Name: analysis of iophenoxic acid analogues in small indian mongoose (herpestes auropunctatus) sera for use as an oral rabies vaccination biological marker
Uploaded: 2019-05-31T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose Herpestes Auropunctatus Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker at JoVE.co

Diese Forschung wurde zum Teil durch das intramurale Forschungsprogramm des US Department of Agriculture, Animal and Plant Health Inspection Service, Wildlife Services, National Tollwut Management Program und IDT Biologika (Dessau-Roßlau, Deutschland) unterstützt.

Alle Verfahren wurden vom institutionellen Animal Care and Use Committee des USDA National Wildlife Research Center gemäß dem genehmigten Forschungsprotokoll QA-2597 genehmigt.
HINWEIS: Das folgende Protokoll beschreibt das Analyseverfahren zum Nachweis von Methyl-Iophenoxsäure im Mongooseserum. Diese Methode ist die endgültige Version eines iterativen Prozesses, der mit der Analyse von Ethyl-Iophenoxsäure in Mongooseserum begann. Bei der ersten Bewertung von Ethyl-Iophenoxsäure wurden g...

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	<li>Nel, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mongoose+rabies+in+southern+Africa:+a+re-evaluation+based+on+molecular+epidemiology.">Mongoose rabies in southern Africa: a re-evaluation based on molecular epidemiology.</a> Virus Research. 109 (2), 165-173 (2005).</li><li>Zieger, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+phylogeography+of+rabies+in+Grenada,+West+Indies,+and+implications+for+control.">The phylogeography of rabies in Grenada, West Indies, and implications for control.</a> PLOS Neglected Tropical Diseases. 8 (10), e3251 (2004).</li><li>Monroe, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+surveillance+in+the+United+States+during+2014.">Rabies surveillance in the United States during 2014.</a> Journal of the American Veterinary Medical Association. 248 (7), 777-788 (2015).</li><li>Slate, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Status+of+oral+rabies+vaccination+in+wild+carnivores+in+the+United+States.">Status of oral rabies vaccination in wild carnivores in the United States.</a> Virus Research. 111, 68-76 (2005).</li><li>Blanton, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccination+of+small+Asian+mongoose+(Herpestes+javanicus)+against+rabies.">Vaccination of small Asian mongoose (Herpestes javanicus) against rabies.</a> Journal of Wildlife Diseases. 42 (3), 663-666 (2006).</li><li>Vos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+vaccination+of+captive+small+Indian+mongoose+(Herpestes+auropunctatus)+against+rabies.">Oral vaccination of captive small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus) against rabies.</a> Journal of Wildlife Diseases. 49 (4), 1033-1036 (2013).</li><li>Berentsen, A. R., Johnson, S. R., VerCauteren, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+ONRAB&#174;+bait+matrix+flavor+preference+by+mongoose+(Herpestes+auropunctatus)+in+Puerto+Rico:+Implications+for+Oral+Rabies+Vaccination.">Evaluation of ONRAB&#174; bait matrix flavor preference by mongoose (Herpestes auropunctatus) in Puerto Rico: Implications for Oral Rabies Vaccination.</a> Caribbean Journal of Science. 48 (1), 52-58 (2014).</li><li>Ortmann, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+studies+with+the+oral+rabies+virus+vaccine+strain+SPBN+GASGAS+in+the+small+Indian+mongoose+(Herpestes+auropunctatus).">Safety studies with the oral rabies virus vaccine strain SPBN GASGAS in the small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus).</a> BMC Veterinary Research. 14 (1), 90 (2018).