Name: analysis of iophenoxic acid analogues in small indian mongoose (herpestes auropunctatus) sera for use as an oral rabies vaccination biological marker
Uploaded: 2019-05-31T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose Herpestes Auropunctatus Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker at JoVE.co

وقد تم دعم هذا البحث جزئيا من قبل برنامج البحوث داخل الجدارية من وزارة الزراعة الأمريكية، ودائرة التفتيش على صحة الحيوان والنبات، وخدمات الحياة البرية، والبرنامج الوطني لإدارة داء الكلب وIDT Biologika (Dessau-Rosslau، ألمانيا).

تمت الموافقة على جميع الإجراءات من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها التابعة للمركز الوطني لبحوث الحياة البرية التابع لوزارة الزراعة الأميركية بموجب بروتوكول البحوث المعتمد QA-2597.
ملاحظة: يصف البروتوكول التالي إجراء التحليل للكشف عن حمض ميثيل ايوفينوكيوك ف?...

<ol>
	<li>Nel, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mongoose+rabies+in+southern+Africa:+a+re-evaluation+based+on+molecular+epidemiology.">Mongoose rabies in southern Africa: a re-evaluation based on molecular epidemiology.</a> Virus Research. 109 (2), 165-173 (2005).</li><li>Zieger, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+phylogeography+of+rabies+in+Grenada,+West+Indies,+and+implications+for+control.">The phylogeography of rabies in Grenada, West Indies, and implications for control.</a> PLOS Neglected Tropical Diseases. 8 (10), e3251 (2004).</li><li>Monroe, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+surveillance+in+the+United+States+during+2014.">Rabies surveillance in the United States during 2014.</a> Journal of the American Veterinary Medical Association. 248 (7), 777-788 (2015).</li><li>Slate, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Status+of+oral+rabies+vaccination+in+wild+carnivores+in+the+United+States.">Status of oral rabies vaccination in wild carnivores in the United States.</a> Virus Research. 111, 68-76 (2005).</li><li>Blanton, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccination+of+small+Asian+mongoose+(Herpestes+javanicus)+against+rabies.">Vaccination of small Asian mongoose (Herpestes javanicus) against rabies.</a> Journal of Wildlife Diseases. 42 (3), 663-666 (2006).</li><li>Vos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+vaccination+of+captive+small+Indian+mongoose+(Herpestes+auropunctatus)+against+rabies.">Oral vaccination of captive small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus) against rabies.</a> Journal of Wildlife Diseases. 49 (4), 1033-1036 (2013).</li><li>Berentsen, A. R., Johnson, S. R., VerCauteren, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+ONRAB&#174;+bait+matrix+flavor+preference+by+mongoose+(Herpestes+auropunctatus)+in+Puerto+Rico:+Implications+for+Oral+Rabies+Vaccination.">Evaluation of ONRAB&#174; bait matrix flavor preference by mongoose (Herpestes auropunctatus) in Puerto Rico: Implications for Oral Rabies Vaccination.</a> Caribbean Journal of Science. 48 (1), 52-58 (2014).</li><li>Ortmann, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+studies+with+the+oral+rabies+virus+vaccine+strain+SPBN+GASGAS+in+the+small+Indian+mongoose+(Herpestes+auropunctatus).">Safety studies with the oral rabies virus vaccine strain SPBN GASGAS in the small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus).</a> BMC Veterinary Research. 14 (1), 90 (2018).</li><li>Linhart, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+field+evaluation+of+baits+for+delivering+oral+rabies+vaccines+to+raccoons+(Procyon+lotor).">A field evaluation of baits for delivering oral rabies vaccines to raccoons (Procyon lotor).</a> Journal of Wildlife Diseases. 30 (2), 185-194 (1994).</li><li>Fry, T. L., Atwood, T., Dunbar, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+rhodamine+B+as+a+biomarker+for+raccoons.">Evaluation of rhodamine B as a biomarker for raccoons.</a> Human Wildlife Interactions. 4 (2), 275-280 (2010).</li><li>Jones, C., Moller, H., Hamilton, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+potential+techniques+for+identifying+individual+stoats+(Mustela+erminea)+visiting+control+or+monitoring+stations.">A review of potential techniques for identifying individual stoats (Mustela erminea) visiting control or monitoring stations.</a> New Zealand Journal of Zoology. 31 (3), 193-203 (2004).</li><li>de Leeuw, A. N. S., Smith, G. C., Woods, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+iophenoxic+acid+to+assess+bait+uptake+by+European+badgers.">Use of iophenoxic acid to assess bait uptake by European badgers.</a> Advances in Vertebrate Pest Management. 4, 243-254 (2006).</li><li>Southey, A. K., Sleeman, D. P., Gormley, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sulfadimethoxine+and+rhodamine+B+as+oral+biomarkers+for+European+badgers+(Meles+meles).">Sulfadimethoxine and rhodamine B as oral biomarkers for European badgers (Meles meles).</a> Journal of Wildlife Diseases. 38 (2), 378-384 (2002).</li><li>Massei, G., Jones, A., Platt, T., Cowan, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+Acid+as+a+Long-Term+Marker+for+Wild+Boar.">Iophenoxic Acid as a Long-Term Marker for Wild Boar.</a> Journal of Wildlife Management. 73 (3), 458-461 (2009).</li><li>Creekmore, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Field+evaluation+of+baits+and+baiting+strategies+for+delivering+oral+vaccine+to+mongooses+in+Antigua,+West+Indies.">Field evaluation of baits and baiting strategies for delivering oral vaccine to mongooses in Antigua, West Indies.</a> Journal of Wildlife Diseases. 30 (4), 497-505 (1994).</li><li>Creekmore, T. E., Rock, R. E., Hurley, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+baiting+system+for+delivery+of+an+oral+plague+vaccine+to+black-tailed+prairie+dogs.">A baiting system for delivery of an oral plague vaccine to black-tailed prairie dogs.</a> Journal of Wildlife Diseases. 38 (1), 32-39 (2002).</li><li>Fernandez, J. R. R., Rocke, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Rhodamine+B+as+a+biomarker+for+oral+plague+vaccination+of+prairie+dogs.">Use of Rhodamine B as a biomarker for oral plague vaccination of prairie dogs.</a> Journal of Wildlife Diseases. 47 (3), 765-768 (2011).</li><li>Johnston, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+and+significance+of+tetracycline+stability+in+rabies+vaccine+baits.">Evaluation and significance of tetracycline stability in rabies vaccine baits.</a> Journal of Wildlife Diseases. 41 (3), 549-558 (2005).</li><li>Algeo, T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+rabies+vaccination+variation+in+tetracycline+biomarking+among+Ohio+Raccoons.">Oral rabies vaccination variation in tetracycline biomarking among Ohio Raccoons.