Name: confocal live imaging of shoot apical meristems from different plant species
Uploaded: 2019-03-29T15:00:00
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Die Autoren erkennen Purdue Bindley Bioscience Center Imaging Facility für den Zugriff auf die Laser-scanning-confocal Mikroskop und für die technische Unterstützung, und die Autoren dankbar für die Hilfe von Andy Schaber in Purdue Bindley Imaging Facility. Diese Tätigkeit wurde von der Purdue University im Rahmen der AgSEED Kreuzung Mittel zur Förderung der Landwirtschaft und ländliche Entwicklung Indianas finanziert.

(1) Medien und Bildgebung Gerichte-Vorbereitung
<ol><li>MS Teller: 0,5 x Murashige & Skoog MS mittlere, 1 % Agar in entionisiertem Wasser hinzufügen und dann justieren pH bis 5.8 mit Kalilauge (Optional: Fügen Sie 1 % Saccharose für langfristige Pflanzenbau). Autoklaven und gießen Sie Platten.</li>
	<li>Imaging-Gerichte: füllen Sie Kunststoff Petrischalen (6 cm breit, 1,5 cm tief) auf 0,5-0,8 cm mit 1,5 % flüssige Agarose.</li>
</ol>(2) Pflanzenwachstum
<ol><li>
Arabidopsis Wach...

<ol>
	<li>Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+control+of+cell+division+patterns+in+developing+plants.">Genetic control of cell division patterns in developing plants.</a> Cell. 88 (3), 299-308 (1997).</li><li>Xu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cascade+of+arabinosyltransferases+controls+shoot+meristem+size+in+tomato.">A cascade of arabinosyltransferases controls shoot meristem size in tomato.</a> Nature Genetics. 47 (7), 784-792 (2015).</li><li>Bommert, P., Nagasawa, N. S., Jackson, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+variation+in+maize+kernel+row+number+is+controlled+by+the+FASCIATED+EAR2+locus.">Quantitative variation in maize kernel row number is controlled by the FASCIATED EAR2 locus.</a> Nature Genetics. 45 (3), 334-337 (2013).</li><li>Je, B. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+from+maize+organ+primordia+via+FASCIATED+EAR3+regulates+stem+cell+proliferation+and+yield+traits.">Signaling from maize organ primordia via FASCIATED EAR3 regulates stem cell proliferation and yield traits.</a> Nature Genetics. 48 (7), 785-791 (2016).</li><li>Ping, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dt2+is+a+gain-of-function+MADS-domain+factor+gene+that+specifies+semideterminacy+in+soybean.">Dt2 is a gain-of-function MADS-domain factor gene that specifies semideterminacy in soybean.</a> Plant Cell. 26 (7), 2831-2842 (2014).</li><li>Vaughan, J. G., Jones, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+of+the+angiosperm+inflorescence+apex.">Structure of the angiosperm inflorescence apex.</a> Nature. 171, 751 (1953).</li><li>Sijacic, P., Liu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+insights+from+live-imaging+in+shoot+meristem+development.">Novel insights from live-imaging in shoot meristem development.</a> Journal of Integrative Plant Biology. 52 (4), 393-399 (2010).</li><li>Tax, F. E., Durbak, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meristems+in+the+movies:+live+imaging+as+a+tool+for+decoding+intercellular+signaling+in+shoot+apical+meristems.">Meristems in the movies: live imaging as a tool for decoding intercellular signaling in shoot apical meristems.</a> Plant Cell. 18 (6), 1331 (2006).</li><li>Grandjean, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+analysis+of+cell+division,+cell+growth,+and+differentiation+at+the+shoot+apical+meristem+in+Arabidopsis.">In vivo analysis of cell division, cell growth, and differentiation at the shoot apical meristem in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 16 (1), 74-87 (2004).