</li><li>Linhart, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+field+evaluation+of+baits+for+delivering+oral+rabies+vaccines+to+raccoons+(Procyon+lotor).">A field evaluation of baits for delivering oral rabies vaccines to raccoons (Procyon lotor).</a> Journal of Wildlife Diseases. 30 (2), 185-194 (1994).</li><li>Fry, T. L., Atwood, T., Dunbar, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+rhodamine+B+as+a+biomarker+for+raccoons.">Evaluation of rhodamine B as a biomarker for raccoons.</a> Human Wildlife Interactions. 4 (2), 275-280 (2010).</li><li>Jones, C., Moller, H., Hamilton, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+potential+techniques+for+identifying+individual+stoats+(Mustela+erminea)+visiting+control+or+monitoring+stations.">A review of potential techniques for identifying individual stoats (Mustela erminea) visiting control or monitoring stations.</a> New Zealand Journal of Zoology. 31 (3), 193-203 (2004).</li><li>de Leeuw, A. N. S., Smith, G. C., Woods, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+iophenoxic+acid+to+assess+bait+uptake+by+European+badgers.">Use of iophenoxic acid to assess bait uptake by European badgers.</a> Advances in Vertebrate Pest Management. 4, 243-254 (2006).</li><li>Southey, A. K., Sleeman, D. P., Gormley, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sulfadimethoxine+and+rhodamine+B+as+oral+biomarkers+for+European+badgers+(Meles+meles).">Sulfadimethoxine and rhodamine B as oral biomarkers for European badgers (Meles meles).</a> Journal of Wildlife Diseases. 38 (2), 378-384 (2002).</li><li>Massei, G., Jones, A., Platt, T., Cowan, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+Acid+as+a+Long-Term+Marker+for+Wild+Boar.">Iophenoxic Acid as a Long-Term Marker for Wild Boar.</a> Journal of Wildlife Management. 73 (3), 458-461 (2009).</li><li>Creekmore, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Field+evaluation+of+baits+and+baiting+strategies+for+delivering+oral+vaccine+to+mongooses+in+Antigua,+West+Indies.">Field evaluation of baits and baiting strategies for delivering oral vaccine to mongooses in Antigua, West Indies.</a> Journal of Wildlife Diseases. 30 (4), 497-505 (1994).</li><li>Creekmore, T. E., Rock, R. E., Hurley, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+baiting+system+for+delivery+of+an+oral+plague+vaccine+to+black-tailed+prairie+dogs.">A baiting system for delivery of an oral plague vaccine to black-tailed prairie dogs.</a> Journal of Wildlife Diseases. 38 (1), 32-39 (2002).</li><li>Fernandez, J. R. R., Rocke, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Rhodamine+B+as+a+biomarker+for+oral+plague+vaccination+of+prairie+dogs.">Use of Rhodamine B as a biomarker for oral plague vaccination of prairie dogs.</a> Journal of Wildlife Diseases. 47 (3), 765-768 (2011).</li><li>Johnston, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+and+significance+of+tetracycline+stability+in+rabies+vaccine+baits.">Evaluation and significance of tetracycline stability in rabies vaccine baits.</a> Journal of Wildlife Diseases. 41 (3), 549-558 (2005).</li><li>Algeo, T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+rabies+vaccination+variation+in+tetracycline+biomarking+among+Ohio+Raccoons.">Oral rabies vaccination variation in tetracycline biomarking among Ohio Raccoons.</a> Journal of Wildlife Diseases. 49 (2), 332-337 (2013).</li><li>Crier, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetracyclines+as+a+fluorescent+marker+in+bones+and+teeth+of+rodents.">Tetracyclines as a fluorescent marker in bones and teeth of rodents.</a> Journal of Wildlife Management. 34 (4), 829-834 (1970).</li><li>Fisher, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+using+Rhodamine+B+as+a+marker+for+wildlife+studies.">Review of using Rhodamine B as a marker for wildlife studies.</a> Wildlife Society Bulletin. 27 (2), 318-329 (1999).