Name: an orthotopic endometrial cancer model with retroperitoneal lymphadenopathy made from in vivo propagated and cultured vx2 cells
Uploaded: 2019-09-12T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Orthotopic Endometrial Cancer Model with Retroperitoneal Lymphadenopathy Made From In Vivo Propagated and Cultured VX2 Cells at JoVE.com

Это исследование было профинансировано Научно-исследовательским институтом Терри Фокса (PPG-1075), Канадским институтом исследований в области здравоохранения (Фонд Грант #154326), Канадским институтом исследований онкологического общества (704718), Советом по естественным наукам и инженерным исследованиям Канады, Фонд инноваций ИАнада и Фонд принцессы Маргарет Рак.
Я хотел бы поблагодарить доктора Маргариту Акенс за предоставление первоначальных клеток VX2 для создания первоначальной модели VX2 и замороженных блоков опухоли VX2. Я хотел бы поблагодарить Марко DiGrappa за помощь в выполнении первоначальных экспериментов Культуры клеток VX2 и Лили Дин за помощь с культурой клеток VX2.

Глубокое закрытие брюшной стенки: Определите вершину брюшного разреза и похитить брюшную мышцу, ректусную мышцу и фасцию с помощью щипц. Все исследования на животных были проведены в Центре ресурсов животных (ARC), утвержденных объектов сети здравоохранения университета и в соответстви...

В этом мы сообщили о стандартизированном хирургическом методе для создания модели рака эндометрия VX2 и сообщили о первом использовании культивированных клеток VX2 для создания этой модели. Уровень опухоли 75% ниже, чем 100% процент ставка ранее сообщалось в литературе35,<s...

