Name: novel protocol for generating physiologic immunogenic dendritic cells
Uploaded: 2019-05-17T14:00:00
Duration: 12 min 8 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Novel Protocol for Generating Physiologic Immunogenic Dendritic Cells at JoVE.com

Эта работа была оказана при поддержке низ-НИР спор Грант 1 P50 CA121974 (р. Эдельсон, м. Жирарди); НИЗ онкологический центр поддержки гранта 3 P30 CA16359-28S1 (р. Эдельсон, м. Жирарди); Учебный Грант института Говарда Хьюза (а. Вассо); и кардиологический фонд Нью-Йорка (р. Эдельсон, а. Вентура, а. Васдалин, х. Эсаолин). Частичную поддержку предоставила м. Босенберг R01 CA196660-01.
Авторы благодарят доктора Роберта Тигелаара за его наставничество, руководство и экспериментальное озарение. Мы благодарим наших коллег в Фраунгофер IBMT, особенно д-р Торстен Кнолл, для разработки и предоставления эквивалентные ИКК палаты TI. Николай Феодосакис любезно помог с начальной стадией экспериментов ЮММ. Мы благодарим наших добровольных доноров крови, Ингер Кристенсен и ее профессиональные сотрудники Йельского Центра лечения ИКК за помощь в добровольческой крови закупок. Д-р Уэнделл Ярбро и д-р Наталья Иссаева любезно поделились с нами сотовыми линиями SCC61 и SCC61-6/7. Для оказания технической помощи в рамках проекта мы благодарим д-ра Джулию Льюис за рекомендации по протоколу FACS и э. Менет, г. Токмулина, к. Коте в Йельском FACS Core. Фильм изображения клеток в пределах пластины TI были приобретены при содействии Феликс Ривера-Молина, PhD, Кафедра клеточной биологии и Йельского КИНЕМАТОГРАФИЧЕСКИЕ центр визуализации, Йельской школы медицины. Кинопроизводство руководил Эндрю Осборн, старший видео продюсер, Управление связи, Йельской школы медицины.

