Name: confocal live imaging of shoot apical meristems from different plant species
Uploaded: 2019-03-29T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Confocal Live Imaging of Shoot Apical Meristems from Different Plant Species at JoVE.com

המחברים מתקן הדמיה מרכז פרדו Bindley Bioscience לגישה הלייזר מיקרוסקופ קונפוקלי סורק, לתמיכה טכנית, ומסכים המחברים מעריך את העזרה של אנדי Schaber במתקן הדמיה Bindley פרדו. פעילות זו מומן על ידי אוניברסיטת פרדו כחלק AgSEED פרשת דרכים מימון לתמוך החקלאות ופיתוח הכפר של אינדיאנה.

1. הכנת מנות מדיה והדמיה
<ol><li>MS צלחות: להוסיף 0.5 x Murashige & Skoog MS בינוני, 1% אגר למים יונים ולאחר מכן התאם את ה-pH ל 5.8 שימוש אשלגן הידרוקסידי פתרון (אופציונלי: להוסיף 1% סוכרוז לגידול צמחים לטווח ארוך). אוטוקלב, יציקת פלטות.</li>
	<li>הדמיה מנות: מילוי פלסטיק צלחות פטרי (6 ס"מ, עומק של 1.5 ס מ) ל- 0.5-0.8 ס מ עם agarose...