</a> Journal of Wildlife Diseases. 49 (2), 332-337 (2013).</li><li>Crier, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetracyclines+as+a+fluorescent+marker+in+bones+and+teeth+of+rodents.">Tetracyclines as a fluorescent marker in bones and teeth of rodents.</a> Journal of Wildlife Management. 34 (4), 829-834 (1970).</li><li>Fisher, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+using+Rhodamine+B+as+a+marker+for+wildlife+studies.">Review of using Rhodamine B as a marker for wildlife studies.</a> Wildlife Society Bulletin. 27 (2), 318-329 (1999).</li><li>Knowlton, F. K., Savarie, P. J., Wahlgren, C. E., Hayes, D. J., Shumake, S. A., Bullard, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+marks+by+coyotes+ingesting+baits+containing+iophenoxic+acid,+Mirex+and+Rhodamine+B.">Physiological marks by coyotes ingesting baits containing iophenoxic acid, Mirex and Rhodamine B.</a> Vertebrate Pest Control and Management Materials. , 141-147 (1987).</li><li>Follmann, E. H., Savarie, P. J., Ritter, D. G., Baer, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+marking+of+arctic+foxes+with+iophenoxic+acid.">Plasma marking of arctic foxes with iophenoxic acid.</a> Journal of Wildlife Diseases. 23 (4), 709-712 (1987).</li><li>Saunders, G., Harris, S., Eason, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+acid+as+a+quantitative+bait+marker+for+foxes.">Iophenoxic acid as a quantitative bait marker for foxes.</a> Wildlife Research. 20, 297-302 (1993).</li><li>Hadidian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acceptance+of+simulated+oral+rabies+vaccine+baits+by+urban+raccoons.">Acceptance of simulated oral rabies vaccine baits by urban raccoons.</a> Journal of Wildlife Diseases. 25 (1), 1-9 (1989).</li><li>Sweetapple, P. J., Nugent, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+acid+as+a+serum+marker+for+red+deer+(Cervus+elaphus+scoticus).">Iophenoxic acid as a serum marker for red deer (Cervus elaphus scoticus).</a> Wildlife Research. 25, 649-654 (1998).</li><li>Ogilvie, S. C., Eason, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+iophenoxic+acid+and+rhodamine+B+for+marking+feral+ferrets+(Mustela+furo).">Evaluation of iophenoxic acid and rhodamine B for marking feral ferrets (Mustela furo).</a> New Zealand Journal of Zoology. 25 (2), 105-108 (1998).</li><li>Eason, C. T., Batcheler, D., Frampton, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+pharmacokinetics+of+iophenoxic+acid+in+cats+and+brushtail+possums.">Comparative pharmacokinetics of iophenoxic acid in cats and brushtail possums.</a> Wildlife Research. 21, 377-380 (1994).</li><li>Fisher, P. M., Marks, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+iophenoxic+acid+as+a+biomarker+for+swamp+wallabies+(Wallabia+bicolor).">Evaluation of iophenoxic acid as a biomarker for swamp wallabies (Wallabia bicolor).</a> Wildlife Research. 24, 97-103 (1997).</li><li>Baer, G. M., Shaddock, J. H., Hayes, D. J., Savarie, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+acid+as+a+serum+marker+in+carnivores.">Iophenoxic acid as a serum marker in carnivores.</a> Journal of Wildlife Management. 49 (1), 49-51 (1985).</li><li>Spurr, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+acid+as+a+systemic+blood+marker+for+assessment+of+bait+acceptance+by+stoats+(Mustela+ermine)+and+weasels+(Mustela+nivalis).">Iophenoxic acid as a systemic blood marker for assessment of bait acceptance by stoats (Mustela ermine) and weasels (Mustela nivalis).</a> New Zealand Journal of Zoology. 29 (2), 135-142 (2002).</li><li>Mudge, G. H., Strewler, G. J., Desbiens, N., Berndt, W. O., Wade, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excretion+and+distribution+of+iophenoxic+acid.">Excretion and distribution of iophenoxic acid.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 178 (1), 159-172 (1971).</li><li>Jones, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-performance+liquid+chromatographic+determination+of+iophenoxic+acid+in+serum.">High-performance liquid chromatographic determination of iophenoxic acid in serum.</a> Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications. 654 (2), 293-296 (1994).</li><li>Wiles, M. C., Campbell, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liquid+chromatography-electrospray+ionization+mass+spectrometry+for+direct+identification+and+quantification+of+iophenoxic+acid+in+serum.">Liquid chromatography-electrospray ionization mass spectrometry for direct identification and quantification of iophenoxic acid in serum.</a> Journal of Chromatography B. 832 (1), 144-157 (2006).</li><li>Ballesteros, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+by+LC/ESI-MS+of+iophenoxic+acid+derivatives+and+evaluation+as+markers+of+oral+baits+to+deliver+pharmaceuticals+to+wildlife.">Analysis by LC/ESI-MS of iophenoxic acid derivatives and evaluation as markers of oral baits to deliver pharmaceuticals to wildlife.</a> Journal of Chromatography B. 878 (22), 1997-2002 (2010).</li><li>Purdey, D. C., Petcu, M., King, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+protocol+for+detecting+two+systemic+bait+markers+(Rhodamine+B+and+iophenoxic+acid)+in+small+mammals.">A simplified protocol for detecting two systemic bait markers (Rhodamine B and iophenoxic acid) in small mammals.</a> New Zealand Journal of Zoology. 30 (3), 175-184 (2003).</li><li>Tobin, M. E., Koehler, A. E., Sugihara, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetracyclines+as+a+fluorescent+marker+in+bones+and+teeth+of+rodents.">Tetracyclines as a fluorescent marker in bones and teeth of rodents.</a> Journal of Wildlife Management. 60 (1), 202-207 (1996).</li><li>Briscoe, J. A., Syring, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+for+emergency+airway+and+vascular+access+in+special+species.">Techniques for emergency airway and vascular access in special species.</a> Seminars in Avian and Exotic Pet Medicine. 13 (3), 118-131 (2004).</li><li>Eason, C. T., Frampton, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+plasma+pharmacokinetics+of+iophenoxic+and+iopanoic+acids+in+goat.">The plasma pharmacokinetics of iophenoxic and iopanoic acids in goat.</a> Xenobiotica. 2 (2), 185-189 (1992).</li><li>Hilton, H. E., Dunn, A. M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mongooses: their natural history. , (1967).</li><li>Stevens, C. E., Hume, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Comparative physiology of the vertebrate digestive system. Second edition. , (1995).</li><li>National Rabies Management Program (NRMP). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Oral rabies vaccination draft operations manual. , (2009).</li></ol>

