Name: confocal live imaging of shoot apical meristems from different plant species
Uploaded: 2019-03-29T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Confocal Live Imaging of Shoot Apical Meristems from Different Plant Species at JoVE.com

De auteurs erkennen Purdue Bindley Bioscience Center Imaging faciliteit voor toegang tot de laser confocal microscoop scannen en voor de technische ondersteuning, en de auteurs waarderen de hulp van Andy Schaber in de Purdue Bindley Imaging faciliteit. Deze activiteit werd gefinancierd door Purdue University als onderdeel van AgSEED kruispunt financiering ter ondersteuning van de landbouw en de plattelandsontwikkeling Indiana's.

1. Media en beeldvorming gerechten voorbereiding
<ol><li>MS platen: Voeg 0,5 x Murashige & Skoog MS middellange, 1% agar in gedeïoniseerd water en pas vervolgens de pH ten slotte op 5.8 met behulp van kaliumhydroxide-oplossing (optioneel: toevoegen van 1% sacharose voor de lange termijn plant groeit). Autoclaaf en giet platen.</li>
	<li>Imaging gerechten: vullen plastic petrischaaltjes (6 cm breed, 1.5 cm diepte) naar 0.5-0.8 cm met 1,5% gesmolten agarose.</li>
</ol>2. de plantengroei
<ol><li...

