Name: a guide to build a highly inclined swept tile microscope for extended field-of-view single-molecule imaging
Uploaded: 2019-04-08T15:00:00
Duration: 8 min 13 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Guide to Build a Highly Inclined Swept Tile Microscope for Extended Field-of-view Single-molecule Imaging at JoVE.com

इस काम को डिफेंस एडवांस्ड रिसर्च प्रोजेक्ट्स एजेंसी (DARPA) (HR00111720066) और नेशनल साइंस फाउंडेशन (NSF) (१८०५२००) ने सपोर्ट किया था । हम उदारता से sCMOS कैमरा उधार के लिए Andor प्रौद्योगिकी में माइकल सर्ज धंयवाद ।

<ol>
	<li>Sigal, Y. M., Zhou, R., Zhuang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+and+discovering+cellular+structures+with+super-resolution+microscopy.">Visualizing and discovering cellular structures with super-resolution microscopy.</a> Science. 361, 880-887 (2018).</li><li>Lerner, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+dynamic+structural+biology:+Two+decades+of+single-molecule+Forster+resonance+energy+transfer.">Toward dynamic structural biology: Two decades of single-molecule Forster resonance energy transfer.</a> Science. 359, (2018).</li><li>Raj, A., van Oudenaarden, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-Molecule+Approaches+to+Stochastic+Gene+Expression.">Single-Molecule Approaches to Stochastic Gene Expression.</a> Annual Review of Biophysics. 38, 255-270 (2009).</li><li>Wilson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolution+and+optical+sectioning+in+the+confocal+microscope.">Resolution and optical sectioning in the confocal microscope.</a> Journal of microscopy. 244, 113-121 (2011).</li><li>Sase, I., Miyata, H., Corrie, J. 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Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extended+field-of-view+single-molecule+imaging+by+highly+inclined+swept+illumination.">Extended field-of-view single-molecule imaging by highly inclined swept illumination.</a> Optica. 5, 1063-1069 (2018).</li><li>Han, K. Y., Kim, S. K., Eggeling, C., Hell, S. 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केंद्रीय फ्लोरिडा विश्वविद्यालय के एक पेटेंट इस पत्र में वर्णित काम को कवर आवेदन दायर की है ।

इस प्रोटोकॉल में दो महत्वपूर्ण चरण हैं । पहले एक कदम ३.३ में L4 के उचित स्थान है, यह सुनिश्चित करना है कि घटना बीम लेंस के केंद्र के माध्यम से गुजरता है और एक परिपूर्ण Airy डिस्क पैटर्न छत पर बना है । L4 की स्थिति M5, L3, जीएम और L2 सहित अंय सभी ऑप्टिकल घटकों की नियुक्ति निर्धारित करता है । दूसरा महत्वपूर्ण चरण सिंक्रनाइज़ेशन प्रक्रिया है । फोकस पृष्ठभूमि से बाहर अस्वीकार करने के लिए, सक्रिय पिक्सेल जिसका प्रभावी पता लगाना चौड़ाई टाइल चौड़ाई के बराबर है बीम झाडू के साथ सिंक्रनाइज़ किया जाना चाहिए । इसलिए, यह एक टाइल बीम के प्रभावी रोशनी की चौड़ाई को मापने के लिए आवश्यक है (चरण ५.६) और सेट कैमरा पैरामीटर तदनुसार चरण ६.४ में ।
जब बहुत बड़ी FOV के साथ इमेजिंग, प्रस्तुत विधि एक पक्ष में दूसरी तरफ की तुलना में एक वृद्धि की पृष्ठभूमि से पता चलता है । यह अलग इमेजिंग पदों पर रोशनी के थोड़ा बदल कोण के लिए जिंमेदार ठहराया है । एक दूसरे galvo दर्पण के बजाय M5 को लागू करने के रूप में इस समस्या को alleviates से पहले तुल्यरूप से स्थिति और स्कैनिंग कोण11समायोजन द्वारा प्रदर्शन किया । इसके बजाय ऑफ-द-शेल्फ अक्रोमेटिक doublets, एक टेलीकेंद्रिक स्कैन लेंस भी मददगार होगा । हालांकि, इमेजिंग के लिए < 8080 μm2, एकल galvo दर्पण व्यापक एक क्षेत्र के लिए पर्याप्त था । HIST माइक्रोस्कोपी इमेजिंग गहराई की एक सीमा है, तथापि, यह एक अच्छा SBR जब इमेजिंग अप करने के लिए प्राप्त करने में सक्षम है ~ 15 μm एक 12 μm टाइल बीम और एक NA १.४५ तेल विसर्जन उद्देश्य लेंस11के साथ ।
इस प्रोटोकॉल में, हम एक टाइल बीम बनाने के लिए 8 के एक बीम संपीड़न अनुपात का इस्तेमाल किया । एक पतली रोशनी HIST माइक्रोस्कोपी में इस्तेमाल किया जा सकता है उच्च SBR, जो एकल अणु ऊतक इमेजिंग11के लिए शक्तिशाली हो सकता है प्राप्त करने के लिए । हालांकि, इस मामले में, photoब्लीचिंग प्रभाव एक वृद्धि की उत्तेजना तीव्रता द्वारा विचार किया जाना चाहिए, जबकि वर्तमान बीम संपीड़न अनुपात 3 पी ईपीआई की तुलना में 3dइमेजिंग में कम photoब्लीचिंग दिखाया । दो orthogonally रखा उद्देश्यों के साथ प्रकाश की चादर माइक्रोस्कोप की तुलना में, HIST माइक्रोस्कोपी को लागू करने और पारंपरिक नमूना तैयारी के साथ संगत करने के लिए सरल है । Hist माइक्रोस्कोपी का बढ़ाया sbr और बड़े fov एकाधिक कोशिकाओं में एकल जैव अणुओं की बातचीत और गतिशीलता का अध्ययन करने के लिए उपयुक्त है और सुपर-रेजोल्यूशन इमेजिंग और एकल अणु ट्रैकिंग में आगे इस्तेमाल किया जा सकता है ।