وقد استخدمت طريقة LC-MS/MS التي تم تطويرها للدراسات انتقائية رصد ردود الفعل المتعددة لتحديد كمية البيانات والإبأعلى نحو دقيق في مصل النمس. كما سمحت الانتقائية للكشف عن مرض التصلب العصبي المتعدد/MS لبروتوكول تنظيف بسيط يعتمد فقط على الأسيتاتونيتريل لتعجيل البروتينات من المصل قبل التحليل.
<p ...

فيروس داء الكلب (RABV) هو شعور سلبي واحد الذين تقطعت بهم السبل ليسافيروس، ويدور بين الأنواع المتنوعة من خزانات الحياة البرية داخل أوامر Carnivora وChiroptera. أنواع متعددة من النمس هي خزانات RABV، والنمس الهندي الصغير (الهربسauropunctatus)هو الخزان الوحيدفي بورتوريكو والجزر الكاريبية الأخرى في نصف الكرة الغربي 1،2،3 . وعادة ما يتم التحكم في دوران رابف في خزانات الحياة البرية من خلال استراتيجية للتطعيم عن طريق الفم ضد داء الكلب (ORV). في الولايات المتحدة (الولايات المتحدة)، يتم تنسيق هذا النشاط الإداري من قبل وزارة الزراعة الأمريكية / APHIS / خدمات الحياة البرية الوطنية إدارة البرنامج (NRMP)4. ولا يوجد حاليا ً أي برنامج لـ ORV للحياة البرية في بورتوريكو. وقد أجريت البحوث في لقاحات داء الكلب وأنواع الطعم المختلفة للنمس مع نتائج واعدة تشير إلى برنامج ORV للنمس ممكن5،6،7،8.
يعتمد رصد تأثير ORV على تقدير تناول الطعم من قبل الأنواع المستهدفة، والذي ينطوي عادة على تقييم تغيير في الانتشار المصلي للجسم المضاد للفيروسات القهقرية. ومع ذلك، قد تكون هذه الاستراتيجية صعبة في المناطق التي توجد فيها برامج نشطة للفيروسات القهقرية أو في المناطق التي تكون فيها RV هي الإنزوتيك ومستويات خلفية من الأجسام المضادة لتحييد RABV (RVNA) موجودة في أنواع المكامن. وفي مثل هذه الحالات، قد يكون من المفيد وضع علامة بيولوجية مدرجة في الطعم أو مصفوفة الطعم الخارجي.
وقد استخدمت علامات بيولوجية مختلفة لرصد تناول الطعم في العديد من الأنواع، بما في ذلك الراكون(Procyon lotor)9،10، stoats (Mustelaermine)11،12، الشارات الأوروبية ( ميليس ميليس) 13، الخنازير البرية (سوس سكروفيه)14، النمس الهندي الصغير15 والكلاب البراري (Cynomysludovicianus)16،17، من بين أمور أخرى. في الولايات المتحدة، غالبا ما تشمل الطعوم ORV التشغيلية 1٪ التتراسيكلين biomarker في مصفوفة الطعم لرصد الطعم التناول18،19. ومع ذلك، فإن العيوب في استخدام التتراسيكلين تشمل القلق المتزايد بشأن توزيع المضادات الحيوية في البيئة، وأن الكشف عن التتراسيكلين هو عادة الغازية، مما يتطلب استخراج الأسنان أو تدمير الحيوان للحصول على العظام عينات20. وقد تم تقييم Rhodamine B كعلامة في مجموعة متنوعة من الأنسجة ويمكن الكشف عنها باستخدام الأشعة فوق البنفسجية (UV) الضوء والفلورة في الشعر وشعيرات10،21.
حمض الايوفينوكسيك (IPA) هو مسحوق أبيض بلوري تم استخدامه لتقييم استهلاك الطعم في القيوط(كانيس لاترانس)22، ثعلب القطب الشمالي (فولبيسلاغوبوس)23، الثعلب الأحمر (الفرج الفرج)24، الراكون 9 , 25، الخنزير البري14، الغزلان الحمراء(سيرفوس elaphus scoticus)26، الشارات الأوروبية12 وferrets (M.furo)27، من بين العديد من الأنواع الثدييات الأخرى. أوقات الاحتفاظ من IPA يختلف حسب الأنواع من أقل من أسبوعين في بعض marsupials28،29، إلى ما لا يقل عن 26 أسبوعا في ungulates26 وأكثر من 52 أسبوعا في الكلاب المنزلية (كانيس الذئبةfamiliaris)30. قد تكون أوقات الاحتفاظ أيضا تعتمد على الجرعة31. حمض Iophenoxic يربط بقوة إلى الزلال المصل واكتشفت تاريخيا عن طريق قياس مستويات اليود في الدم32. وحلت محل هذا النهج غير المباشر أساليب التصوير اللوني السائل عالية الأداء (HPLC) لقياس تركيزات حمض الفينوإكسيوك مباشرة مع الكشف عن الأشعة فوق البنفسجية33،وفي نهاية المطاف مع الكروماتوغرافيا السائلة وقياس الطيف الكتلي (LCMS) 34و35 . ولهذه الدراسة، تم تطوير التصوير اللوني السائل شديد الحساسية والانتقائية مع طريقة قياس الطيف الكتلي جنباً إلى جنب (LC-MS/MS) التي تستخدم رصد التفاعل المتعدد (MRM) لتحديد نظائرها من حمض الأيوفينوك. كان هدفنا هو استخدام طريقة LC-MS/MS هذه لتقييم قدرة وضع العلامات على حمض البربانويك 2-(3-هيدروكسي-2,4,6-triiodobenzyl) (ميثيل-IPA أو me-IPA) و2-(3-هيدروكسي-2,4,6-ترييودوبنزل) حمض البوتانويك (إيثيل-IPA أو et-IPA) وعند تسليمها في ORV الطعم إلى النمس الأسير.
تم القبض على النمس الحية في الفخاخ قفص الطعم مع النقانق المدخنة المتاحة تجاريا وزيت السمك. تم إيواء النمس في أقفاص فردية 60 سم × 60 سم × 40 سم من الفولاذ المقاوم للصدأ وتغذية حصة يومية من حوالي 50 غرام من أغذية القطط الجافة التجارية، تستكمل مرتين في الأسبوع مع فخذ الدجاج المتاحة تجاريا. المياه كانت متاحة ad libitum. سلمنا اثنين من مشتقات IPA، إيثيل-IPA وميثيل-IPA، إلى النمس الأسير في الطعوم ORV الغفل. وكانت جميع الطعوم تتكون من 28 مم × 20 مم × 9 مم احباط حزمة نفطة مع طلاءخارجي (فيما يلي "مصفوفة الطعم") التي تحتوي على مسحوق بيض الدجاج والجيلاتين (جدول المواد). تحتوي الطعوم على 0.7 مل من الماء أو مشتق IPA وتزن حوالي 3 غرام، منها حوالي 2 غرام كانت مصفوفة الطعم الخارجي.
عرضنا 16 النمس الأسير وIPA في ثلاثة تركيزات: 0.14٪ (2.8 ملغ وIPA في مصفوفة الطعم ~ 2 غرام؛ 3 الذكور [م] ، 3 الإناث [و])، 0.4٪ (2.8 ملغ ET IPA في 0.7 مل حجم حزمة نفطة؛ 3M، 3F)، و 1.0٪ (7.0 ملغ إيثيل IPA في 0.7 مل حجم حزمة نفطة؛ 2M ، 2و). الجرعة الإجمالية من 2.8 ملغ يتوافق مع معدل جرعة من 5 ملغ /كغ27,36 ويستند إلى متوسط وزن النمس من 560 غرام في بورتوريكو. اخترنا 1٪ كأعلى تركيز كما تشير البحوث النفور من الذوق لبعض المؤشرات الحيوية قد تحدث في تركيزات >1٪ في بعض الأنواع37. قدمنا فقط جرعة 1٪ في حزمة نفطة كما منع التفلطاب من ذوبان في المذيب بما فيه الكفاية ليتم دمجها بالتساوي في مصفوفة الطعم. تلقت مجموعة تحكم واحدة (2M، 1f) الطعوم مليئة بالماء المعقمة وليس IPA. عرضنا الطعوم على النمس في الصباح (حوالي 8 صباحا) أثناء أو قبل تغذية حصص الصيانة اليومية الخاصة بهم. وأُزيلت بقايا الطعم بعد حوالي 24 ساعة. جمعنا عينات الدم قبل العلاج، يوم واحد بعد العلاج ومن ثم أسبوعيا تصل إلى 8 أسابيع بعد العلاج. نحن النمس التخدير عن طريق استنشاق غاز isoflurane وجمعما ما يصل إلى 1.0 مل من الدم كله عن طريق الوريد من الوريد الجمجمة كافا كما هو موضح للنمس38. قمنا بالطرد المركزي لعينات الدم بأكملها، ونقلنا سيرا إلى الفيارير اتّساها في -80 درجة مئوية حتى التحليل. لم يتم أخذ عينات من جميع الحيوانات خلال جميع الفترات الزمنية لتقليل آثار الدم المتكرر على صحة الحيوانات. تم أخذ عينات من الحيوانات السيطرة في اليوم 0، ثم أسبوعيا لمدة تصل إلى 8 أسابيع بعد العلاج.
قدمنا لي-IPA في ثلاثة تركيزات: 0.035٪ (0.7 ملغ)، 0.07٪ (1.4 ملغ) و 0.14٪ (2.8 ملغ)، وكلها أدرجت في مصفوفة الطعم، مع 2 الذكور و 2 الإناث لكل مجموعة العلاج. تلقى ذكران وامرأتان طعوم مليئة بالماء المعقم وليس وكالة تشجيع الاستثمار. يتم وصف الطعم الذي يقدم الأوقات وتخدير النمس أعلاه. جمعنا عينات الدم قبل العلاج في اليوم الأول، ثم الأسبوعية لمدة تصل إلى 4 أسابيع بعد العلاج.