<ol>
	<li>Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+control+of+cell+division+patterns+in+developing+plants.">Genetic control of cell division patterns in developing plants.</a> Cell. 88 (3), 299-308 (1997).</li><li>Xu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cascade+of+arabinosyltransferases+controls+shoot+meristem+size+in+tomato.">A cascade of arabinosyltransferases controls shoot meristem size in tomato.</a> Nature Genetics. 47 (7), 784-792 (2015).</li><li>Bommert, P., Nagasawa, N. S., Jackson, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+variation+in+maize+kernel+row+number+is+controlled+by+the+FASCIATED+EAR2+locus.">Quantitative variation in maize kernel row number is controlled by the FASCIATED EAR2 locus.</a> Nature Genetics. 45 (3), 334-337 (2013).</li><li>Je, B. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+from+maize+organ+primordia+via+FASCIATED+EAR3+regulates+stem+cell+proliferation+and+yield+traits.">Signaling from maize organ primordia via FASCIATED EAR3 regulates stem cell proliferation and yield traits.</a> Nature Genetics. 48 (7), 785-791 (2016).</li><li>Ping, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dt2+is+a+gain-of-function+MADS-domain+factor+gene+that+specifies+semideterminacy+in+soybean.">Dt2 is a gain-of-function MADS-domain factor gene that specifies semideterminacy in soybean.</a> Plant Cell. 26 (7), 2831-2842 (2014).</li><li>Vaughan, J. G., Jones, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+of+the+angiosperm+inflorescence+apex.">Structure of the angiosperm inflorescence apex.</a> Nature. 171, 751 (1953).</li><li>Sijacic, P., Liu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+insights+from+live-imaging+in+shoot+meristem+development.">Novel insights from live-imaging in shoot meristem development.</a> Journal of Integrative Plant Biology. 52 (4), 393-399 (2010).</li><li>Tax, F. E., Durbak, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meristems+in+the+movies:+live+imaging+as+a+tool+for+decoding+intercellular+signaling+in+shoot+apical+meristems.">Meristems in the movies: live imaging as a tool for decoding intercellular signaling in shoot apical meristems.</a> Plant Cell. 18 (6), 1331 (2006).</li><li>Grandjean, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+analysis+of+cell+division,+cell+growth,+and+differentiation+at+the+shoot+apical+meristem+in+Arabidopsis.">In vivo analysis of cell division, cell growth, and differentiation at the shoot apical meristem in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 16 (1), 74-87 (2004).</li><li>Heisler, M. G., Ohno, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-imaging+of+the+Arabidopsis+inflorescence+meristem.">Live-imaging of the Arabidopsis inflorescence meristem.</a> Methods in Molecular Biology. 1110, 431-440 (2014).</li><li>Tobin, C. J., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+lineage+analysis+to+study+cell+division+orientation+in+the+Arabidopsis+shoot+meristem.">Real-time lineage analysis to study cell division orientation in the Arabidopsis shoot meristem.</a> Methods in Molecular Biology. 1370, 147-167 (2016).</li><li>Prunet, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+confocal+Imaging+of+developing+Arabidopsis+flowers.">Live confocal Imaging of developing Arabidopsis flowers.</a> Journal of Visualized Experiments. (122), e55156 (2017).</li><li>Prunet, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+confocal+imaging+of+Arabidopsis+flower+buds.">Live confocal imaging of Arabidopsis flower buds.</a> Developmental Biology. 419, 114-120 (2016).</li><li>Reddy, G. V., Heisler, M. G., Ehrhardt, D. W., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+lineage+analysis+reveals+oriented+cell+divisions+associated+with+morphogenesis+at+the+shoot+apex+of+Arabidopsis+thaliana.">Real-time lineage analysis reveals oriented cell divisions associated with morphogenesis at the shoot apex of Arabidopsis thaliana.</a> Development. 131, 4225-4237 (2004).</li><li>Nimchuk, Z. L., Perdue, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+Imaging+of+Shoot+Meristems+on+an+Inverted+Confocal+Microscope+Using+an+Objective+Lens+Inverter+Attachment.">Live Imaging of Shoot Meristems on an Inverted Confocal Microscope Using an Objective Lens Inverter Attachment.</a> Frontiers in Plant Science. 8, 773 (2017).</li><li>Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HAIRY+MERISTEM+with+WUSCHEL+confines+CLAVATA3+expression+to+the+outer+apical+meristem+layers.">HAIRY MERISTEM with WUSCHEL confines CLAVATA3 expression to the outer apical meristem layers.</a> Science. 361 (6401), 502-506 (2018).</li><li>Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+plant+stem+cell+function+by+conserved+interacting+transcriptional+regulators.">Control of plant stem cell function by conserved interacting transcriptional regulators.</a> Nature. 517 (7534), 377-380 (2015).</li><li>Nimchuk, Z. L., Zhou, Y., Tarr, P. T., Peterson, B. A., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plant+stem+cell+maintenance+by+transcriptional+cross-regulation+of+related+receptor+kinases.">Plant stem cell maintenance by transcriptional cross-regulation of related receptor kinases.</a> Development. 142 (6), 1043 (2015).</li><li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LEAFY+Controls+Auxin+Response+Pathways+in+Floral+Primordium+Formation.">LEAFY Controls Auxin Response Pathways in Floral Primordium Formation.</a> Science Signaling. 6 (270), ra23 (2013).</li><li>Truernit, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+whole-mount+imaging+of+three-dimensional+tissue+organization+and+gene+expression+enables+the+study+of+phloem+development+and+structure+in+Arabidopsis.">High-resolution whole-mount imaging of three-dimensional tissue organization and gene expression enables the study of phloem development and structure in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 20 (6), 1494-1503 (2008).</li></ol>

Hier beschrijven we een eenvoudige beeldvorming methode die kan worden toegepast op de studie van schieten apicale meristems uit verschillende planten met kleine wijziging, openen van een nieuwe laan te studeren het meristeem regelgeving op zowel vegetatieve en reproductieve fasen in model planten en Hiermee wordt uitgesneden. In tegenstelling tot de SEM en histologische kleuring methoden, kan dit protocol helpen onthullen van zowel oppervlakte weergave als interne cellulaire structuren van de SAM's, zonder de noodzaak v...

