Name: confocal live imaging of shoot apical meristems from different plant species
Uploaded: 2019-03-29T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Confocal Live Imaging of Shoot Apical Meristems from Different Plant Species at JoVE.com

लेखकों को स्वीकार लेजर संनाभि माइक्रोस्कोप और तकनीकी सहायता के लिए, और लेखक एंडी schaber से मदद की सराहना करते है के लिए purdue bindley bioscience केंद्र इमेजिंग सुविधा में प्रवेश के लिए purdue bindley इमेजिंग सुविधा । इस गतिविधि को इंडियाना कृषि और ग्रामीण विकास का समर्थन करने के लिए AgSEED चौराहे धन के हिस्से के रूप में इन्होने विश्वविद्यालय द्वारा वित्त पोषित किया गया था ।

1. मीडिया और इमेजिंग व्यंजन तैयारी
<ol><li>एमएस प्लेटें: जोड़ें 0.5 x मुराशिगे & skoog एमएस मध्यम, 1% विआयनीकृत पानी में आगर और फिर ५.८ को पीएच समायोजित पोटेशियम हाइड्रॉक्साइड समाधान का उपयोग (वैकल्पिक: लंबी अवधि के ?...

<ol>
	<li>Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+control+of+cell+division+patterns+in+developing+plants.">Genetic control of cell division patterns in developing plants.</a> Cell. 88 (3), 299-308 (1997).</li><li>Xu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cascade+of+arabinosyltransferases+controls+shoot+meristem+size+in+tomato.">A cascade of arabinosyltransferases controls shoot meristem size in tomato.</a> Nature Genetics. 47 (7), 784-792 (2015).</li><li>Bommert, P., Nagasawa, N. S., Jackson, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+variation+in+maize+kernel+row+number+is+controlled+by+the+FASCIATED+EAR2+locus.">Quantitative variation in maize kernel row number is controlled by the FASCIATED EAR2 locus.</a> Nature Genetics. 45 (3), 334-337 (2013).</li><li>Je, B. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+from+maize+organ+primordia+via+FASCIATED+EAR3+regulates+stem+cell+proliferation+and+yield+traits.">Signaling from maize organ primordia via FASCIATED EAR3 regulates stem cell proliferation and yield traits.</a> Nature Genetics. 48 (7), 785-791 (2016).</li><li>Ping, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dt2+is+a+gain-of-function+MADS-domain+factor+gene+that+specifies+semideterminacy+in+soybean.">Dt2 is a gain-of-function MADS-domain factor gene that specifies semideterminacy in soybean.</a> Plant Cell. 26 (7), 2831-2842 (2014).</li><li>Vaughan, J. G., Jones, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+of+the+angiosperm+inflorescence+apex.">Structure of the angiosperm inflorescence apex.</a> Nature. 171, 751 (1953).</li><li>Sijacic, P., Liu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+insights+from+live-imaging+in+shoot+meristem+development.">Novel insights from live-imaging in shoot meristem development.</a> Journal of Integrative Plant Biology. 52 (4), 393-399 (2010).</li><li>Tax, F. E., Durbak, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meristems+in+the+movies:+live+imaging+as+a+tool+for+decoding+intercellular+signaling+in+shoot+apical+meristems.">Meristems in the movies: live imaging as a tool for decoding intercellular signaling in shoot apical meristems.</a> Plant Cell. 18 (6), 1331 (2006).</li><li>Grandjean, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+analysis+of+cell+division,+cell+growth,+and+differentiation+at+the+shoot+apical+meristem+in+Arabidopsis.">In vivo analysis of cell division, cell growth, and differentiation at the shoot apical meristem in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 16 (1), 74-87 (2004).