</li><li>Heisler, M. G., Ohno, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-imaging+of+the+Arabidopsis+inflorescence+meristem.">Live-imaging of the Arabidopsis inflorescence meristem.</a> Methods in Molecular Biology. 1110, 431-440 (2014).</li><li>Tobin, C. J., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+lineage+analysis+to+study+cell+division+orientation+in+the+Arabidopsis+shoot+meristem.">Real-time lineage analysis to study cell division orientation in the Arabidopsis shoot meristem.</a> Methods in Molecular Biology. 1370, 147-167 (2016).</li><li>Prunet, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+confocal+Imaging+of+developing+Arabidopsis+flowers.">Live confocal Imaging of developing Arabidopsis flowers.</a> Journal of Visualized Experiments. (122), e55156 (2017).</li><li>Prunet, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+confocal+imaging+of+Arabidopsis+flower+buds.">Live confocal imaging of Arabidopsis flower buds.</a> Developmental Biology. 419, 114-120 (2016).</li><li>Reddy, G. V., Heisler, M. G., Ehrhardt, D. W., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+lineage+analysis+reveals+oriented+cell+divisions+associated+with+morphogenesis+at+the+shoot+apex+of+Arabidopsis+thaliana.">Real-time lineage analysis reveals oriented cell divisions associated with morphogenesis at the shoot apex of Arabidopsis thaliana.</a> Development. 131, 4225-4237 (2004).</li><li>Nimchuk, Z. L., Perdue, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+Imaging+of+Shoot+Meristems+on+an+Inverted+Confocal+Microscope+Using+an+Objective+Lens+Inverter+Attachment.">Live Imaging of Shoot Meristems on an Inverted Confocal Microscope Using an Objective Lens Inverter Attachment.</a> Frontiers in Plant Science. 8, 773 (2017).</li><li>Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HAIRY+MERISTEM+with+WUSCHEL+confines+CLAVATA3+expression+to+the+outer+apical+meristem+layers.">HAIRY MERISTEM with WUSCHEL confines CLAVATA3 expression to the outer apical meristem layers.</a> Science. 361 (6401), 502-506 (2018).</li><li>Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+plant+stem+cell+function+by+conserved+interacting+transcriptional+regulators.">Control of plant stem cell function by conserved interacting transcriptional regulators.</a> Nature. 517 (7534), 377-380 (2015).</li><li>Nimchuk, Z. L., Zhou, Y., Tarr, P. T., Peterson, B. A., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plant+stem+cell+maintenance+by+transcriptional+cross-regulation+of+related+receptor+kinases.">Plant stem cell maintenance by transcriptional cross-regulation of related receptor kinases.</a> Development. 142 (6), 1043 (2015).</li><li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LEAFY+Controls+Auxin+Response+Pathways+in+Floral+Primordium+Formation.">LEAFY Controls Auxin Response Pathways in Floral Primordium Formation.</a> Science Signaling. 6 (270), ra23 (2013).</li><li>Truernit, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+whole-mount+imaging+of+three-dimensional+tissue+organization+and+gene+expression+enables+the+study+of+phloem+development+and+structure+in+Arabidopsis.">High-resolution whole-mount imaging of three-dimensional tissue organization and gene expression enables the study of phloem development and structure in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 20 (6), 1494-1503 (2008).</li></ol>

