipore-Sigma</td>
			<td style="width:148px;">I9278-5ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Oil red O</td>
			<td style="width:139px;">Millipore-Sigma</td>
			<td style="width:148px;">O0625-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">pantothenic acid</td>
			<td style="width:139px;">Millipore-Sigma</td>
			<td style="width:148px;">P5155-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">penicillin-streptomycin solution</td>
			<td style="width:139px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:148px;">15240062</td>
			<td>100ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">permount</td>
			<td style="width:139px;">Fisher</td>
			<td style="width:148px;">SP15-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:299px;">phosphotungstic/phosphomoybdic acid solution</td>
			<td style="width:139px;">Millipore-Sigma</td>
			<td style="width:148px;">P4006-100G/221856-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">primocin</td>
			<td style="width:139px;">Invivogen</td>
			<td style="width:148px;">ant-pm-1</td>
			<td>Antimicrobial reagent for culture media.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">rosiglitazone</td>
			<td style="width:139px;">Millipore-Sigma</td>
			<td style="width:148px;">R2408-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">TGFb1</td>
			<td style="width:139px;">Peprotech</td>
			<td style="width:148px;">100-21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Weigert&#39;s hematoxylin</td>
			<td style="width:139px;">EKI</td>
			<td style="width:148px;">4880-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

differentiation capacity of human aortic perivascular adipose progenitor cells

الأنسجة الدهنية مصدر غنى قوية متعددة الخلايا الجذعية الوسيطة (MSC) قادر على التفريق في أوستيوجينيك، أديبوجينيك، والأنساب تشوندروجينيك. أديبوجينيك التفريق بين الخلايا السلف إليه رئيسية يقود التوسع في الأنسجة الدهنية، والخلل الوظيفي في الاستجابة إلى السمنة. وهكذا فهم التغيرات في الأنسجة الدهنية ارتشاح (بفات) ذات الصلة سريرياً في الأمراض الأيضية. ومع ذلك، كانت الدراسات السابقة يغلب أداؤها في الماوس والحيوانات الأخرى نماذج. هذا البروتوكول يستخدم البشرية الصدر بفات العينات التي جمعت من المرضى الذين يخضعون لجراحة الشريان التاجي بالاختلاس. الأنسجة الدهنية من الشريان الاورطي تصاعدي تم جمعها واستخدامها اكسبلانتيشن كسر الأوعية الدموية stromal. نحن سبق وأكدت وجود الخلايا الدهنية السلف في بفات البشرية مع القدرة على التفريق في المحتوية على الدهن adipocytes. في هذه الدراسة، ونحن حلل كذلك إمكانات تمايز الخلايا من الكسر الأوعية الدموية stromal، يفترض أنها تحتوي على خلايا السلف قوية متعددة. أننا بالمقارنة مع الخلايا المستمدة من بفات بنخاع العظام البشرية ماجستير للتمايز في أديبوجينيك، أوستيوجينيك، والأنساب تشوندروجينيك. وبعد 14 يوما تمايز، استخدمت البقع محددة للكشف عن تراكم الدهن في adipocytes (س زيت أحمر)، رواسب كالسيفيك في خلايا أوستيوجينيك (الأليزارين الأحمر)، أو الجليكوزامينوجليكان والكولاجين في الخلايا تشوندروجينيك (Masson's Trichrome). بينما نخاع العظام MSC كفاءة متباينة في جميع الأنساب الثلاثة، قد الخلايا المستمدة من بفات أديبوجينيك وتشوندروجينيك المحتملة، ولكنها تفتقر إلى إمكانات osteogenic قوية.

عزلة كسر الأوعية الدموية stromal من بفات البشرية
ويبين الشكل 1A تخطيطي للمنطقة التشريحية التي حصلت فيها بفات تغمر الشريان الاورطي تصاعدي. ونحن سابقا وصف السكان المريض يمر الشريان التاجي الالتفافية التطعيم الذي كانت...