اختبرنا بيانات تركيز المصل للطبيعية والوسائل المقدرة لتركيزات IPA المصل من مجموعات العلاج المختلفة. استخدمنا نموذج ًا خطيًا مختلطًا لمقارنة تركيزات المصل وIPA المتوسطة المجمعة عبر الأفراد. نوع الطعم (مصفوفة / حزمة نفطة) كان تأثير ثابت بالإضافة إلى اليوم التجريبي، في حين أن هوية الحيوان كان تأثير عشوائي. تم تشغيل جميع الإجراءات باستخدامالبرمجيات الإحصائية المشتركة (جدول المواد) وتم تقييم الأهمية في α = 0.05.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1036px;" width="1036">
	<tbody>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">Acetonitrile, Optima grade</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">A996</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">Analytical balance</td>
			<td style="width:193px;">Mettler Toledo</td>
			<td style="width:304px;">XS204</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:380px;">C18 column, 2.1 x 50 mm, 2.5-&#181;m particle size</td>
			<td style="width:193px;">Waters Corp.</td>
			<td style="width:304px;">186003085</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">ESI Source</td>
			<td style="width:193px;">Agilent&#160;</td>
			<td style="width:304px;">G1958-65138</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:380px;">Ethyl-iophenoxic acid, 97 %</td>
			<td style="width:193px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;">Lot MKBP5399V</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:380px;">Formic acid, LC/MS grade</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">A117</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:380px;">LCMS software</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">MassHunter Data Acquisition and Quantitative Analysis</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:380px;">Methyl-iophenoxic acid, 97 % (w/w)</td>
			<td style="width:193px;">PR EuroChem Ltd.</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;">Lot PR0709514717</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">Microanalytical balance</td>
			<td style="width:193px;">Mettler Toledo</td>
			<td style="width:304px;">XP6U</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">Microcentrifuge</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">5415C</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">MS/MS</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">G6470A</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:380px;">N-Evap</td>
			<td style="width:193px;">Organomation</td>
			<td style="width:304px;">115</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:380px;">Oral Rabies Vaccine Baits</td>
			<td style="width:193px;">IDT Biologika, Dessau Rossleau, Germany</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">Propyl-iophenoxic acid, 99 % (w/w)</td>
			<td style="width:193px;">PR EuroChem Ltd.</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;">Lot PR100612108RR</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:380px;">Repeat pipettor</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">M4</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:380px;">Screw-top autosampler vial caps, PTFE-lined</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">5190-7024</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:25px;width:380px;">Sodium chloride, Certified ACS grade</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">S271</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:380px;">Statistical Software Package</td>
			<td style="width:193px;">SAS Institute, Cary, North Carolina, USA</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:380px;">Trifluoroacetic acid, 99 %</td>
			<td style="width:193px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:304px;">L06374</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;width:380px;">UPLC</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">1290 Series</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:380px;">Vortex Mixer</td>
			<td style="width:193px;">Glas-Col</td>
			<td style="width:304px;">099A PV6</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">0.2-mL pipettor tips</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">30089.413</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">0.5-mL pipettor tips</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">30089.421</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">1.5-mL microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">14-666-325</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:380px;">1250-&#181;L capacity pipette tips</td>
			<td style="width:193px;">GeneMate</td>
			<td style="width:304px;">P-1233-1250</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:380px;">1-mL pipettor tips</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">30089.43</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:380px;">2-mL amber screw-top autosampler vials</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">5182-0716</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">5-mL pipettor tips</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">30089.456</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">80-position microcentrifuge tube rack</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">05-541-2</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:380px;">8-mL amber vials with PTFE-lined caps</td>
			<td style="width:193px;">Wheaton</td>
			<td style="width:304px;">224754</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:380px;">70 % (v/v) isopropanol</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">A459</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">100-1000 &#181;L air displacement pipette</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">ES-100</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of iophenoxic acid analogues in small indian mongoose (herpestes auropunctatus) sera for use as an oral rabies vaccination biological marker