Рак эндометрия, или рак слизистой оболочки матки, является вторым наиболее распространенным гинекологических злокачественных новообразований во всем мире и наиболее распространенных злокачественных новообразований в развитых странах1. Заболеваемость раком эндометрия неуклонно растет, увеличившись на 2,3% в год в период 2005-2013 годов с соответствующим 2,2% увеличение смертности1,2,3. Диагноз метастазах лимфатических узлов имеет первостепенное значение, так как наличие положительных лимфатических узлов является сильным отрицательным предиктором выживания4,5,6,7 и может направлять администрирование адъювантная терапия8,9,10,11,12,13. Метастазовые лимфатические узлы в настоящее время диагностируются хирургическим путем удаления лимфатических тканей, лежащих в основных кровеносных сосудов в тазе и животе. Эта процедура, известная как лимфаденэктомия, является спорным из-за противоречивых данных выживания из двух больших испытаний14,15,16,17,18 и известных риск внутриоперационной15,19,20 и послеоперационной заболеваемости21,22,23. Поскольку современные неинвазивные методы визуализации не обладают необходимой чувствительностью и специфичностью для замены рассечения лимфатических узлов24,был предотврачив разработку новых методов диагностической визуализации. Для проверки этих новых методов в доклинических условиях требуется надежная модель рака эндометрия с ретроперитонеальными метастазами лимфатических узлов.
Модель опухоли кролика VX2 является устоявшейся моделью, которая широко используется для изучения нескольких опухолей твердых органов человека25, включая легкие26,голову и шею27,28, печень29, почки30, кости31,32, мозг33, поджелудочная железа34 и матка35,36,37. Модель VX2 была первоначально разработана в 1940 году Кидд и Рус38 путем успешной трансплантации хлопчатобумажный вирус папилломы кролика обнаружили Shope в 193339. С тех пор модель VX2 поддерживается in vivo, требуя серийного прохождения в четырехглавой мышце белых новозеландских кроликов40. Совсем недавно, однако, несколько групп успешно выросли VX2 клетки в пробирке40,41,42 и продемонстрировали сохраненные tumorigenecity культивированных клеточной линии31, 42,43. Опухоли VX2 гистологически определены как анапластические плоскоклеточные карциномы44 и содержат железистые особенности, которые напоминают аденокарциному26. Опухоли характеризуются простотой имплантации, быстрым ростом и гиперваскулярностью44,45 и надежно метастазируют, чаще всего в региональные и отдаленные лимфатические узлы45. Сходства в маточных сосудистой и лимфатической анатомии46, а также ортотопический рост сайта обеспечить, чтобы метастатическая картина рака кролика VX2 имитирует, что из рака эндометрия человека, что делает модель VX2 надежной моделью для изучения человека метастатического заболевания. Кроме того, гистологические особенности, такие как аномальная микрососудистая пролиферация47 , а также иммунологические48 и генетические сходства49,50 между людьми и кроликами предполагают, что опухоль микроокружение может отражать рак эндометрия человека.
Несколько групп сообщили об использовании VX2 для создания модели рака эндометрия с ретроперитонеальной метастазы с высоким уровнем сообщили успеха36,51,52; однако в нынешней литературе существуют значительные различия в отношении метода создания модели. Сотовые дозы подвески как низко как 4 х 105 клеток / матки рога51 и выше, чем 5 х 109 клеток / матки рога37,53 были зарегистрированы без стандартного консенсуса по требуемой дозы VX2 клеточной. Кроме того, различные методы прививки были зарегистрированы в том числе микро-хирургической имплантации опухоли в миометрию матки36, инъекция VX2 клеточной суспензии37,44,52 , 53 и в некоторых случаях, добавление зашвы роговой матки зашивания до инноциуляции52. Наконец, ни одна группа не сообщила об использовании культивированных ячеек VX2 для создания этой модели. Таким образом, цель этого исследования состоит в том, чтобы продемонстрировать успешный стандартизированный метод создания модели VX2 и сообщить о первом использовании культивированных клеток VX2 для создания модели рака эндометрия с ретроперитонеальными метастазами в кролике.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>11-blade scalpel, Sterile, Disposible</td>
			<td>Aspen Surgical (VWR)</td>
			<td>80094-086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22-gague ear vein catheter</td>
			<td>CDMV</td>
			<td>14332</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-0 absorbable poly-filament suture (Polysorb)</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>356718</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-0 braided absorbable suture (Polysorb)</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>356718</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70uM cell strainer, Individually wrapped, Nylon</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acepromazine (Atravet)</td>
			<td>CDMV</td>
			<td>1047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine soap (Poviodone iodine 7.5%)</td>
			<td>CDMV</td>
			<td>4363</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine solution (Poviodone iodine 10%)</td>
			<td>UHN Stores</td>
			<td>457955</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>McGill University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cefazolin</td>
			<td>UHN in-patient pharmacy</td>
			<td>No Cat # Needed</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine solution</td>
			<td>CDMV</td>
			<td>119872</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 100mm dishes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354450</td>
			<td>brand not important</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 24-well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354408</td>
			<td>brand not important</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 6-well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354400</td>
			<td>brand not important</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Matrigel Basement Membrane Matrix, *LDEV-free, 10 mL</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/HAM F12 1:1</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11320</td>
			<td>brand not important</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Caledon Lab Chem</td>
			<td>1/10/4100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enrofloxacin (Baytril injectable)</td>
			<td>CDMV</td>
			<td>11242</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Tube</td>
			<td>Corning Centri-Star</td>
			<td>430828</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, Qualified, Canadian Origin, 500ml</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12483020</td>
			<td>brand/source not important</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>UHN in-patient pharmacy</td>
			<td>No Cat # Needed</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isohexol contrast</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>407141210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam (Metacam 0.5%)</td>
			<td>CDMV</td>
			<td>104674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Saline</td>
			<td>House Brand (UofT Medstore)</td>
			<td>1011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Multicell or Sigma</td>
			<td>331-010-CL or D8537-500mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin (100mL; 10000U Penicillin, 10000ug Streptomycin)</td>
			<td>Corning-Cellgro</td>
			<td>CA45000-652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Hanks Balanced Salt Solution (-Ca++, -Mg++, -Phenol Red)</td>
			<td>T.C.M.F (Dr Bristow)</td>
			<td>28-Jan-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Glue (Tissue Adhesive)</td>
			<td>3M Vetbond</td>
			<td>14695B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin (0.25%), Proteomics Grade</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T-6567-5X20UG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA, 0.05%, 100ml</td>
			<td>Wisent Inc</td>
			<td>325-542-EL</td>
			<td>brand not important</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an orthotopic endometrial cancer model with retroperitoneal lymphadenopathy made from in vivo propagated and cultured vx2 cells