<ol>
	<li>Edelson, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+cutaneous+T-cell+lymphoma+by+extracorporeal+photochemotherapy.+Preliminary+results.">Treatment of cutaneous T-cell lymphoma by extracorporeal photochemotherapy. Preliminary results.</a> The New England Journal of Medicine. 316 (6), 297-303 (1987).</li><li>Berger, C. L., Wang, N., Christensen, I., Longley, J., Heald, P., Edelson, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immune+response+to+class+I-associated+tumor-specific+cutaneous+T-cell+lymphoma+antigens.">The immune response to class I-associated tumor-specific cutaneous T-cell lymphoma antigens.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 107 (3), 392-397 (1996).</li><li>Scarisbrick, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multicentre+UK+study+of+GVHD+following+DLI:+rates+of+GVHD+are+high+but+mortality+from+GVHD+is+infrequent.">A multicentre UK study of GVHD following DLI: rates of GVHD are high but mortality from GVHD is infrequent.</a> Bone Marrow Transplantation. 50 (1), 62-67 (2015).</li><li>Barten, M. J., Dieterlen, M. -. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracorporeal+photopheresis+after+heart+transplantation.">Extracorporeal photopheresis after heart transplantation.</a> Immunotherapy. 6 (8), 927-944 (2014).</li><li>Heald, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+erythrodermic+cutaneous+T-cell+lymphoma+with+extracorporeal+photochemotherapy.">Treatment of erythrodermic cutaneous T-cell lymphoma with extracorporeal photochemotherapy.</a> Journal of the American Academy of Dermatology. 27 (3), 427-433 (1992).</li><li>Ratcliffe, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=National+Institutes+of+Health+State+of+the+Science+Symposium+in+Therapeutic+Apheresis:+Scientific+Opportunities+in+Extracorporeal+Photopheresis.">National Institutes of Health State of the Science Symposium in Therapeutic Apheresis: Scientific Opportunities in Extracorporeal Photopheresis.</a> Transfusion Medicine Reviews. 29 (1), 62-70 (2015).</li><li>Edelson, R., Wu, Y., Schneiderman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=American+council+on+ECP+(ACE):+Why+now?.">American council on ECP (ACE): Why now?.</a> Journal of Clinical Apheresis. , (2018).</li><li>Edelson, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanistic+insights+into+extracorporeal+photochemotherapy:+Efficient+induction+of+monocyte-to-dendritic+cell+maturation.">Mechanistic insights into extracorporeal photochemotherapy: Efficient induction of monocyte-to-dendritic cell maturation.</a> Transfusion and Apheresis Science. 50 (3), 322-329 (2014).</li><li>Gasparro, F. P., Dall&#8217;Amico, R., Goldminz, D., Simmons, E., Weingold, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+aspects+of+extracorporeal+photochemotherapy.">Molecular aspects of extracorporeal photochemotherapy.</a> The Yale journal of biology and medicine. 62 (6), 579 (1989).</li><li>Bevilacqua, P. M., Edelson, R. L., Gasparro, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-performance+liquid+chromotography+analysis+of+8-methoxypsoralen+monoadducts+and+crosslinks+in+lymphocytes+and+keratinocytes.">High-performance liquid chromotography analysis of 8-methoxypsoralen monoadducts and crosslinks in lymphocytes and keratinocytes.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 97 (1), 151-155 (1991).</li><li>Ventura, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracorporeal+Photochemotherapy+Drives+Monocyte-to-Dendritic+Cell+Maturation+to+Induce+Anticancer+Immunity.">Extracorporeal Photochemotherapy Drives Monocyte-to-Dendritic Cell Maturation to Induce Anticancer Immunity.</a> Cancer Research. 78 (14), 4045-4058 (2018).</li><li>Perez, M., Lobo, F. M., Yamane, Y., John, L., Berger, C. L., Edelson, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+antiskin+allograft+immunity+induced+by+infusions+with+photoinactivated+effector+T+lymphocytes+(PET+cells).+Is+in+vivo+cell+transferrable?.">Inhibition of antiskin allograft immunity induced by infusions with photoinactivated effector T lymphocytes (PET cells). Is in vivo cell transferrable?.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 636 (1), 95-112 (1991).</li><li>Girardi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transimmunization+for+cutaneous+T+cell+lymphoma:+A+phase+I+study.">Transimmunization for cutaneous T cell lymphoma: A phase I study.</a> Leukemia &amp; Lymphoma. 47 (8), 1495-1503 (2006).</li><li>Durazzo, T. S., Tigelaar, R. E., Filler, R., Hayday, A., Girardi, M., Edelson, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+monocyte-to-dendritic+cell+maturation+by+extracorporeal+photochemotherapy:+Initiation+via+direct+platelet+signaling.">Induction of monocyte-to-dendritic cell maturation by extracorporeal photochemotherapy: Initiation via direct platelet signaling.</a> Transfusion and Apheresis Science. 50 (3), 370-378 (2014).</li><li>Gonzalez, A. L., Berger, C. L., Remington, J., Girardi, M., Tigelaar, R. E., Edelson, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrin-driven+monocyte+to+dendritic+cell+conversion+in+modified+extracorporeal+photochemotherapy:+ECP+activation+of+monocytes+by+fibronectin.">Integrin-driven monocyte to dendritic cell conversion in modified extracorporeal photochemotherapy: ECP activation of monocytes by fibronectin.</a> Clinical &amp; Experimental Immunology. 175 (3), 449-457 (2014).</li><li>Kibbi, N., Sobolev, O., Girardi, M., Edelson, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+anti-tumor+CD8+T+cell+responses+by+experimental+ECP-induced+human+dendritic+antigen+presenting+cells.">Induction of anti-tumor CD8 T cell responses by experimental ECP-induced human dendritic antigen presenting cells.</a> Transfusion and Apheresis Science. 55 (1), 146-152 (2016).</li><li>Maeda, A., Schwarz, A., Bullinger, A., Morita, A., Peritt, D., Schwarz, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+Extracorporeal+Photopheresis+Inhibits+the+Sensitization+and+Effector+Phases+of+Contact+Hypersensitivity+via+Two+Mechanisms.">Experimental Extracorporeal Photopheresis Inhibits the Sensitization and Effector Phases of Contact Hypersensitivity via Two Mechanisms.</a> Generation of IL-10 and Induction of Regulatory T Cells. The Journal of Immunology. 181 (9), 5956-5962 (2008).</li><li>Meeth, K., Wang, J., Micevic, G., Damsky, W., Bosenberg, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+YUMM+lines:+a+series+of+congenic+mouse+melanoma+cell+lines+with+defined+genetic+alterations.">The YUMM lines: a series of congenic mouse melanoma cell lines with defined genetic alterations.</a> Pigment Cell &amp; Melanoma Research. , (2016).</li><li>Gubanova, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Downregulation+of+SMG-1+in+HPV-Positive+Head+and+Neck+Squamous+Cell+Carcinoma+Due+to+Promoter+Hypermethylation+Correlates+with+Improved+Survival.">Downregulation of SMG-1 in HPV-Positive Head and Neck Squamous Cell Carcinoma Due to Promoter Hypermethylation Correlates with Improved Survival.</a> Clinical Cancer Research. 18 (5), 1257-1267 (2012).</li><li>Berger, C. L., Perez, M., Laroche, L., Edelson, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+Autoimmune+Disease+in+a+Murine+Model+of+Systemic+Lupus+Erythematosus+Induced+by+Exposure+to+Syngeneic+Photoinactivated+Lymphocytes.">Inhibition of Autoimmune Disease in a Murine Model of Systemic Lupus Erythematosus Induced by Exposure to Syngeneic Photoinactivated Lymphocytes.</a> Journal of Investigative Dermatology. 94 (1), 52-57 (1990).</li><li>Spisek, R., Gasova, Z., Bartunkova, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maturation+state+of+dendritic+cells+during+the+extracorporeal+photopheresis+and+its+relevance+for+the+treatment+of+chronic+graft-versus-host+disease.">Maturation state of dendritic cells during the extracorporeal photopheresis and its relevance for the treatment of chronic graft-versus-host disease.</a> Transfusion. 46 (1), 55-65 (2006).</li><li>Berger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+generation+of+maturationally+synchronized+human+dendritic+cells:+contribution+to+the+clinical+efficacy+of+extracorporeal+photochemotherapy.">Rapid generation of maturationally synchronized human dendritic cells: contribution to the clinical efficacy of extracorporeal photochemotherapy.</a> Blood. 116 (23), 4838-4847 (2010).</li></ol>

Йельский университет владеет патентами, вытекающими из исследования дендритных клеток профессора Ричарда Эдельсона, которые получили лицензию на запуск компании в Йельском университете, Transimmune AG. Ричард Эдельсон и Михаэль Жирарди являются научными консультантами в Transimmune AG, а Ольга Соболев является сотрудником компании Transimmune AG. Transimmune AG не имеет каких-либо текущих коммерческих продуктов, однако на основе сотрудничества она производит Transimmune пластин, используемых в этой статье. Вполне возможно, что эти три автора могли бы потенциально извлечь выгоду из коммерциализации этих открытий в будущем.