</li><li>Heisler, M. G., Ohno, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-imaging+of+the+Arabidopsis+inflorescence+meristem.">Live-imaging of the Arabidopsis inflorescence meristem.</a> Methods in Molecular Biology. 1110, 431-440 (2014).</li><li>Tobin, C. J., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+lineage+analysis+to+study+cell+division+orientation+in+the+Arabidopsis+shoot+meristem.">Real-time lineage analysis to study cell division orientation in the Arabidopsis shoot meristem.</a> Methods in Molecular Biology. 1370, 147-167 (2016).</li><li>Prunet, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+confocal+Imaging+of+developing+Arabidopsis+flowers.">Live confocal Imaging of developing Arabidopsis flowers.</a> Journal of Visualized Experiments. (122), e55156 (2017).</li><li>Prunet, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+confocal+imaging+of+Arabidopsis+flower+buds.">Live confocal imaging of Arabidopsis flower buds.</a> Developmental Biology. 419, 114-120 (2016).</li><li>Reddy, G. V., Heisler, M. G., Ehrhardt, D. W., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+lineage+analysis+reveals+oriented+cell+divisions+associated+with+morphogenesis+at+the+shoot+apex+of+Arabidopsis+thaliana.">Real-time lineage analysis reveals oriented cell divisions associated with morphogenesis at the shoot apex of Arabidopsis thaliana.</a> Development. 131, 4225-4237 (2004).</li><li>Nimchuk, Z. L., Perdue, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+Imaging+of+Shoot+Meristems+on+an+Inverted+Confocal+Microscope+Using+an+Objective+Lens+Inverter+Attachment.">Live Imaging of Shoot Meristems on an Inverted Confocal Microscope Using an Objective Lens Inverter Attachment.</a> Frontiers in Plant Science. 8, 773 (2017).</li><li>Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HAIRY+MERISTEM+with+WUSCHEL+confines+CLAVATA3+expression+to+the+outer+apical+meristem+layers.">HAIRY MERISTEM with WUSCHEL confines CLAVATA3 expression to the outer apical meristem layers.</a> Science. 361 (6401), 502-506 (2018).</li><li>Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+plant+stem+cell+function+by+conserved+interacting+transcriptional+regulators.">Control of plant stem cell function by conserved interacting transcriptional regulators.</a> Nature. 517 (7534), 377-380 (2015).</li><li>Nimchuk, Z. L., Zhou, Y., Tarr, P. T., Peterson, B. A., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plant+stem+cell+maintenance+by+transcriptional+cross-regulation+of+related+receptor+kinases.">Plant stem cell maintenance by transcriptional cross-regulation of related receptor kinases.</a> Development. 142 (6), 1043 (2015).</li><li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LEAFY+Controls+Auxin+Response+Pathways+in+Floral+Primordium+Formation.">LEAFY Controls Auxin Response Pathways in Floral Primordium Formation.</a> Science Signaling. 6 (270), ra23 (2013).</li><li>Truernit, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+whole-mount+imaging+of+three-dimensional+tissue+organization+and+gene+expression+enables+the+study+of+phloem+development+and+structure+in+Arabidopsis.">High-resolution whole-mount imaging of three-dimensional tissue organization and gene expression enables the study of phloem development and structure in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 20 (6), 1494-1503 (2008).</li></ol>

यहां, हम एक सरल इमेजिंग विधि है कि छोटे संशोधन के साथ विभिंन संयंत्रों से गोली मार के लिए, एक नया एवेंयू खोलने के लिए दोनों वनस्पति और मॉडल पौधों में प्रजनन चरणों में meristems विनियमन का उद्घाटन के अध्ययन के ल...

