Name: using caenorhabditis elegans for studying trans- and multi-generational effects of toxicants
Uploaded: 2019-07-29T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using Caenorhabditis elegans for Studying Trans- and Multi-Generational Effects of Toxicants at JoVE.com

1. kültür E. coli OP50
<ol><li>100 mL suda 4 gr sodyum hidroksit çözünerek 1 M sodyum hidroksit çözeltisi hazırlayın.</li>
	<li>10 gr Tripton, 5 g maya ekstresi ve 1 l konik Flask içinde 1 l ultra saf su ile 10 gr sodyum klorür çözünerek lysogeny suyu (lb) orta hazırlayın. 1 M sodyum hidroksit çözeltisi ile pH 'yi 7,0 olarak ayarlayın.</li>
	<li>Her biri 50 ml Orta ile 20 konik şişeler (maksimum izin verilen hacim: 100 ml) içine adım 1.2 den lb sıvı orta aliquot. Konik flsorlarla Kraft...

<ol>
	<li>Yu, Z., Zhang, J., Hou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+time-dependent+stimulation+of+sodium+halide+salts+on+redox+reactants,+energy+supply+and+luminescence+in+Vibrio+fischeri.">The time-dependent stimulation of sodium halide salts on redox reactants, energy supply and luminescence in Vibrio fischeri.</a> Journal of Hazardous Materials. 342, 429-435 (2018).</li><li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+nicotine+exposure+induces+dysfunction+of+mouse+endothelial+progenitor+cells.">Long-term nicotine exposure induces dysfunction of mouse endothelial progenitor cells.</a> Experimental and Therapeutic. 13, 85-90 (2017).</li><li>Yu, Z. Y., Chen, X. X., Zhang, J., Wang, R., Yin, D. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenerational+effects+of+heavy+metals+on+L3+larva+of+Caenorhabditis+elegans+with+greater+behavior+and+growth+inhibitions+in+the+progeny.">Transgenerational effects of heavy metals on L3 larva of Caenorhabditis elegans with greater behavior and growth inhibitions in the progeny.</a> Ecotoxicology and Environmental Safety. 88C, 178-184 (2013).</li><li>Chen, R., Yu, Z., Yin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-generational+effects+of+lindane+on+nematode+lipid+metabolism+with+disturbances+on+insulin-like+signal+pathway.">Multi-generational effects of lindane on nematode lipid metabolism with disturbances on insulin-like signal pathway.</a> Chemosphere. 210, 607-614 (2018).</li><li>Van Norman, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+matter+of+mice+and+men:+ethical+issues+in+animal+experimentation.">A matter of mice and men: ethical issues in animal experimentation.</a> International Anesthesiology Clinics. 53 (3), 63-78 (2015).</li><li>Pereira, C. M. S., Everaert, G., Blust, R., De Schamphelaere, K. A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multigenerational+effects+of+nickel+on+Daphnia+magna+depend+on+temperature+and+the+magnitude+of+the+effect+in+the+first+generation.">Multigenerational effects of nickel on Daphnia magna depend on temperature and the magnitude of the effect in the first generation.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (7), 1877-1888 (2018).</li><li>Morimoto, J., Simpson, S. J., Ponton, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+and+trans-generational+effects+of+male+and+female+gut+microbiota+in+Drosophila+melanogaster.">Direct and trans-generational effects of male and female gut microbiota in Drosophila melanogaster.</a> Biology Letters. 13, 20160966 (2017).</li><li>Coimbra, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+effects+of+clofibric+acid+in+zebrafish+(Danio+rerio):+A+multigenerational+study.">Chronic effects of clofibric acid in zebrafish (Danio rerio): A multigenerational study.</a> Aquatic Toxicology. 160, 76-86 (2015).</li><li>Sugi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+editing+in+C.+elegans+and+other+nematode+species.">Genome editing in C. elegans and other nematode species.</a> International Journal of Molecular Sciences. 17, 295 (2016).</li><li>Leung, M. C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caenorhabditis+elegans:+an+emerging+model+in+biomedical+and+environmental+toxicology.">Caenorhabditis elegans: an emerging model in biomedical and environmental toxicology.</a> Toxicological Science. 106 (1), 5-28 (2008).</li><li>Yu, Z. Y., Jiang, L., Yin, D. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavior+toxicity+to+Caenorhabditis+elegans+transferred+to+the+progeny+after+exposure+to+sulfamethoxazole+at+environmentally+relevant+concentration.">Behavior toxicity to Caenorhabditis elegans transferred to the progeny after exposure to sulfamethoxazole at environmentally relevant concentration.</a> Journal of Environmental Sciences-China. 23 (2), 294-300 (2011).