Миниатюрное устройство и протокол, описанные выше впервые, позволяют эффективно провести лабораторное исследование механизмов ИКЧП в экспериментальных системах мыши и в небольших образцах крови человека. Это большой аванс; Например, это позволило нам впервые продемонстрировать эффективность трансиммунизации против твердых опухолей в модели мыши 11, открывая будущую возможность аналогичного применения в онкологии человека.
До разработки устройства и метода трансиммунизации, описанного здесь, невозможно было в полной мере изучить все аспекты ИКК. В моделях мыши, хотя 8-швабра аспект терапии смог быть реплицирован несколько путем обрабатывать клетки в чашке Петри12,20, не было возможности интегрировать в метод проход плиты, который был показан к обеспечивают динамическое взаимодействие тромбоцитов, которые являются критически важными для физиологической активации ИКК, DC14. В человеческих исследованиях, альтернативно, компонент потока был полностью присутствует, но способность выборочно подвергать определенные клеточные компоненты 8-ШВАБРУA, или защитить их от него, была пропущна21,22. Это помешало полному пониманию механизма ИКК и его оптимизации иммунитета или терпимости. Кроме того, объем крови, необходимый для работы с клиническим аппаратом ИКК, является большим и препятствует научному расследованию. Миниатюрное устройство и протокол ИКК, описанные здесь впервые, позволяют эффективно, полностью гибко и с полной гибкостью моделировать моделирование ИКК. Кроме того, пластины TI позволяет в режиме реального времени визуализации и мониторинга клеточных взаимодействий в пластине с помощью микроскопии.
Для успеха протокола, используя как в естественных условиях, так и в системах ex естественных условиях, очень важно, чтобы обработаткмс содержал моноциты, которые могут быть активированы в функциональных РС. Для продолжения этой активации необходимо также обеспечить, чтобы фракция УАТС содержала физиологическое число здоровых, активационного тромбоцитов и чтобы протокол прохождения плит TI был тщательно проследил. Для того, чтобы направить вновь активированный РС в направлении конкретной реактивности, они должны быть обеспечены антигеном. Мы обнаружили, что наиболее эффективным методом антигена доставки для борьбы с раком иммунитет ночь совместного инкубации вновь активированных РС с антиген-содержащих 8-СС-подвергаетсяопухолевые клетки. Это имеет дополнительное преимущество в том, что в состоянии создать иммуногенный анти-онкологический ответ без необходимость предварительного знания опухолевых антигенов, позволяя DC, чтобы выбрать их. Однако, в тех случаях, когда антиген известен, мы имели некоторый успех в бывших системах естественных условиях при использовании свободных пептидов как антигены в совместном инкубации. Для иммуногенных приложений, сами контроллеры должны быть защищены от 8-СС воздействия . Наконец, в в естественных условиях экспериментов, важно, чтобы работать с животным модель, которая способна анти-опухолевого иммунитета. Трансиммунизация работает, создавая активированный, антиген-специфические Вмрс, которые работают в организме, чтобы инициировать врожденные и адаптивные иммунные реакции. Нарушение активности или отсутствие НК, CD4, или CD8 T клеток в обработке мышь повлияет на эффективность протокола5,11.
Хотя описанный здесь протокол является доказательством принципиального, который был оптимизирован для генетической модели опухоли для мыши, тем не менее, он раскрывает множество возможностей. Механизмы ИКК в онкологии только выяснены, и есть еще много возможностей для более глубокого понимания. В более широком смысле, способность генерировать физиологически активированной мыши и человека DC, и выборочно направлять их к антиген-специфический иммунитет имеет много потенциальных приложений, помимо рака. Способность делать то же самое, но вместо этого направлять Вмрс на толерантность к антигену, как это предлагается в том, что касается действенности самой ИКК, также имеет широкомасштабные медицинские последствия. С помощью этого метода, мы надеемся предоставить инструменты и открыть продуктивный проспект исследований для тех, кто с интересом в физиологической терапии DC.