संयंत्र विभज्योतक अविभेदित स्टेम कोशिकाओं का एक पूल शामिल है और लगातार संयंत्र अंग विकास और विकास1। postembryonic विकास के दौरान, लगभग सभी एक संयंत्र के aboveground ऊतकों गोली मार के ऊपर विभज्योतक (सैम) से प्राप्त कर रहे हैं । फसलों में, गतिविधि और सैम और इसके व्युत्पंन पुष्प meristems के आकार के कसकर ऐसे शूट वास्तुकला, फल उत्पादन, और बीज उपज के रूप में कई कृषि लक्षण के साथ जुड़े रहे हैं । उदाहरण के लिए, टमाटर में, एक बढ़े हुए सैम गोली और पुष्पक्रम बंटी में वृद्धि का कारण बनता है, और इस प्रकार अतिरिक्त फूल और फल अंगों पैदा करने में परिणाम2। मक्का में, सैम के आकार में वृद्धि एक उच्च बीज संख्या और कुल उपज3,4की ओर जाता है । सोयाबीन में, विभज्योतक अनिर्धारता भी बारीकी से शूट वास्तुकला और उपज5के साथ जुड़ा हुआ है ।
आकृति विज्ञान और sams के एनाटॉमी कई विभिंन विधियों द्वारा विशेषता हो सकता है, ऊतकीय sectioning सहित/धुंधला और स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (SEM)6, दोनों जिनमें से बहुत विभज्योतक अनुसंधान के माध्यम से उंनत किया है प्रदान या तो सेक्शनल दृश्य या SAMs का त्रि-आयामी (3D) पृष्ठ दृश्य । हालांकि, दोनों तरीकों समय लगता है, डेटा अधिग्रहण करने के लिए नमूना तैयार करने से कई प्रयोगात्मक कदम शामिल है, और इन विधियों मुख्य रूप से तय नमूनों पर निर्भर करते हैं । लेजर स्कैनिंग संनाभि माइक्रोस्कोपी तकनीक में हाल के अग्रिमों इन सीमाओं को दूर किया है और हमें एक शक्तिशाली उपकरण के साथ सेलुलर संरचना और संयंत्र के ऊतकों और अंगों के विकास की प्रक्रिया की जांच करने के लिए प्रदान7,8. भौतिक ऊतक sectioning के बजाय ऑप्टिकल के माध्यम से, संनाभि माइक्रोस्कोपी जेड की एक श्रृंखला के संग्रह की अनुमति देता है ढेर छवियों और बाद में छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर के माध्यम से नमूना के 3 डी पुनर्निर्माण ।
यहां, हम दोनों के अंदर और विभिंन प्रजातियों के पौधों से रहने sams की सतह संरचनाओं की जांच के लिए एक कुशल प्रक्रिया का वर्णन लेजर स्कैनिंग संनाभि माइक्रोस्कोपी, जो संभवतः शोधकर्ताओं ने सभी प्रायोगिक पूरा करने के लिए अनुमति देता है 20 मिनट के रूप में कम के रूप में प्रक्रिया । अरेबिडाप्सिस फूलना sams9,10,11,12,13,14, की लाइव संनाभि इमेजिंग के लिए अन्य प्रकाशित विधियों से अलग 15 और arabidopsis फूल12,13, यहां हम दर्शाते है कि इस प्रोटोकॉल का अध्ययन करने के लिए अत्यधिक कुशल है न केवल पुष्पक्रम meristems मॉडल प्रजातियों पर भी वनस्पति शूट टमाटर और सोयाबीन के रूप में विभिन्न फसलों से, शीर्ष meristems. इस विधि ट्रांसजेनिक फ्लोरोसेंट मार्कर पर भरोसा नहीं है, और संभवतः कई विभिंन प्रजातियों और किस्मों से शूट meristems का अध्ययन करने के लिए लागू किया जा सकता है । इसके अलावा, हम भी देखने और एक 3 डी दृश्य में अलग SAMs का विश्लेषण करने के लिए सरल छवि प्रसंस्करण कदम परिचय । एक साथ लिया, इस सरल विधि शोधकर्ताओं बेहतर दोनों मॉडल जीवों और फसलों से meristems की संरचना और विकास की प्रक्रिया को समझने की सुविधा होगी ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:968px;" width="968">
	<tbody>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:283px;">Agar Phyto</td>
			<td style="width:176px;">Dot Scientific Inc.</td>
			<td style="width:119px;">DSA20300-1000</td>
			<td style="width:391px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:35px;width:283px;">Agarose</td>
			<td style="width:176px;">Dot Scientific Inc.</td>
			<td style="width:119px;">AGLE-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:283px;">Forceps&#160;</td>
			<td style="width:176px;">ROBOZ</td>
			<td style="width:119px;">RS-4955</td>
			<td>Dumont #5SF Super Fine Forceps Inox Tip Size .025 X .005mm, for dissecting shoot apices.</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:283px;">LSM 880 Upright Confocal Microscope&#160;</td>
			<td style="width:176px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Murashige &#38; Skoog MS medium</td>
			<td style="width:176px;">Dot Scientific Inc.</td>
			<td style="width:119px;">DSM10200-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Plan APO 20x/1.1 water dipping lens</td>
			<td style="width:176px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:283px;">Plastic petri dishes 100 mm X 15 mm</td>
			<td style="width:176px;">CELLTREAT Scientific Products</td>
			<td style="width:119px;">229694</td>
			<td style="width:391px;">Use as making MS plates</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Plastic petri dishes60 mm X 15</td>
			<td style="width:176px;">CELLTREAT Scientific Products</td>
			<td style="width:119px;">229665</td>
			<td>Use as imaging dishes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Propagation Mix</td>
			<td style="width:176px;">Sungro Horticulture</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Propidium iodide</td>
			<td style="width:176px;">Acros Organics</td>
			<td style="width:119px;">440300250</td>
			<td>1 mg/mL solution in water, to stain the cell walls</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Razor blade</td>
			<td style="width:176px;">PERSONNA&#160;</td>
			<td style="width:119px;">62-0179</td>
			<td style="width:391px;">For cutting shoot apex from plants</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:35px;width:283px;">Stereomicroscope</td>
			<td style="width:176px;">Nikon</td>
			<td style="width:119px;">SMZ1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Tissue</td>
			<td style="width:176px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">82003-820</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Zen black</td>
			<td style="width:176px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Image acquisition software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