Рак эндометрия является наиболее распространенным гинекологических злокачественных новообразований в Северной Америке и заболеваемость растет во всем мире. Лечение состоит из хирургии с или без адъювантной терапии в зависимости от участия лимфатических узлов, как это определено лимфаденэктомии. Лимфаденэктомия является болезненной процедурой, которая не была показана, чтобы иметь терапевтическую пользу у многих пациентов, и, таким образом, новый метод диагностики метастазов лимфатических узлов не требуется. Для тестирования новых агентов визуализации необходима надежная модель рака эндометрия с ретроперитонеальными метастазами лимфатических узлов. Модель рака эндометрия VX2 часто описывается в литературе; однако существуют значительные различия в отношении метода создания моделей. Кроме того, никаких исследований не сообщалось об использовании культивированных клеток VX2 для создания этой модели, поскольку только клетки, распространяемые in vivo, ранее использовались. В этом виде мы представляем стандартизированный хирургический метод и метод послеоперационного мониторинга для создания модели рака эндометрия VX2 и сообщаем о первом использовании культивированных клеток VX2 для создания этой модели.

Двадцать восемь кроликов были использованы для создания модели рака эндометрия. На момент эксперимента средний вес кроликов составил 2,83 кг (2,71-3,58 кг). Опухоли матки успешно росли в 21 кроликов для общего успеха модели 75%. До включения маточных сшивок в протокол, показате...

Watch this Scientific Journal Video about An Orthotopic Endometrial Cancer Model with Retroperitoneal Lymphadenopathy Made From In Vivo Propagated and Cultured VX2 Cells at JoVE.com

An Orthotopic Endometrial Cancer Model with Retroperitoneal Lymphadenopathy Made From In Vivo Propagated and Cultured VX2 Cells

Этот протокол представляет собой стандартизированный метод для выращивания клеток VX2 в культуре и создания ортотопической модели VX2 рака эндометрия с ретроперитонеальными лимфатическими метастазами у кроликов. Ортотопические модели рака эндометрия имеют важное значение для доклинического исследования новых методов визуализации для диагностики метастаз лимфатических узлов.

Ортотопические эндометрия рака модель с ретроперитонеальной лимфаденопатии Сделано из In Vivo распространяется и культивированных VX2 клеток

Endometrial cancer is the most common gynecologic malignancy in North America and the incidence is rising worldwide. Treatment consists of surgery with or ...