Экстракорпоральная фотохимиотерапия (ИКК) является установленной иммунотерапией, которая широко распространена в университетских центрах по всему миру. Его использование было обусловлено уникальной селективностью, безопасностью и двунаправленной эффективностью терапии ИКБ, черт, которые разделяет ИКБ с самой физиологической иммунной системой, с которой она, как представляется, партнера. ИКК избирательно Иммунизирующая против злокачественных клеток в кожной лимфоме т-клеток (кткл)1,2и селективно толеризации для целевых антигенов в трансплантации, аутоиммунитет, и трансплантата против хозяина болезни (РТГ) настройки 3-х , 4. иммуногенность икр подсвечиваются ее зависимостью от НЕПОВРЕЖДЕННЫМ CD8 т-клеточного отсека в КЦКТ5, в то время как специфичность отражается в очень благоприятной неблагоприятной реакции профиля ИКК, без целевого подавления иммунитета при пересадке или Настройки Ртбг, а также отсутствие повышенной оппортунистической инфекции восприимчивость в кткл, где непатогенные т-клеточные клоны потенциально могут быть потеряны вместе с злокачественными т-клетками.
Учитывая клиническую значимость ИКК, надежда на то, что лучшее понимание ее механизмов может расширить терапевтическое воздействие ИКК на более широкий спектр раковых заболеваний и иммунологических расстройств, стимулировала международный интерес. Два практикума национально санкционированных, Национальный институт здоровья (НИЗ) государство-оф-науки симпозиум6 и Американское общество для апгереза консенсусной конференции7, были проведены и сообщил, с целью ускорения идентификации основных клеточных вкладчиков в борьбе с раком и толероженик последствиям ИКК.
На сегодняшний день, несмотря на многочисленные опубликованные доклады, в которых предпринимается попытка рассмотреть механизм ИКК, два основных препятствия препятствуют научным достижениям. Во-первых, исследование механизмов ИКК в экспериментальной лаборатории ограничено отсутствием миниатюрного устройства ИКК, которое в полной мере отражает клеточные и в естественных условиях последствия ИКК и применимо к моделям животных. Во-вторых, глубокий лабораторный анализ образцов ИКК в клинических условиях был ограничен ограниченным наличием иммунных клеток, обработанных ИКК, которые требуют доступа к лечебным центрам, и дополнительно подвержены срокам инфузии пациента, а этическая потребность в бескомпромиссных комплектах лейкоцитов, Перезаряженные пациентами.
Для устранения препятствий, мешающих прогрессу исследований ИКК, мы поставили перед собой вопрос о разработке миниатюрного аппарата ИКК, который бы наиболее тесно имитирующий ключевые элементы терапии. Стандартное лечение ИКК включает в себя прохождение лейкоцитов-обогащенных лейкоцитами пациента через 1 мм толщиной, ультрафиолетовое излучение (Уфа)-прозрачная, пластиковая пластина6,8. В пластине, лейкоциты подвергаются 8-метоксисорален (8-ШВАБРА), Фото-актинационной агента, который после Уфа экспозиции переходно преобразуется в реактивную форму (8-ШВАБРА), способный ДНК кросс-ссылок через его двувалентные привязки к пирмидина баз на нити ДНК сестры9,10. Обработано, 8-ССобработанных лейкоцитов собираются и возвращаются внутривенно пациенту.
Поскольку ИКБ сама по себе является двунаправленной терапией, иммунизированием при раке и толеризации в трансплантации, аутоиммунных и Ртбг, для уточнения мы назвали режим иммунизации модели ИКЧП "трансиммунизации" и режим толероженик "транстоляризация". В первую очередь мы сосредоточились на трансимунизации модальности. Наш недавно сообщили миниатюрных масштабируемых мышь к человеку устройство ИКК, трансиммунизации (TI) камеры или пластины, и соответствующий протокол, воспроизводить как сотовые и в естественных условиях эффекты человеческого устройства ИКК в рак установление11.
Для того, чтобы трансиммунизации в естественных условиях модели, как клинически актуальным, как это возможно, мы приступили к иммунотерапии после подкожно вводили сингенетических опухолей мыши стал ощутимым, тем самым проверяя эффективность протокола в установленных рака. Как и в ИКК в КТКЛ, в доказательстве принципа трансиммунизации в модели ЮММ 1.7 меланомы используются мононуклеарные клетки периферической крови (УАТС) из опухолевых животных. Клетки передаются через пластину TI в потоке. Пока 8-ШВАБРА обработка клеток в миниатюрной камере по возможности, предпочтительно дирижировать ее отдельно, для того чтобы обеспечить что только пожеланного типа клетки подвергается действию до 8-ШВАБРАA. Более ранние исследования показывают, что толероженик влияние ИКК опосредовано 8-швабрыA-ранены антиген-представляя клетки12, в то время как иммуизирующий эффект требует 8-швабры травмы целевых опухолевых клеток11. В протоколе трансиммунизации либо опухолевые клетки, либо иммунные клетки, могут выборочно подвергаться воздействию 8-ССA по мере необходимости. В виду того что максимальное время контакта между 8-шваброй-поврежденных опухолевыми клетками и НАВЕДЕННЫЕ к ИКЭ-дендритные клетки (DC) было показано, что значительно увеличивает иммунотерапевтический потенциал клинической икр13, мы включили ночную шаг совместного инкубации в наш протокол. После ночной инкубации, обработанные клетки возвращаются к опухоли подшипника животного.
Эта система надежно сократила рост опухоли и инициировала специфическую противоопухолевую иммунную систему у мышей с установленными синогенным опухолями11, и позволила вскрыть механизм клинического противоопухолевого применения ИКК. В нескольких исследованиях мы показали, что ИКК иммунитет инициирован через ex естественных условиях активации тромбоцитов в Ti пластины14,15. Активированные тромбоциты впоследствии сигнализируют о созревании моноцитов-дендритных клеток14, что приводит к выработке физиологических вмрс. Новообразованные моноцитов, полученных РС способны кросс-настоящее интернализированных антигенов из 8-ССповрежденных опухолевых клеток для активации антиген-специфические т-клеток ответы16. Как было предложено ранее12,17, однако, 8-СС-индуцированной повреждение зарождающихся РС сами могут противодействовать или даже повернуть вспять антиопухолевого эффекта11, обеспечивая механистический связь с терпимостью к ИКК.
Пластина TI также использовалась для производства физиологически активированных РС от человека. Аналогично изучению мыши, человеческие TI-производные РС зависят от пластичного прохода в присутствии тромбоцитов для их поколения, как правило, идентичны этим производным в клинической пластине ИКК, и способны эффективно обрабатывать и перекрестные представления человеческих опухолевых антигенов для активации человеческих т-клеток11,16.
Раскрыв механизм иммунотерапии ИКК, мы раскрыли метод для быстрой генерации физиологической мыши и дендритных клеток, обладающих желаемой специфичностью антигена, которые могут быть функционально модулированы. Инновационное устройство и протокол TI имеют существенное потенциальное значение в области исследований и терапии ИКК и лечения рака в более широком смысле, и в любой другой области с интересом к физиологическим, функциональным дендритными ячейкам либо в иммунизации, либо толеризации модальности. Мы надеемся, что эта публикация предоставит необходимые инструменты для тех, кто заинтересован в таких областях исследований.