النمس الهندي الصغير (الهربسأوروبوتوس)هو خزان من فيروس داء الكلب (RABV) في بورتوريكو، ويضم أكثر من 70٪ من حالات داء الكلب الحيوانيالمبلغ عنها سنويا. وعادة ما يتم التحكم في دوران رابف في خزانات الحياة البرية من خلال استراتيجية للتطعيم عن طريق الفم ضد داء الكلب (ORV). ولا يوجد حاليا ً أي برنامج لـ ORV للحياة البرية في بورتوريكو. وقد أجريت بحوث في لقاحات داء الكلب الفموي وأنواع الطعم المختلفة للنمس بنتائج واعدة. يعتمد رصد نجاح ORV على تقدير تناول الطعم من قبل الأنواع المستهدفة، والذي ينطوي عادة على تقييم تغيير في RABV تحييد الأجسام المضادة (RVNA) بعد التطعيم. وقد يكون من الصعب تفسير هذه الاستراتيجية في المناطق التي يوجد فيها برنامج نشط للأحياء البرية أو في المناطق التي يكون فيها هذا البرنامج غير صحيح، وتوجد مستويات خلفية من RVNA في أنواع المكامن. وفي مثل هذه الحالات، قد يكون من المفيد وضع علامة بيولوجية مدمجة مع اللقاح أو مصفوفة الطعم. قدمنا 16 النمس الأسير الطعوم الغفل ORV التي تحتوي على حمض إيثيل iophenoxic (et-IPA) في تركيزات من 0.4٪ و 1٪ داخل الطعم و 0.14٪ في مصفوفة الطعم الخارجي. كما قدمنا 12 النمس الأسير ORV الطعوم التي تحتوي على حمض ميثيل iophenoxic (me-IPA) في تركيزات 0.035٪، 0.07٪ و 0.14٪ في مصفوفة الطعم الخارجي. جمعنا عينة مصل قبل تقديم الطعم ومن ثم أسبوعيا لمدة تصل إلى ثمانية أسابيع بعد العرض. لقد استخرجنا أحماض الأيوفينوكسيوك من سيرا إلى أسيتاتونيتريل وكمي باستخدام الكروماتوغرافيا السائلة/قياس الطيف الكتلي. قمنا بتحليل سيرا لET-IPA أو me-IPA عن طريق قياس الطيف الكتلي اللوني السائل. وجدنا قدرة كافية على وضع العلامات لمدة ثمانية وأربعة أسابيع على الأقل لـ ET-and me-IPA، على التوالي. ويمكن أن يكون كل من مشتقات وكالة تشجيع الاستثمار مناسبة للتقييم الميداني لطعم ORV في النمس. نظرا لطول العمر من علامة في النمس سيرا، يجب الحرص على عدم الخلط بين النتائج باستخدام نفس مشتق IPA خلال التقييمات المتتالية.