Het meristeem plant bevat een pool van ongedifferentieerde stamcellen en voortdurend voedt de plantengroei orgel en ontwikkeling1. Tijdens de postembryonic ontwikkeling, zijn bijna alle bovengrondse weefsels van een plant afgeleid van de shoot apicale meristeem (SAM). In gewassen zijn de activiteit en de grootte van de SAM en zijn afgeleide floral meristems strak gekoppeld aan vele agronomische eigenschappen zoals schieten architectuur, fruitteelt en zaad opbrengst. Bijvoorbeeld, in tomatensaus veroorzaakt een uitgebreide SAM een toename van de shoot en vertakking van de bloeiwijze, en dus resultaten bij het genereren van extra bloem en vrucht organen2. In maïs leidt een toename van de grootte van de SAM tot een hogere basiswaarde en totale opbrengst3,4. In soja, het meristeem onbepaaldheid is ook nauw verbonden met de architectuur van de shoot en opleveren van5.
De morfologie en de anatomie van SAMs kunnen worden gekarakteriseerd door verschillende methoden, met inbegrip van histologische afdelen/kleuring en scanning elektronen microscopie (SEM)6, die beide hebben sterk het meristeem onderzoek door het verstrekken van geavanceerde het aanzicht of een driedimensionale (3D) oppervlakte weergave van SAMs. Echter beide methoden zijn tijd in beslag, waarbij verschillende experimentele stappen van de bereiding van de monsters voor de data-acquisitie, en deze methoden voornamelijk afhangen van vaste monsters. Recente vooruitgang in laser scannen confocale microscopie techniek hebben deze beperkingen te overwinnen en ons te voorzien van een krachtig hulpmiddel om de cellulaire structuur en ontwikkelingsstoornissen proces van plantaardige weefsels en organen7,8te onderzoeken. Door middel van optische in plaats van fysieke weefsel vectorafbeeldingsbestanden, confocal microscopie staat de inzameling van een reeks van beelden van de z-stack en de daaropvolgende 3D reconstructie van het monster door de software van de analyse van de afbeelding.
Hier beschrijven we een efficiënte procedure voor het onderzoek naar zowel binnen en structuren van de oppervlakte van de levende SAMs van verschillende plantensoorten met behulp van laser scanning confocal microscopie, waarmee potentieel onderzoekers te bereiken de experimentele proces binnen 20 minuten zo kort. Anders dan andere gepubliceerde methoden voor live confocal beeldvorming van Arabidopsis bloeiwijze SAMs9,10,11,12,13,14, 15 en Arabidopsis bloemen12,13, hier wij laten zien dat dit protocol zeer efficiënt voor het bestuderen van niet alleen de meristems van de bloeiwijze van de model-soorten, maar ook de vegetatieve shoot apicale meristems uit verschillende gewassen, zoals tomaten en soja. Deze methode niet afhankelijk is van transgene fluorescente markeringen, en potentieel kan worden toegepast om te bestuderen van de shoot meristems van vele verschillende soorten en cultivars. Daarnaast voeren wij ook de eenvoudige stappen voor het weergeven en analyseren van verschillende SAMs in een 3D-weergave van de beeldverwerking. Samen genomen, zal deze eenvoudige methode onderzoekers beter inzicht in zowel de structuur en de ontwikkelings proces van de meristems van zowel gewassen als modelorganismen vergemakkelijken.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:968px;" width="968">
	<tbody>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:283px;">Agar Phyto</td>
			<td style="width:176px;">Dot Scientific Inc.</td>
			<td style="width:119px;">DSA20300-1000</td>
			<td style="width:391px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:35px;width:283px;">Agarose</td>
			<td style="width:176px;">Dot Scientific Inc.</td>
			<td style="width:119px;">AGLE-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:283px;">Forceps&#160;</td>
			<td style="width:176px;">ROBOZ</td>
			<td style="width:119px;">RS-4955</td>
			<td>Dumont #5SF Super Fine Forceps Inox Tip Size .025 X .005mm, for dissecting shoot apices.</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:283px;">LSM 880 Upright Confocal Microscope&#160;</td>
			<td style="width:176px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Murashige &#38; Skoog MS medium</td>
			<td style="width:176px;">Dot Scientific Inc.</td>
			<td style="width:119px;">DSM10200-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Plan APO 20x/1.1 water dipping lens</td>
			<td style="width:176px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:283px;">Plastic petri dishes 100 mm X 15 mm</td>
			<td style="width:176px;">CELLTREAT Scientific Products</td>
			<td style="width:119px;">229694</td>
			<td style="width:391px;">Use as making MS plates</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Plastic petri dishes60 mm X 15</td>
			<td style="width:176px;">CELLTREAT Scientific Products</td>
			<td style="width:119px;">229665</td>
			<td>Use as imaging dishes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Propagation Mix</td>
			<td style="width:176px;">Sungro Horticulture</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Propidium iodide</td>
			<td style="width:176px;">Acros Organics</td>
			<td style="width:119px;">440300250</td>
			<td>1 mg/mL solution in water, to stain the cell walls</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Razor blade</td>
			<td style="width:176px;">PERSONNA&#160;</td>
			<td style="width:119px;">62-0179</td>
			<td style="width:391px;">For cutting shoot apex from plants</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:35px;width:283px;">Stereomicroscope</td>
			<td style="width:176px;">Nikon</td>
			<td style="width:119px;">SMZ1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Tissue</td>
			<td style="width:176px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">82003-820</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Zen black</td>
			<td style="width:176px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Image acquisition software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