<ol>
	<li>Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+control+of+cell+division+patterns+in+developing+plants.">Genetic control of cell division patterns in developing plants.</a> Cell. 88 (3), 299-308 (1997).</li><li>Xu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cascade+of+arabinosyltransferases+controls+shoot+meristem+size+in+tomato.">A cascade of arabinosyltransferases controls shoot meristem size in tomato.</a> Nature Genetics. 47 (7), 784-792 (2015).</li><li>Bommert, P., Nagasawa, N. S., Jackson, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+variation+in+maize+kernel+row+number+is+controlled+by+the+FASCIATED+EAR2+locus.">Quantitative variation in maize kernel row number is controlled by the FASCIATED EAR2 locus.</a> Nature Genetics. 45 (3), 334-337 (2013).</li><li>Je, B. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+from+maize+organ+primordia+via+FASCIATED+EAR3+regulates+stem+cell+proliferation+and+yield+traits.">Signaling from maize organ primordia via FASCIATED EAR3 regulates stem cell proliferation and yield traits.</a> Nature Genetics. 48 (7), 785-791 (2016).</li><li>Ping, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dt2+is+a+gain-of-function+MADS-domain+factor+gene+that+specifies+semideterminacy+in+soybean.">Dt2 is a gain-of-function MADS-domain factor gene that specifies semideterminacy in soybean.</a> Plant Cell. 26 (7), 2831-2842 (2014).</li><li>Vaughan, J. G., Jones, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+of+the+angiosperm+inflorescence+apex.">Structure of the angiosperm inflorescence apex.</a> Nature. 171, 751 (1953).</li><li>Sijacic, P., Liu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+insights+from+live-imaging+in+shoot+meristem+development.">Novel insights from live-imaging in shoot meristem development.</a> Journal of Integrative Plant Biology. 52 (4), 393-399 (2010).</li><li>Tax, F. E., Durbak, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meristems+in+the+movies:+live+imaging+as+a+tool+for+decoding+intercellular+signaling+in+shoot+apical+meristems.">Meristems in the movies: live imaging as a tool for decoding intercellular signaling in shoot apical meristems.</a> Plant Cell. 18 (6), 1331 (2006).</li><li>Grandjean, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+analysis+of+cell+division,+cell+growth,+and+differentiation+at+the+shoot+apical+meristem+in+Arabidopsis.">In vivo analysis of cell division, cell growth, and differentiation at the shoot apical meristem in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 16 (1), 74-87 (2004).</li><li>Heisler, M. G., Ohno, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-imaging+of+the+Arabidopsis+inflorescence+meristem.">Live-imaging of the Arabidopsis inflorescence meristem.</a> Methods in Molecular Biology. 1110, 431-440 (2014).</li><li>Tobin, C. J., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+lineage+analysis+to+study+cell+division+orientation+in+the+Arabidopsis+shoot+meristem.">Real-time lineage analysis to study cell division orientation in the Arabidopsis shoot meristem.</a> Methods in Molecular Biology. 1370, 147-167 (2016).</li><li>Prunet, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+confocal+Imaging+of+developing+Arabidopsis+flowers.">Live confocal Imaging of developing Arabidopsis flowers.</a> Journal of Visualized Experiments. (122), e55156 (2017).</li><li>Prunet, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+confocal+imaging+of+Arabidopsis+flower+buds.">Live confocal imaging of Arabidopsis flower buds.</a> Developmental Biology. 419, 114-120 (2016).</li><li>Reddy, G. V., Heisler, M. G., Ehrhardt, D. W., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+lineage+analysis+reveals+oriented+cell+divisions+associated+with+morphogenesis+at+the+shoot+apex+of+Arabidopsis+thaliana.">Real-time lineage analysis reveals oriented cell divisions associated with morphogenesis at the shoot apex of Arabidopsis thaliana.</a> Development. 131, 4225-4237 (2004).</li><li>Nimchuk, Z. L., Perdue, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+Imaging+of+Shoot+Meristems+on+an+Inverted+Confocal+Microscope+Using+an+Objective+Lens+Inverter+Attachment.">Live Imaging of Shoot Meristems on an Inverted Confocal Microscope Using an Objective Lens Inverter Attachment.</a> Frontiers in Plant Science. 8, 773 (2017).</li><li>Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HAIRY+MERISTEM+with+WUSCHEL+confines+CLAVATA3+expression+to+the+outer+apical+meristem+layers.">HAIRY MERISTEM with WUSCHEL confines CLAVATA3 expression to the outer apical meristem layers.</a> Science. 361 (6401), 502-506 (2018).</li><li>Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+plant+stem+cell+function+by+conserved+interacting+transcriptional+regulators.">Control of plant stem cell function by conserved interacting transcriptional regulators.</a> Nature. 517 (7534), 377-380 (2015).</li><li>Nimchuk, Z. L., Zhou, Y., Tarr, P. T., Peterson, B. A., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plant+stem+cell+maintenance+by+transcriptional+cross-regulation+of+related+receptor+kinases.">Plant stem cell maintenance by transcriptional cross-regulation of related receptor kinases.</a> Development. 142 (6), 1043 (2015).</li><li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LEAFY+Controls+Auxin+Response+Pathways+in+Floral+Primordium+Formation.">LEAFY Controls Auxin Response Pathways in Floral Primordium Formation.</a> Science Signaling. 6 (270), ra23 (2013).</li><li>Truernit, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+whole-mount+imaging+of+three-dimensional+tissue+organization+and+gene+expression+enables+the+study+of+phloem+development+and+structure+in+Arabidopsis.">High-resolution whole-mount imaging of three-dimensional tissue organization and gene expression enables the study of phloem development and structure in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 20 (6), 1494-1503 (2008).</li></ol>

כאן, אנו מתארים שיטה הדמיה פשוטה שניתן להחיל בחקר לירות apical meristems מצמחים שונים עם מינימאליים, פתיחת שדרה חדש ללמוד ברגולציה meristem בשלבים הן וגטטיבי לבין הרבייה בצמחים מודל ו יבולים. בניגוד SEM ופעולות היסטולוגית מוכתמים, פרוטוקול זה יכול לעזור לחשוף בתצוגת משטח והן מבנים הסלולר פנימי של סאמס...