وترد في الشكل 1مخططات الألوان الأيونية التمثيلية من تحليل me-IPA . مصل النمس التحكم (الشكل1A)يوضح وقت الاحتفاظ ET-IPA (analyte البديلة) وعدم وجود me-IPA في وقت الاحتفاظ المشار إليه. توضح عينة مراقبة الجودة (الشكل1B)الفصل الأساسي بين i-IPA وet...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose Herpestes Auropunctatus Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker at JoVE.co

Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose Herpestes Auropunctatus Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker

قدمنا النمس الأسير لقاح داء الكلب عن طريق الفم الطعوم مع حمض الإيثيل أو ميثيل iophenoxic كعلامة حيوية والتحقق من تناول الطعم باستخدام الكروماتوغرافيا السائلة الجديدة مع قياس الطيف الكتلي جنبا إلى جنب (LC-MS /MS) طريقة.

تحليل نظائرها حمض الأيوفينوكسيك في النمس الهندي الصغير (الهربساتوبوتوس)سيرا لاستخدامها كعلامة بيولوجية التطعيم داء الكلب عن طريق الفم

The small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus) is a reservoir of rabies virus (RABV) in Puerto Rico and comprises over 70% of animal rabies cases ...

حددنا إجراءً للكشف عن حمض iophenoxic في مصل النمس وتحديده كمياً. وتشير النتائج إلى أن حمض iophenoxic يمكن استخدامه كعلامة بيولوجية للتحقق من امتصاص بيتا في الأنواع. والميزة الرئيسية لهذه الطريقة هي أنها تسمح بالتكين من النظير التناظري من حمض الإوفينوكسيك في أجزاء من المليار، وذلك باستخدام تقنية بسيطة لتنفيذ البروتين هطول الأمطار.للمرحلة المتنقلة A، الجمع بين ملليلتر واحد من حمض الفورميك مع لتر واحد من الماء النقي جدا. للمرحلة المتنقلة B, الجمع بين ملليلتر واحد من حمض الفورميك مع لتر واحد من الأسيتونتريل. للديوين، والجمع بين ملليلتر واحد من حمض ثلاثي الفلوراستيك مع 200 ملليلتر من الأسيتونيتريل.المقبل, تزن ما يقرب من 10 ملليغرام من ميثيل-IPA على microbalance, وسجل كتلة زائد أو ناقص 0001 ملليغرام. نقل كمية من ميثيل IPA إلى 10 ملليلتر فئة قارورة الحجمي، وذلك باستخدام أربعة إلى خمسة ملليلترات من الأسيتونيتريل. سونيكات لدقيقة واحدة لإذابة جميع المواد الصلبة ومن ثم جلب إلى حجم مع الأسيتونيتريل.نقل ما يقرب من ثمانية ملليلترات من كل مخزون إلى ثمانية قوارير الزجاج الكهرماني ملليلتر مع قبعات مبطنة PTFE وتخزين العينات في درجة حرارة الغرفة. ثم، نقل المخزون المتبقي إلى النفايات الخطرة. بالنسبة للمخزون 25X 7 ميثيل IPA إعداد مخزون من IPA الميثيل و acetonitrile في حوالي 200 ميكروغرام لكل ملليلتر.نقل ملليلتر واحد من الأسهم إلى قارورة خمسة ملليلتر وتمييع إلى حجم مع الأسيتونيتريل. ثم، نقل المخزون إلى قارورة زجاجية العنبر ثمانية ملليلتر مع غطاء مبطن PTFE وتخزينها في درجة حرارة الغرفة. باستخدام أنبوب مكرر، قم بإعداد ستة مخزونات إضافية من 25X الميثيل-IPA الموصوفة في بروتوكول النص في 8 قوارير زجاجية من نوع الكهرمان ملليلتر مع قبعات مبطنة بغطاء PTFE وتخزينها في درجة حرارة الغرفة.بالنسبة للمخزون البديل 25X، قم بنقل 0.1 ملليلتر من مخزون الإيثيل IPA المركز إلى قارورة بحجم 10 ملليلتر من الفئة A باستخدام حقنة زجاجية 100 ميكروليتر ثم تمييعها إلى الحجم مع الأسيتريتريل. نقل ما يقرب من ثمانية ملليلتر من المخزون البديل إلى قارورة زجاجية من نوع الكهرمان تبلغ ثمانية ملليلتر مع غطاء مبطن بغطاء PTFE وتخزينه في درجة حرارة الغرفة. (أ) نقل المخزون المتبقي إلى النفايات الخطرة.المقبل, إعداد 4X الأسهم التي تحتوي على كل من ميثيل-IPA والإيثيل-IPA في 10 ملليلتر مسامير قوارير العينات الزجاجي الأعلى, كما هو موضح في بروتوكول النص. على سبيل المثال، لإعداد المخزون 4X7، إضافة 0.2 ملليلتر من مخزون 25X سبعة ميثيل-IPA إلى قارورة ملليلتر اثنين باستخدام الأنابيب المتكررة مع 0.5 ملليلتر قدرة طرف. إضافة 0.2 ملليلتر من 25X مركب إيثيل IPA باستخدام أنبوب تكرار مع تلميح قدرة 0.5 ملليلتر.إضافة 0.85 ملليلتر من الأسيتونيتريل باستخدام أنبوب تكرار مع طرف قدرة ميليلتر واحد. قم بتكهّل القارورة بشكل آمن وعكس خمس مرات لمزجها. بعد ذلك، قم بإعداد المنحنى القياسي في قارورة العينات التلقائية ذات اللولبية اثنين ملليلتر كما هو موضح في بروتوكول النص.على سبيل المثال، لإعداد سبعة القياسية، إضافة 0.2 ملليلتر من الأسهم 4X7 إلى قارورة ملليلتر اثنين، وذلك باستخدام أنبوب تكرار مع تلميح سعة 0.5 ملليلتر. إضافة 0.6 ملليلتر من المياه المتينة فائقة النقاء باستخدام الأنابيب المتكررة مع طرف قدرة ميليلتر واحد. اِقم القنينات بإحكام و قلبها خمس مرات لخلطها.لكل عينة، قم بإعداد أنبوب جهاز طرد مركزي صغير 1.5 ملليلتر يحتوي على 200 إلى 300 ملليغرام من كلوريد الصوديوم وترتيب الأنابيب في رف بلاستيكي 80 موضعاً. لكل عينة، تسمية واحد 1.5 ملليلتر أنبوب أجهزة الطرد المركزي الصغيرة كما A وثاني أنبوب جهاز طرد مركزي صغير كما B.ترتيب الأنابيب في رف بلاستيكية موقف 80. ضع المواد والمعدات التالية اللازمة لاستخراج المصل في مجلس الوزراء السلامة البيولوجية من الدرجة الثانية: أنابيب أجهزة الطرد المركزي الصغيرة، خلاط دوامة، وبربير تكرار مع 0.5 ملليلتر وخمس نصائح قدرة ملليلتر، ما بين 100 إلى 1000 ميكرولتر الهواء المواص إزاحة مع 1000 نصائح ميكرولتر، والحاويات مع ما يقرب من 100 ملليلتر كل من المياه المتينة والنقاء جدا، وحاوية النفايات الخطر الحيوي.