</li><li>Kim, S. W., Kwak, J. I., An, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multigenerational+study+of+gold+nanoparticles+in+Caenorhabditis+elegans:+transgenerational+effect+of+maternal+exposure.">Multigenerational study of gold nanoparticles in Caenorhabditis elegans: transgenerational effect of maternal exposure.</a> Environmental Science &amp; Technology. 47, 5393-5399 (2013).</li><li>Klosin, A., Casas, E., Hidalgo-Carcedo, C., Vavouri, T., Lehner, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenerational+transmission+of+environmental+information+in+C.+elegans.">Transgenerational transmission of environmental information in C. elegans.</a> Science. 356, 320 (2017).</li><li>Yu, Z. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trans-generational+influences+of+sulfamethoxazole+on+lifespan,+reproduction+and+population+growth+of+Caenorhabditis+elegans.">Trans-generational influences of sulfamethoxazole on lifespan, reproduction and population growth of Caenorhabditis elegans.</a> Ecotoxicology and Environmental Safety. 135, 312-318 (2017).</li><li>Buisset-Goussen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+chronic+gamma+irradiation:+a+multigenerational+study+using+Caenorhabditis+elegans.">Effects of chronic gamma irradiation: a multigenerational study using Caenorhabditis elegans.</a> Radioactivity. 137, 190-197 (2014).</li><li>Zhao, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multigenerational+exposure+to+dietary+zearalenone+(ZEA),+anestrogenic+mycotoxin,+affects+puberty+and+reproductionin+female+mice.">Multigenerational exposure to dietary zearalenone (ZEA), anestrogenic mycotoxin, affects puberty and reproductionin female mice.</a> Reproductive Toxicology. 47, 81-88 (2014).</li><li>Yang, Z., Wang, J., Tang, L., Sun, X., Xue, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenerational+comparison+of+developmental+and+reproductive+toxicities+in+zearalenone+exposed+Caenorhabditis+elegans.">Transgenerational comparison of developmental and reproductive toxicities in zearalenone exposed Caenorhabditis elegans.</a> Asian Journal of Ecotoxicology. 11 (4), 61-68 (2016).</li><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+Caenorhabditis+dlegans.">The genetics of Caenorhabditis dlegans.</a> Genetics. 77, 71-94 (1974).</li><li>Emmons, S., Klass, M., Hirsch, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+analysis+of+the+constancy+of+DNA+sequences+during+development+and+evolution+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">An analysis of the constancy of DNA sequences during development and evolution of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 76, 1333-1337 (1979).</li><li>Van Gilst, M. R., Hadjivassiliou, H., Yamamoto, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Caenorhabditis+elegans+nutrient+response+system+partially+dependent+on+nuclear+receptor+NHR-49.">A Caenorhabditis elegans nutrient response system partially dependent on nuclear receptor NHR-49.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (38), 13496-13501 (2005).</li><li>Cobb, E., Hall, J., Palazzolo, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+metallothionein+expression+after+exposure+to+conventional+cigarette+smoke+but+not+electronic+cigarette+(ECIG)-generated+aerosol+in+Caenorhabditis+elegans.">Induction of metallothionein expression after exposure to conventional cigarette smoke but not electronic cigarette (ECIG)-generated aerosol in Caenorhabditis elegans.</a> Frontiers in Physiology. 9, 426 (2018).</li><li>Livak, K. J., Schmittgen, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+relative+gene+expression+data+using+real-time+quantitative+PCR+and+the+2-&#916;&#916;CT+method.">Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-&#916;&#916;CT method.</a> Methods. 25 (4), 402-408 (2001).</li><li>Hill, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+flexibility+in+the+convergent+evolution+of+hermaphroditism+in+Caenorhabditis+Nematodes.">Genetic flexibility in the convergent evolution of hermaphroditism in Caenorhabditis Nematodes.</a> Developmental Cell. 10, 531-538 (2006).</li><li>Cabreiro, F., Gems, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Worms+need+microbes+too:+microbiota,+health+and+aging+in+Caenorhabditis+elegans.">Worms need microbes too: microbiota, health and aging in Caenorhabditis elegans.</a> EMBO Molecular Medicine. 2013, 1300-1310 (2013).</li><li>Breider, F., von Gunten, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+total+N-nitrosamine+concentrations+in+aqueous+samples+via+UV-photolysis+and+chemiluminescence+detection+of+nitric+oxide.">Quantification of total N-nitrosamine concentrations in aqueous samples via UV-photolysis and chemiluminescence detection of nitric oxide.</a> Analytical Chemistry. 89 (3), 1574-1582 (2017).</li></ol>