Meristem הצמח מכיל מאגר של תאי גזע מובחן, ברציפות ומקיימת את צימוח איברים ואת פיתוח1. במהלך הפיתוח postembryonic, כמעט כל רקמות מעל פני הקרקע של צמח נגזרות של meristem apical לירות (SAM). בגידולים, פעילותן ואת גודל את סאם שלה meristems פרחוני נגזר הם קשורים בחוזקה רבים אגרונומית תכונות כגון ארכיטקטורה לירות, פירות ייצור זרע התשואה. לדוגמה, בעגבניה, סאם מוגדל גורמת עלייה הצילומים ואת תפרחת הסתעפות, ולכן התוצאות על מנת לייצר פרח נוסף ופרי איברים2. תירס, גידול בגודל סאם מוביל מספר הזרעים גבוה יותר, התשואה הכוללת3,4. סויה, indeterminacy meristem גם קשורה קשר הדוק עם הארכיטקטורה לירות, תשואה5.
מורפולוגיה של האנטומיה של סאמס יכולים להיות מאופיינת במספר שיטות, כולל היסטולוגית חלוקתה/צביעת וסריקה מיקרוסקופ אלקטרונים (SEM)6, אשר שניהם יש קידמה מאוד את המחקר meristem באמצעות מתן תצוגת חתך או מבט תלת מימדי (3D) משטח של סאמס. אולם, שתי השיטות הן זמן רב, מעורבים מספר שלבים ניסיוני משלב הכנת המדגם אל, רכישת נתונים, שיטות אלה תלויים בעיקר מדגמים קבועים. התפתחויות אחרונות סריקת מיקרוסקופיה קונפוקלית טכניקת לייזר היה להתגבר על מגבלות אלה ולספק לנו כלי רב עוצמה כדי לחקור את המבנה התאי ואת התהליך ההתפתחותי של הצמח רקמות ואיברים7,8. דרך אופטי ולא רקמה גופנית מיקרוסקופ קונפוקלי, אופטים מאפשר את האוסף של סדרה של תמונות z-מחסנית ושיחזור 3D עוקבות של המדגם באמצעות תוכנות ניתוח התמונה.
כאן, אנו מתארים הליך יעיל עבור חוקרים גם בפנים ולשתול משטח מבני המגורים סאמס מ שונים מינים באמצעות סריקת קונפוקלית, אשר פוטנציאל מאפשר לחוקרים לבצע כל את ניסיוני לייזר תהליך בתוך קצר ככל 20 דקות. שונה מכל שיטות נוספות שפורסמו בשידור חי הדמיה קונאפוקלית של תודרנית תפרחת סאמס9,10,11,12,13,14, 15 ו תודרנית פרחים12,13, כאן אנחנו מוכיחים כי פרוטוקול זה הוא יעיל ביותר ללמוד לא רק את תפרחת meristems של המין מודל, אלא גם את הצילומים וגטטיבי meristems apical של גידולים שונים, כגון עגבניות, סויה. בשיטה זו אין להסתמך על סמנים פלורסנט הטרנסגניים ולאחר פוטנציאלי יכול להיות מיושם ללמוד את meristems לירות מתוך שפע מינים שונים של הזנים. בנוסף, אנחנו גם מציגים את התמונה פשוט עיבוד צפייה וניתוח סאמס שונים בתצוגה תלת-ממדית. יחדיו, שיטה פשוטה זו יקל על החוקרים להבין טוב יותר את המבנה ואת תהליך התפתחותי meristems דגם אורגניזמים והן יבולים.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:968px;" width="968">
	<tbody>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:283px;">Agar Phyto</td>
			<td style="width:176px;">Dot Scientific Inc.</td>
			<td style="width:119px;">DSA20300-1000</td>
			<td style="width:391px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:35px;width:283px;">Agarose</td>
			<td style="width:176px;">Dot Scientific Inc.</td>
			<td style="width:119px;">AGLE-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:283px;">Forceps&#160;</td>
			<td style="width:176px;">ROBOZ</td>
			<td style="width:119px;">RS-4955</td>
			<td>Dumont #5SF Super Fine Forceps Inox Tip Size .025 X .005mm, for dissecting shoot apices.</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:283px;">LSM 880 Upright Confocal Microscope&#160;</td>
			<td style="width:176px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Murashige &#38; Skoog MS medium</td>
			<td style="width:176px;">Dot Scientific Inc.</td>
			<td style="width:119px;">DSM10200-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Plan APO 20x/1.1 water dipping lens</td>
			<td style="width:176px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:283px;">Plastic petri dishes 100 mm X 15 mm</td>
			<td style="width:176px;">CELLTREAT Scientific Products</td>
			<td style="width:119px;">229694</td>
			<td style="width:391px;">Use as making MS plates</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Plastic petri dishes60 mm X 15</td>
			<td style="width:176px;">CELLTREAT Scientific Products</td>
			<td style="width:119px;">229665</td>
			<td>Use as imaging dishes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Propagation Mix</td>
			<td style="width:176px;">Sungro Horticulture</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Propidium iodide</td>
			<td style="width:176px;">Acros Organics</td>
			<td style="width:119px;">440300250</td>
			<td>1 mg/mL solution in water, to stain the cell walls</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Razor blade</td>
			<td style="width:176px;">PERSONNA&#160;</td>
			<td style="width:119px;">62-0179</td>
			<td style="width:391px;">For cutting shoot apex from plants</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:35px;width:283px;">Stereomicroscope</td>
			<td style="width:176px;">Nikon</td>
			<td style="width:119px;">SMZ1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Tissue</td>
			<td style="width:176px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">82003-820</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Zen black</td>
			<td style="width:176px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Image acquisition software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

