Name: an orthotopic endometrial cancer model with retroperitoneal lymphadenopathy made from in vivo propagated and cultured vx2 cells
Uploaded: 2019-09-12T12:30:00
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这项研究由特里·福克斯研究所（PPG#1075）、加拿大健康研究所（基金会赠款#154326）、加拿大癌症学会研究所（704718）、加拿大自然科学和工程研究理事会资助，[阿纳达创新基金会和玛格丽特公主癌症基金会。
我要感谢玛格丽特·阿肯斯博士为建立初始VX2模型和冷冻VX2肿瘤块提供了初始VX2细胞。我要感谢马可·迪格拉帕帮助进行初始VX2细胞培养实验，并感谢丁丽丽帮助VX2细胞培养。

深腹壁闭合：识别腹膜切口的顶点，用组织钳子抓住腹膜、整管肌肉和筋膜。所有动物研究均在大学卫生网络动物资源中心（ARC）批准的设施中进行，并符合经批准的动物使用和护理协议（AUP #3994/#4299）。VX2细胞系是从大学健康网络的Aken博士实验室获得的。
1. 创建体外VX2细胞系
<ol><li>从兔子四头肌和小鼠侧翼生长中收获VX2肿瘤。<ol>
<li>解冻冷冻VX2肿瘤块（1厘米x1厘米），?...

在此，我们报告了建立VX2子宫内膜癌模型的标准化手术方法，并报告了首次使用培养的VX2细胞创建此模型。肿瘤的切除率75%低于文献35、37、53、56所报告的100%;肿瘤的接受率是75%的。"37、53、56"的肿瘤取肿瘤率低于75%的发病率。然而，90%的病理确认淋巴结转移率与之前对该模型35、53<su...

子宫内膜癌，或子宫内膜癌，是全球第二大最常见的妇科恶性肿瘤，也是发达国家最常见的恶性肿瘤1。子宫内膜癌的发病率稳步上升，在2005-2013年间每年上升2.3%，死亡率为1、2、3，相应上升2.2%。淋巴结转移的诊断是最重要的，因为正淋巴结的存在是生存4，5，6，7的强烈负预测，并可以指导管理辅助疗法8，9，10，11，12，13。淋巴结转移目前通过手术切除骨盆和腹部主要血管的淋巴组织进行诊断。这个程序，被称为淋巴腺切除术，是有争议的，因为冲突的生存数据从两个大型试验14，15，16，17，18和已知的术中15、19、20和术后发病风险21、22、23。由于目前的非侵入性成像模式没有所需的灵敏度和特异性来取代淋巴结解剖24，因此一直在推动开发新的诊断成像技术。为了在临床前环境中测试这些新技术，需要一个可靠的子宫内膜癌模型与逆转淋巴结转移。
兔子VX2肿瘤模型是一个成熟的模型，已被广泛用于研究多个人体固体器官肿瘤25，包括肺26，头颈部27，28，肝脏29，肾脏30，骨31，32，脑33，胰腺34和子宫35，36，37。VX2模型最初由基德和鲁斯38于1940年开发，成功移植了1933年Shope发现的棉尾兔辣椒瘤病毒。自那时以来，VX2模型一直维持在体内，需要连续通过白新西兰兔子40的四头肌。然而，最近，多个组已经成功地在体外40，41，42中生长VX2细胞，并证明了培养细胞系31的保留性。42，43.VX2肿瘤被组织学定义为肿瘤鳞状细胞癌44，并含有类似于腺癌26的腺体特征。肿瘤的特点是易于植入，快速生长和超血管44，45和可靠的转移，最常见的区域和遥远的淋巴结45。子宫血管和淋巴解剖46以及正交生长部位的相似性确保了兔子VX2癌的转移模式与人类子宫内膜癌的转移模式相仿，使VX2模型成为研究人类的可靠模型转移性疾病。此外，组织学特征，如异常微血管增殖47，以及免疫学48和基因相似性49，50人与兔子之间的表明肿瘤微环境可能反映人类子宫内膜癌。
多个小组已经报告使用VX2创建子宫内膜癌模型与逆转性转移与高报告成功率36，51，52;然而，在模型创建方法方面，当前文献中存在着显著的变化。细胞悬浮剂量低至4 x 105细胞/子宫角51和高达5 x 109细胞/子宫角37，53已报告没有标准共识所需的VX2细胞剂量。此外，还报告了多种接种方法，包括将肿瘤微手术植入子宫肌膜36，注射VX2细胞悬浮液37，44，52,53，在某些情况下，在接种前添加子宫角缝合52。最后，没有组报告使用培养的 VX2 单元格来创建此模型。因此，本研究的目的是展示VX2模型创建的成功标准化方法，并报告首次使用培养的VX2细胞创建子宫内膜癌模型与在兔子的逆转转移。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>11-blade scalpel, Sterile, Disposible</td>
			<td>Aspen Surgical (VWR)</td>
			<td>80094-086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22-gague ear vein catheter</td>
			<td>CDMV</td>
			<td>14332</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-0 absorbable poly-filament suture (Polysorb)</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>356718</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-0 braided absorbable suture (Polysorb)</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>356718</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70uM cell strainer, Individually wrapped, Nylon</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acepromazine (Atravet)</td>
			<td>CDMV</td>
			<td>1047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine soap (Poviodone iodine 7.5%)</td>
			<td>CDMV</td>
			<td>4363</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine solution (Poviodone iodine 10%)</td>
			<td>UHN Stores</td>
			<td>457955</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>McGill University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cefazolin</td>
			<td>UHN in-patient pharmacy</td>
			<td>No Cat # Needed</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine solution</td>
			<td>CDMV</td>
			<td>119872</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 100mm dishes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354450</td>
			<td>brand not important</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 24-well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354408</td>
			<td>brand not important</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 6-well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354400</td>
			<td>brand not important</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Matrigel Basement Membrane Matrix, *LDEV-free, 10 mL</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/HAM F12 1:1</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11320</td>
			<td>brand not important</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Caledon Lab Chem</td>
			<td>1/10/4100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enrofloxacin (Baytril injectable)</td>
			<td>CDMV</td>
			<td>11242</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Tube</td>
			<td>Corning Centri-Star</td>
			<td>430828</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, Qualified, Canadian Origin, 500ml</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12483020</td>
			<td>brand/source not important</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>UHN in-patient pharmacy</td>
			<td>No Cat # Needed</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isohexol contrast</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>407141210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam (Metacam 0.5%)</td>
			<td>CDMV</td>
			<td>104674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Saline</td>
			<td>House Brand (UofT Medstore)</td>
			<td>1011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Multicell or Sigma</td>
			<td>331-010-CL or D8537-500mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin (100mL; 10000U Penicillin, 10000ug Streptomycin)</td>
			<td>Corning-Cellgro</td>
			<td>CA45000-652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Hanks Balanced Salt Solution (-Ca++, -Mg++, -Phenol Red)</td>
			<td>T.C.M.F (Dr Bristow)</td>
			<td>28-Jan-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Glue (Tissue Adhesive)</td>
			<td>3M Vetbond</td>
			<td>14695B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin (0.25%), Proteomics Grade</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T-6567-5X20UG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA, 0.05%, 100ml</td>
			<td>Wisent Inc</td>
			<td>325-542-EL</td>
			<td>brand not important</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an orthotopic endometrial cancer model with retroperitoneal lymphadenopathy made from in vivo propagated and cultured vx2 cells