Açıklanan protokolü başarıyla yürütmek için aşağıdaki öneriler dikkate alınmalıdır. Genel deneysel işlemleri steril bir ortamda gerçekleştirin. Uygunsuz çalışma, E. coli suşlarının kontaminasyonuna neden olabilir, örneğin, mantar ve akarları C. eleganların normal büyümesini engelleyebilir ve bu nedenle deneysel sonuçları etkileyebilir. C. elegans yetiştirmeyi anlatan bölümde, NGM Agarlar üzerindeki c. elegans 'ın büyüme ölçeğini çıplak gözle...

Kimyasalların uygulama ve atık yönetimi, belirli konsantrasyonlarda etkilerinin bilgilerine son derece bağlıdır. Özellikle, zaman etkileri ve konsantrasyonları arasında başka bir temel unsurdur. Demek ki, kimyasallar, özellikle de gerçek ortamlarda düşük konsantrasyonlarda, ölçülebilir etkileri provoke etmek için zaman gerekir1. Bu nedenle, araştırmacılar hayvan deneylerinde pozlama süresinin farklı uzunlukları düzenlemek ve hatta tüm yaşam döngüsü kapsayacak. Örneğin, fareler nikotin için maruz kaldı 30, 90 veya 180 zehirli etkileri incelemek için gün 2. Ancak, bu tür pozlama süreleri hala kirleticilerin uzun vadeli etkilerini (örneğin, kalıcı organik kirleticiler [POPs]) çevre organizmaların nesiller boyunca sürebilir için yeterli değildir. Bu nedenle, nesiller üzerinde etkileri üzerinde çalışmalar daha fazla ilgi kazanıyor.
Jenerasyonel etki çalışmalarında iki ana yönü vardır. İlki Trans-jenerasyonel (TG) etkisi çalışma, anne-babalar için kimyasal pozlama yavru3herhangi bir sonuca neden olabilir olup olmadığını test edebilirsiniz. İkincisi, hem pozlama hem de kalıntı etkileri ile ilgili hususlar ile daha sistematik olan çok jenerasyonel bir etki çalışmadır. Bir yandan, çok jenerasyonel pozlama (MGE) efektleri, hayvanlarda uzun vadeli zorlu ortamlarda uyarlanabilir tepkiler göstermek için kullanılır. Öte yandan, çok jenerasyonel kalıntı (MGR) etkileri maruz kaldıktan sonra uzun vadeli kalıntı sonuçları göstermek için kullanılır, maternal pozlama ilk yavrularını embriyo maruz kalma ve ikinci germ-Line pozlama ile birlikte olduğundan ilk nesil olarak üçüncü yavrusu tamamen pozlama4yapar yavru.
Memeliler (örn. fareler), özellikle insan varlıklarıyla ilgili olarak toksisite çalışmalarında model organizmalar olmakla birlikte, jenerasyonel etkilere yönelik çalışma uygulamaları oldukça zaman alıcı, pahalı ve etik olarak 5ile ilgili. Buna göre, kabuklu Daphnia magna6, böcek Drosophila melanogaster7 ve zebra balığı Danio rerio8dahil organizmalar, alternatif seçimler sağlar. Ancak, bu organizmaların ya insan, ya da çalışmalar belirli ekipman gerektiren benzerlikleri eksikliği.
Caenorhabditis elegans kısa bir yaşam döngüsü ile küçük bir serbest canlı nematod (yaklaşık 1 mm uzunluğunda) (20 °c ' de yaklaşık 84 h)9. Bu nematod insanlar için muhafazakar birçok biyolojik yolları paylaşır, ve bu nedenle yaygın çeşitli stresler veya toksisitan etkileri göstermek için istihdam edilmiştir10. Özellikle,% 99,5 nematitlerin bu organizmalar jenerasyonel etkileri, örneğin, ağır metaller ve sülfonamidler3,11, MGE etkileri TG etkileri eğitim çok uygun hale Hünsa altın Nanopartiküllerin ve ağır metallerin12 ve sıcaklık13, MGR sülfonamid14etkileri, ve Gamma ıŞıNLAMA hem MGE ve MGR etkileri15 ve Lindane4. Ayrıca, kimyasal maddelerin etkileri arasında karşılaştırılabilir sonuçlar bulundu (örneğin, Zearalenone) farelerin geliştirilmesi ve üreme üzerinde ve C. elegans16,17, hangi ayırt etmek için bir avantaj sağlayacak Bu küçük hayvandan insana etkileri.
Hem TG hem de MG efekt çalışmaları zaman alıcı ve dikkatli tasarım ve performansa ihtiyaç vardır. Özellikle, söz konusu çalışmalarda yaşam aşaması seçimleri, pozlama koşulları ve nesil ayırma yöntemlerinde farklılıklar vardı. Bu tür farklılıklar sonuçları arasında doğrudan karşılaştırma engelledi ve sonuçların daha fazla yorumlanması engel. Bu nedenle, TG ve MG etkileri çalışmaları rehberlik etmek için üniforma protokolleri kurmak zorunludur, ve aynı zamanda uzun vadeli sonuçları çeşitli toksisitan veya kirleticiler benzer desenleri ortaya çıkarmak için daha büyük bir resim sağlamak için. Mevcut protokollerin amacı, C. elegansile Trans-ve çok jenerasyonel etkileri araştıran açık çalışma süreçleri gösterecektir. Protokoller, hidrokarbonlar veya kirleticilerin uzun vadeli etkilerini incelemek isteyen araştırmacıların yararına olacaktır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:684px;" width="684">
	<tbody>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:191px;">&#160;agar powder</td>
			<td style="width:200px;">OXOID, Thermo Fisher Scientific, UK</td>
			<td style="width:123px;">9002-18-0</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:191px;">79nnHT Fast Real-Time PCR System</td>
			<td>&#160;Applied Biosystems&#160;</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">96-well sterile microplate</td>
			<td style="width:200px;">Costar&#65292;Corning&#65292;America</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;">Autoclave sterilizer</td>
			<td style="width:200px;">Tomy, Tomy Digital Biology, Japan</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="55">