एकल अणु प्रतिदीप्ति इमेजिंग कई जैविक अध्ययनों में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है जो ultrastructures, गतिशीलता और जैव अणुओं की मात्रा1,2,3प्रकट करते हैं । हालांकि, यह कोशिकाओं या ऊतकों के अंदर एकल अणुओं का अध्ययन करने के लिए चुनौतीपूर्ण हो गया है । जबकि संनाभि माइक्रोस्कोपी उच्च परिच्छेदन क्षमता4प्रदान करता है, यह उच्च उत्तेजना तीव्रता या धीमी इमेजिंग गति से गंभीर photoब्लीचिंग के कारण एकल अणु इमेजिंग के लिए उपयुक्त नहीं है । Widefield माइक्रोस्कोपी कमजोर रोशनी का उपयोग करता है, लेकिन पृष्ठभूमि अनुपात (SBR)5के लिए एक गरीब संकेत से ग्रस्त है । प्रकाश-चादर माइक्रोस्कोपी, दूसरी ओर, अच्छा परिच्छेदन और कम photoब्लीचिंग6दिखा सकता है; हालांकि, उपलब्ध संख्यात्मक एपर्चर (एनए) बहुत orthogonally रखा उद्देश्य7की आवश्यकता द्वारा सीमित है । वैकल्पिक रूप से, यह विशेष प्रकाशक और नमूना मंडलों8,9की आवश्यकता है ।
इन कारणों के लिए, उच्च झुका और परतदार ऑप्टिकल शीट (HILO) माइक्रोस्कोपी व्यापक रूप से 3 डी एकल अणु इमेजिंग10के लिए इस्तेमाल किया गया है । जब एक झुका बीम दो मीडिया के एक अंतरफलक के सामने (कांच और पानी, उदाहरण के लिए), किरण है Snell कानून के अनुसार पुनः खंडित है । महत्वपूर्ण रूप से, रिफ्रैक्टेड बीम पतले हो जाता है, और इसकी मोटाई dz = R/tan (θ) के रूप में वर्णित है जहां R प्रवृत्त बीम का व्यास है और θ पारेषित बीम का अपवर्तन कोण है । यह सरल कार्यांवयन एक अच्छा परिच्छेदन क्षमता में परिणाम है । फिर भी, यह संबंध इंगित करता है कि एक पतली रोशनी (यानी, उच्च परिच्छेदन क्षमता) एक छोटे R और/या एक बड़े θ की आवश्यकता है । उदाहरण के लिए, जब R = 20 μm और θ = ७२ अंश, एक dz = ६.५ μm प्राप्त कर सकते हैं । के बाद से वहां के लिए अपवर्तन कोण में वृद्धि करने के लिए एक व्यावहारिक सीमा है ताकि गहरी छवि के अंदर कोशिकाओं और कुल आंतरिक प्रतिबिंब से बचने के लिए, वहां एक मजबूत युग्मन प्रकाश व्यास और बीम मोटाई की है । इस कारण से, HILO इमेजिंग एक अपेक्षाकृत छोटे क्षेत्र के दृश्य (FOV) है कि बहुत बहुकोशिकीय इमेजिंग में अपने अनुप्रयोगों को प्रतिबंधित दिखाता है ।
हाल ही में, हम अत्यधिक इच्छुक बह टाइल (HIST) माइक्रोस्कोपी जहां FOV एक बहुत ही सरल तरीके से11बीम मोटाई से decoupled है द्वारा इस समस्या को दूर किया है । सबसे पहले, एक दिशा में लम्बी बीम बेलनाकार लेंस की एक जोड़ी के माध्यम से उत्पन्न होता है । इस बीम, एक टाइल के रूप में कहा जाता है, dz के साथ एक पतली रोशनी का उत्पादन ~ 4 μm जबकि इसके FOV १३० x 12 μm2है । फिर, टाइल एक घूर्णन galvo दर्पण का उपयोग कर नमूना भर में बह रहा है । इस बीच, प्रतिदीप्ति छवि एक वैज्ञानिक पूरक धातु-ऑक्साइड सेमीकंडक्टर (scmos) कैमरा है कि फिल्टर कुशलता से बाहर का ध्यान केंद्रित पृष्ठभूमि में एक रोलिंग शटर मोड जो स्वरित्र संनाभि भट्ठा का पता लगाने के रूप में कार्य करता है पर दर्ज की गई है । इस तरह, HIST माइक्रोस्कोपी देखने का एक बड़ा क्षेत्र के साथ एकल अणु इमेजिंग सक्षम बनाता है (~ १३० x १३० μm2) और hilo इमेजिंग से एक पतली रोशनी । हम इस नए इमेजिंग तकनीक कोशिकाओं में एक जांच के साथ या माउस मस्तिष्क के ऊतकों, जो जीन अभिव्यक्ति और रोगों के अध्ययन के लिए महत्वपूर्ण क्षमता है में कुछ जांच के साथ आरएनए टेप का पता लगाने के लिए आवेदन किया । अन्य दृष्टिकोणों के विपरीत, HIST एक अतिरिक्त प्रकाशक या दूरदराज के पता लगाने के उद्देश्यों के बिना केवल एक ही उच्च संख्यात्मक एपर्चर उद्देश्य कार्यरत हैं और उल्टे सूक्ष्मदर्शी के साथ पूरी तरह से संगत है । एक बड़े FOV और उच्च कंट्रास्ट के साथ साथ ये लाभ जीव विज्ञान और चिकित्सा में एक प्रमुख उपकरण HIST माइक्रोस्कोपी कर देगा । हम HIST माइक्रोस्कोप के इंस्ट्रूमेंटेशन के बारे में विस्तृत निर्देश मौजूद है, और कैसे परीक्षण और नीचे के रूप में अपने प्रदर्शन जांचना ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:680px;" width="680">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1&#34; Achromatic doublet</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">AC254-060-A-ML</td>
			<td style="width:225px;">Collimator&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1&#34; Achromatic doublet</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">AC254-100-A-ML</td>
			<td style="width:225px;">L1,L2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1&#34; Achromatic doublet</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">AC254-300-A-ML</td>
			<td style="width:225px;">TL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1&#34; Broadband Dielectric Mirrors</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">BB1-E02-10</td>
			<td style="width:225px;">M1~M7</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1&#34; Cylindrical Lenses</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">LJ1363RM-A</td>
			<td style="width:225px;">CL1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1&#34; Cylindrical Lenses</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">LJ1695RM-A</td>
			<td style="width:225px;">CL2</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">1&#34; square kinematic mount</td>
			<td style="width:88px;">Edmund Optics</td>
			<td style="width:151px;">58-857</td>
			<td style="width:225px;">For dichroic mirror mounting</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1&#34; Threaded Cage Plate</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">CP02</td>
			<td style="width:225px;">For holding other lenses</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">2&#34; Achromatic doublet</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">AC508-150-A-ML</td>
			<td style="width:225px;">L3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">2&#34; Achromatic doublet</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">AC508-400-A-ML</td>
			<td style="width:225px;">L4</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">2&#34; Threaded Cage Plate</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">LCP01</td>
			<td style="width:225px;">For holding L4</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">2&#34; Threaded Cage Plate</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">LCP01T</td>
			<td style="width:225px;">For holding L3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">2% Bis Solution</td>
			<td style="width:88px;">Bio Rad</td>
			<td style="width:151px;">64085292</td>
			<td style="width:225px;">hydrogel component</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">20 nm fluorescent beads</td>
			<td style="width:88px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:151px;">F8782</td>
			<td style="width:225px;">For testing imaging</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">30 mm Cage Right-Angle Kinematic Mirror Mount</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">KCB1</td>
			<td style="width:225px;">For objective &#38; camera mounting</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">30mm Cage System Iris</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">CP20S</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">3-Axis NanoMax Stage</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">MAX311D</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">40% Acrylamide Solution</td>
			<td style="width:88px;">Bio Rad</td>
			<td style="width:151px;">64148001</td>
			<td style="width:225px;">hydrogel component</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">405 nm laser</td>
			<td style="width:88px;">Cobolt</td>
			<td style="width:151px;">Cobolt 06-MLD</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">50x TAE buffer</td>
			<td style="width:88px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:151px;">161-0743</td>
			<td style="width:225px;">hydrogel component</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">561 nm laser</td>