<table >
	<tbody>
		<tr >
			<td >8-MOP (UVADEX 20ug/mL, 10 mL)</td>
			<td >Therakos, Inc</td>
			<td >Rx only, NDC No. 64067-0216-01</td>
			<td >Protocol steps 3 and 8 - mouse and human 8-MOP/UVA treatment of cells</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >AB serum</td>
			<td >Lonza BioWhittaker</td>
			<td >14-498E</td>
			<td>Protocol step 8.5 - overnight culture of human PBMC</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >ACK red cell lysis buffer</td>
			<td >Lonza BioWhittaker</td>
			<td >10-548E</td>
			<td>Protocol step 2 - mouse PBMC preparation</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Anesthesia Tabletop V1 system with active scavenging</td>
			<td >VetEquip</td>
			<td >901820</td>
			<td>Protocol steps 1 and 7 - mouse sc tumor introduction and TI administration</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Autologous mouse plasma</td>
			<td >prepare in lab</td>
			<td >n/a</td>
			<td>Prepare per protocol step 2.4, use in&#160; 7.1 - mouse TI treatment administration</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Autologous mouse serum</td>
			<td >prepare in lab</td>
			<td >n/a</td>
			<td>Prepare per protocol step 5, use in step 6.1 - overnight culture of mouse PBMC</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >C57Bl/6J mice</td>
			<td >Jackson labs</td>
			<td >0000664</td>
			<td>Protocol steps 1, 2, 5 and 7 - mouse tumor injection, blood/serum collection, and therapy return</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Cheek bleed GoldenRod lancet, 5 um</td>
			<td >Medipoint</td>
			<td >9891620</td>
			<td>Protocol step 2 - mouse PBMC preparation</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Clear RPMI</td>
			<td >Gibco by LifeTech</td>
			<td >11835-030</td>
			<td>Protocol steps 6 and 8 - overnight culture of mouse/human PBMC</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DMEM/F12</td>
			<td >Gibco by LifeTech</td>
			<td >11330-032</td>
			<td>Protocol steps 1 and 2 - YUMM1.7 cell culture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >EasyGrip Petri Dishes, 35mm</td>
			<td >Falcon</td>
			<td >351008</td>
			<td>Protocol steps 5 and 8 - overnight culture of mouse/human PBMC</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Eppendorf 1.5mL conical tubes</td>
			<td >DOT scientific</td>
			<td >1700-GMT</td>
			<td>Protocol steps 1-8</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >FBS (fetal bovine serum, heat-inactivated)</td>
			<td >SAFC Biosciences</td>
			<td >12306C-500mL</td>
			<td>Protocol steps 1-4 - YUMM1.7 cell culture, 8-MOP/UVA treatment of cells, TI plate</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hemavet 950FS hematology counter</td>
			<td >Drew Scientific</td>
			<td >HV950FS</td>
			<td>Protocol step 8.2 - monitoring human platelet numbers</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Heparin 5,000U/mL</td>
			<td >McKesson Packaging services</td>
			<td>949512</td>
			<td>Protocol steps 2 and 8 - mouse and human PBMC preparation</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Isoflurane</td>
			<td >Abbott Laboratories</td>
			<td >5260-04-05</td>
			<td>Protocol steps 1 and 7 - mouse sc tumor introduction and TI administration</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Lympholyte M lymphocyte isolation medium</td>
			<td >Cedarlane Labs</td>
			<td >CL5035</td>
			<td>Protocol step 2 - mouse PBMC preparation</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Non-essential amino acids</td>
			<td >Gibco by LifeTech</td>
			<td >11140-050</td>
			<td>Protocol steps 1 and 2 - YUMM1.7 cell culture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >PBS (1x DPBS, (-) Ca+2, (-) Mg+2)</td>
			<td >Gibco by LifeTech</td>
			<td >14190-144</td>
			<td>Protocol steps 1-7</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Pen/strep</td>
			<td >Gibco by LifeTech</td>
			<td >15140-122</td>
			<td>Protocol steps 1 and 2 - YUMM1.7 cell culture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Polypropylene 15mL conical tubes</td>
			<td >Falcon</td>
			<td >352097</td>
			<td>Protocol steps 1-8</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Programmable 2-channel syringe pump</td>
			<td >New Era Pump Systems Inc</td>
			<td >model NE-4000</td>
			<td>Protocol steps 4 and 8 - running the TI plate</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Retro-orbital injection needles, 27G x 1/2</td>
			<td >BD Biosciences</td>
			<td >305109</td>
			<td>Protocol step 7 - mouse TI treatment administration</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Syringes, 10mL (LUER-LokTip)</td>
			<td >BD Biosciences</td>
			<td >309604</td>
			<td>Protocol steps 4, 8 - running the TI plate</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Syringes, 1mL (Slip tip)</td>
			<td >BD Biosciences</td>
			<td >309659</td>
			<td>Protocol steps 1, 4, 7, 8</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >TI plate and tubing set</td>
			<td >Transimmune AG</td>
			<td >not commercially available&#160;</td>
			<td >Please contact Prof. R. Edelson or Transimmune in order to obtain the device on a collaborative basis.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >TI plate running platform</td>
			<td >Transimmune AG</td>
			<td >not commercially available&#160;</td>
			<td >Please contact Prof. R. Edelson or Transimmune in order to obtain the device on a collaborative basis.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Tissue culture flasks, T75 (75 cm2)</td>
			<td >Falcon</td>
			<td >353136</td>
			<td>Protocol steps 1, 2, 6 and 8 - mouse and human cell culture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Tissue culture plates, 12-well</td>
			<td >Falcon</td>
			<td >353043</td>
			<td>Protocol steps 3 and 8 - mouse and human 8-MOP/UVA treatment of cells</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Tissue culture scrapers</td>
			<td >Falcon</td>
			<td >353085</td>
			<td>Protocol steps 6 and 8 - overnight culture of mouse/human PBMC</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Trypsin-EDTA 0.25% (1x)</td>
			<td >Gibco by LifeTech</td>
			<td >25200-056</td>
			<td>Protocol steps 1 and 2 - YUMM1.7 cell culture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Tumor injection needles, 25G x 5/8</td>
			<td >BD Biosciences</td>
			<td >305122</td>
			<td>Protocol step 1 - mouse subcutaneous tumor introduction</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >UVA irradiator</td>
			<td >Johnson and Johnson</td>
			<td >not commercially available&#160;</td>
			<td >The apparatus was specifically developed by J&#38;J for Prof. R. Edelson&#39;s laboratory. Several machines are available in the laboratory on a collaborative basis; please contact Prof. R. Edelson for use of one. Alternative UVA irradiators are commercially available but have not been tested by us.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Invitrogen EVOS FL Auto 2 Imaging System</td>
			<td >Invitrogen</td>
			<td ></td>
			<td>fluorescence imaging instrument</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