			<td height="55" style="height:55px;">Biosafety cabinet</td>
			<td style="width:200px;">LongYue, Shanghai longyue instrument equipment co. Ltd, China</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;">calcium chloride</td>
			<td style="width:200px;">Sinopharm chemical reagent company Ltd, China</td>
			<td>10043-52-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="55">
			<td height="55" style="height:55px;">centrifuge&#160; 5417R</td>
			<td style="width:200px;">Eppendorf, Ai Bende (Shanghai) International Trade Co., Ltd, Germany</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;">Centrifuge tubes</td>
			<td style="width:200px;">Axygen, Aixjin biotechnology (Hangzhou) co. Ltd, America</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;">cholesterol</td>
			<td style="width:200px;">Sinopharm chemical reagent company Ltd, China</td>
			<td style="width:123px;">57-88-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="55">
			<td height="55" style="height:55px;">Dimethyl sulfoxide</td>
			<td style="width:200px;">VETEC, Sigmar aldrich (Shanghai) trading co. Ltd, America</td>
			<td>67-68-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;">disodium hydrogen phosphate</td>
			<td style="width:200px;">Sinopharm chemical reagent company Ltd, China</td>
			<td style="width:123px;">7558-79-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;">ethanol</td>
			<td style="width:200px;">Sinopharm chemical reagent company Ltd, China</td>
			<td style="width:123px;">64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;">Filter</td>
			<td style="width:200px;">Thermo, Thermo Fisher Scientific, America</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="55">
			<td height="55" style="height:55px;">incubator</td>
			<td style="width:200px;">YiHeng17, Shanghai yiheng scientific instrument co. Ltd, China</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">inoculating loop</td>
			<td style="width:200px;"></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;">K2HPO4&#8226;3H2O</td>
			<td style="width:200px;">Sinopharm chemical reagent company Ltd, China</td>
			<td>16788-57-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">kraft paper</td>
			<td style="width:200px;"></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;">Mcroplate Reader</td>
			<td style="width:200px;">Boitek, Boten apparatus co. Ltd, America</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;">MgSO4&#8226;7H2O</td>
			<td style="width:200px;">Sinopharm chemical reagent company Ltd, China</td>
			<td>10034-99-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="55">
			<td height="55" style="height:55px;">Microscopes XTL-BM-9TD</td>
			<td style="width:200px;">BM, Shanghai BM optical instruments manufacturing co. Ltd, China&#160;</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Petri dishes</td>
			<td style="width:200px;"></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="55">
			<td height="55" style="height:55px;">Pipette</td>
			<td style="width:200px;">Eppendorf, Ai Bende (Shanghai) International Trade Co., Ltd, Germany</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;">Potassium chloride</td>
			<td style="width:200px;">Sinopharm chemical reagent company Ltd, China</td>
			<td>7447-40-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;">potassium dihydrogen phosphate</td>
			<td style="width:200px;">Sinopharm chemical reagent company Ltd, China</td>
			<td>7778-77-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;">Qiagen RNeasy kits</td>
			<td style="width:200px;">Qiagen Inc., Valencia, CA, United States</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:191px;">QuantiTect SYBR Green RT-PCR kits</td>
			<td style="width:200px;">Qiagen Inc., Valencia, CA, United States</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:191px;">RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit</td>
			<td style="width:200px;">Thermo Scientific, Wilmington, DE, United States</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;">sodium chloride</td>
			<td style="width:200px;">Sinopharm chemical reagent company Ltd, China</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;">sodium hydroxide</td>
			<td style="width:200px;">Sinopharm chemical reagent company Ltd, China</td>
			<td>1310-73-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="55">
			<td height="55" style="height:55px;">sodium hypochlorite solution</td>
			<td style="width:200px;">Aladdin, Shanghai Aladdin biochemical technology co. Ltd, China</td>
			<td style="width:123px;">7681-52-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;">tryptone</td>
			<td style="width:200px;">OXOID, Thermo Fisher Scientific, UK</td>
			<td>73049-73-7</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;">yeast extract</td>
			<td style="width:200px;">OXOID, Thermo Fisher Scientific, UK</td>
			<td>119-44-8</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using caenorhabditis elegans for studying trans- and multi-generational effects of toxicants