confocal live imaging of shoot apical meristems from different plant species

गोली मार के रूप में एक संरक्षित स्टेम सेल जलाशय के रूप में कार्य करता है और यह लगभग सभी अबोवभूमि ऊतक postembryonic विकास के दौरान बनाता है । sams की गतिविधि और आकारिकी महत्वपूर्ण कृषि लक्षण, जैसे शूट वास्तुकला, आकार और प्रजनन अंगों की संख्या, और सबसे महत्वपूर्ण बात, अनाज उपज निर्धारित करते हैं । यहां, हम लेजर स्कैनिंग संनाभि माइक्रोस्कोप के माध्यम से विभिन्न प्रजातियों से रहने वाले sams की सतह आकारिकी और आंतरिक सेलुलर संरचना दोनों का विश्लेषण करने के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं । नमूना तैयार करने से उच्च संकल्प तीन आयामी (3 डी) छवियों के अधिग्रहण के लिए पूरी प्रक्रिया के भीतर 20 मिनट के रूप में कम के रूप में पूरा किया जा सकता है । हम दर्शाते है कि इस प्रोटोकॉल का अध्ययन करने के लिए अत्यधिक कुशल है न केवल पुष्पक्रम SAMs मॉडल प्रजातियों पर भी विभिंन फसलों से वनस्पति meristems, एक सरल लेकिन शक्तिशाली उपकरण प्रदान करने के लिए अध्ययन के संगठन और विकास के विभिंन प्रजातियों के पौधों में meristems ।

हमारे प्रोटोकॉल की दक्षता का मूल्यांकन करने के लिए और विभिन्न प्रजातियों से meristems के आकारिकी का पता लगाने के लिए, हम arabidopsis से पुष्पक्रम meristems पर संनाभि लाइव इमेजिंग प्रयोगों और वनस्पति meristems स...