confocal live imaging of shoot apical meristems from different plant species

De shoot apicale meristeem (SAM) fungeert als een reservoir van geconserveerde cel van de stam en het genereert bijna alle bovengrondse weefsels tijdens de postembryonic ontwikkeling. De activiteit en de morfologie van SAMs bepalen belangrijk agronomische kenmerken, zoals schieten architectuur, grootte en aantal reproductieve organen, en het belangrijkst, graan opbrengst. Hier bieden we een gedetailleerd protocol voor het analyseren van zowel de bovengrondse morfologie en de interne cellulaire structuur van de levende SAMs van verschillende soorten via laser confocal microscoop scannen. De hele werkwijze vanaf de bereiding van de monsters voor de verwerving van driedimensionale (3D) beelden met hoge resolutie kan worden bereikt binnen 20 minuten zo kort. Wij laten zien dat dit protocol zeer efficiënt voor het bestuderen van niet alleen de bloeiwijze SAMs van de model-soorten, maar ook de vegetatieve meristems uit verschillende gewassen, die een eenvoudige maar krachtige tool om te bestuderen van de organisatie en ontwikkeling van bieden: meristems over verschillende plantensoorten.

Evaluatie van de doeltreffendheid van onze protocol en verken de morfologie van de meristems van verschillende soorten, hebben we de confocal levende imaging experimenten uitgevoerd op het meristeem bloeiwijze van Arabidopsis en de vegetatieve meristems van zowel tomaat en soja. In deze studie, Arabidopsis ecotype Landsberg erectatomaat cultivar Micro-Tom en soja cultivar zijn Williams 82 gebruikt als voorbeelden.
<p class="jove_content" fo:keep-together.wit...

Watch this Scientific Journal Video about Confocal Live Imaging of Shoot Apical Meristems from Different Plant Species at JoVE.com

Confocal Live Imaging of Shoot Apical Meristems from Different Plant Species

Confocale Live beeldvorming van Shoot apicale Meristems van verschillende plantensoorten

Dit protocol presenteert hoe te leven van beeld en analyseren van de shoot apicale meristems van verschillende plantensoorten met behulp van laser scanning confocal microscopie.

The shoot apical meristem (SAM) functions as a conserved stem cell reservoir and it generates almost all aboveground tissues during the postembryonic ...