			<td style="width:88px;">Cobolt</td>
			<td style="width:151px;">Cobolt 06-DPL</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">638 nm laser</td>
			<td style="width:88px;">Cobolt</td>
			<td style="width:151px;">Cobolt 06-MLD</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ammonium persulfate</td>
			<td style="width:88px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">A3678-25G</td>
			<td style="width:225px;">hydrogel component</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Beam alignment tool</td>
			<td style="width:88px;">custom made</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">BNC terminal blocks</td>
			<td style="width:88px;">Natural Instruments</td>
			<td style="width:151px;">BNC-2110</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Cage plate with M9 x 0.5 internal threads</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">CP1TM09</td>
			<td style="width:225px;">For holding aspheric lens</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cage System Rods</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">SR series</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cell culture &#38; smFISH</td>
			<td style="width:88px;"></td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:225px;">See a reference [11]</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Double side tape&#160;</td>
			<td style="width:88px;">Scotch</td>
			<td style="width:151px;">515182</td>
			<td style="width:225px;">Flow chamber</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Epoxy&#160;</td>
			<td style="width:88px;">Devcon</td>
			<td style="width:151px;">14250</td>
			<td style="width:225px;">Flow chamber</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Galvo mirror</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">GVS211</td>
			<td style="width:225px;">GM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Galvo System Linear Power Supply</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">GPS011</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Half wave plate</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">WPH10M-405/561/633</td>
			<td style="width:225px;">Power adjustment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">long-pass dichroic mirror</td>
			<td style="width:88px;">Chroma</td>
			<td style="width:151px;">T550lpxr</td>
			<td style="width:225px;">For combining lasers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Microscope slides</td>
			<td style="width:88px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:151px;">12549-3</td>
			<td style="width:225px;">Flow chamber</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Mikroskopische Deckglaser</td>
			<td style="width:88px;">Hecht Assistent</td>
			<td style="width:151px;">990/5024</td>
			<td style="width:225px;">Flow chamber</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Mounted Frosted Glass Alignment Disk</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">DG10-1500-H1-MD</td>
			<td style="width:225px;">For double pinhole system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mounted rochester aspheric lens</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">A230TM-A</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Multi-band dichroic mirror</td>
			<td style="width:88px;">Semrock</td>
			<td style="width:151px;">Di03-R405/488/561/635-t3</td>
			<td style="width:225px;">DM; 3 mm thickness</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Multi-band filter</td>
			<td style="width:88px;">Semrock</td>
			<td style="width:151px;">FF01-446/523/600/677-25</td>
			<td style="width:225px;">BF</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Multimode fiber</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">M31L02</td>
			<td style="width:225px;">MMF</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">N,N,N&#39;,N&#39;-tetramethyl ethylenediamine</td>
			<td style="width:88px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">T7024-25ML</td>
			<td style="width:225px;">hydrogel component</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">NI-DAQ board</td>
			<td style="width:88px;">Natural Instruments</td>
			<td style="width:151px;">PCI-6733</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">&#216;1&#34; Kinematic Mirror Mount</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">KM100</td>
			<td style="width:225px;">For holding mirrors</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Objective lens</td>
			<td style="width:88px;">Olympus</td>
			<td style="width:151px;">PLANAPO N 60X</td>
			<td style="width:225px;">60X 1.45NA oil</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pedestal Base Clamping Forks</td>
			<td style="width:88px;">Newport</td>
			<td style="width:151px;">9916</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pedestal Pillar Posts</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">RS1P8E</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Piezo controller</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">BPC303</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Polarized beam splitter</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">PBS251</td>
			<td style="width:225px;">For combining lasers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">RMS-SM1 adapter</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">SM1A3TS</td>
			<td style="width:225px;">For objective lens</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Rod holder</td>
			<td style="width:88px;">custom made</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Rotation cage mount&#160;</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">RSP1/CRM1/CRM1P</td>
			<td style="width:225px;">For HWP &#38; cylindrical lens mounting</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">sCMOS camera</td>
			<td style="width:88px;">Andor</td>
			<td style="width:151px;">Zyla-4.2P-CL10</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Shearing interferometer</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">SI100</td>
			<td style="width:225px;">Beam collimation test</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Single mode fiber</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">P5-405BPM-FC-2</td>
			<td style="width:225px;">SMF</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">SM1 Lens Tubes</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">SM1S25</td>
			<td style="width:225px;">For double pinhole system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">SM1 Slotted Lens Tube</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">SM1L30C</td>
			<td style="width:225px;">For double pinhole system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Stage mount</td>
			<td style="width:88px;">custom made</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">threaded fiber adapter</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">SM1FC</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Z-Axis Translation Mount</td>
			<td style="width:88px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:151px;">SM1Z</td>
			<td style="width:225px;">Fiber coupling</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a guide to build a highly inclined swept tile microscope for extended field-of-view single-molecule imaging