Kimyasalların toksisiteleri hakkında bilgi, uygulama ve atık yönetiminde esastır. Düşük konsantrasyonlarda kimyasallar için, uzun vadeli etkileri çok çevre ve insan sağlığı üzerindeki sonuçlarını yargılamak önemlidir. Uzun vadeli etkileri göstererek, kimyasalların son çalışmalarda nesiller boyunca etkileri yeni bir anlayış sağlar. Burada, biz serbest yaşam nematod Caenorhabditis eleganskullanarak birden fazla nesiller üzerinde kimyasalların etkilerini incelemek için protokoller açıklanmaktadır. İki yönü sunulmaktadır: (1) Trans-jenerasyonel (TG) ve (2) çok jenerasyonel etkisi çalışmaları, ikincisi çok jenerasyonel pozlama (MGE) ve çok jenerasyonel kalıntı (MGR) etkisi çalışmalarda ayrılır. TG etkisi çalışma ebeveynler için kimyasal maruz yavru üzerinde herhangi bir kalıntı sonuçları neden olabilir olup olmadığını belirlemek için basit bir amaç ile sağlam. Etkileri ebeveynler üzerinde ölçülen sonra, sodyum hipoklorit çözümleri ebeveynler öldürmek ve yavru üzerinde etki ölçümü kolaylaştırmak için yavru tutmak için kullanılır. TG efekt çalışması, çocuklarının ebeveyn kirleticiler maruz kaldığında etkilenir olup olmadığını belirlemek için kullanılır. MGE ve MGR efekt Etüdü sürekli jenerasyonel pozlama nesiller boyunca yavru uyarlanabilir yanıtlar neden olup olmadığını belirlemek için kullanılan sistematik. Her nesildeki efekt ölçümünü kolaylaştırmak için nesiller ayırt etmek için dikkatli pick-up ve transfer kullanılır. Ayrıca lokomotif davranışlarını, üreme, ömür, biyokimyasal ve gen ifade değişikliklerini ölçmek için protokoller birleştirdik. Bazı örnek deneyler de Trans-ve çok jenerasyonel etkisi etütler göstermek için sunulmaktadır.

Burada, Trans-jenerasyonel (TG), çok jenerasyonel pozlama (MGE) ve çok jenerasyonel kalıntı (MGR) efekt çalışmalarından C. elegans kullanarak kimyasal maddelerin nesiller boyunca etkilerinin incelenmesi için protokoller açıklanmaktadır. Kendi Araştırma sonuçlarımız örnek olarak sunulmuştur. Bir çalışmada lokomotif davranış3AĞıR metaller TG etkileri sunar. Diğer iki çalışmada, sulfomethoxazole ve Lindane 'in üreme ve biyokimya...