Hier beschreiben wir eine einfache bildgebende Methode, die für die Untersuchung von Shoot Sprossapikalmeristem Meristeme aus unterschiedlichen Werken mit geringfügigen Änderungen angewendet werden kann öffnen einen neuen Weg um die Meristem-Verordnung an den vegetativen und reproduktiven Stadien in Modellpflanzen zu studieren und Pflanzen. Im Gegensatz zu die SEM und histologische Färbung Methoden helfen dieses Protokolls Oberflächenansicht und interne Zellstrukturen von SAMs, ohne die Notwendigkeit für arbeitsin...

Die Pflanze Meristem enthält einen Pool von undifferenzierten Stammzellen und kontinuierlich erhält die Orgel Pflanzenwachstum und Entwicklung1. Während der postembryonic Entwicklung stammen fast alle oberirdischen Gewebe einer Pflanze aus schießen Sprossapikalmeristem Meristem (SAM). In Kulturen sind die Aktivität und die Größe des SAM und seine abgeleiteten floral Meristeme viele agronomischen Eigenschaften wie Shooting Architektur, Obstbau und Samen Ertrag fest zugeordnet. Beispielsweise führt eine vergrößerte SAM in Tomate, eine Zunahme der schießen und Blütenstand Verzweigungen und damit Ergebnisse bei der Schaffung von zusätzlichen Blüte und Frucht Organe2. Bei Mais führt eine Zunahme SAM Größe zu einer höheren Ausgangszahl und Gesamtausbeute3,4. In Soja Meristem Unbestimmtheit ist auch eng verbunden mit der Shooting-Architektur und5.
Die Morphologie und Anatomie von SAMs können durch verschiedene Methoden, einschließlich der histologischen Schnitt/Färbung und Rasterelektronenmikroskopie (SEM)6, Scannen charakterisiert werden, die beide Meristem-Forschung durch die Bereitstellung von stark fortgeschrittenen haben die Schnittansicht oder eine dreidimensionale (3D) Oberflächenansicht von SAMs. Beide Methoden sind zeitaufwendig, an denen mehrere experimentelle Schritte von der Probenvorbereitung für die Datenerfassung, jedoch und diese Methoden hängen vor allem von örtlich festgelegten Proben. Jüngste Fortschritte in der Laser-scanning-Technik der konfokalen Mikroskopie haben diese Grenzen überwinden und uns ein mächtiges Werkzeug, um die Zellstruktur und Entwicklungsprozess des pflanzlichen Geweben und Organen7,8zu untersuchen. Durch optische anstatt physische Gewebe strukturierendes, konfokale Mikroskopie ermöglicht die Sammlung eine Reihe von Z-Stapel Bilder und die anschließende 3D-Rekonstruktion der Probe durch Bildanalyse-Software.
Hier beschreiben wir ein effizientes Verfahren zur Untersuchung sowohl innen und Oberflächenstrukturen des lebendigen SAMs aus verschiedenen Pflanzenarten mit Laser-scanning-konfokalen Mikroskopie, wodurch potentiell Forscher, die experimentell zu erreichen Prozesse innerhalb von 20 Minuten. Anders als bei anderen veröffentlichten Methoden für live konfokale Abbildung von Arabidopsis Blütenstand SAMs9,10,11,12,13,14, 15 und Arabidopsis Blumen12,13, hier zeigen wir, dass dieses Protokoll ist sehr effizient für das Studium nicht nur den Blütenstand Meristeme der Modell-Arten, sondern auch die vegetativen schießen Sprossapikalmeristem Meristeme aus verschiedenen Kulturen, wie Tomaten und Soja. Diese Methode setzt nicht auf transgene fluoreszierenden Marker und kann potenziell angewendet werden, um das Shooting Meristeme aus vielen verschiedenen Arten und Sorten zu studieren. Darüber hinaus führen wir auch einfache Bildverarbeitung Schritte zum Anzeigen und analysieren von verschiedenen SAMs in einer 3D-Ansicht. Zusammengenommen wird diese einfache Methode Forscher besser zu verstehen, die Struktur und Entwicklungsprozess des Meristeme von Modellorganismen und Kulturen erleichtern.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:968px;" width="968">
	<tbody>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:283px;">Agar Phyto</td>
			<td style="width:176px;">Dot Scientific Inc.</td>
			<td style="width:119px;">DSA20300-1000</td>
			<td style="width:391px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:35px;width:283px;">Agarose</td>
			<td style="width:176px;">Dot Scientific Inc.</td>
			<td style="width:119px;">AGLE-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:283px;">Forceps&#160;</td>
			<td style="width:176px;">ROBOZ</td>
			<td style="width:119px;">RS-4955</td>
			<td>Dumont #5SF Super Fine Forceps Inox Tip Size .025 X .005mm, for dissecting shoot apices.</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:283px;">LSM 880 Upright Confocal Microscope&#160;</td>
			<td style="width:176px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Murashige &#38; Skoog MS medium</td>
			<td style="width:176px;">Dot Scientific Inc.</td>
			<td style="width:119px;">DSM10200-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Plan APO 20x/1.1 water dipping lens</td>
			<td style="width:176px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:283px;">Plastic petri dishes 100 mm X 15 mm</td>
			<td style="width:176px;">CELLTREAT Scientific Products</td>
			<td style="width:119px;">229694</td>
			<td style="width:391px;">Use as making MS plates</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Plastic petri dishes60 mm X 15</td>
			<td style="width:176px;">CELLTREAT Scientific Products</td>
			<td style="width:119px;">229665</td>
			<td>Use as imaging dishes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Propagation Mix</td>
			<td style="width:176px;">Sungro Horticulture</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Propidium iodide</td>
			<td style="width:176px;">Acros Organics</td>
			<td style="width:119px;">440300250</td>
			<td>1 mg/mL solution in water, to stain the cell walls</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Razor blade</td>
			<td style="width:176px;">PERSONNA&#160;</td>
			<td style="width:119px;">62-0179</td>
			<td style="width:391px;">For cutting shoot apex from plants</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:35px;width:283px;">Stereomicroscope</td>
			<td style="width:176px;">Nikon</td>
			<td style="width:119px;">SMZ1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Tissue</td>
			<td style="width:176px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">82003-820</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Zen black</td>
			<td style="width:176px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Image acquisition software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