Watch this Scientific Journal Video about Differentiation Capacity of Human Aortic Perivascular Adipose Progenitor Cells at JoVE.com

Differentiation Capacity of Human Aortic Perivascular Adipose Progenitor Cells

والهدف من هذا البروتوكول اختبار قدرة الخلايا السلف المستمدة من الأنسجة الدهنية ارتشاح البشرية على التفريق في الأنساب خلية متعددة. تمت مقارنة التمايز للخلايا الجذعية الوسيطة المشتقة من نخاع العظام البشرية، التي من المعروف أن تفرق في adipocyte، أوستيوسيتي، والأنساب تشوندروسيتي.

قدرة التمايز للخلايا الدهنية ارتشاح الابهري البشرية السلف

Adipose tissue is a rich source of multi-potent mesenchymal stem cells (MSC) capable of differentiating into osteogenic, adipogenic, and chondrogenic ...

يحيط النسيج الشحمي الزّي المحيط بالأوعية الدموية وينظم فسيولوجيا القلب والأوعية الدموية. يستخدم هذا البروتوكول للإجابة على الأسئلة الرئيسية المتعلقة بوظيفة السلف الدهنية البشرية في البيئة الدقيقة الوعائية. تختلف الخلايا السلف الدهنية وفقًا لموقعها التشريحي.ونحن نظهر أن يمكن أن تستمد مجموعة من السلف متعددة القدرات بنجاح من الأنسجة الدهنية perivascular من المرضى الذين يعانون من أمراض القلب والأوعية الدموية. إثبات الإجراء سيكون سبنسر سكوت، طالب طب من مختبري. الحصول على قطعة 500 مليغرام من الأنسجة الدهنية Perivascular الإنسان أو PVAT من غرفة العمليات كما هو موضح في بروتوكول النص.نقل PVAT الإنسان الطازجة من DMEM إلى أنبوب مخروطي 50 ملليلتر تحتوي على 25 ملليلتر من محلول المضادات الحيوية. احتضان مع هزاز لمدة 20 دقيقة في أربع درجات مئوية. في حين أن PVAT هو في حل المضادات الحيوية، ذوبان aliquot من العازلة تفكك في 37 درجة مئوية.إضافة 50 ميكرولترات من 100x المضادات الحيوية / محلول مضاد للوميكوليك إلى خمسة ملليلتر من العازلة الانفصام وتعقيم باستخدام مرشح حقنة 0.22 ميكرون. إضافة ملليلتر واحد من محلول الجيلاتين إلى بئر واحد من لوحة 24-جيدا. في غطاء محرك تدفق المفارش، استخدم ملقط ومقصات معقمة لنقل PVAT من محلول المضادات الحيوية إلى طبق بيتري معقمة.إضافة ملليلتر واحد من العازلة ما قبل الدافئة تفكك الأنسجة. ناعما ينم الأنسجة بأكملها في الطين باستخدام ملقط العقيمة ومقص تشريح. نقل الطين ملليلتر واحد إلى أربعة ملليلتر من العازلة الانفصام.احتضان الأنبوب على جانبه في شاكر مداري درجة حرارة مسبقة 37 درجة مئوية عند 200 دورة في الدقيقة لمدة ساعة واحدة. بعد ساعة واحدة، لا ينبغي أن تكون هناك قطع الأنسجة مرئية، والحل سوف تظهر كـ تعليق خلية غائم. تصفية الحل من خلال مصفاة خلية 70 ميكرون تعيين فوق أنبوب مخروطي 50 ملليلتر.شطف المصفاة مع 10 ملليلتر إضافية من محلول المضادات الحيوية لالتقاط أكبر عدد ممكن من الخلايا. لا تضغط على مصفاة. الآن بيليه الخلايا لمدة 12 دقيقة في 300 مرة ز في جهاز طرد مركزي دلو يتأرجح.