Watch this Scientific Journal Video about Using Caenorhabditis elegans for Studying Trans- and Multi-Generational Effects of Toxicants at JoVE.com

Using Caenorhabditis elegans for Studying Trans- and Multi-Generational Effects of Toxicants

Toxicants Trans ve çok jenerasyonel etkileri okumak için Caenorhabditis elegans kullanma

Sürekli kimyasalların Trans-ve çok jenerasyonel etkileri, çevre ve insan sağlığı üzerinde uzun vadeli sonuçlarını yargılamak için esastır. Ücretsiz yaşam nematod Caenorhabditis eleganskullanarak Trans-ve çok jenerasyonel etkileri incelemek için yeni ayrıntılı Yöntemler sağlıyoruz.

Information about toxicities of chemicals are essential in their application and waste management. For chemicals at low concentrations, the long-term ...

Sunulan protokol, çevrede uzun süre var olabilecek proteinlerin trans ve çok nesilli etkileri üzerine çalışmaları kolaylaştıracaktır. Trans ve çok nesilli etkileri incelemek için zaman ve çabadan tasarruf etmek için hermafrodit olarak 99,5 ile serbest yaşam nematod istihdam ettik. Bu teknik, son ilaçların uzun vadeli etkilerini göstermek için kullanılabilir, çünkü mevcut protokoldeki nematod birçok konservatif mekanizmayı veya yolu insanlarla paylaşır.Bu yöntem, kimyasalların potansiyel tehlikeleri hakkında geri bildirime ihtiyaç duydukları için farmasötik sentez ve çevre yönetimi alanlarına ışık verebilir. Bu yöntem suda toksisite daha fazla odaklanarak Daphnia magna uygulanabilir. Ayrıca Drosphila melanogaster daha fazla cinsiyet üzerindeki etkisini keşfetmek için.Nesiller boyunca etkileri incelemenin zaman ve enerji tüketen bir şey olduğu fikrine takılıp kalır. İlk izlenimde korkma. Protokolü takip etmek size verimli bir sonuç kazandıracaktır.Kültür E.coli için, pipet 200 mikrolitre bakteriyel süspansiyonlar içine 50 lb orta bir şişe içinde. Veya NGM agars küçük bir koloni almak ve LB orta yerleştirmek için bir aşıdöngü kullanın. Kültür C.elegans için, bir mikroskop altında, istifleme NGM agars daha önce hazırlanan nematodları saymak.Sayı 2,000'e ulaştığında, NGM agarının 1/6'sını kesmek için steril bir uç kullanın ve bakteriyel çimenli yeni hazırlanmış NGM agarlarına aktarın. Sonraki kültür için 22 derece santigrat santigrat kuvözde NGM agars baş aşağı tutun. Yaklaşık 36 saat sonra, nematodlar gravid olur.Steril santrifüj tüpler içine her NGM agar üzerinde gravid nematods ve yeni üretilen yumurta floş steril su iki mililitre kullanın. Nematodları yerleştirmek için tüpleri 30 dakika rafa yerleştirin ve sonra borulama ile süpernatantların %85'ini atın. Nematodların senkronizasyon için yeterince etkili olup olmadığına karar vermek çok önemlidir.Aksi takdirde, yaş senkronizasyon işlemi boşuna olurdu. Peletleri yedi cilt sodyum hipoklorit çözeltisi ile karıştırın ve larvaları ve yetişkin nematodları lyse etmek için santrifüj tüplerini her iki dakikada bir 5-8 kez sallayın. Tüpleri 700 kez G'de 20 santigrat derecede üç dakika santrifüj edin ve sonra boruyu tutarak süpernatantları atın.Yaş senkronize yumurtayıkamak için steril su beş hacimli pelet yeniden askıya. 20 santigrat derecede üç dakika için 700 kez G santrifüj. Steril su ile yıkamayı iki kez tekrarlayın.Daha sonra, yaş senkronize yumurta ları yeniden askıya almak için tüplere bir hacim steril su ekleyin. Bakteriyel çim ile her yeni NGM agars üzerine elli mikro litre pipetleme tarafından yumurta süspansiyonlar dağıtın. NGM agars üst tarafında 20 derece santigrat antisul 30 dakika boyunca, su buharlaşmasını veya bakteriyel çim tarafından emilir izin tutun.Sonra, NGM agars ters çevirin, sonraki kültür için, ve yumurta zamanı olarak zaman işareti. Yumurta saatinden 36 saat sonra nematodlar L3 larva evresine ulaşır. Santrifüj tüpler içine her NGM agar kapalı nematods floş steril su iki mililitre kullanın.30 dakika yerleştikten sonra, iki saat boyunca bağırsaklarda