子宫内膜癌是北美最常见的妇科恶性肿瘤，其发病率正在全球上升。治疗包括手术与或不辅助治疗取决于淋巴结参与由淋巴腺切除术确定。淋巴腺切除术是一种病态手术，在许多患者中尚未证明具有治疗作用，因此需要一种诊断淋巴结转移的新方法。为了测试新的成像剂，需要一个可靠的子宫内膜癌模型与逆转淋巴结转移。VX2子宫内膜癌模型在文献中经常被描述;然而，在模型建立方法方面存在着很大的差异。此外，没有研究报告使用培养的VX2细胞来创建这个模型，因为以前只使用在体内繁殖的细胞。本文介绍了建立VX2子宫内膜癌模型的标准化手术方法和术后监测方法，并报告首次使用培养的VX2细胞创建该模型。

28只兔子被用于建立子宫内膜癌模型。在实验时，兔子的平均体重为2.83公斤（2.71-3.58公斤）。子宫肿瘤在21只兔子中成功生长，总体模型成功率为75%。在将子宫缝合纳入协议之前，成功率为57%，而添加子宫缝合后为81%。第7只兔子之后，由于最初的低模型成功率，在协议中加入了子宫缝合。五个模型是从培养的VX2细胞（在8只兔子中尝试，成功率为63%）和16个兔子模?...

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An Orthotopic Endometrial Cancer Model with Retroperitoneal Lymphadenopathy Made From In Vivo Propagated and Cultured VX2 Cells

该协议提出了一种标准化的方法，用于培养VX2细胞，并创建子宫内膜癌的正交VX2模型，在兔子中具有逆转淋巴结转移。正位子宫内膜癌模型对于对诊断淋巴结转移的新型成像模式进行临床前研究具有重要意义。

矫形子宫内膜癌模型，具有从 Vivo 传播和培养的 VX2 细胞中制成的再生淋巴病

Endometrial cancer is the most common gynecologic malignancy in North America and the incidence is rising worldwide. Treatment consists of surgery with or ...