</li><li>Knowlton, F. K., Savarie, P. J., Wahlgren, C. E., Hayes, D. J., Shumake, S. A., Bullard, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+marks+by+coyotes+ingesting+baits+containing+iophenoxic+acid,+Mirex+and+Rhodamine+B.">Physiological marks by coyotes ingesting baits containing iophenoxic acid, Mirex and Rhodamine B.</a> Vertebrate Pest Control and Management Materials. , 141-147 (1987).</li><li>Follmann, E. H., Savarie, P. J., Ritter, D. G., Baer, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+marking+of+arctic+foxes+with+iophenoxic+acid.">Plasma marking of arctic foxes with iophenoxic acid.</a> Journal of Wildlife Diseases. 23 (4), 709-712 (1987).</li><li>Saunders, G., Harris, S., Eason, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+acid+as+a+quantitative+bait+marker+for+foxes.">Iophenoxic acid as a quantitative bait marker for foxes.</a> Wildlife Research. 20, 297-302 (1993).</li><li>Hadidian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acceptance+of+simulated+oral+rabies+vaccine+baits+by+urban+raccoons.">Acceptance of simulated oral rabies vaccine baits by urban raccoons.</a> Journal of Wildlife Diseases. 25 (1), 1-9 (1989).</li><li>Sweetapple, P. J., Nugent, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+acid+as+a+serum+marker+for+red+deer+(Cervus+elaphus+scoticus).">Iophenoxic acid as a serum marker for red deer (Cervus elaphus scoticus).</a> Wildlife Research. 25, 649-654 (1998).</li><li>Ogilvie, S. C., Eason, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+iophenoxic+acid+and+rhodamine+B+for+marking+feral+ferrets+(Mustela+furo).">Evaluation of iophenoxic acid and rhodamine B for marking feral ferrets (Mustela furo).</a> New Zealand Journal of Zoology. 25 (2), 105-108 (1998).</li><li>Eason, C. T., Batcheler, D., Frampton, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+pharmacokinetics+of+iophenoxic+acid+in+cats+and+brushtail+possums.">Comparative pharmacokinetics of iophenoxic acid in cats and brushtail possums.</a> Wildlife Research. 21, 377-380 (1994).</li><li>Fisher, P. M., Marks, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+iophenoxic+acid+as+a+biomarker+for+swamp+wallabies+(Wallabia+bicolor).">Evaluation of iophenoxic acid as a biomarker for swamp wallabies (Wallabia bicolor).</a> Wildlife Research. 24, 97-103 (1997).</li><li>Baer, G. M., Shaddock, J. H., Hayes, D. J., Savarie, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+acid+as+a+serum+marker+in+carnivores.">Iophenoxic acid as a serum marker in carnivores.</a> Journal of Wildlife Management. 49 (1), 49-51 (1985).</li><li>Spurr, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+acid+as+a+systemic+blood+marker+for+assessment+of+bait+acceptance+by+stoats+(Mustela+ermine)+and+weasels+(Mustela+nivalis).">Iophenoxic acid as a systemic blood marker for assessment of bait acceptance by stoats (Mustela ermine) and weasels (Mustela nivalis).</a> New Zealand Journal of Zoology. 29 (2), 135-142 (2002).</li><li>Mudge, G. H., Strewler, G. J., Desbiens, N., Berndt, W. O., Wade, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excretion+and+distribution+of+iophenoxic+acid.">Excretion and distribution of iophenoxic acid.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 178 (1), 159-172 (1971).</li><li>Jones, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-performance+liquid+chromatographic+determination+of+iophenoxic+acid+in+serum.">High-performance liquid chromatographic determination of iophenoxic acid in serum.</a> Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications. 654 (2), 293-296 (1994).