novel protocol for generating physiologic immunogenic dendritic cells

Экстракорпоральная фотохимиотерапия (ИКР) является широко используемой иммунотерапии рака для кожного т-клеточной лимфомы (цккт), оперативника в более чем 350 университетских центрах по всему миру. В то время как клиническая эффективность ИКК и образцовый профиль безопасности привели к ее широкому применению, разъяснения основных механизмов остаются проблемой, отчасти из-за отсутствия лабораторной модели ИКК. Чтобы преодолеть это препятствие и создать простую, дружественную пользователю платформу для исследования ИКК, мы разработали уменьшенную версию клинического устройства для обработки лейкоцитов, пригодного для работы как с моделями мышей, так и с небольшими образцами крови человека. Данное устройство называется Камера Трансиммунизации (TI) или пластина. В серии знаковых экспериментов, миниатюрное устройство было использовано для производства клеточной вакцины, которая регулярно инициировала терапевтическое противораковое иммунитет в нескольких сингенетических моделях опухоли мыши. Удалив индивидуальные факторы из экспериментальной системы и выяснив их вклад в антиопухолевую реакцию в естественных условиях, мы затем выясняли ключевые механистические факторы, направленные на ВАКЦИНАЦИЮ от ИКК. В совокупности наши результаты показали, что анти-опухолевые эффекты ИКЭ инициируются дендритными клетками (DC), физиологически генерируемые при взаимодействии крови моноцитов с тромбоцитами в пластине TI, и загружаются с антигенами из опухолевых клеток, Апоптотические клетки которых смерть тонко титруют воздействием фотоактизационная ДНК кросс-связывающий агент 8-метоксипарален и УФ-лучей (8-швабра). Когда вернулся в мышь, эта клеточная вакцина приводит к конкретным и передаче анти-опухоли т-клеточный иммунитет. Мы подтвердили, что камера TI также подходит для обработки крови человека, производя человека DC полностью сопоставимым в состоянии активации и профиле к тем, которые получены из клинической камеры ИКК. Представленные здесь протоколы предназначены для исследований ИКК в мышах и человеке, контролируемых генераций апоптотических опухолевых клеток с 8-ШВАБРОЙ, а быстрое производство физиологических человеческих и мышиных моноцитов-производных РС для различных применений.

Watch this Scientific Journal Video about Novel Protocol for Generating Physiologic Immunogenic Dendritic Cells at JoVE.com

Novel Protocol for Generating Physiologic Immunogenic Dendritic Cells

Было разработано устройство или плита трансиммунизации (TI) и соответствующие протоколы для воспроизведения ключевых особенностей экстракорпоральной фотохимиотерапии (ИКК) в экспериментальной обстановке, позволяющей производство физиологически активированных, настраиваемые дендритные клеток (Вмрс) для иммунотерапии рака.

Новый протокол для генерации физиологических иммуногенных дендритных клеток

Extracorporeal photochemotherapy (ECP) is a widely used cancer immunotherapy for cutaneous T cell lymphoma (CTCL), operative in over 350 university ...