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Confocal Live Imaging of Shoot Apical Meristems from Different Plant Species

अलग पौधों की प्रजातियों से गोली मार के एक प्रकार का पौधा की Confocal लाइव इमेजिंग

इस प्रोटोकॉल कैसे छवि जीने के लिए प्रस्तुत करता है और अलग संयंत्र प्रजातियों में से गोली मार शीर्ष meristems लेजर स्कैनिंग संनाभि माइक्रोस्कोपी का उपयोग कर विश्लेषण ।

The shoot apical meristem (SAM) functions as a conserved stem cell reservoir and it generates almost all aboveground tissues during the postembryonic ...

शूट एपिकल मेरिस्टेम्स पौधे के विकास और प्रजनन को नियंत्रित करते हैं। यह विधि हमें न केवल मॉडल प्रजातियों में बल्कि विभिन्न फसलों में भी शूट एपिकल मेरिस्टेम्स की आकृति विज्ञान और आंतरिक संरचनाओं की जांच करने में मदद करती है। यह तकनीक एक बहुत ही कुशल प्रक्रिया है।शूट एपिकल मेरिस्टेम को सीधे किसी भी श्रम-गहन नमूना निर्धारण और ऊतक खंडित चरणों के बिना एक उच्च सेलुलर रिज़ॉल्यूशन में कल्पना की जा सकती है। शुरू करने के लिए, पाठ प्रोटोकॉल में विस्तृत के रूप में अरबीडोप्सिस, टमाटर और सोयाबीन पौधों को विकसित करें। बोल्ड अरबिडोप्सिस पौधों से पुष्पदर्शिता शूट शीर्ष काटें।मुख्य तने के बेसल भाग को पकड़ो, और मुख्य तने से जितना संभव हो उतने पुराने फूल अंगों को हटाने के लिए संदंश का उपयोग करें। स्टीरियो माइक्रोस्कोप के क्षेत्र में बाकी फूलों को हटाना जारी रखें जब तक कि शूट एपिकल मेरिस्टेम को आईपीस से नहीं देखा जा सकता। टमाटर या सोयाबीन से वनस्पति शूट एपिकल मेरिस्टेम्स को देखने के लिए, पौधे से कोटिलेडॉन, पत्तियों और जड़ों को काटना।स्टीरियो माइक्रोस्कोप के नीचे पौधे के हाइपोकॉटायल पकड़ो, और वनस्पति शूट एपिकल मेरिस्टेम्स को कवर करने वाली पत्तियों और पत्तियों प्राइमोर्डिया को और काटने के लिए संदंश का उपयोग करें। एक साफ और खाली पेट्री डिश में प्रोपिडियम आयोडाइड समाधान के पिपेट 50 माइक्रोलीटर। दो मिनट के लिए डाई में पूरे विच्छेदित गोली शीर्ष डुबकी।धुंधला प्रक्रिया के दौरान, एक समान धुंधला प्राप्त करने के लिए प्रोपिडियम आयोडाइड समाधान में पूरे फूलों की शूटिंग एपिकल मेरिस्टेम या वनस्पति शूट एपिकल मेरिस्टेम को विसर्जित करें। बाँझ, deionized पानी में दो बार दाग गोली शीर्ष कुल्ला । अब, संदंश का उपयोग कर एक तैयार इमेजिंग पकवान के केंद्र में एक छेद छेद, और दाग गोली मार मध्यम में सीधा सीधा छड़ी ।पूरी तरह से नमूना विसर्जित करने के लिए बाँझ, deionized पानी के साथ इमेजिंग पकवान भरें। स्टीरियो माइक्रोस्कोप के माध्यम से नमूना देखें। मेरिसेम के चारों ओर फंसे हवा के बुलबुले को हटाने के लिए ऊपर और नीचे पिपेट।फिर, आगर में तने के कोण को समायोजित करें ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि शूट एपिकल मेरिस्टेम सीधे ऊपर से पूरी तरह से दिखाई दे। अब इमेजिंग डिश को कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप के सैंपल स्टेज पर रखें। पानी की सूई लेंस कम है, और माइक्रोस्कोप नमूना चरण बढ़ाने के लिए लेंस की नोक पानी में डुबकी ।कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप सॉफ्टवेयर खोलें, और उज्ज्वल क्षेत्र में शूट एपिकल मेरिस्टेम का पता लगाने और ध्यान केंद्रित करने के लिए आईपीस का उपयोग करें। कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप सॉफ्टवेयर में अधिग्रहण कार्य संचालित करें। कंप्यूटर स्क्रीन से नमूना देखने के लिए लाइव मोड शुरू करें, और लेजर स्कैनिंग प्रयोग के लिए सभी मापदंडों को सेट करें।मापदंडों को समायोजित करते समय, यह परिभाषित करने के लिए रेंज इंडिकेटर फ़ंक्शन का उपयोग करें कि सिग्नल संतृप्त है या नहीं। इमेजिंग अधिग्रहण के लिए उपयोग किए जाने वाले एक ही सॉफ्टवेयर का उपयोग त्रि-आयामी पारदर्शी प्रक्षेपण की कल्पना के लिए किया जा सकता है। मूल कॉन्फोकल फ़ाइल खोलें, 3D मेनू पर क्लिक करें, और 3D प्रोजेक्शन व्यू जेनरेट करने के लिए पारदर्शी चुनें।वैकल्पिक रूप से, 3डी छवि की पारदर्शिता के लिए थ्रेसहोल्ड, रैंप और अधिकतम सहित प्रक्षेपण के तीन मापदंडों को समायोजित करने के लिए पारदर्शिता का चयन करें। अब, 3डी छवि की चमक को समायोजित करने के लिए लाइट का चयन करें। अनुमानित छवियों का निर्यात करें, और उन्हें झगड़ा फ़ाइलों के रूप में सहेजें।3D छवियों के गहराई कोडिंग दृश्य की कल्पना करने के लिए, एक ही सॉफ्टवेयर का उपयोग करें। फिर, 3D मेनू पर क्लिक करें, और उपस्थिति का चयन करें। विशेष चुनें, और गहराई कोडिंग का चयन करें।अनुमानित छवियों का निर्यात करें, और उन्हें झगड़ा फ़ाइलों के रूप में सहेजें। अरबीडोप्सिस शूट एपिकल मेरिस्टेम के मध्य से ऑर्थोगोनल सेक्शन से यह छवि दर्शाती है कि क्षैतिज दीवारें कई कोशिका परतों पर लगभग सभी कोशिकाओं में प्रोपिडियम आयोडाइड से सना हुआ है। इनफ्लोरेसेंस शूट एपिकल मेरिस्टेम के कॉर्पस के माध्यम से एक ट्रांसवर्स सेक्शन का एक दृश्य दिखाता है कि एक्सवाई प्लेन से कोशिकाओं को भी स्पष्ट रूप से चित्रित किया गया है।3 डी प्रक्षेपण दृश्य से पता चलता है कि इनफ्लोरेसेम मेरिस्टेम एक गुंबद जैसी संरचना बनाता है और विकासशील फूल प्राइमोर्डिया से घिरा हुआ है। टमाटर शूट एपिकल मेरिस्टेम के बीच के माध्यम से ऑर्थोगोनल सेक्शन से यह छवि यह भी दर्शाती है कि क्षैतिज दीवारें कई सेल परतों पर प्रोविडियम आयोडाइड से सना हुआ है, हालांकि गहरे आंतरिक क्षेत्र से प्रोपिडियम आयोडाइड सिग्नल थोड़ा कम है। वनस्पति शूट एपिकल मेरिस्टेम की गहरी परतों के माध्यम से एक ट्रांसवर्स सेक्शन से एक छवि XY विमानों और वनस्पति मेरिस्टेम और लीफ प्राइमोर्डिया के बीच गठित सीमा से कोशिकाओं को प्रकट करती है।3 डी प्रक्षेपण दृश्य आगे टमाटर से वनस्पति मेरिस्टेम के आकार और संगठन का एक व्यापक दृश्य प्रदान कर सकता है। यहां दिखाया गया है सोयाबीन शूट एपिकल मेरिस्टेम के बीच के माध्यम से एक ऑर्थोगोनल दृश्य और एक ही शूट एपिकल मेरिस्टेम का 3 डी प्रक्षेपण है। गुंबद की तरह वनस्पति मेरिस्टेम और इसके व्युत्पन्न नए पत्ते प्राइमोर्डिया भी नमूदार हैं।प्रोपिडियम आयोडाइड आसानी से क्षतिग्रस्त या मृत कोशिकाओं को दाग सकता है, जो छवियों की गुणवत्ता को बहुत प्रभावित करेगा, इसलिए शूट एपिकल मेरिस्टेम नमूनों को तैयार करते समय किसी भी शारीरिक क्षति से बचना महत्वपूर्ण है।