</li><li>Wiles, M. C., Campbell, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liquid+chromatography-electrospray+ionization+mass+spectrometry+for+direct+identification+and+quantification+of+iophenoxic+acid+in+serum.">Liquid chromatography-electrospray ionization mass spectrometry for direct identification and quantification of iophenoxic acid in serum.</a> Journal of Chromatography B. 832 (1), 144-157 (2006).</li><li>Ballesteros, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+by+LC/ESI-MS+of+iophenoxic+acid+derivatives+and+evaluation+as+markers+of+oral+baits+to+deliver+pharmaceuticals+to+wildlife.">Analysis by LC/ESI-MS of iophenoxic acid derivatives and evaluation as markers of oral baits to deliver pharmaceuticals to wildlife.</a> Journal of Chromatography B. 878 (22), 1997-2002 (2010).</li><li>Purdey, D. C., Petcu, M., King, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+protocol+for+detecting+two+systemic+bait+markers+(Rhodamine+B+and+iophenoxic+acid)+in+small+mammals.">A simplified protocol for detecting two systemic bait markers (Rhodamine B and iophenoxic acid) in small mammals.</a> New Zealand Journal of Zoology. 30 (3), 175-184 (2003).</li><li>Tobin, M. E., Koehler, A. E., Sugihara, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetracyclines+as+a+fluorescent+marker+in+bones+and+teeth+of+rodents.">Tetracyclines as a fluorescent marker in bones and teeth of rodents.</a> Journal of Wildlife Management. 60 (1), 202-207 (1996).</li><li>Briscoe, J. A., Syring, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+for+emergency+airway+and+vascular+access+in+special+species.">Techniques for emergency airway and vascular access in special species.</a> Seminars in Avian and Exotic Pet Medicine. 13 (3), 118-131 (2004).</li><li>Eason, C. T., Frampton, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+plasma+pharmacokinetics+of+iophenoxic+and+iopanoic+acids+in+goat.">The plasma pharmacokinetics of iophenoxic and iopanoic acids in goat.</a> Xenobiotica. 2 (2), 185-189 (1992).</li><li>Hilton, H. E., Dunn, A. M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mongooses: their natural history. , (1967).</li><li>Stevens, C. E., Hume, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Comparative physiology of the vertebrate digestive system. Second edition. , (1995).</li><li>National Rabies Management Program (NRMP). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Oral rabies vaccination draft operations manual. , (2009).</li></ol>

Die für die Studien entwickelte LC-MS/MS-Methode nutzte die Selektivität der Mehrfachreaktionsüberwachung, um me-IPA und et-IPA im Mongooseserum genau zu quantifizieren. Die Selektivität der MS/MS-Erkennung ermöglichte auch ein einfaches Bereinigungsprotokoll, das sich ausschließlich auf Acetonitril stützt, um Proteine aus Demerum vor der Analyse zu fällen.
Iophenoxsäuren sind in ACN löslich, aber praktisch unlöslich in Wasser. Um Wasser aus der ACN-Extraktion auszuschließen, wurde...

Das Tollwutvirus (RABV) ist ein einsträngiges Lyssavirus mit negativem Sinn und zirkuliert zwischen verschiedenen Tierreservoirarten innerhalb der Ordnungen Carnivora und Chiroptera. Mehrere Arten von Mongoose sind Reservoirs von RABV, und die kleine indische Mongoose (Herpestes auropunctatus) ist das einzige Reservoir in Puerto Rico und anderen karibischen Inseln in der westlichen Hemisphäre1,2,3 . Die Kontrolle der RABV-Zirkulation in Wildtierreservoirs erfolgt in der Regel durch eine Strategie der oralen Tollwutimpfung (ORV). In den Vereinigten Staaten (USA) wird diese Management-Aktivität vom USDA/APHIS/Wildlife Services National Tollwut Management Program (NRMP)4koordiniert. Derzeit gibt es kein OrV-Programm für Wildtiere in Puerto Rico. Die Forschung an Tollwut-Impfstoffen und verschiedenen Ködertypen für Gänse wurde mit vielversprechenden Ergebnissen durchgeführt, die darauf hindeuten, dass ein ORV-Programm für Gänse möglich ist5,6,7,8.