这种VX2子宫内膜癌模型具有逆膜淋巴结转移，可用于研究图像引导手术的技术。这项技术的主要优点是可靠、简单，并且能够产生一致的转移性扩散，模仿人类子宫内膜癌的模式。总的来说，这是一个简单的技术。但是，在尝试创建模型之前练习苏特操作将有助于使过程更容易。这种技术的视觉演示很重要，因为它有助于演示模型建立中涉及的手术步骤。演示与哈雷陈和我将李丽丁，一个技术员从我们的实验室演示程序。要准备体外传播的VX2细胞进行注射，首先在37摄氏度的珠子或水浴中加热VX2细胞的冷冻小瓶一分钟。当细胞解冻后，将细胞悬浮液拉在含有10毫升培养培养的15毫升管中。通过离心沉淀细胞。将颗粒以九毫升的介质重新暂停。将细胞转移到一个大的培养瓶中，在37摄氏度下孵育，无需摇晃，每天通过光显微镜检查细胞的汇合。当细胞达到80%的汇合时，在烧瓶中加入三毫升0.2%的三丁普辛，并将细胞返回细胞培养箱5分钟。当细胞分离时，将细胞悬浮转移到锥形管中，通过离心收集细胞。每次洗涤用9毫升新鲜PBS清洗细胞颗粒三次。最后一次洗涤后，在新鲜PBS中重新暂停细胞计数，然后稀释到每毫升PBS浓度的7个VX2细胞的4倍10，在冰上新的锥形管中。要准备体内传播的 VX2 细胞进行注射，请解冻一厘米 VX2 肿瘤块，并使用手术刀在培养板中切碎组织样本。将组织片段转移到70微米过滤器中，并加入汉克平衡盐溶液（HBSS）高达1毫升的小等分，以确保所有细胞都通过滤株机。然后计算细胞，然后将细胞悬浮液稀释到每毫升HSS浓度的7个VX2细胞的1倍至7个VX2细胞，在冰上的无菌管中。在确认对刺激缺乏反应后，将麻醉的雌性新西兰白兔放在手术台上的后体位置。将头发夹在骨盆和腹部，并使用三步手术皮肤准备清洁暴露的皮肤。戴上手术帽和面罩，在戴上无菌长袍和无菌手术手套之前，先用消毒剂擦洗双手。地标化阴骨的顶部，用腹腔切除术窗帘覆盖手术场，使下腹部的五到五厘米区域暴露。接下来，使用数字11手术刀刀片，使一个2.5厘米切口一厘米的颅骨，通过皮肤和皮下组织到共生阴。倾斜直肠筋膜，并横向解剖直肠肌肉，以暴露潜在的内膜。确认底面是无肠或其他腹部器官。快速进入膀胱，识别膀胱，并扫一个戴手套的手指优越，后部，横向在膀胱的顶点，以找到子宫角。通过腹部切口提取子宫角，放在腹壁上。使用 3-0 编织的可吸收缝合线对每个子宫角进行单缝合连接，距离子宫颈大约 1.5 到 2 厘米，并且只是中向子宫动脉。然后紧贴缝合线，包括近月子宫角。要用先前准备的 VX2 细胞悬浮液接种眼膜，请装上装有 27 量针的 1 毫升细胞的一毫升注射器。在一分钟内缓慢地将0.5毫升的细胞悬浮液注射到每个子宫角近到缝合线和子宫颈之间的缝合位点。然后对子宫内膜注射部位施加压力30秒，以尽量减少细胞泄漏。在将子宫角放回腹部之前，检查注射和缝合部位有没有出血。对于深腹壁闭合，识别腹膜切口的顶点，并使用手术夹抓住腹膜直肠肌肉和筋膜。通过放置一个3-0可吸收的多丝缝合线锚定缝合线，在切口的一个顶点上将表面到深，在切口的一个顶点上深到表面。使用附加的缝合线，使运行缝合垂直于切口通过腹壁的层，沿着切口从一侧到一边，然后绑下缝合和切割松散的末端。对于表面腹壁闭合，使用埋藏运行下切下3-0可吸收多丝缝合缝合深到表面的切口的一侧和表面到深的另一侧。打结缝合后，使用锚定缝合线使皮肤层中的运行缝合与切口平行，沿着切口从一侧到另一侧逐步工作。系上缝合线并拆下松动的末端。将手术胶涂抹在闭合切口上，以涂抹皮肤边缘。然后，将动物放在带氧气和监测的温暖毯子上，直到动物处于警觉状态并能够独立地坐着。建立此模型时，在从接种到实验的平均45天中，在四只兔子中成功获得每子宫角10倍至7个细胞的剂量，因此被确定为培养VX2模型的最佳注射剂量。对于体内传播的VX2模型，在16只兔子中成功创建，平均从接种到实验29天，每个子宫角的5倍10到6个细胞被确定为最佳注射剂量。所有模型都成功地转移了逆转录体淋巴结。此外，通过组织学分析，来自培养的VX2细胞的肿瘤和转移淋巴结与体内传播的VX2细胞的肿瘤相似，在入侵的肌肉中观察到登西梅托索林染色细胞，形成具有许多病理肌瘤图的腺状结构。将缝合线内侧放在子宫动脉上，以避免血管穿刺出血，并注意将细胞渗入肌膜而不是子宫内膜腔。在模型创建过程中，注意使用适当的无菌技术，以防止术后感染，并在手术过程中使用钛材料保护自己。

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