بعد ذلك، إزالة عينات المصل من التخزين المجمدة ودافئة لدرجة حرارة الغرفة في مجلس الوزراء السلامة البيولوجية. Vortex مزيج كل عينة مصل قبل أخذ العينات. باستخدام أنبوب تكرار مع تلميح قدرة 0.5 ملليلتر، الاستغناء 05 ملليلتر من مصل النمس في أنبوب A وإضافة 05 ملليلتر من المخزون البديل 25X.ثم إضافة 0.95 ملليلتر من diluent إلى أنبوب A باستخدام أنبوب تكرار مع تلميح قدرة خمسة ملليلتر. قم بتكهُن الأنابيب بشكل آمن ومزيج دوامة لمدة 10 إلى 15 ثانية. المقبل, إضافة مصل النمس التحكم إلى أنبوب A.Fortify كل من العينات 4QC مع لي-IPA باستخدام الأنابيب المتكررة مع تلميح قدرة 0.5 ملليلتر.إضافة 25X الأسهم البديلة لعينات QC. ثم، إضافة إلى عينات QC. اِكِلَ الأنابيب ومزيج الدوامة.الاستغناء عن كلوريد الصوديوم قبل وزنها في أنبوب A ومزيج دوامة ثلاث مرات لمدة ثماني إلى 12 ثانية. ثم، مسح أسفل الأسطح الخارجية للرف القارورة التي تحتوي على أنبوب A باستخدام 70٪ isopropanol. بعد إزالة العينات من مجلس الوزراء السلامة الحيوية، أنبوب الطرد المركزي A في 1200 مرات G لمدة دقيقة واحدة لفصل مراحل مائي و acetonitrile.Pipette 0.8 ملليلتر من مرحلة الأسيتونتريل العليا إلى أنبوب B، وذلك باستخدام ماصات إزاحة الهواء 100 إلى 1000 ميكرولتر. نقل الحل المتبقي في الأنبوب A إلى النفايات الخطرة والتخلص من الأنبوب الفارغ في حاوية نفايات المخاطر البيولوجية. الآن، إزالة الأسيتونيتريل وثلاثي فلورواجيكي من أنبوب B مع تدفق لطيف من غاز النيتروجين في حمام الماء 45 درجة مئوية.إضافة 0.25 ملليلتر من الأسيتونيتريل إلى أنبوب B باستخدام تكرار الأنابيب ومزيج دوامة لمدة أربع إلى خمس ثوان. ثم، الطرد المركزي في 1200 مرة G لمدة ثانيتين إلى أربع ثوان لجمع السائل في الجزء السفلي من الأنبوب. بعد الطرد المركزي، إضافة 0.75 ملليلتر من المياه ديونيد نقية جدا إلى أنبوب B باستخدام الأنابيب المتكررة مع طرف سعة خمسة ملليلتر ومزيج دوامة لمدة أربع إلى خمس ثوان.أجهزة الطرد المركزي في 1200 مرات G لمدة دقيقة واحدة لتوضيح العينة. ثم، نقل 0.75 ملليلتر من عظمى إلى قارورة العينات السيارات باستخدام ماصات 1000 ميكرولتر إزاحة الهواء والتخلص من نصائح ماصة في حاوية النفايات الخطر الحيوي. قم باحتواء كل قارورة لصناعة العينات بشكل آمن لتحليل LC-MS/MS.نقل الحل المتبقي في الأنبوب باء إلى النفايات الخطرة والتخلص من الأنبوب الفارغ في حاوية نفايات المخاطر البيولوجية. تكوين LC-MS/MS مع كافة المعلمات الموضحة في بروتوكول النص. السلطة على LC-MS / MS والسماح للعمود للوصول إلى 70 درجة مئوية قبل تحديد معدل التدفق إلى 0.8 ملليلتر في الدقيقة.إعداد تسلسل في برنامج الحصول على البيانات لحقن المنحنى القياسي قبل وبعد كل دفعة تتكون من عينات مراقبة الجودة وعينات غير معروفة. حقن جميع المعايير والعينات والحصول على الكروماتومات MR ايون باستخدام المعلمات المذكورة في بروتوكول النص. بعد الانتهاء من تسلسل، إيقاف LC-MS / MS والتخلص من جميع قوارير العينات السيارات في النفايات الخطرة.ويوضح مخطط الكروماتوات الأيون لمصل النمس التحكمي وقت الاحتفاظ بـ الإيثيل -IPA وعدم وجود ميثيل IPA في وقت الاحتفاظ المشار إليه. ويوضح مخطط الكروماتوات الأيون لعينة مراقبة الجودة الفصل الأساسي لميثيل IPA عن الإيثيل - IPA، وكذلك التحولات الكمية والمؤهلة لميثيل IPA. يُظهر مخطط الكروماتوغرام الأيون للعينة التمثيلية من الدراسة تركيزًا مُلاحظًا في المصل من 33.5 ميكروغرام لكل ميكرولتر من ميثيل IPA.تظهر هنا دقة ونتائج دقيقة للتحكم في مصل النمس المحصن بميثيل IPA. وتراوحت نسبة الاسترداد في المائة من 96.9 إلى 109 في المائة، وكان الانحراف النسبي في مستويات التحصين الثلاثة 3.4 في المائة 1.7 في المائة و 2.3 في المائة على التوالي. تظهر هنا دقة ونتائج دقيقة للتحكم في مصل النمس المحصن بـ Ethyl-IPA.وتراوحت نسبة الاسترداد في المائة من 89.5 إلى 115 في المائة، وكان الانحراف المعياري النسبي في مستويات التحصين الخمسة 4.3٪1.5٪2.3٪5.6٪و1.1٪ على التوالي. وقد قدمت جميع النمس إيثيل IPA و Methyl-IPA الطعوم تستهلك ما لا يقل عن 25٪ من الطعم في غضون 24 ساعة من القيود الزمنية ومستويات قابلة للقياس الكمي من إيثيل IPA و Methyl-IPA في سيرا على التوالي. ويمكن زيادة الفائدة المحتملة للأسلوب عن طريق تكوين LC-MS لجمع البيانات عن التناظرية حمض iophenoxic الأخرى، مثل البروبيل وحمض ثنائي الفينيل.وشجعنا الموظفين على الرجوع إلى أحدث التوصيات الصادرة عن اللجنة الاستشارية المعنية بممارسات التحصين، أو لجنة السلامة البيولوجية المؤسسية التابعة لها، من أجل تقديم إرشادات بشأن ما إذا كان التطعيم ضد داء الكلب قبل التعرض ضروري. وينبغي أن يتم تنفيذ الأقسام من 2.3 إلى 2.6 من هذا البروتوكول الذي ينطوي على العمل مع المصل غير المخفف في خزانة السلامة البيولوجية من الفئة الثانية.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose (Herpestes Auropunctatus) Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker

An Analytical Tool-box for Comprehensive Biochemical, Structural and Transcriptome Evaluation of Oral Biofilms Mediated by Mutans Streptococci

وهو أداة تحليلية للعلبة التقييم الشامل الكيمياء الحيوية ، والهيكلية والأغشية الحيوية عن طريق الفم من Transcriptome بوساطة العقديات الطافرة

Biofilms are highly dynamic, organized and structured communities of microbial cells enmeshed in an extracellular matrix of variable density and ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

إدخال إجهاد القص في دراسة الالتصاق الجرثومي

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

مقدمة لالدبابير الطفيلية من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; والاستجابة المناعية Antiparasite

Most known parasitoid wasp species attack the larval or pupal stages of Drosophila. While Trichopria drosophilae infect the pupal stages of the host (Fig. ...

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization (LNA flow-FISH): a Method for Bacterial Small RNA Detection

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization LNA flow-FISH: a Method for Bacterial Small RNA Detection

تأمين تدفق الأحماض النووية الخلوي ومضان في الموقع التهجين (LNA تدفق FISH) : طريقة لاكتشاف الحمض النووي الريبي البكتيرية الصغيرة

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a powerful technique that is used to detect and localize specific nucleic acid sequences in the cellular ...

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

استخدام<em&gt; غاليريا mellonella</em&gt; كما كائن نموذج لدراسة<em&gt; البكتيريا المستروحة</em&gt; عدوى

Legionella pneumophila, the causative agent of a severe pneumonia named Legionnaires&#39; disease, is an important human pathogen that infects and ...

Intralymphatic Immunotherapy and Vaccination in Mice

الخلايا الجذعية داخل الوعاء اللمفي والتطعيم في الفئران

Vaccines are typically injected subcutaneously or intramuscularly for stimulation of immune responses. The success of this requires efficient drainage of ...

Porphyromonas gingivalis as a Model Organism for Assessing Interaction of Anaerobic Bacteria with Host Cells

Porphyromonas gingivalis as a Model Organism for Assessing Interaction of Anaerobic Bacteria with Host Cells

اللثوية Porphyromonas كما كائن نموذج لتقييم تفاعل البكتيريا اللاهوائية مع خلايا المضيف

Anaerobic bacteria far outnumber aerobes in many human niches such as the gut, mouth, and vagina. Furthermore, anaerobic infections are common and ...

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

إنشاء إعداد إنتاجية عالية لفحص الجزيئات الصغيرة التي تعدل ج-دي-GMP في اشارة<em&gt; الزائفة الزنجارية</em

Bacterial resistance to traditional antibiotics has driven research attempts to identify new drug targets in recently discovered regulatory pathways. ...

In Vitro Methods for Comparing Target Binding and CDC Induction Between Therapeutic Antibodies: Applications in Biosimilarity Analysis

In Vitro Methods for Comparing Target Binding and CDC Induction Between Therapeutic Antibodies: Applications in Biosimilarity Analysis

في طرق المختبر لمقارنة الهدف وتجليد وCDC التعريفي بين الأجسام المضادة العلاجية: تطبيقات في تحليل Biosimilarity

Therapeutic monoclonal antibodies (mAbs) are relevant to the treatment of different pathologies, including cancers. The development of biosimilar mAbs by ...

In Vitro ELISA Test to Evaluate Rabies Vaccine Potency

في اختبار فيترو ELISA لتقييم قوة لقاح داء الكلب

The growing global concern for the animal welfare is encouraging manufacturers and the National Control Laboratories (OMCLs) to follow the 3Rs strategy ...