Физиологические дендритные антиген-представляя клетки, называемые PhDC, являются иммунными мастер-переключатели, которые инициируют антиген-специфический иммунитет Т-клеток и толерантности. Эта статья разграничивает эффективный метод для производства PhDC. Клиническое использование дендритных клеток препятствует неиспихиатических методов цитокинов, используемых для их производства.Наш метод преодолевает эту проблему с помощью эффективной сигнализации тромбоцитов преобразования моноцитов в ДК у людей и мышей. Эти PhDC не зависят от условий цитокинов недоступны in vivo, поэтому они могут генерировать мощные клинические противоопухолевой Т-клеток ответы у людей и мышей с установленным раком. Вид-независимое начало тромбоцитов созревания моноцитов к PhDC имеет широкую экспериментальную применимость.PhDC позволяет рассечение дендритных клеток физиологии, облегчить индукцию терапевтического противоопухоливого иммунитета к иммуногенным ракам, и предлагают перспективы для персонализированной противомикробной вакцинации. Эта экспериментальная система является новой, и несколько аспектов, таких как покрытие пластиковой камеры, лечение опухолевых клеток с 8-MOP/UVA, условия потока, и высвобождение моноцитов лучше всего визуально представлены. Демонстрацией процедуры будет Ева Робинсон, техник из моей лаборатории.Для сбора периферических моноядерных клеток крови, сначала создали 15-миллилитровую трубку с четырьмя миллилитров лимфоцитов изоляции среды на пять до 10 мышей кровь. Затем медленно слой крови, собранной из опухолевых мышей на верхней части среды. Спин клеток на 1000-1, 500 раз-G в течение 20 минут, чтобы отделить ПКМК от красных кровяных телец.В конце центрифугации, собирать верхний слой плазмы, оставляя 0,5 миллилитров, оставшихся выше баффи пальто, и хранить при четырех градусах по Цельсию для более позднего использования. Далее, собирать баффи слой пальто в чистую 15-миллилитровую трубку заполнены PBS до 15 миллилитров, и спина в 250 раз G в стандартной центрифуге культуры ткани в течение 10 минут, чтобы собрать PBMC. В конце центрифугации, тщательно пипетки от супернатанта и Флик трубки повторно гранулы.Затем добавьте два миллилитров буфера лиза красных кровяных телец ACK в трубку, чтобы удалить оставшиеся эритроциты из PBMC. Инкубировать PBMC на льду в течение 10 минут. Заполните трубку с PBS до 15 миллилитров, и спина вниз на 250-раз-G в стандартной центрифуге культуры тканей в течение 10 минут, чтобы собрать PBMC.Тщательно пипетка от супернатанта и Флик трубки, чтобы ослабить гранулы. Повторное производство гранул в 300 микролитров FBS. Для подготовки YUMM1.7 опухолевых клеток в группе лечения, сначала повторно использовать гранулы опухолевых клеток в FBS на 2,5 миллиона клеток на 300 микролитров.С тканью культуры капот свет выключен, добавить 8-methoxypsoralen для окончательной концентрации 100 нанограмм на миллилитр в YUMM1.7 опухолевых клеток подвески. Затем смешайте клетки, оберните контейнер клетки в фольгу и инкубировать при 37 градусах по Цельсию в течение 20 минут. Чтобы предварительно покрыть пластину культуры тканей 12-хорошо, добавьте один миллилитр FBS к одному хорошо для каждой группы лечения из пяти мышей, и хранить в холодильнике пластины при четырех градусах по Цельсию в течение 20 минут.Через 20 минут, под капюшоном культуры тканей, удалить FBS из колодцев, и добавить 300 микролитров метамфетамина подвергаются опухолевые клетки на скважину. Затем подвергайте клеточно-содержащую пластину предварительно разогретому ультрафиолетовому источнику света для полного облучения четырех джоулей на квадратный сантиметр. Для сбора 8-methoxypsoralen / UVA-обработанных опухолевых клеток из каждой хорошо, вихрем пластины и пипетки тщательно, чтобы обеспечить полное восстановление клеток.Для выполнения трансиммунизации пластины проход для каждой группы лечения из пяти мышей, объединить 300 микролитров соответствующих PBMC и 300 микролитров 8-methoxypsoralen / UVA-обработанных опухолевых клеток в 1,5-миллилитровой конической трубки и смешать клетки. Далее откройте вход и выход трубки зажимы пластины TI. Используйте 10-миллилитровый шприц, чтобы заполнить трубку TI с FBS, закрывая зажимы, как трубка заполнена, чтобы сохранить FBS внутри трубки.Отключите шприц. Поместите наконечник пипетки P1000 надежно в вход пластины TI. Держите пластину под углом 45 градусов и медленно заполните пластину смесью PBMC и опухолевых клеток, избегая пузырьков.Удалите наконечник пипетки из потребления, прежде чем выпустить поршень пипетки. Верните оставшиеся клетки в коническую трубку с 1,5 миллилитров. Инкубировать заполненные FBS трубки, заполненные клетками ПЛАСТИНЫ TI, и 1,5-миллилитровая коническая трубка, содержащая оставшиеся клетки в инкубаторе культуры тканей при 37 градусах по Цельсию в течение одного часа.После инкубации отпустите зажимы и опорожните Тюбинг TI гравитацией. Затем вставьте наконечник P1000 пипетки с поршень депрессии в порт пластины, чтобы удалить клетки из пластины TI. Держите пластину под углом 45 градусов и заполните наконечник пипетки P1000.Поместите клетки обратно в их первоначальную 1,5-миллилитровую коническую трубку. Чтобы запустить пластину TI, подключите выходную трубку к пластине и закреполните пластину TI в систему, запускаемую пластинами. Затем, используя одноми миллилитровый шприц, составить эти 600 микролитров PBMC и смеси опухолевых клеток из 1,5-миллилитровой конической трубки.Прикрепите шприц к входной трубке с открытым зажимом и медленно заполните, пока жидкость не достигнет конца трубки. Прикрепите свободный конец входной трубки к пластине TI и продолжайте аккуратно загружать оставшийся объем. Закройте входной зажим, когда закончите.Отсоедините одноми миллилитровый шприц и соедините входную трубу со шприц-насосом. Закрепните выходную трубу до чистой 1,5-миллилитровой конической трубки для сбора клеток. Отрегулируйте скорость потока шприц-насоса до 0,09 миллилитров в минуту.Наклоните пластину TI примерно на 30 градусов к стороне насоса шприца с помощью платформы TI пластины. Аккуратно отпустите зажим на входной трубе. Запустите шприц насос, внимательно наблюдая, как пластина TI заполняет.После того, как пластина TI полностью заполнена, наклоните ее примерно на 30 градусов в противоположном направлении, как она опустеет. Когда все клетки в жидкости находятся в 1,5-миллилитровой конической трубки сбора, остановить насос. Чтобы вымыть пластину TI, отсоедините входную трубку от шприц-насоса и соедините ее с одноми миллилитровый шприц, наполненный 600 микролитров FBS.Заполните до тех пор, пока FBS полностью загружен. Затем отключите шприц и прикрепите трубку к шприц-насосу. Отрегулируйте скорость потока шприц-насоса до 0,49 миллилитров в минуту.Отпустите входной зажим, и запустить TI пластины, собирая мыть в той же 1,5-миллилитровой конической трубки. Флик или нажмите TI пластины мягко все время, чтобы помочь в отсоединения и eluting любой приверженец клеток, как пластина опорожняется. Отключите коллекцию 1,5-миллилитровую коническую трубку от установки пластины TI.Закрутьте трубку коллекции в микрофуге на скамейке в 250 раз-G в течение восьми минут и отбросьте супернатант. Для выполнения ночной совместной инкубации PBMC с антигеном, первый resuspend PBMC и гранулы опухолевых клеток в двух миллилитров ясно RPMI дополнены 15%аутологичной сыворотки мыши. Затем клетки пластины в 35-миллиметровой неткани культуры лечение стерильных блюдо, и инкубировать на ночь в стандартных условиях культуры тканей.На следующий день, тщательно отделить любые клетки адепта от нижней части блюда с тканью культуры скребок. Поверните блюдо во время соскабливания, чтобы обеспечить даже сбор клеток. Соберите клетки в 15-миллилитровую трубку.Добавьте в блюдо два миллилитров PBS и повторите шаг соскабливания, собирая клетки в ту же трубку. Промыть 35-миллиметровую тарелку одним миллилитром PBS и добавить полоскание в ту же трубку. Спин при 250-времени-G в стандартной центрифуге культуры ткани в течение 10 минут, чтобы собрать клетки.Тщательно пипетка от супернатанта, а затем Флик трубки повторно гранулы. Терапия показала снижение роста опухоли YUMM1.7 в более чем 100 обработанных против контрольных мышей, как это наблюдается в кумулятивных данных роста опухоли девяти независимых экспериментов, проведенных в течение двух лет. Репрезентативные кривые роста опухоли для отдельных животных в рамках одного эксперимента обеспечивают ощущение изменчивости в системе.Когда моноциты или тромбоциты истощаются из фракции PBMC, или когда прохождение пластины опущено, терапевтический эффект больше не наблюдается. Лечение является неэффективным в отсутствие либо иммунных клеток или источника антигена, или в присутствии несовпадаемого антигена, таких как опухоли YUMM1.7, обработанные с помощью клеток карциномы толстой кишки MC38. Для иммунизации результат, это также важно, чтобы избежать воздействия PBMC на 8-methoxypsoralen.Анализ FACS изменения указанных маркеров от соответствующих элементов управления IgG в человеческих CD11c-клеток среди либо недавно изолированных PBMC, TI-обработанных PBMC, TI-обработанных PBMC без прохождения пластины, обедненные тромбоциты до прохождения пластины, или оба вышеперечисленных, показали, что активация DC зависит от наличия тромбоцитов в PBMC, и на прохождение пластины TI. TI-активированных человеческих DCs может эффективно обрабатывать и кросс-настоящее либо пептидных антигенов, или антигены из целых 8-methoxypsoralen подвергаются человеческие опухолевые клетки, чтобы активировать человека антиген-специфических Т-клеток линий в пробирке анализы в TI-и тромбоцитов зависимой образом. Специфика реакций Т-клеток зависит от источника обработанных антигенов.При индуцировании противоопихолявого иммунитета, апоптоз каждой линии раковых клеток должен быть титрирован, чтобы максимизировать иммуногенность. Поскольку индуцированный иммунитет будет специфичен для иммунизации антигенов, будет возможно детальное вскрытие каждой системы. Каждый экспериментальный или клинический рак, и каждый антимикробный ответ, будет однозначно информативным.Каждый отдельный рак человека имеет свой собственный массив опухолевых антигенов. PhDC выполняет необходимую сортировку и представление опухолевых антигенов, не требуя их предварительной лабораторной идентификации. Пожалуйста, имейте в виду, что 8-MOP и UVA свет канцерогенов.Используйте соответствующее защитное оборудование и следуйте процедурам безопасности при обработке 8-MOP и при работе с источниками света UVA.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Optimized Protocol for Efficient Transfection of Dendritic Cells without Cell Maturation