confocal live imaging of shoot apical meristems from different plant species

הפונקציות apical meristem (SAM) לירות כמו מאגר תאי גזע שנשמרת וזה יוצר כמעט לכל רקמות מעל פני הקרקע במהלך הפיתוח postembryonic. פעילותן ואת המורפולוגיה של סאמס לקבוע תכונות אגרונומית חשובים, כגון ארכיטקטורה לירות, הגודל והמספר של איברי הרבייה, וחשוב, התשואה תבואה. כאן, אנו מספקים פרוטוקול מפורט לניתוח המורפולוגיה השטח והן המבנה התאי פנימי של חיים סאמס ממינים שונים דרך מיקרוסקופ קונפוקלי סורק לייזר. ההליך כולו משלב הכנת המדגם רכישת תמונות תלת מימד (3D) ברזולוציה גבוהה יכול להתבצע במרחק קצר ככל 20 דקות. נדגים כי פרוטוקול זה הוא יעיל ביותר ללמוד לא רק התפרחת סאמס של המין מודל, אלא גם את meristems וגטטיבי של גידולים שונים, מתן כלי פשוט אך רב עוצמה כדי ללמוד את הארגון ואת התפתחות meristems על פני מינים שונים.

כדי להעריך את היעילות של פרוטוקול שלנו וכדי לחקור את המורפולוגיה של meristems של מינים שונים, ערכנו הניסויים קונאפוקלית הדמיה בשידור חי את meristem תפרחת של תודרנית ו את צמח meristems מ עגבניות וגם סויה. זה מחקר, תודרנית אקוטיפ לנדסברג זקופה, עגבניות לדבורי מיקרו-טום, סו...

Watch this Scientific Journal Video about Confocal Live Imaging of Shoot Apical Meristems from Different Plant Species at JoVE.com

Confocal Live Imaging of Shoot Apical Meristems from Different Plant Species

קונאפוקלית חי הדמיה של לירות Meristems הפסגה מ שונים זנים של צמחים

פרוטוקול זה מציג כיצד לחיות התמונה ולנתח את meristems apical לירות מכל מיני צמחים שונים באמצעות סריקת מיקרוסקופיה קונפוקלית לייזר.

The shoot apical meristem (SAM) functions as a conserved stem cell reservoir and it generates almost all aboveground tissues during the postembryonic ...