Die Überwachung der Auswirkungen von ORV beruht auf der Schätzung der Köderaufnahme durch Zielarten, was in der Regel die Bewertung einer Veränderung der RV-Antikörperseroprävalenz beinhaltet. Diese Strategie kann jedoch in Gebieten mit aktiven ORV-Programmen für Wildtiere oder in Gebieten, in denen RV enzootisch ist und die Hintergrundniveaus von RABV-neutralisierenden Antikörpern (RVNA) in Reservoir-Arten vorhanden sind, eine Herausforderung darstellen. In solchen Situationen kann ein Biomarker, der im Köder oder in der externen Ködermatrix enthalten ist, nützlich sein.
Verschiedene biologische Marker wurden verwendet, um die Aufnahme von Ködern bei zahlreichen Arten zu überwachen, einschließlich Waschbären (Procyon Lotor)9,10, Stoats (Mustela ermine)11,12, Europäische Dachse ( Meles meles) 13, Wildschweine (Sus scrofa)14, kleine indische Gänse15 und Präriehunde (Cynomysludovicianus)16,17, u.a. In den USA enthalten operative ORV-Köder oft einen 1% Tetracyclin-Biomarker in der Ködermatrix, um die Köderaufnahme18,19zu überwachen. Zu den Nachteilen bei der Verwendung von Tetracyclin gehört jedoch die wachsende Sorge über die Verteilung von Antibiotika in die Umwelt und dass der Nachweis von Tetracyclin typischerweise invasiv ist, was eine Zahnextraktion oder -zerstörung des Tieres erfordert, um Knochen zu erhalten. Proben20. Rhodamine B wurde als Marker in einer Vielzahl von Geweben bewertet und kann mit ultraviolettem (UV) Licht und Fluoreszenz in Haaren und Schnurrhaaren10,21nachgewiesen werden.
Iophenoxsäure (IPA) ist ein weißes, kristallines Pulver, das verwendet wurde, um köderlichen Verbrauch in Kojoten zu bewerten (Canis latrans)22, polarer Fuchs (Vulpes lagopus)23, Rotfuchs (Vulpes vulpes)24, Waschbären 9 , 25, Wildschwein14, Rotwild (Cervus elaphus scoticus)26, Europäische Dachse12 und Frettchen (M. furo)27, unter mehreren anderen Säugetierarten. Retentionszeiten von IPA variiert nach Arten von weniger als zwei Wochen in einigen Beuteltieren28,29, bis mindestens 26 Wochen in Huftieren26 und über 52 Wochen bei Haushunden (Canis lupus familiaris)30. Retentionszeiten können auch dosisabhängigsein 31. Iophenoxsäure bindet stark an Serumalbumin und wurde historisch durch Messung des Jodspiegels im Blut32nachgewiesen. Dieser indirekte Ansatz wurde durch Hochleistungsmethoden zur Flüssigchromatographie (HPLC) zur direkten Messung der Iophenoxsäurekonzentrationen mit UV-Detektion33und schließlich mit Flüssigchromatographie und Massenspektrometrie (LCMS) ersetzt. 34,35. Für diese Studie wurde eine hochempfindliche und selektive Flüssigchromatographie mit Tandem-Massenspektrometrie (LC-MS/MS)-Methode entwickelt, die multiple Reaction Monitoring (MRM) nutzt, um zwei Analoga von Iophenoxsäure zu quantifizieren. Unser Ziel war es, mit dieser LC-MS/MS-Methode die Markierungsfähigkeit von 2-(3-Hydroxy-2,4,6-Triiodobenzyl)Propansäure (Methyl-IPA oder me-IPA) und 2-(3-hydroxy-2,4,6-triiodobenzyl)butansäure (ethyl-IPA oder et-IPA) und Köder an gefangene Gänse.