Эта модель рака эндометрия VX2 с ретроперитонеальным метастазом лимфатических узлов может быть использована для изучения технологии для хирургии, управляемой изображениями. Основные преимущества этой техники в том, что она надежна, проста, и что она создает последовательное метастатическое распространение, которое имитирует картину рака эндометрия человека. В целом, это простой метод.Тем не менее, практика шва до попытки создать модель поможет сделать процесс проще. Визуальная демонстрация этой техники важна, так как она помогает продемонстрировать хирургические шаги, связанные с созданием модели. Демонстрация процедуры с Харли Чан и я буду Лили Дин, техник из нашей лаборатории.Для подготовки клеток VX2, распространяемых в пробирке, начните с нагрева замороженных флаконов клеток VX2 в бисере или водяной бане на 37 градусов по Цельсию в течение одной минуты. Когда клетки разморозились, потяните клеточные суспензии в 15-миллилитровую трубку, содержащую 10 миллилитров среды культуры. Осадок клеток центрифугации.Переусейте гранулы в девяти миллилитров среднего. Передача клеток в большую культурную колбу для инкубации при 37 градусах Цельсия без встряхивания, ежедневно проверяя клетки на слияние с помощью световой микроскопии. Когда клетки достигли 80%-ного слияния, добавьте три миллилитра 0,2%трипсина в колбу и верните клетки в инкубатор культуры клеток в течение пяти минут.Когда клетки отсоединились, перенесите подвесную клетку в коническую трубку, чтобы собрать клетки путем центрифугации. Вымойте гранулы клетки три раза с девятью миллилитров свежего PBS за стирку. После последней стирки, повторное распределение клеток в свежем PBS для подсчета до разбавления в четыре раза 10 до семи клеток VX2 на миллилитр концентрации PBS в новой конической трубки на льду.Для подготовки в vivo-распространяемых клеток VX2 для инъекций, оттепель замороженных один на один сантиметр VX2 опухолевых блоков и использовать скальпель, чтобы фарш образцов тканей в культуре пластины. Перенесите фрагменты тканей в 70-микрометровый фильтр и добавьте небольшие алициты до одного миллилитра сбалансированного соленого раствора Хэнка, или HBSS, чтобы убедиться, что все клетки проходят через ситечко. Затем подсчитайте клетки перед разбавлением клеточной суспензии в один раз от 10 до семи клеток VX2 на миллилитр концентрации HBSS в стерильной трубке на льду.После подтверждения отсутствия реакции на стимул, поместите анестезированной самки белого новозеландского кролика в спинное положение на операционном столе. Клип волосы над тазом и животом, и использовать три шага хирургической подготовки кожи для очистки открытой кожи. Ношение хирургической шапки и маски для лица, скраб руки с дезинфицирующим средством, прежде чем надеть стерильное платье и стерильные хирургические перчатки.Ориентир верхней части лобковой кости и драпировка хирургического поля с лапаротомии шторы, в результате чего пять на пять сантиметров области нижней части живота подвергаются. Далее, используйте номер 11 скальпель лезвие, чтобы сделать 2,5-сантиметровый разрез один сантиметр черепа симфиза лобка через кожу и подкожной ткани. Incise прямой фасции и вскрыть мышцы прямой кишки боковой подвергать основной брюшной полыши.Подтвердите, что подповерхностная поверхность очищена от кишечника или других органов брюшной полости. Резко введите брюшной полых, чтобы определить мочевой пузырь и развертки в перчатках палец выше, задним, а затем над вершиной мочевого пузыря, чтобы найти рога матки. Извлеките рога матки через разрез брюшной полости, чтобы отдохнуть на брюшной стенке.Используйте 3-0 плетеные абсорбируемые швы для выполнения одной перевязки шва каждого рога матки, примерно от 1,5 до двух сантиметров дистальной шейки матки и просто медиальной для маточных артерий. Затем связать швы плотно включить дистальные рога матки. Чтобы привить миометрий с ранее подготовленной клеточной подвеской VX2, загрузите одноми миллилитровый шприц, оснащенный иглой 27-го калибра с одним миллилитром клеток.Медленно ввилите 0,5 миллилитров клеточной суспензии в течение одной минуты в каждый маточные рога проксимальные к месту шва между швом и шейкой матки. Затем нанесите давление на место инъекций миометрия в течение 30 секунд, чтобы свести к минимуму утечку клеток. Осмотрите места инъекций и швов на гемостаз перед тем, как поместить рога матки обратно в брюшную полость.Для глубокого закрытия брюшной стенки, определить вершину перитонеального разреза и использовать хирургический зажим, чтобы понять мышцы прямой кишки и фасции. Якорь шва, поставив 3-0 абсорбируемых полифиламент шов, поверхностный глубоко на одной вершине разреза, и глубоко поверхностно, с другой стороны. Используя прикрепленный шов, сделать работает стежки перпендикулярно разрез через слои брюшной стенки, работая шаг за шагом вдоль разреза из стороны в сторону, прежде чем связывать шв и резки свободные концы.Для поверхностного закрытия брюшной стенки, используйте похоронен работает подкожный 3-0 абсорбируемых полифиламент шов для шва глубоко поверхностно с одной стороны разреза и поверхностные глубоко с другой стороны. После завязывания швов, используйте якорные швы, чтобы сделать работает стежки в дермальный слой параллельно разрезу, работая шаг за шагом вдоль разреза из стороны в сторону. Свяжите швы и удалите свободные концы.Нанесите хирургический клей на закрытый разрез, чтобы зарезать края кожи. Затем поместите животное на теплое одеяло с кислородом и мониторинг, пока животное не будет начеку и не сможет сидеть самостоятельно. При создании этой модели, доза от двух раз 10 до семи клеток на рога матки был успешным в четырех кроликов, в среднем время 45 дней от прививки до эксперимента и, таким образом, определяется как оптимальная доза инъекции для культурных VX2 модели.Для виво-распространяемой модели VX2, которая была успешно создана в 16 кроликов со средним временем от прививки до эксперимента 29 дней, пять раз от 10 до шести клеток на рог матки была определена в качестве оптимальной дозы инъекции. Все модели привели к успешной метастатической трансформации ретроперитонеаных лимфатических узлов. Кроме того, опухоли и метастатические лимфатические узлы из культурных клеток VX2 оказались похожими на опухоли из виво-распространяемых клеток VX2 по гистологическому анализу, с денсиметоксолин-окрашенных клеток наблюдается в вторгающейся мышцы и формирования железистых, как структуры со многими патологическими митотических фигур.Поместите шов медиальной артерии матки, чтобы избежать кровотечения из прокола сосуда и заботиться, чтобы проникнуть в клетки в миометрии, а не эндометрия полости. Позаботьтесь, чтобы использовать правильную стерильную технику во время создания модели, чтобы предотвратить послеоперационную инфекцию и защитить себя с барием материала во время операции.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Флуоресцентные Ортотопическая Мышь Модель панкреатического рака