לירות meristems apical לשלוט צמיחת הצמח ורבייה. שיטה זו מסייעת לנו לחקור את המורפולוגיה והמבנים הפנימיים של ירי מריסטמים אפיים לא רק במין המודל אלא גם בגידולים שונים. טכניקה זו היא הליך יעיל מאוד.לירות meristem apical ניתן לדמיין ישירות ברזולוציה תאית גבוהה ללא כל קיבעון מדגם עתיר עבודה וצעדי חתך רקמות. ראשית, לגדל ערביידופסיס, עגבניות, וצמחי סויה כמפורט בפרוטוקול הטקסט. חותכים את תפרחת לירות איפקס מצמחי Arabidopsis מוברגים.החזיקו את החלק הבסיסי של הגבעול הראשי, ולהשתמש במקלות כדי להסיר כמה שיותר איברי פרחים ישנים ככל האפשר מהגזע הראשי. המשך להסיר את שאר הפרחים בשדה של מיקרוסקופ סטריאו עד meristem apical לירות ניתן לראות מן העיניים. כדי לצפות בצמחייה לירות meristems apical מעגבניות או סויה, לנתח את הקוטילדונים, עלים, ושורשים מן הצמח.החזיקו את ההיפוקוטילים של הצמח מתחת למיקרוסקופ הסטריאו, ולהשתמש במטסים כדי לנתח עוד יותר את העלים ואת פרימורדיית העלים המכסים את הריסתם הצמחית. פיפט 50 מיקרוליטרים של תותח פרופידיום יודיד בצלחת פטרי נקייה וריקה. טובלים את כל איפקס היורה המנותק לצבע במשך שתי דקות.במהלך תהליך הכתמים, לטבול את כל תפרחת לירות meristem אפית או וגטטיבי לירות meristem אפית לתוך פתרון יודיד פרופיד כדי להשיג כתמים אחידים. שוטפים את איפקס הירי המוכתם פעמיים במים סטריליים, דה-מיונים. עכשיו, לנקב חור במרכז צלחת הדמיה מוכנה באמצעות מדפים, ולתקוע את היורה מוכתם זקוף במדיום.ממלאים את צלחת ההדמיה במים סטריליים, deionized לטבול לחלוטין את המדגם. הצג את הדגימה דרך מיקרוסקופ הסטריאו. פיפטה למעלה ולמטה כדי להסיר בועות אוויר לכודות סביב מריסטם.לאחר מכן, להתאים את הזווית של הגבעול ב agar כדי לוודא כי meristem apical לירות גלוי לחלוטין מלמעלה. עכשיו, מניחים את צלחת ההדמיה על שלב הדגימה של מיקרוסקופ הקונפוקל. מנמיך את עדשת טבילת המים, ומרים את שלב דגימת המיקרוסקופ כדי לאפשר לקצה העדשה לטבול במים.פתח את תוכנת המיקרוסקופ הקונפוקלי, ולהשתמש ב eyepieces כדי לאתר ולהתמקד meristem apical לירות בשדה הבהיר. הפעילו את פונקציית הרכישה בתוכנת המיקרוסקופ הקונפוקל. הפעל את המצב החי כדי להציג את הדגימה ממסך המחשב והגדר את כל הפרמטרים לניסוי סריקת הלייזר.בעת התאמת הפרמטרים, השתמש בפונקציה מחוון טווח כדי להגדיר אם האות רווי או לא. אותה תוכנה ששימשה לרכישת דימות יכולה לשמש להדמיה של הקרנה שקופה תלת-ממדית. פתחו את קובץ הקונפוסל המקורי, לחצו על תפריט תלת-מימד ובחרו 'שקוף' ליצירת תצוגת הקרנה תלת-מימדית.לחלופין, בחרו 'שקיפות' להתאמת שלושה פרמטרים של ההקרנה, כולל 'סף', 'שיפוע' ו'מקסימום' לשקיפות התמונה תלת-מימדית. כעת, בחרו 'אור' להתאמת הבהירות של התמונה תלת-מימדית. יצא את התמונות המוקרנות ושמור אותן כקבצי TIFF.להצגה חזותית של תצוגת קידוד העומק של התמונות תלת-מימדיות, השתמש באותה תוכנה. שוב, לחצו על 'תלת-מימד' ובחרו 'מראה'. בחרו 'מיוחד' ובחרו 'קידוד עומק'.יצא את התמונות המוקרנות ושמור אותן כקבצי TIFF. תמונה זו מן החלק orthogonal דרך אמצע Arabidopsis לירות מריסטם apical מראה כי הקירות האופקיים מוכתמים יודיד פרופיד כמעט בכל התאים בשכבות תאים מרובים. מבט על קטע רוחבי אחד דרך הקורפוס של תפרחת לירות מריסטם apical מראה כי התאים ממישור XY הם גם בתמונה ברורה.תצוגת ההקרנה תלת מימדית מגלה כי מריסטם תפרחת יוצר מבנה דמוי כיפה ומוקף פרימורדיה הפרח המתפתחת. תמונה זו מן החלק orthogonal דרך אמצע העגבניות לירות מריסטם אפית גם מראה כי הקירות האופקיים מוכתמים יודיד פרופיד בשכבות תאים מרובים, אם כי אות יודיד פרופיד מאזור הפנים העמוק הוא מעט נמוך יותר. תמונה מקטע רוחבי אחד דרך השכבות העמוקות של מריסטם האף הצמחי חושפת את התאים ממטוסי ה- XY ואת הגבול שנוצר בין מריסטם הצמחי לפרימורדיית העלים.תצוגת ההקרנה תלת מימדית יכולה לספק תצוגה מקיפה של הצורה והארגון של מריסטם הצמחי מעגבניות. מוצג כאן הוא נוף אורתוגונאלי דרך אמצע מריסטם פולי סויה לירות apical והקרנה 3D של מריסטם אפית לירות אותו. גם מריסטם הצמחי דמוי הכיפה ופרימורדיית העלים החדשים הנגזרים שלו ניתנים לצפייה.Propidium יודיד יכול בקלות כתם תאים פגומים או מתים, אשר ישפיעו מאוד על איכות התמונות, ולכן חשוב למנוע כל נזק פיזי בעת הכנת לירות דגימות מריסטם apical.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-הדמיה של<em&gt; דרוזופילה</em&gt; גלמי עין