بعد الطرد المركزي، سيتم فصل الأنبوب إلى طبقة أعلى الدهنية من adipocytes، interphase و بيليه. بيليه هو كسر الأوعية الدموية stromal التي تحتوي على الخلايا البطانية, الخلايا المناعية, خلايا الدم والخلايا السلف. إعادة تعليق بيليه في 10 ملليلتر من HBSS والطرد المركزي لمدة خمس دقائق في 300 مرة ز.كرر هذه الخطوة لمجموع اثنين من يغسل في HBSS. الآن يُفطّن الجيلاتين من طبق 24 بئراً. غسل بلطف البئر مرة واحدة مع HBSS لإزالة الجيلاتين غير منضم.Resuspend الكسر الأوعية الدموية stromal بيليه مع خلايا الدم الحمراء سليمة في ملليلتر واحد من متوسطة النمو والبذور على الجيلاتين المغلفة جيدا. ثم إضافة FGF2 الإنسان إلى تركيز النهائي من 25 نانوغرام لكل ملليلتر في الثقافة المتوسطة. احتضان لمدة 24 ساعة في 37 درجة مئوية مع 5٪ CO2.بعد زراعة الخلايا لمدة 24 ساعة، وإزالة وسائل الإعلام نمو وغسل الخلايا خمس مرات مع HBSS. هذه الخطوة غسل يزيل خلايا الدم الحمراء والخلايا الميتة. ثم إضافة ملليلتر واحد من وسائل الإعلام النمو الطازجة تكمل مع 25 نانوغرام لكل ملليلتر FGF2 إلى كل بئر.تغيير وسائل الإعلام كل 48 ساعة مع التأكد من تكملة مع 25 نانوغرام لكل ملليلتر FGF2 الطازجة في كل مرة. مرور الخلايا بمجرد أن تصل إلى 100٪ التقاء سبعة إلى 10 أيام بعد explant. للقيام بذلك، الطامح وسائل الإعلام النمو وغسل monolayer مرتين مع HBSS ملليلتر واحد.pirate كل HBSS من الآبار وإضافة بضع قطرات من حل تفكك الخلية. اضغط على لوحة ودوامة عدة مرات واحتضان في 37 درجة مئوية مع 5٪ CO2 لمدة خمس إلى سبع دقائق لرفع الخلايا. ثم إضافة ما يقرب من ملليلتر واحد من ثقافة جديدة المتوسطة إلى الخلايا المنفصلة.توزيع 500 ميكرولترات من الخلايا المنفصلة على بئرين من لوحة 24 بئر يحتوي كل منها على 500 ميكرولترات من وسائط النمو و25 نانوغرام FGF2. أيضا، ثقافة الإنسان نخاع العظام Mesenchymal الخلايا الجذعية أو مستعمرات MSC كما هو موضح في بروتوكول النص. لوحة الأرقام المناسبة من نخاع العظام والخلايا المشتقة من PVAT في بئر من لوحة 12-جيدا.لadipogenic والظروف العظمية، لوحة ما يقرب من 200، 000 إلى 225، 000 الخلايا في البئر. في حين للشروط chondrogenic، لوحة 150، 000 إلى 175، 000 الخلايا في البئر. ثم فصل الخلايا عن كل من الإنسان PVAT الخلية السلف والسكان البشري نخاع العظم MSC عن طريق إضافة حل مفرزة الخلية.احتضان الخلايا في حل مفرزة في 37 درجة مئوية و 5٪ CO2 لمدة خمس دقائق. سحب السكان في قوارير مخروطية منفصلة 15 ملليلتر. تدور قارورة أسفل في 500 مرات ز لمدة سبع دقائق ل بيليه الخلايا.ثم إعادة تعليق الخلايا في ملليلتر واحد من برنامج تلفزيوني واستخدام مقياس الدم لتقدير عدد الخلايا. لوحة الخلايا في أطباق 12 جيدا كما كان من قبل. تقديم أطباق منفصلة لظروف adipogenic والعظام المستحثة وغير المستحثة.وإضافة 1.5 ملليلتر من وسائط الاتصال adipogenic والعظام إلى كل بئر من الحالة المستحثة. ثم إضافة 1.5 ملليلتر من وسائل الاعلام adipogenic والعظام غير التعريفي إلى كل بئر من الشرط غير المستحث. بدء حضانة مجموعات الخلايا المستحثة والمستحثة بالعظام والخلايا غير المستحثة عند 37 درجة مئوية و5٪ ثاني أكسيد الكربون.