gıda sindirmek için K Medium ile supernatants% 85 değiştirin. Sonra, supernatants atın. Sonraki deneyler için nematod süspansiyonları 100 mikrolitrede yaklaşık 200 nematod olarak ayarlamak için K Medium'u kullanın.Kenar efektlerini önlemek için, 96 kuyulu steril bir mikroplakanın orta alanında, 10 kuyuya 10 0 mikrolitre hazırlanmış kontrol veya kimyasal çözelti ekleyin, altı grupta kopyalandığı gibi. 60 kuyunun her birine hazırlanan nematod K Medium'un 100 mikrolitresini ekleyin. Saati T0 olarak işaretleyin. Pozlamayı 24 ila 96 saat boyunca gerçekleştirin.Pozlama sonra, altı 1,5 mililitre santrifüj tüpler içine, her gruptaki beş kuyudan nematod toplamak için bir pipet kullanın. 30 dakika nematodlar yerleşmek ve sonra supernatants atmak için pipet. Alttaki nematodları bir mililitre steril su ile yıkayın.Nematodları 30 dakikalığına halledin. Süpernatantları atın ve f0 olarak işaretlenmiş açıkta kalan üst neslin gösterge ölçümleri için alttaki nematodları kullanın. Her grupta kalan beş kuyudan nematodları toplayın. Yerleşmek ve daha önce olduğu gibi nematodlar yıkayın.Daha sonra, her tüpteki nematodları yeniden askıya almak için 100 mikrolitre steril su ekleyin ve nematod süspansiyonlarını bakteriyel çimenli yeni hazırlanmış üç NGM agars'a eşit olarak aktarın. Gravid olmak için 36 saat boyunca nematodları kuluçkaya yatırın ve daha önce olduğu gibi yaş senkronizasyonu yapın. NGM agarlarında senkronize yumurtaları bakteriyel çimlerle 36 saat kuluçkaya yattıktan sonra, nematodları altı santrifüj tüpüne boşaltın.Bir mililitre steril su ile yerlebir edip yıkadıktan sonra, T1 olarak işaretlenmiş yavru neslinin gösterge ölçümleri için alttaki nematodları kullanın. 99 mililitre sıcak NGM agarını bir mililitre kontrol veya kimyasal çözeltiyle karıştırın. El yazmasına göre bakteri süspansiyonları ile agars hazırlandıktan sonra, biyo-güvenlik kabininde, petri kaplarının üst kapaklarını bir kenara koyun ve 15 dakika boyunca UV ışığına bakteri çim maruz. Pipet UV-tedavi agars üzerine yaş senkronize yumurta.Ana nesil F0'ye maruz kalmanın başlangıcını sıfır gün olarak işaretleyin. Agarları üç gün boyunca 20 derecede kuluçkaya yatırın. Daha sonra, F0 etkilerini ölçmek için olgun nematodlar kullanın. Ayrıca, üçüncü gün, f0 olgun nematodları almak için bir halka içine bükülmüş bir insan yapımı fiber tel ile donatılmış bir cam çubuk kullanın, ve yeni UV tedavi NGM agars yüzeyine slayt.Dördüncü gün, seçin ve NGM agars gelen olgun F0 nematods atın. Altıncı günde, endeks ölçümü için üç gün boyunca maruz kalma yaşamış F1 olgun nematodları kullanın. Bu protokolde, kadmiyum, bakır, kurşun ve çinkonun vücut bükme frekansı üzerindeki kuşak lar arası etkileri, nematod ebeveyni F0'deki inhibisyonların döllerinden daha az olduğunu göstermiştir, T1. Sülfametoksazolün nematod ömrü ve üreme üzerindeki çok nesilli kalıntı etkileri, üremenin mikrop-line maruziyetinde önemli ölçüde etkilendiğini ve toksisitelerin T3'ten T6 kuşağına kadar maruz kalan olmayan nesillerde devam ettiğini göstermiştir.Lindane'nin nematod biyokimyasal ve genetik indeksler üzerinde çok nesilli maruziyet ve çok nesilli kalıntı etkileri, insülin sinyal regülasyonundaki bozukluklarla birlikte obezite etkileri göstermiştir. Ayrıca, sgk-1 ve akt-1 sinyalizasyonu arasındaki değişiklikler, farklı maruziyet nesillerinden nematodların tolerans ve kaçınma için farklı tepki stratejileri gösterdiğini göstermiştir. Her işlemden önce nematodların yaşam durumunu kontrol edin ve aşağıdaki adımları buna göre değiştirin.Diğer etkileri, örneğin, kimyasalların obezite etkileri, daha fazla nesiller boyunca obezite artan yaygınlık cevap dahil edilebilir. Yönteme göre, diğer mekanizmalar araştırılabilir. Örneğin, nesiller arasında kalıtsal epigenetik sinyaller.Klor çözeltileri güçlü oksidatif potansiyellere sahiptir ve cildin doğrudan temasından kaçınır.