एकल अणु इमेजिंग ने जैविक अध्ययनों में आणविक तंत्रों की हमारी समझ को काफी उन्नत किया है । हालांकि, यह बड़े क्षेत्र के देखने के लिए चुनौतीपूर्ण है, मोटी कोशिकाओं और ऊतकों में उच्च विपरीत छवियों । यहां, हम अत्यधिक इच्छुक बह टाइल (HIST) माइक्रोस्कोपी कि इस समस्या को काबू करने परिचय । बेलनाकार लेंस की एक जोड़ी एक लंबी उत्तेजना बीम कि एक तेजी से galvo दर्पण के माध्यम से एक बड़े इमेजिंग क्षेत्र पर स्कैन किया गया उत्पंन करने के लिए लागू किया गया था । एक 4एफ विंयास ऑप्टिकल घटकों की स्थिति के लिए इस्तेमाल किया गया था । एक वैज्ञानिक पूरक धातु-ऑक्साइड सेमीकंडक्टर कैमरा ने प्रतिदीप्ति संकेत का पता लगाया और बीम के साथ सिंक्रनाइज़ गतिशील संनाभि झिरी के साथ बाहर की फोकस पृष्ठभूमि को अवरुद्ध किया । हम सभी बुनियादी घटकों के साथ हिस्ट माइक्रोस्कोप के निर्माण पर एक कदम दर कदम निर्देश प्रस्तुत करते हैं ।