Schiet apicale meristems controle plantengroei en reproductie. Deze methode helpt ons de morfologie en interne structuren van schietapicale meristems te onderzoeken, niet alleen in de modelsoort, maar ook in verschillende gewassen. Deze techniek is een zeer efficiënte procedure.Schiet apicale meristem kan direct worden gevisualiseerd in een hoge cellulaire resolutie zonder enige arbeidsintensieve monsterfixatie en weefselsectiestappen. Om te beginnen, groeien Arabidopsis, tomaat, en sojaplanten zoals beschreven in de tekst protocol. Snijd de bloeiwijze schieten apex van de vastgeschroefde Arabidopsis planten.Houd het basale deel van de hoofdsteel vast en gebruik tangen om zoveel mogelijk oudere bloemorganen uit de hoofdsteel te verwijderen. Doorgaan met het verwijderen van de rest van de bloemen op het gebied van de stereo microscoop tot de shoot apicale meristem kan worden bekeken van de oculairs. Om de vegetatieve shoot apicale meristems van tomaat of soja te bekijken, ontleden de cotyledons, bladeren en wortels van de plant.Houd de hypocotyls van de plant onder de stereomicroscoop, en gebruik tangen om verder te ontleden de bladeren en blad primordia die de vegetatieve schiet apicale meristems. Pipette 50 microliters propidium jodide oplossing in een schone en lege petrischaal. Dip de hele ontleed shoot apex in kleurstof voor twee minuten.Tijdens het kleuringsproces, dompel de hele bloeiwijze schieten apicale meristem of vegetatieve schieten apicale meristem in de propidium jodide oplossing om uniforme kleuring te bereiken. Spoel de gekleurde shoot apex twee keer in steriel, gedeïmiseerd water. Nu, doorboren een gat in het midden van een voorbereide imaging schotel met behulp van tangen, en plak de gekleurde schieten apex rechtop in het medium.Vul de beeldschaal met steriel, gedeïstiseerd water om het monster volledig onder te dompelen. Bekijk het monster door de stereomicroscoop. Pipette op en neer om luchtbellen te verwijderen die vastzitten rond de meristem.Pas vervolgens de hoek van de steel in de agar aan om ervoor te zorgen dat de schietapicale meristem volledig zichtbaar is vanaf direct boven. Plaats nu de beeldvorming schotel op het monster stadium van de confocale microscoop. Laat de waterdipende lens, en hef de microscoop monster stadium om de punt van de lens duik in het water te laten.Open de confocale microscoop software, en gebruik de oculairs te lokaliseren en zich te concentreren op de shoot apicale meristem in het heldere veld. Bedien de overnamefunctie in de confocale microscoopsoftware. Start de live-modus om het voorbeeld vanaf het computerscherm te bekijken en stel alle parameters in voor het laserscanexperiment.Wanneer u de parameters aanpast, gebruikt u de functie Bereikindicator om te bepalen of het signaal verzadigd is of niet. Dezelfde software die werd gebruikt voor het verwerven van beeldvorming kan worden gebruikt voor het visualiseren van een driedimensionale transparante projectie. Open het oorspronkelijke confocale bestand, klik op het 3D-menu en selecteer Transparant om een 3D-projectieweergave te genereren.Selecteer optioneel Transparantie om drie parameters van de projectie aan te passen, waaronder Drempel, Helling en Maximum voor de transparantie van de 3D-afbeelding. Selecteer nu Licht om de helderheid van de 3D-afbeelding aan te passen. Exporteer de geprojecteerde afbeeldingen en sla ze op als TIFF-bestanden.Gebruik dezelfde software voor het visualiseren van de dieptecoterende weergave van de 3D-beelden. Klik nogmaals op het 3D-menu en selecteer Vormgeving. Selecteer Speciaal en selecteer Dieptecoting.Exporteer de geprojecteerde afbeeldingen en sla ze op als TIFF-bestanden. Dit beeld van de orthogonale sectie door het midden van arabidopsis ontspruit apicale meristem toont aan dat de horizontale muren met propidiumjodide in bijna alle cellen bij veelvoudige cellagen worden bevlekt. Een weergave van een dwarse sectie door het corpus van de bloeiwijze schieten apicale meristem laat zien dat de cellen van de XY-vlak zijn ook duidelijk afgebeeld.De 3D-projectieweergave laat zien dat de bloeiwijze meristem een koepelachtige structuur vormt en wordt omringd door de zich ontwikkelende bloem primordia. Dit beeld van de orthogonale sectie door het midden van de tomaat shoot apicale meristem toont ook aan dat de horizontale muren zijn gekleurd met propidium jodide op meerdere cellagen, hoewel de propidium jodide signaal van het diepe binnengebied is iets lager. Een beeld van één dwarse sectie door de diepe lagen van de vegetatieve spruit apicale meristem openbaart de cellen van de XY vlakken en de grens die tussen de vegetatieve meristem en blad primordia wordt gevormd.De 3D-projectieweergave kan verder een uitgebreid beeld geven van de vorm en organisatie van de vegetatieve meristem van tomaat. Hier getoond is een orthogonale weergave door het midden van de sojabonen schieten apicale meristem en een 3D-projectie van dezelfde shoot apicale meristem. De koepelachtige vegetatieve meristem en de afgeleide nieuwe blad primordia zijn ook waarneembaar.Propidium jodide kan gemakkelijk vlekken beschadigde of dode cellen, die sterk zal de kwaliteit van de beelden beïnvloeden, dus het is belangrijk om fysieke schade te voorkomen tijdens de voorbereiding schieten apicale meristem monsters.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-beeldvorming van de<em&gt; Drosophila</em&gt; Pupal Eye