Research

JoVE Journal

Environment

Using Caenorhabditis elegans for Studying Trans- and Multi-Generational Effects of Toxicants

Technique for Studying Arthropod and Microbial Communities within Tree Tissues

Ağaç Dokuların içinde eklembacaklı ve Mikrobiyal Toplulukları incelenmesi için Tekniği

Phloem tissues of pine are habitats for many thousands of organisms.  Arthropods and microbes use phloem and cambium tissues to seek mates, lay eggs, rear ...

Measuring Fluxes of Mineral Nutrients and Toxicants in Plants with Radioactive Tracers

Radyoaktif izleyiciler ile Bitkilerde Mineral Besin ve Toksikantların Değişimler Ölçme

Unidirectional influx and efflux of nutrients and toxicants, and their resultant net fluxes, are central to the nutrition and toxicology of plants. ...

A CO2 Concentration Gradient Facility for Testing CO2 Enrichment and Soil Effects on Grassland Ecosystem Function

A CO2 Concentration Gradient Facility for Testing CO2 Enrichment and Soil Effects on Grassland Ecosystem Function

A CO<sub&gt; 2</subTest CO&gt; Konsantrasyon Gradient Tesisi<sub&gt; 2</subÇayır Ekosistem Fonksiyon&gt; Zenginleştirme ve Toprak Etkileri

Continuing increases in atmospheric carbon dioxide concentrations (CA) mandate techniques for examining impacts on terrestrial ecosystems. Most ...

LC-MS Analysis of Human Platelets as a Platform for Studying Mitochondrial Metabolism

Mitokondriyal Metabolizma incelenmesi için Platform olarak İnsan Trombositler LC-MS Analizi

Perturbed mitochondrial metabolism has received renewed interest as playing a causative role in a range of diseases. Probing alterations to metabolic ...

A Flow-through Exposure System for Evaluating Suspended Sediments Effects on Aquatic Life

Sucul Life Asma değerlendirmek Sedimanlar Etkileri için Flow-through Pozlama Sistemi

This paper describes the Fish Larvae and Egg Exposure System (FLEES). The flow-through exposure system is used to investigate the effects of suspended ...

Protocol for Assessing the Relative Effects of Environment and Genetics on Antler and Body Growth for a Long-lived Cervid

Boynuz ve uzun ömürlü bir Cervid için vücut büyüme ortamı ve genetik etkileri göreli değerlendirmek için iletişim kuralı

Cervid phenotype can be placed into one of two categories: efficiency, which promotes survival over extravagant morphometric growth, and luxury, which ...

Collection and Extraction of Occupational Air Samples for Analysis of Fungal DNA

Toplama ve mesleki hava örnekleri çıkarma mantar DNA analizi için

Traditional methods of identifying fungal exposures in occupational environments, such as culture and microscopy-based approaches, have several ...

An Experimental Protocol for Studying Mineral Effects on Organic Hydrothermal Transformations

Organik hidrotermal dönüşümler üzerinde Mineral etkileri eğitimi için deneysel bir protokol

Organic-mineral interactions are widely occurring in hydrothermal environments, such as hot springs, geysers on land, and the hydrothermal vents in the ...

In Vitro Scratch Assay to Demonstrate Effects of Arsenic on Skin Cell Migration

In Vitro Scratch Assay to Demonstrate Effects of Arsenic on Skin Cell Migration

Vitro Cilt hücre göç arsenik etkilerini göstermek için tahlil kaşı

Understanding the physiologic mechanisms of wound healing has been the focus of ongoing research for many years. This research directly translates into ...

A High-throughput Assay for the Prediction of Chemical Toxicity by Automated Phenotypic Profiling of Caenorhabditis elegans

A High-throughput Assay for the Prediction of Chemical Toxicity by Automated Phenotypic Profiling of Caenorhabditis elegans

Bir yüksek-den geçerek tahlil tarafından otomatik fenotipik profil oluşturma Caenorhabditis elegans ve kimyasal toksisitesi tahmin için

Applying toxicity testing of chemicals in higher order organisms, such as mice or rats, is time-consuming and expensive, due to their long lifespan and ...