एक उदाहरण के रूप में, Atto647N के साथ लेबल एकल-असहाय डीएनए एक 3 डी hydrogel में ६३८ एनएम की उत्तेजना तरंग दैर्ध्य के साथ imaged था । डीएनए जेल बहुलकीकरण के दौरान एक acrydite मोइटी के माध्यम से हाइड्रोजेल नेटवर्क के लिए लंगर डाला गया था । चित्र 5कमें दर्शाए अनुसार सतह के ऊपर 5 μm पर छवियां ली गई थीं । HIST छवि बहुत कम महामारी छवि, जिसमें से संकेत पृष्ठभूमि अनुपात करने के लिए १.९ ± ०.७ को HIST छवि के लिए गणना की गई थी जबकि एकल अणु स्पॉट के सबसे मुश्किल महामारी द्वारा पता लगाया जा सकता है की तुलना में दिखाया ।
एकल-अणु आरएनए प्रतिदीप्ति स्वस्थानी संकरण (smFISH) में 4 मछली जांच के साथ किया गया था । चित्रा 5 बी EEF2 के smfish छवियों को प्रदर्शित करता है (यूकेरियोटिक अनुवाद बढ़ाव फैक्टर 2) एक इमेजिंग बफर में A549 कोशिकाओं पर alexafluor ६४७ के साथ लेबल (नमूना तैयारी11के बारे में हमारे पिछले काम को देखें) । एक अधिकतम तीव्रता प्रक्षेपण 20 z-5 μm मोटाई के समान ढेर पर प्रदर्शन किया गया था । HIST छवि न केवल अधिक SBR सुधार दिखाया, लेकिन यह भी अधिक वर्दी प्रकाश महामारी की छवि की तुलना में । महामारी इमेजिंग के लिए, एक्सपोजर समय था ४०० ms जबकि HIST इमेजिंग के लिए प्रति पंक्ति एकीकरण समय ३२ ms था, दोनों जिनमें से ७.५ मेगावाट के एक ही रोशनी शक्ति उद्देश्य से पहले मापा गया था । ईपीआई और हिस्ट की इमेजिंग गति २.५ एफपीएस थे ।
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59360/59360fig1.jpg"> चित्रा 1 . माइक्रोस्कोप शरीर, लेज़रों और संरेखण उपकरण । (क) वस्तुनिष्ठ और प्रतिदर्श धारक । (ख) लेजर प्रणालियों का फोटो । एल. पी., लांग-पास द्वि-चक्रीय दर्पण; λ/2, अर्ध-तरंग पट्ट; Pbs, ध्रुवीकरण बीएमअलगाटर. (ग) समांतरित प्रकाश स्त्रोत । (घ) दो निवेशनीय पिनहोल के साथ बीम संरेखण उपकरण । (ङ) दोहरी पिनहोल प्रणाली । <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59360/59360fig1large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59360/59360fig2.jpg"> चित्रा 2 . अत्यधिक इच्छुक बह टाइल (HIST) माइक्रोस्कोपी के लिए विस्तृत सेटअप । फोटो (क) और योजनाबद्ध (ख) हिस्ट माइक्रोस्कोप सिस्टम । BF, मल्टी बैंड पास फिल्टर; CL1-2, बेलनाकार लेंस; डीचरोइक दर्पण; जीएम, galvo दर्पण; BF, बैंड-पास फिल्टर; M1-7, दर्पण; L1-4, लेंस; SMF, एकल मोड फाइबर; TL, ट्यूब लेंस; cIP, संयुग्मित छवि विमान; सीबीएफपी, संयुग्मित वापस फोकल विमान । <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59360/59360fig2large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59360/59360fig3.jpg"> चित्रा 3 . 8 के संपीड़न अनुपात के साथ टाइल रोशनी । (क) एक 3 डी hydrogel में 20 एनएम मोती की प्रतिदीप्ति छवि । स्केल बार, 20 μm । (ख) मानक विचलन प्रक्षेपण के साथ एक की दिशा y, 10 डेटा बिंदुओं द्वारा सुचारु । लाल तीर 12 μm की एक प्रभावी रोशनी चौड़ाई इंगित करता है । <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59360/59360fig3large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें</a> ।
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59360/59360fig4v2.jpg"> चित्रा 4 . नियंत्रण और इमेजिंग सॉफ्टवेयर सामने पैनलों । (क) एक कस्टम निर्मित labview कार्यक्रम तुल्यरूप से galvo दर्पण की स्कैनिंग, scmos कैमरा के शुरू अधिग्रहण और पीजो मंच के आंदोलन को नियंत्रित करता है । (ख) कैमरा अधिग्रहण नियंत्रण पैनल स्थापित करना । <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59360/59360fig4v2large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59360/59360fig5.jpg"> चित्रा 5. (क) Atto647N-लेबल डीएनए के एक 3d हाइड्रोजेल में ईपीआई और hist रोशनी के साथ छवियां । (ख) EEF2 की Smfish छवियों ईपीआई और हिस्ट माइक्रोस्कोपी द्वारा A549 कोशिकाओं पर 4 मछली जांच का उपयोग कर । दपि दाग नीले रंग में दिखाया गया है । स्केल सलाखों, 20 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59360/59360fig5large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें</a> ।