تدور أسفل حجم المتبقية من الخلايا السلف PVAT الإنسان وMSCs نخاع العظام البشري لمدة سبع دقائق في 500 مرة ز. تحديد حجم اللازمة لإعادة تعليق نخاع العظام المتبقية والكريات الخلية المشتقة من PVAT لتحقيق كثافة 100،000 خلية لكل 10 ميكرولترات. ثم إعادة تعليق الكريات في الحجم المحسوب من وسائط النمو MSC لاستقراء النسب chondrogenic.نقل بلطف حجم الخلايا صعودا وهبوطا باستخدام ماصة لضمان توزيع متجانسة. الآن ماصة 10 ميكرولتر قطرات من حل الخلية المركزة في مركز كل بئر لتشكيل كتلة صغيرة من 100، 000 الخلايا. ضع مليمتر واحد من الماء المعقم في البئر المجاورة لمنع التبخر.احتضان الثقافات كتلة صغيرة لمدة ساعتين في 37 درجة مئوية و 5٪ CO2 للسماح للكتلة الصغيرة لتجميع. بعد ساعتين، تضاف بعناية chondrogenic تمايز وسائل الإعلام ارتفعت مع 10 نانوغرام لكل ملليلتر الإنسان TGF-beta-one إلى كل من الآبار حالة المستحثة. الآن بعناية إضافة 1.5 ملليلتر من وسائل الإعلام غير التعريفي لآبار الشرط غير المستحث.كشط أو صب كتلة صغيرة في حالة شوكندروجينية مستحثة في كاسيت من أجل التجفيف، تضمين، وصمة العينة كما هو موضح في بروتوكول النص. أجريت دراسات تمايز Adipogenic بالتوازي مع MSC المشتقة من نخاع العظم البشري وخلايا السلف المشتقة من PVAT. في حالة غير مستحث, لا تراكم الدهون واضح.هذا على النقيض من الحالة المستحثة التي تظهر بعد تلطيخ الدهون المحايدة مع Oil Red O.While درجة التمايز في الخلايا المشتقة من PVAT الأبهري البشري أكثر قوة ، أظهرت مصادر الخلايا البشرية القدرة على التمييز للنسل الادبوي. تم استخدام بروتوكول التمايز العظمي لـ MSCs المشتقة من نخاع العظم البشري والخلايا المشتقة من PVAT. لم الخلايا غير المستحثة وصمة عار مع أليسارين الأحمر.بعد بروتوكول التمايز العظمي ، وضعت MSCs الإنسان العقيدات المتكلسة التي تلطخت بال Alizarin Red في حين أن خلايا PVAT الأبهر البشري لم تفعل ذلك. الخلايا المشتقة من كل من MSCs نخاع العظام البشري وPVAT الإنسان عرض ميزات مميزة للتمايز chondrogenic مع تراكم الكولاجين وفيرة في كتلة صغيرة. يتم تشكيل كتلة صغيرة من MSCs نخاع العظام البشري والخلايا الأبهرية المشتقة PVAT أظهرت أيضا تراكم وفير من الجليكوسامينوغلوكان كما هو مبين من قبل تلطيخ الأزرق Alcian.مورفولوجيا، تم الكشف عن هياكل مماثلة للثغرات مع الخلايا الجالسة في تجاويف محاطة ترسب الكولاجين. من الأهمية بمكان أن ينوم ناعما الأنسجة الدهنية perivascular قبل فصل الأنزيمية وضمان مطلية كثافات الخلايا المناسبة لكل قياس النسب التمايز. بعد هذا الإجراء، ينبغي استخدام PCR الكمي جنبا إلى جنب مع لطخة الغربية والتدفق الخلوي لتوصيف علامات النسب محددة من السلف المتباينة من الدهنية perivascular ومصادر نخاع العظام.مع هذه التقنية، يمكننا أن نبدأ في فهم الآليات التي تنظم توسع الأنسجة الدهنية perivascular والخلل الوظيفي أثناء السمنة والآثار التي الخلايا السلف على وظيفة الأوعية الدموية وأمراض القلب والأوعية الدموية.