Inherent processes of Drosophila pupal development can shift and distort the eye epithelium in ways that make individual cell behavior difficult to track ...

In Vitro Differentiation of Mature Myofibers for Live Imaging

In Vitro Differentiation of Mature Myofibers for Live Imaging

In Vitro Differentiatie van Mature spiervezels voor Live Imaging

Skeletal muscles are composed of myofibers, the biggest cells in the mammalian body and one of the few syncytia. How the complex and evolutionarily ...

Live Confocal Imaging of Developing Arabidopsis Flowers

Live confocale Imaging van de ontwikkelingslanden Arabidopsis Flowers

The study of plant growth and development has long relied on experimental techniques using dead, fixed tissues and lacking proper cellular resolution. ...

A Simple Chamber for Long-term Confocal Imaging of Root and Hypocotyl Development

Een eenvoudige kamer voor langdurige confocal beeldvorming van wortel- en hypocotylontwikkeling

Several aspects of plant development, such as lateral root morphogenesis, occur on time spans of several days. To study underlying cellular and ...

Long-term Live Imaging of Drosophila Eye Disc

Long-term Live Imaging of Drosophila Eye Disc

Langdurige Live-Imaging van<em&gt; Drosophila</em&gt; Disc Eye

Live imaging provides the ability to continuously track dynamic cellular and developmental processes in real time. Drosophila larval imaginal discs have ...

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Zaadknop teelt voor Live-cel Imaging van Zygote polarisatie en Embryo patronen in Arabidopsis thaliana

In most flowering plants, the zygote and embryo are hidden deep in the mother tissue, and thus it has long been a mystery of how they develop dynamically; ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Live Cell Imaging of Chromosome Segregation During Mitosis

Levende cel beeldvorming van chromosoom segregatie tijdens de mitose

Chromosomes must be reliably and uniformly segregated into daughter cells during mitotic cell division. Fidelity of chromosomal segregation is controlled ...

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live beeldvorming en analyse van spiercontracties in Drosophila embryo

Coordinated muscle contractions are a form of rhythmic behavior seen early during development in Drosophila embryos. Neuronal sensory feedback circuits ...

Live Cell Imaging of Microtubule Cytoskeleton and Micromechanical Manipulation of the Arabidopsis Shoot Apical Meristem

Live Cell Imaging of Microtubule Cytoskeleton and Micromechanical Manipulation of the Arabidopsis Shoot Apical Meristem

Live Cell Imaging van Microtubule Cytoskeleton en Micromechanische Manipulatie van de Arabidopsis Shoot Apical Meristem

Understanding cell and tissue level regulation of growth and morphogenesis has been at the forefront of biological research for many decades. Advances in ...