Die Gänse wurden in Käfigfallen, die mit handelsüblichen Räucherwürsten und Fischöl geködert wurden, live gefangen. Die Gänse wurden in einzelnen 60 cm x 60 cm x 40 cm Edelstahlkäfigen untergebracht und mit einer täglichen Ration von 50 g gewerblichem Trockenkatzenfutter von 50 g gefüttert, zweimal pro Woche mit einem handelsüblichen Hühnerschenkel ergänzt. Wasser war verfügbar ad libitum. Wir lieferten zwei Derivate von IPA, Ethyl-IPA und Methyl-IPA, an gefangene Mongos in Placebo-ORV-Ködern. Alle Köder setzten sich aus einer 28 mm x 20 mm x 9 mm Folienblisterpackung mit einer externen Beschichtung(nachfolgend "Ködermatrix") mit pulverisiertem Hühnerei und Gelatine (Materialtabelle) zusammen. Köder enthielten 0,7 ml Wasser oder IPA-Derivat und wogen etwa 3 g, von denen 2 g die externe Ködermatrix war.
Wir boten 16 in Gefangenschaft gehaltene Mongooses et-IPA in drei Konzentrationen an: 0,14% (2,8 mg et-IPA in 2 g Ködermatrix; 3 Männchen [m], 3 Weibchen [f]), 0,4% (2,8 mg et-IPA in 0,7 ml Blisterpackungvolumen; 3m, 3f) und 1,0% (7,0 mg Ethyl-IPA in 0,7 ml Blisterpackung; 2 , 2f). Die Gesamtdosis von 2,8 mg entspricht einer Dosis von 5 mg/kg27,36 und basiert auf einem durchschnittlichen Gänsegewicht von 560 g in Puerto Rico. Wir wählten 1% als höchste Konzentration, da die Forschung darauf hindeutet, dass Geschmacksaversion zu einigen Biomarkern in Konzentrationen von >1% bei einigen Arten auftreten kann37. Wir boten nur die 1%-Dosis in der Blisterpackung an, da die Flockung verhinderte, dass sich die Lösung im Lösungsmittel ausreichend auflöste, um gleichmäßig in die Ködermatrix eingearbeitet zu werden. Eine Kontrollgruppe (2m, 1f) erhielt Köder, die mit sterilem Wasser und ohne IPA gefüllt waren. Wir boten Den Gänsen morgens (ca. 8 Uhr) während oder vor der Fütterung ihrer täglichen Pflegeration Köder an. Köderreste wurden nach etwa 24 Stunden entfernt. Wir sammelten Blutproben vor der Behandlung, einen Tag nach der Behandlung und dann wöchentlich bis zu 8 Wochen nach der Behandlung. Wir anästhetisierten Mongooses durch Einatmen von Isoflurangas und sammelten bis zu 1,0 ml Vollblut durch Venipunktion der Schädelvenenhöhle, wie für Frettchen beschrieben38. Wir zentrifugierten Vollblutproben, übertrugen Seren auf Kryovials und lagerten sie bis zur Analyse bei -80 °C. Nicht alle Tiere wurden in allen Zeiträumen beprobt, um die Auswirkungen wiederholter Blutentnahmen auf die Gesundheit der Tiere zu minimieren. Kontrolltiere wurden am Tag 0, dann wöchentlich für bis zu 8 Wochen nach der Behandlung beprobt.
Wir lieferten me-IPA in drei Konzentrationen: 0,035% (0,7 mg), 0,07% (1,4 mg) und 0,14% (2,8 mg), alle in die Ködermatrix integriert, mit 2 Männern und 2 Frauen pro Behandlungsgruppe. Zwei Männchen und zwei Weibchen erhielten Köder, die mit sterilem Wasser und ohne IPA gefüllt waren. Köder, die Zeiten und Mongooseanästhesie anbieten, werden oben beschrieben. Wir sammelten Blutproben vor der Behandlung am ersten Tag, und dann wöchentlich bis zu 4 Wochen nach der Behandlung.