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A Guide to Build a Highly Inclined Swept Tile Microscope for Extended Field-of-view Single-molecule Imaging

एक विस्तृत अनुदेश एक उच्च झुका हुआ टाइल (HIST) माइक्रोस्कोप और एकल अणु इमेजिंग के लिए इसके उपयोग का निर्माण करने के लिए कैसे पर वर्णन किया गया है ।

विस्तारित क्षेत्र के दृश्य एकल अणु इमेजिंग के लिए एक उच्च इच्छुक बह टाइल माइक्रोस्कोप बनाने के लिए एक गाइड

Single-molecule imaging has greatly advanced our understanding of molecular mechanisms in biological studies. However, it has been challenging to obtain ...

हमारी विधि हमें पारंपरिक तरीकों की तुलना में 40 गुना बड़ी छवि क्षेत्र के साथ एकल अणुओं की कल्पना करने की अनुमति देती है, और इसमें पृष्ठभूमि संकेत बहुत कम हो जाता है। अन्य तकनीकों के विपरीत हमारा दृष्टिकोण एक एकल उद्देश्य लेंस का उपयोग करता है, एक विशेष नमूना कक्ष की आवश्यकता नहीं होती है, और यह वाणिज्यिक माइक्रोस्कोप सिस्टम के साथ आसानी से संगत है। आवश्यक घटकों को इकट्ठा करने के बाद सिस्टम का निर्माण शुरू करते हैं।यहां बेंच पर कई तत्व पहले से ही स्थिति में हैं । एक एल्यूमीनियम ब्लॉक पर घुड़सवार एक पीजो चरण और नमूना धारक के साथ एक माइक्रोस्कोप शरीर है। इसके अलावा बेंच पर बीम गठबंधन करने के लिए तीन लेजर और ऑप्टिकल तत्व हैं।संयुक्त बीम को यथासंभव कुशलता से एक मोड फाइबर के साथ जोड़ा जाता है। एक अंतिम प्रारंभिक चरण के रूप में, एक पिंजरे प्रणाली में एक कोलिमेटेड प्रकाश स्रोत इकट्ठा करें। इसमें एक अस्थायी सुसंगत प्रकाश स्रोत है जो एक मोड फाइबर, फाइबर एडाप्टर, एक्रोमेटिक लेंस और आईरिस से जुड़ा हुआ है।पता लगाने के रास्ते के साथ काम शुरू करते हैं। सबसे पहले, कोलिमेटेड प्रकाश स्रोत को माइक्रोस्कोप शरीर के उद्देश्य बंदरगाह में रखें। उद्देश्यों के नीचे दर्पण समायोजित करें ताकि आउटपुट बीम मोटे तौर पर क्षैतिज हो और बेंच के छेद के साथ गठबंधन हो।बीम पथ में एक डिक्रोइक मिरर डालें और बीम को 90 डिग्री तक प्रतिबिंबित करें। एक SCMOS कैमरे के लिए प्रेषित बीम के रास्ते के समायोजन की अनुमति देने के लिए दर्पण जोड़ें । बीम चिप के केंद्र हिट सुनिश्चित करने के लिए दर्पण का प्रयोग करें।इसके बाद, कैमरे से फोकल लंबाई के बारे में 300-मिलीलीटर फोकल लेंथ ट्यूब लेंस डालें। माइक्रोस्कोप शरीर से कोलिमेटेड प्रकाश स्रोत निकालें। फिर अपने फोकल प्लेन को सेट करने के लिए ट्यूब लेंस की स्थिति को समायोजित करें।समायोजन बंद करो जब कैमरा स्पष्ट रूप से छत पर पैटर्न को हल करता है । इस योजनाबद्ध में डिटेक्शन पाथ को दर्शाया गया है। मल्टीकलर फ्लोरेसेंस इमेजिंग के लिए ट्यूब लेंस से पहले एक मल्टी-बैंड पास फिल्टर के अलावा ध्यान दें।माइक्रोस्कोप शरीर पर लौटें। वहां, उद्देश्य धारक में कोलिमेटेड प्रकाश स्रोत को फिर से स्थापित करें। डिक्रोइक मिरर के बाद, परावर्तित बीम के रास्ते में एक गुना-दर्पण रखें ताकि इसे 90 डिग्री तक रीडायरेक्ट किया जा सके।माइक्रोस्कोप शरीर से कोलिमेटेड प्रकाश स्रोत निकालें और इसे पास रखें। इसके बाद, दर्पण से लगभग एक फोकल लंबाई पर 400 मिलीमीटर फोकल लंबाई लेंस डालें। माइक्रोस्कोप शरीर में उद्देश्य लेंस स्थापित करें।फिर ऑप्टिकल धुरी के साथ दर्पण की स्थिति को समायोजित करें। उद्देश्य के ऊपर छत का निरीक्षण करें और जब वहां एक आदर्श हवादार डिस्क पैटर्न बनता है तो बंद हो जाता है। अब उद्देश्य को हटा दें और एक खुली आईरिस के साथ कोलिमेटेड प्रकाश स्रोत को फिर से स्थापित करें।निर्धारित करें कि बीम पथ के साथ बीम दर्पण से लगभग 400 मिलीमीटर दूर सबसे छोटा है। एक बार बिंदु की पहचान की है, वहां एक दर्पण माउंट, एक संयुग्मित छवि विमान । इस बिंदु पर स्थापित की स्थिति इस योजनाबद्ध में दिखाई देती है।दर्पण सिर्फ जोड़ा M5 लेबल है । बीम 90 डिग्री को प्रतिबिंबित करने के लिए एक और दर्पण डालें और इससे परे 150 मिलीमीटर फोकल लेंथ लेंस माउंट करें। लेंस संयुग्मित छवि विमान से 150 मिलीमीटर होना चाहिए। इसके बाद, अस्थायी रूप से उत्तेजन बीम पथ में पहला लेंस दूर ले जाएं।