confocal live imaging of shoot apical meristems from different plant species

Die schießen Sprossapikalmeristem Meristem (SAM) Funktionen wie einem konservierten Stammzell-Reservoir und es erzeugt fast alle oberirdischen Gewebe während der postembryonic Entwicklung. Die Aktivität und Morphologie von SAMs bestimmen wichtige agronomische Merkmale, wie schießen Architektur, Größe und Anzahl der Geschlechtsorgane, und vor allem Kornertrag. Hier bieten wir ein detailliertes Protokoll zur Analyse der Morphologie der Oberfläche und die internen Zellstruktur des lebendigen SAMs aus verschiedenen Arten durch Laser-scanning-confocal Mikroskop. Das gesamte Verfahren von der Probenvorbereitung für den Erwerb von dreidimensionalen (3D) Bilder mit hoher Auflösung erreicht werden kann, innerhalb von 20 Minuten. Wir zeigen, dass dieses Protokoll ist für das Studium nicht nur der Blütenstand SAMs die Modell-Arten, sondern auch die vegetativen Meristeme aus verschiedenen Kulturen, bietet eine einfache, aber leistungsstarkes Tool zur Untersuchung der Organisation und Entwicklung von hocheffizienten Meristeme über verschiedene Pflanzenarten.

Um die Effizienz unseres Protokolls zu bewerten und die Morphologie der Meristeme verschiedener Arten zu erkunden, haben wir die konfokale live-imaging-Experimente an der Blütenstand Meristem von Arabidopsis und die vegetative Meristeme aus ausgeführt. Tomaten und Soja. In dieser Studie, Arabidopsis Ökotyp Landsberg Erecta, Tomaten Sorte Micro-Tom und Sojabohnen Sorte worden Williams 82 als Beispiele benutzt.
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Confocal Live Imaging of Shoot Apical Meristems from Different Plant Species

Konfokale Live Imaging von Shoot Sprossapikalmeristem Meristeme aus verschiedenen Pflanzenarten

Dieses Protokoll stellt Informationen zum live-Bild und analysieren schießen Sprossapikalmeristem Meristeme aus verschiedenen Pflanzenarten mit Laser-scanning-konfokalen Mikroskopie.

The shoot apical meristem (SAM) functions as a conserved stem cell reservoir and it generates almost all aboveground tissues during the postembryonic ...