Inherent processes of Drosophila pupal development can shift and distort the eye epithelium in ways that make individual cell behavior difficult to track ...

In Vitro Differentiation of Mature Myofibers for Live Imaging

In Vitro Differentiation of Mature Myofibers for Live Imaging

במבחנת הבידול של בוגרות Myofibers עבור הדמיה חיה

Skeletal muscles are composed of myofibers, the biggest cells in the mammalian body and one of the few syncytia. How the complex and evolutionarily ...

Live Confocal Imaging of Developing Arabidopsis Flowers

חי Confocal הדמיה של פיתוח פרחים ארבידופסיס

The study of plant growth and development has long relied on experimental techniques using dead, fixed tissues and lacking proper cellular resolution. ...

A Simple Chamber for Long-term Confocal Imaging of Root and Hypocotyl Development

חדר פשוט עבור לטווח ארוך הדמיה confocal של שורש ו היפוקוטיל פיתוח

Several aspects of plant development, such as lateral root morphogenesis, occur on time spans of several days. To study underlying cellular and ...

Long-term Live Imaging of Drosophila Eye Disc

Long-term Live Imaging of Drosophila Eye Disc

הדמיה לטווח ארוך בשידור חי של<em&gt; דרוזופילה</em&gt; דיסק העין

Live imaging provides the ability to continuously track dynamic cellular and developmental processes in real time. Drosophila larval imaginal discs have ...

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

במבחנה ביצית טיפוח עבור Live-תא הדמיה של הזיגוטה קיטוב והמתבנת העובר ב תודרנית לבנה

In most flowering plants, the zygote and embryo are hidden deep in the mother tissue, and thus it has long been a mystery of how they develop dynamically; ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

הדמיה חיה של עכבר משניים פיוז &#39;ן

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Live Cell Imaging of Chromosome Segregation During Mitosis

תא חי הדמיה של הפרדה בין כרומוזום במהלך מיטוזה

Chromosomes must be reliably and uniformly segregated into daughter cells during mitotic cell division. Fidelity of chromosomal segregation is controlled ...

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

הדמיה חיה וניתוח של התכווצויות שרירים בתוך העובר דרוזופילה

Coordinated muscle contractions are a form of rhythmic behavior seen early during development in Drosophila embryos. Neuronal sensory feedback circuits ...

Live Cell Imaging of Microtubule Cytoskeleton and Micromechanical Manipulation of the Arabidopsis Shoot Apical Meristem

Live Cell Imaging of Microtubule Cytoskeleton and Micromechanical Manipulation of the Arabidopsis Shoot Apical Meristem

הדמיה חיה של ציטוסקלטון Microtubule ומניפולציה מיקרומכנית של Arabidopsis לירות מריסטם Apical

Understanding cell and tissue level regulation of growth and morphogenesis has been at the forefront of biological research for many decades. Advances in ...