Wir haben Serumkonzentrationsdaten auf Normalität und geschätzte Mittel für Serum-IPA-Konzentrationen verschiedener Behandlungsgruppen getestet. Wir verwendeten ein lineares gemischtes Modell, um mittlere Serum- und IPA-Konzentrationen zu vergleichen, die über Individuen gepoolt wurden. Der Ködertyp (Matrix/Blisterpackung) war neben dem Versuchstag ein fester Effekt, während die tierische ID ein Zufallseffekt war. Alle Prozeduren wurden mit einer gemeinsamen statistischen Software (Tabelle der Materialien) durchgeführt und die Signifikanz wurde mit 0,05 bewertet.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1036px;" width="1036">
	<tbody>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">Acetonitrile, Optima grade</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">A996</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">Analytical balance</td>
			<td style="width:193px;">Mettler Toledo</td>
			<td style="width:304px;">XS204</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:380px;">C18 column, 2.1 x 50 mm, 2.5-&#181;m particle size</td>
			<td style="width:193px;">Waters Corp.</td>
			<td style="width:304px;">186003085</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">ESI Source</td>
			<td style="width:193px;">Agilent&#160;</td>
			<td style="width:304px;">G1958-65138</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:380px;">Ethyl-iophenoxic acid, 97 %</td>
			<td style="width:193px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;">Lot MKBP5399V</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:380px;">Formic acid, LC/MS grade</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">A117</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:380px;">LCMS software</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">MassHunter Data Acquisition and Quantitative Analysis</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:380px;">Methyl-iophenoxic acid, 97 % (w/w)</td>
			<td style="width:193px;">PR EuroChem Ltd.</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;">Lot PR0709514717</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">Microanalytical balance</td>
			<td style="width:193px;">Mettler Toledo</td>
			<td style="width:304px;">XP6U</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">Microcentrifuge</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">5415C</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">MS/MS</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">G6470A</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:380px;">N-Evap</td>
			<td style="width:193px;">Organomation</td>
			<td style="width:304px;">115</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:380px;">Oral Rabies Vaccine Baits</td>
			<td style="width:193px;">IDT Biologika, Dessau Rossleau, Germany</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">Propyl-iophenoxic acid, 99 % (w/w)</td>
			<td style="width:193px;">PR EuroChem Ltd.</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;">Lot PR100612108RR</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:380px;">Repeat pipettor</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">M4</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:380px;">Screw-top autosampler vial caps, PTFE-lined</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">5190-7024</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:25px;width:380px;">Sodium chloride, Certified ACS grade</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">S271</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:380px;">Statistical Software Package</td>
			<td style="width:193px;">SAS Institute, Cary, North Carolina, USA</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:380px;">Trifluoroacetic acid, 99 %</td>
			<td style="width:193px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:304px;">L06374</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;width:380px;">UPLC</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">1290 Series</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:380px;">Vortex Mixer</td>
			<td style="width:193px;">Glas-Col</td>
			<td style="width:304px;">099A PV6</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">0.2-mL pipettor tips</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">30089.413</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">0.5-mL pipettor tips</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">30089.421</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">1.5-mL microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">14-666-325</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:380px;">1250-&#181;L capacity pipette tips</td>
			<td style="width:193px;">GeneMate</td>