Оптимизированный протокол для эффективной трансфекции дендритных клеток без сотового Созревание

Dendritic cells (DCs) can be considered sentinels of the immune system which play a critical role in its initiation and response to infection1. Detection ...

Generation and Labeling of Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells with Qdot Nanocrystals for Tracking Studies

Генерация и маркировки костного мозга мышей-дендритных клеток с Qdot нанокристаллов для отслеживания исследований

Dendritic cells (DCs) are professional antigen presenting cells (APCs) found in peripheral tissues and in immunological organs such as thymus, bone ...

Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

Выделение мышиные клетки легких Дендритные

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Preparation of Tumor Antigen-loaded Mature Dendritic Cells for Immunotherapy

Подготовка опухолевый антиген нагруженных Зрелые дендритные клетки иммунотерапии

While clinical studies have established that antigen-loaded DC vaccines are safe and promising therapy for tumors 1, their clinical efficacy remains to be ...

Isolating And Immunostaining Lymphocytes and Dendritic Cells from Murine Peyer's Patches

Изоляция и Иммуноокрашивание лимфоциты и дендритные клетки из мышиных Патчи Пейера

Peyer's  patches (PPs) are integral components of the gut-associated lymphoid tissues  (GALT) and play a central role in intestinal immunosurveillance and ...

Generation of a Novel Dendritic-cell Vaccine Using Melanoma and Squamous Cancer Stem Cells

Поколение новой дендритно-клеточной вакцины с использованием меланомы и плоскоклеточных раковых стволовых клеток

We identified cancer stem cell (CSC)-enriched populations from murine melanoma D5 syngeneic to C57BL/6 mice and the squamous cancer SCC7 syngeneic to C3H ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

Изоляция миелоидных дендритных клеток и эпителиальных клеток из человеческого тимуса

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

T Cells Capture Bacteria by Transinfection from Dendritic Cells

Т-клеток Захват бактерий Transinfection от дендритных клеток

Recently, we have shown, contrary to what is described, that CD4+ T cells, the paradigm of adaptive immune cells, capture bacteria from infected dendritic ...

Generation of Immature, Mature and Tolerogenic Dendritic Cells with Differing Metabolic Phenotypes

Поколение незрелые, зрелые и толерогенную дендритных клеток с отличающимися метаболический фенотипов

Immune response results from a complex interplay between the antigen non-specific innate immune system and the antigen specific adaptive immune system. ...

Generation of Human Monocyte-derived Dendritic Cells from Whole Blood

Поколение человеческих моноцитов дендритных клеток из цельной крови

Dendritic cells (DCs) recognize foreign structures of different pathogens, such as viruses, bacteria, and fungi, via a variety of pattern recognition ...