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

का लाइव-इमेजिंग<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; पोटा संबंधी नेत्र

Inherent processes of Drosophila pupal development can shift and distort the eye epithelium in ways that make individual cell behavior difficult to track ...

In Vitro Differentiation of Mature Myofibers for Live Imaging

In Vitro Differentiation of Mature Myofibers for Live Imaging

लाइव इमेजिंग के लिए परिपक्व Myofibers की इन विट्रो भेदभाव में

Skeletal muscles are composed of myofibers, the biggest cells in the mammalian body and one of the few syncytia. How the complex and evolutionarily ...

Live Confocal Imaging of Developing Arabidopsis Flowers

लाइव Arabidopsis फूल विकास की confocal इमेजिंग

The study of plant growth and development has long relied on experimental techniques using dead, fixed tissues and lacking proper cellular resolution. ...

A Simple Chamber for Long-term Confocal Imaging of Root and Hypocotyl Development

रूट और हाइपोकॉटल विकास के दीर्घकालिक कन्फोकल इमेजिंग के लिए एक सरल चैंबर

Several aspects of plant development, such as lateral root morphogenesis, occur on time spans of several days. To study underlying cellular and ...

Long-term Live Imaging of Drosophila Eye Disc

Long-term Live Imaging of Drosophila Eye Disc

लंबे समय तक की लाइव इमेजिंग<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; नेत्र डिस्क

Live imaging provides the ability to continuously track dynamic cellular and developmental processes in real time. Drosophila larval imaginal discs have ...

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

इन विट्रो Arabidopsis थालियाना में युग्मनज ध्रुवीकरण और भ्रूण के नमूनों की लाइव-सेल इमेजिंग के लिए बीजांड खेती

In most flowering plants, the zygote and embryo are hidden deep in the mother tissue, and thus it has long been a mystery of how they develop dynamically; ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

माउस द्वितीयक ताललेट फ्यूजन की लाइव इमेजिंग

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Live Cell Imaging of Chromosome Segregation During Mitosis

बँटवारा के दौरान गुणसूत्र अलगाव की लाइव सेल इमेजिंग

Chromosomes must be reliably and uniformly segregated into daughter cells during mitotic cell division. Fidelity of chromosomal segregation is controlled ...

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

लाइव इमेजिंग और Drosophila भ्रूण में मांसपेशी संकुचन का विश्लेषण

Coordinated muscle contractions are a form of rhythmic behavior seen early during development in Drosophila embryos. Neuronal sensory feedback circuits ...

Live Cell Imaging of Microtubule Cytoskeleton and Micromechanical Manipulation of the Arabidopsis Shoot Apical Meristem

Live Cell Imaging of Microtubule Cytoskeleton and Micromechanical Manipulation of the Arabidopsis Shoot Apical Meristem

माइक्रोटुबुल साइटोस्केलेटन की लाइव सेल इमेजिंग और अरबीडोप्सिस शूट एपिकल मेरिस्टेम के माइक्रोमैकेनिकल हेरफेर

Understanding cell and tissue level regulation of growth and morphogenesis has been at the forefront of biological research for many decades. Advances in ...