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation and Large Scale Expansion of Adult Human Endothelial Colony Forming Progenitor Cells

العزلة وتوقعات بنمو كبير من الكبار الإنسان خلايا غشائي السلف تشكيل مستعمرة

This paper introduces a novel recovery strategy for endothelial colony forming progenitor cells (ECFCs) from heparinized but otherwise unmanipulated adult ...

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors

تمايز الخلايا الجذعية الجنينية في السلائف Oligodendrocyte

Oligodendrocytes are the myelinating cells of the central nervous system. For regenerative cell therapy in demyelinating diseases, there is significant ...

Generation of Human Cardiomyocytes: A Differentiation Protocol from Feeder-free Human Induced Pluripotent Stem Cells

جيل من العضلية الإنسان: البروتوكول التمايز من خالية من الطاعم المستحثة الخلايا الجذعية المحفزة الإنسان

In order to investigate the events driving heart development and to determine the molecular mechanisms leading to myocardial diseases in humans, it is ...

Manual Isolation of Adipose-derived Stem Cells from Human Lipoaspirates

عزل الخلايا الجذعية من دليل الدهنية المشتقة من Lipoaspirates الإنسان

In 2001, researchers at the University of  California, Los Angeles, described the isolation of a new population of adult  stem cells from liposuctioned ...

Assessing the Secretory Capacity of Pancreatic Acinar Cells

تقييم القدرة الإفرازية للخلايا البنكرياس عنيبية

Pancreatic acinar cells produce and secrete digestive enzymes. These cells are organized as a cluster which forms and shares a joint lumen. This work ...

Assessment of Vascular Tone Responsiveness using Isolated Mesenteric Arteries with a Focus on Modulation by Perivascular Adipose Tissues

تقييم استجابه نغمه الاوعيه الدموية باستخدام الشرايين المساريقيه المعزولة مع التركيز علي التحوير بواسطة الانسجه الدهنية الوعائية

Altered vascular tone responsiveness to pathophysiological stimuli contributes to the development of a wide range of cardiovascular and metabolic ...

Hepatic Progenitor Specification from Pluripotent Stem Cells using a Defined Differentiation System

مواصفات السلف الكبدي من الخلايا الجذعية متعددة القدرات باستخدام نظام تمييز محدد

Liver disease is an escalating global health issue. While liver transplantation is an effective mode of therapy, patient mortality has increased due to ...

Isolation and Enrichment of Human Lung Epithelial Progenitor Cells for Organoid Culture

عزل وإثراء الخلايا السلفية الظهارية للرئة البشرية للزراعة العضوية

Epithelial organoid models serve as valuable tools to study the basic biology of an organ system and for disease modeling. When grown as organoids, ...

Preparation of Adipose Progenitor Cells from Mouse Epididymal Adipose Tissues

إعداد الخلايا الدهنية بروجينيتور من ماوس Epididymal الأنسجة الدهنية

Obesity and metabolic disorders such as diabetes, heart disease, and cancer, are all associated with dramatic adipose tissue remodeling. Tissue-resident ...

Isolation, Proliferation and Differentiation of Rhesus Macaque Adipose-Derived Stem Cells

عزل وتكاثر وتمايز الخلايا الجذعية المشتقة من المكاك الريسوس الدهنية

Adipose tissue provides a rich and accessible source of multipotent stem cells, which are able to self-renew. These adipose-derived stem cells (ADSCs) ...