Schießen Sie apikale Meristems steuern Pflanzenwachstum und Fortpflanzung. Diese Methode hilft uns, die Morphologie und die inneren Strukturen von Trieb-apikalen Meristems nicht nur in den Modellarten, sondern auch in verschiedenen Kulturen zu untersuchen. Diese Technik ist ein sehr effizientes Verfahren.Shoot apical Meristem kann direkt in einer hohen zellulären Auflösung ohne arbeitsintensive Probenfixierung und Gewebeschnitt Schritte visualisiert werden. Zunächst wachsen Arabidopsis, Tomaten- und Sojapflanzen, wie im Textprotokoll beschrieben. Schneiden Sie den Blütenstand Schießen Spitze aus den verschraubten Arabidopsis Pflanzen.Halten Sie den Basalteil des Hauptstamms und verwenden Sie Zangen, um so viele ältere Blütenorgane wie möglich aus dem Hauptstamm zu entfernen. Entfernen Sie weiterhin die restlichen Blumen im Bereich des Stereomikroskops, bis das schießende apikale Meristem von den Okularen aus betrachtet werden kann. Um den vegetativen Trieb apikalmer meristems von Tomaten oder Sojabohnen zu sehen, sezieren Sie die Kotyledonen, Blätter und Wurzeln aus der Pflanze.Halten Sie die Hypocotyle der Pflanze unter dem Stereomikroskop, und verwenden Sie Zangen, um die Blätter und Blattprimordien, die die vegetativen Trieb eapikalen Meristems bedecken, weiter zu sezieren. Pipette 50 Mikroliter Propidiumjodidlösung in einer sauberen und leeren Petrischale. Tauchen Sie die gesamte sezierte Triebspitze für zwei Minuten in Farbstoff.Tauchen Sie während des Färbevorgangs den gesamten Blütenstand ein, der apikale Meristem oder vegetative Trieb-Apische in die Propidiumjodidlösung schießt, um eine gleichmäßige Färbung zu erreichen. Spülen Sie den gefärbten Triebspitze zweimal in sterilem, entionisiertem Wasser. Nun durchbohren Sie ein Loch in der Mitte einer vorbereiteten bildgebenden Schale mit Zangen, und kleben Sie die gefärbte Triebspitze aufrecht in das Medium.Füllen Sie die bildgebende Schale mit sterilem, entionisiertem Wasser, um die Probe vollständig einzutauchen. Sehen Sie sich die Probe durch das Stereomikroskop an. Pipette nach oben und unten, um Luftblasen zu entfernen, die um das Meristem gefangen sind.Passen Sie dann den Winkel des Stiels im Agar an, um sicherzustellen, dass der Trieb-Apische Meristem von direkt von oben vollständig sichtbar ist. Platzieren Sie nun die Bildform auf der Probenstufe des konfokalen Mikroskops. Senken Sie die wassertauchende Linse, und heben Sie die Mikroskop-Probestufe, um die Linsenspitze ins Wasser tauchen zu lassen.Öffnen Sie die konfokale Mikroskop-Software, und verwenden Sie die Okularen, um den Schieß-Apischen Meristem im hellen Feld zu lokalisieren und zu fokussieren. Betreiben Sie die Erfassungsfunktion in der konfokalen Mikroskopsoftware. Starten Sie den Live-Modus, um das Beispiel vom Computerbildschirm aus anzuzeigen, und richten Sie alle Parameter für das Laserscanexperiment ein.Verwenden Sie beim Anpassen der Parameter die Funktion Bereichsanzeige, um zu definieren, ob das Signal gesättigt ist oder nicht. Die gleiche Software, die für die Bildaufnahme verwendet wurde, kann zur Visualisierung einer dreidimensionalen transparenten Projektion verwendet werden. Öffnen Sie die ursprüngliche konfokale Datei, klicken Sie auf das 3D-Menü, und wählen Sie Transparent aus, um eine 3D-Projektionsansicht zu generieren.Wählen Sie optional Transparenz aus, um drei Parameter der Projektion anzupassen, einschließlich Schwellenwert, Rampe und Maximum für die Transparenz des 3D-Bildes. Wählen Sie nun Licht aus, um die Helligkeit des 3D-Bildes anzupassen. Exportieren Sie die projizierten Bilder, und speichern Sie sie als TIFF-Dateien.Verwenden Sie dieselbe Software, um die Tiefencodierungsansicht der 3D-Bilder zu visualisieren. Klicken Sie erneut auf das 3D-Menü, und wählen Sie Aussehen aus. Wählen Sie Spezial aus, und wählen Sie Tiefencodierung aus.Exportieren Sie die projizierten Bilder, und speichern Sie sie als TIFF-Dateien. Dieses Bild aus dem orthogonalen Abschnitt durch die Mitte des Arabidopsis-Schießens zeigt, dass die horizontalen Wände in fast allen Zellen in mehreren Zellschichten mit Propidiumjodid befleckt sind. Ein Blick auf einen Querschnitt durch den Korpus des Blütenstandesschießens zeigt, dass die Zellen aus der XY-Ebene ebenfalls klar abgebildet sind.Die 3D-Projektionsansicht zeigt, dass das Blütenstand-Meristem eine kuppelartige Struktur bildet und von der sich entwickelnden Blütenprimordia umgeben ist. Dieses Bild aus dem orthogonalen Abschnitt durch die Mitte des Tomatentriebs apischen Meristem zeigt auch, dass die horizontalen Wände mit Propidiumjodid an mehreren Zellschichten gefärbt sind, obwohl das Propidiumiodidsignal aus dem tiefen Inneren etwas niedriger ist. Ein Bild aus einem Querschnitt durch die tiefen Schichten des vegetativen Trieb-Apischen Meristamms zeigt die Zellen der XY-Ebenen und die Grenze zwischen dem vegetativen Meristem und der Blattprimordia.Die 3D-Projektionsansicht kann darüber hinaus einen umfassenden Überblick über die Form und Organisation des vegetativen Meristes aus Tomaten bieten. Hier ist eine orthogonale Ansicht durch die Mitte des Sojabohnen-Schießens apikalmeristem und eine 3D-Projektion des gleichen Trieb apischen Meristem gezeigt. Das kuppelartige vegetative Meristem und seine abgeleiteten neuen Blattprimordien sind ebenfalls beobachtbar.Propidiumiodid kann leicht beschädigte oder abgestorbene Zellen färben, was die Qualität der Bilder stark beeinflussen wird, daher ist es wichtig, bei der Vorbereitung von apikalen Meristemproben zu vermeiden, dass es keine physischen Schäden verursacht.

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