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Мышиные Экспериментальная модель самобытного развития опухолевого и перитонеальный метастаз<em&gt; с помощью</em&gt; Ортотопическая Заражение клеток карциномы яичников

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Выделение циркулирующих опухолевых клеток в модели ортотопической мыши колоректального рака

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

Development of a Human Preclinical Model of Osteoclastogenesis from Peripheral Blood Monocytes Co-cultured with Breast Cancer Cell Lines

Развитие человека доклинических модели Osteoclastogenesis от периферической крови моноциты совместно культивируемых с линии клеток рака молочной железы

The crosstalk between tumor cells and bone cells in the bone microenvironment is crucial to understanding the mechanism of bone metastasis formation. We ...

An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion

An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion

В естественных условиях мышиных седалищного нерва модель рассасывании вторжения

Cancer cells invade nerves through a process termed perineural invasion (PNI), in which cancer cells proliferate and migrate in the nerve ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Иммунофенотипирование ортотопическая Homograft (сингенных) из мышиных первичной КЗК аденокарциномы поджелудочной железы протоковой подачей Cytometry

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Development and Angiographic Use of the Rabbit VX2 Model for Liver Cancer

Развития и ангиографическое использование модели VX2 кролика для рака печени

The rabbit VX2 tumor is an animal model commonly utilized for translational research regarding hepatocellular carcinoma (HCC) in the field of ...

Spatial and Temporal Control of Murine Melanoma Initiation from Mutant Melanocyte Stem Cells

Пространственный и временный контроль Мурин Меланомы Инициация от мутантных меланоцитов стволовых клеток

Cutaneous melanoma is well known as the most aggressive skin cancer. Although the risk factors and major genetic alterations continue to be documented ...

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

Изучение Тройной отрицательный рак молочной железы Использование ортотопической модели рака молочной железы

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

An Orthotopic Resectional Mouse Model of Pancreatic Cancer

Ортотопическая резекционная мышиная модель рака поджелудочной железы

There is a lack of satisfactory animal models to study adjuvant and/or neoadjuvant therapy in patients being considered for surgery of pancreatic cancer ...