इस विन्यास के साथ दूसरे लेंस की केंद्र स्थिति पाते हैं। एक संयुग्मित बैक फोकल प्लेन के रूप में इस फोकल पॉइंट पर एक ही एक्सिस गैलवो मिरर रखें। गैल्वो मिरर में जीरो वोल्ट की आपूर्ति करें और अपने धारक को घुमाएं ताकि यह बीम 90 डिग्री को प्रतिबिंबित करे।बीम पथ के साथ अगला, एक गुना-दर्पण रखें जो बीम को 90 डिग्री पर दर्शाता है। लेंस 100 मिलीमीटर को संयुग्मित बैक फोकल प्लेन से बीम पथ के साथ रखें। एक बार फिर, माइक्रोस्कोप माउंट से कोलिमेटेड प्रकाश स्रोत को हटा दें।एक आइरिस के साथ एक फाइबर एडाप्टर और एकल मोड फाइबर के साथ एक और 100 मिलीमीटर कोलिमेशन लेंस जोड़ें। फिर इमेजिंग सिस्टम के माध्यम से एक कोलिमेटेड बीम भेजने के लिए आईरिस, फाइबर और लेंस का उपयोग करें। इसके बाद, बीम पथ में अंतिम कोलिमेशन लेंस से ठीक पहले फोकल लंबाई 400 मिलीमीटर का बेलनाकार लेंस डालें।बीम को फोकस करने के लिए इसका इस्तेमाल करें। पहले के सामने 50 मिलीमीटर का बेलनाकार लेंस 450 मिलीमीटर डालें। यह पता लगाने और उत्तेजन दोनों रास्तों के साथ अंतिम सेटअप का एक योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व है।तीन लेजर के उत्पादन एक मोड फाइबर द्वारा पथ में युग्मित है। परीक्षण के लिए 3डी हाइड्रोजेल नमूना तैयार करें। इसमें हाइड्रोजेल के साथ मिश्रित 20-नैनोमीटर क्रिमसन मोती होते हैं।सेटअप में सैंपल होल्डर में हाइड्रोजेल सैंपल रखें। नमूना उत्तेजन के लिए 638-नैनोमीटर लेजर चालू करें और अपनी शक्ति को एक मिलीवाट से कम पर समायोजित करें। कैमरा कंट्रोल सॉफ्टवेयर को इंटरनल ट्रिगर मोड में सेट करें और वीडियो कैप्चर करें।इस बिंदु पर गैल्वो मोटर में शून्य वोल्ट लगाया गया है। कैमरे की स्थिति ताकि छवि लेंस के केंद्र में हो। इसके बाद, दर्पण को समायोजित करें जो संजूगेट छवि विमान है।अत्यधिक झुकाव वाली रोशनी को प्राप्त करने के लिए दर्पण पर क्षैतिज घुंडी घुमाएं। 20-नैनोमीटर मोतियों के साथ 3 डी हाइड्रोगेल के नमूने फ्लोरेसेंस छवि के रूप में टाइल छवि रिकॉर्ड करें। स्केल बार 20 माइक्रोमीटर है।गैलवो मिरर को स्वीप करने के लिए हार्डवेयर और सॉफ्टवेयर स्थापित करने के बाद आगे बढ़ें। यह सेटअप के लिए गल्वो मिरर स्वीप सॉफ्टवेयर है। Vmin को माइनस 500 मिलीवोल्ट्स में सेट करके फुल फील्ड-ऑफ-व्यू इमेजिंग की व्यवस्था करें।इसके बाद 500 मिलीवोल्ट्स के लिए वीमैक्स सेट करें। इसके बाद, कैमरा अधिग्रहण सॉफ्टवेयर पर स्विच करें। ट्रिगर मोड में बाहरी का चयन करें।लाइटस्कैन प्लस ड्रॉप-डाउन मेनू के तहत नीचे का चयन करें, स्कैन स्पीड कंट्रोल पर क्लिक करें। कुछ नियंत्रण पैरामीटर अब निर्धारित किए जा सकते हैं। विंडो ऊंचाई के तहत 180 पंक्तियों में प्रवेश करें।एक्सपोजर के तहत 28 मिलीसेकंड दर्ज करें। जब किया, दर्पण नियंत्रण सॉफ्टवेयर पर लौटें। मिरर कंट्रोल सॉफ्टवेयर में 3डी स्टैक ऑन पर स्विच करें। ढेर और कदम आकार की संख्या निर्दिष्ट करें।छवियों को रिकॉर्ड करना शुरू करने के लिए वीडियो लेने पर क्लिक करें। यह एकल फंसे लेबल डीएनए के Epi इमेजिंग का एक उदाहरण है । इसके विपरीत, अत्यधिक झुकाव वाले बह टाइल तकनीक ने इस छवि का उत्पादन किया।एचईटी छवि Epi छवि की तुलना में कम पृष्ठभूमि दिखाती है। डीएनए एक 3 डी हाइड्रोजेल में है, और उत्तेजन तरंगदैर्ध्य ६३८ नैनोमीटर है । यहां लेबल यूकेरियोटिक अनुवाद विस्तार कारक 2 की एक एपीई छवि है।एचएएसटी इमेज ने सिग्नल-टू-बैकग्राउंड रेशियो में सुधार किया है । इसमें एक समान रोशनी भी ज्यादा होती है। दोनों में 7.5 मिलीवाट की एक ही रोशनी शक्ति है।इमेजिंग गति दोनों २.५ फ्रेम प्रति सेकंड थे । यह लगातार एक उच्च झुकाव कोण रखने के लिए महत्वपूर्ण है, और कैमरा readout के साथ व्यापक दर्पण सिंक्रोनाइज़ । यह छवि अधिग्रहण के दौरान एक उच्च सिग्नल-टू-बैकग्राउंड अनुपात की गारंटी देता है।हम उम्मीद करते हैं कि एचएएसटी माइक्रोस्कोपी से डीप इमेजिंग गहराई पर सुपर-रेजोल्यूशन इमेजिंग और मोटी ऊतक स्लाइस में उच्च-थ्रूपुट जीन अभिव्यक्ति प्रोफाइलिंग सहित कई अनुप्रयोगों को लाभ होगा।

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

डिजाइन के लिए एक चक्रीय दबाव bioreactor पूर्व vivo</emमहाधमनी हार्ट वाल्व का> अध्ययन

The aortic valve, located between the left ventricle and the aorta, allows for unidirectional blood flow, preventing backflow into the ventricle. Aortic ...

Investigating Receptor-ligand Systems of the Cellulosome with AFM-based Single-molecule Force Spectroscopy

AFM आधारित एकल अणु शक्ति स्पेक्ट्रोस्कोपी के साथ Cellulosome के रिसेप्टर ligand सिस्टम की जांच कर

Cellulosomes are discrete multienzyme complexes used by a subset of anaerobic bacteria and fungi to digest lignocellulosic substrates. Assembly of the ...

From Voxels to Knowledge: A Practical Guide to the Segmentation of Complex Electron Microscopy 3D-Data

Voxels से ज्ञान के लिए: परिसर इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी 3 डी डेटा का विभाजन करने के लिए एक व्यावहारिक गाइड

Modern 3D electron microscopy approaches have recently allowed unprecedented insight into the 3D ultrastructural organization of cells and tissues, ...

High-resolution Spatiotemporal Analysis of Receptor Dynamics by Single-molecule Fluorescence Microscopy

एकल अणु प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी द्वारा रिसेप्टर गतिशीलता के उच्च संकल्प Spatiotemporal विश्लेषण

Single-molecule microscopy is emerging as a powerful approach to analyze the behavior of signaling molecules, in particular concerning those aspect (e.g., ...

3D Orbital Tracking in a Modified Two-photon Microscope: An Application to the Tracking of Intracellular Vesicles

एक संशोधित दो photon माइक्रोस्कोप में 3 डी कक्षीय ट्रैकिंग: Intracellular vesicles की ट्रैकिंग के लिए एक आवेदन

The objective of this video protocol is to discuss how to perform and analyze a three-dimensional fluorescent orbital particle tracking experiment using a ...

From Fast Fluorescence Imaging to Molecular Diffusion Law on Live Cell Membranes in a Commercial Microscope

एक वाणिज्यिक माइक्रोस्कोप में लाइव कोशिका झिल्ली पर आण्विक प्रसार कानून को फास्ट प्रतिदीप्ति इमेजिंग से

It has become increasingly evident that the spatial distribution and the motion of membrane components like lipids and proteins are key factors in the ...

Microfluidic Genipin Deposition Technique for Extended Culture of Micropatterned Vascular Muscular Thin Films

Micropatterned संवहनी पेशी पतली फिल्मों की विस्तारित संस्कृति के लिए microfluidic Genipin बयान तकनीक

The chronic nature of vascular disease progression requires the development of experimental techniques that simulate physiologic and pathologic vascular ...

Single Molecule Fluorescence Microscopy on Planar Supported Bilayers

Planar पर एकल अणु प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी bilayers समर्थित

In the course of a single decade single molecule microscopy has changed from being a secluded domain shared merely by physicists with a strong background ...

A Guide to Structured Illumination TIRF Microscopy at High Speed with Multiple Colors

कई रंगों के साथ उच्च गति से संरचित रोशनी TIRF माइक्रोस्कोपी के लिए एक गाइड

Optical super-resolution imaging with structured illumination microscopy (SIM) is a key technology for the visualization of processes at the molecular ...

Conducting Multiple Imaging Modes with One Fluorescence Microscope

एक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के साथ कई इमेजिंग मोड का आयोजन

Fluorescence microscopy is a powerful tool to detect biological molecules in situ and monitor their dynamics and interactions in real-time. In addition to ...