			<td style="width:304px;">P-1233-1250</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:380px;">1-mL pipettor tips</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">30089.43</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:380px;">2-mL amber screw-top autosampler vials</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">5182-0716</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">5-mL pipettor tips</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">30089.456</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">80-position microcentrifuge tube rack</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">05-541-2</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:380px;">8-mL amber vials with PTFE-lined caps</td>
			<td style="width:193px;">Wheaton</td>
			<td style="width:304px;">224754</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:380px;">70 % (v/v) isopropanol</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">A459</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">100-1000 &#181;L air displacement pipette</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">ES-100</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of iophenoxic acid analogues in small indian mongoose (herpestes auropunctatus) sera for use as an oral rabies vaccination biological marker

Die kleine indische Gänse (Herpestes auropunctatus) ist ein Reservoir des Tollwutvirus (RABV) in Puerto Rico und umfasst über 70% der jährlich gemeldeten Tollwutfälle. Die Kontrolle des RABV-Kreislaufs in Wildtierreservoirs erfolgt in der Regel durch eine Strategie der oralen Tollwutimpfung (ORV). Derzeit gibt es kein OrV-Programm für Wildtiere in Puerto Rico. Die Forschung an oralen Tollwut-Impfstoffen und verschiedenen Ködertypen für Gänse wurde mit vielversprechenden Ergebnissen durchgeführt. Die Überwachung des Erfolgs von ORV beruht auf der Schätzung der Köderaufnahme durch Zielarten, was in der Regel die Bewertung einer Änderung der RABV-Neutralisierungsantikörper (RVNA) nach der Impfung beinhaltet. Diese Strategie kann in Gebieten mit einem aktiven ORV-Programm für Wildtiere oder in Gebieten, in denen RABV enzootisch ist und die Hintergrundniveaus von RVNA bei Reservoirarten vorhanden sind, schwierig sein. In solchen Situationen kann ein Biomarker, der mit dem Impfstoff oder der Ködermatrix aufgenommen wurde, nützlich sein. Wir boten 16 gefangene Mongos Placebo ORV Köder mit Ethyl-Iophenoxsäure (et-IPA) in Konzentrationen von 0,4% und 1% innerhalb des Köders und 0,14% in der externen Ködermatrix an. Wir boten auch 12 in Gefangenschaft gehaltene Mongos ORV Köder an, die Methyl-Iophenoxsäure (me-IPA) in Konzentrationen von 0,035%, 0,07% und 0,14% in der externen Ködermatrix enthalten. Wir sammelten eine Serumprobe vor dem Köder-Angebot und dann wöchentlich für bis zu acht Wochen Post-Angebot. Wir extrahierten Iophenoxic Säuren aus Seren in Acetonitril und quantifizierten mit flüssiger Chromatographie/Massenspektrometrie. Wir analysierten sera für et-IPA oder me-IPA mittels Flüssigchromatographie-Massenspektrometrie. Wir fanden eine ausreichende Markierungsfähigkeit für mindestens acht bzw. vier Wochen für et- bzw. me-IPA. Beide IPA-Derivate könnten für die Feldbewertung der ORV-Köderaufnahme in Mongos geeignet sein. Aufgrund der Langlebigkeit des Markers in mongoose sera ist darauf zu achten, dass die Ergebnisse nicht durch die Verwendung desselben IPA-Derivats während aufeinander folgender Auswertungen verwirrt werden.

Repräsentative Ionenchromatogramme aus einer Me-IPA-Analyse sind in Abbildung 1dargestellt. Das Kontrollmongooseserum (Abbildung 1A) zeigt die Retentionszeit von et-IPA (Ersatzanalyt) und das Fehlen von me-IPA zur angegebenen Retentionszeit. Die Qualitätskontrollstichprobe (Abbildung 1B) veranschaulicht die basislinienliche Trennung von me-IPA von et-IPA sowie die Quantifizierer- und Qualifizierer?...

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Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose Herpestes Auropunctatus Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker

Wir boten in Gefangenschaft Mongooses Placebo orale Tollwut-ImpfstoffKöder mit Ethyl- oder Methyl-Iophenoxsäure als Biomarker und verifizierte Köderaufnahme mit einer neuartigen Flüssigchromatographie mit Tandem-Massenspektrometrie (LC-MS/MS) Methode an.

Analyse von Iophenoxic Acid Analoga in Small Indian Mongoose (Herpestes Auropunctatus) Sera zur Verwendung als orale Tollwut-Impfung Biologischer Marker

The small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus) is a reservoir of rabies virus (RABV) in Puerto Rico and comprises over 70% of animal rabies cases ...

Wir haben ein Verfahren zum Nachweis und zur Quantifizierung von Jophenoxsäure im Mongoserum skizziert. Die Ergebnisse deuten darauf hin, dass Iophenoxsäure als biologischer Marker verwendet werden kann, um die Beta-Aufnahme bei der Art zu überprüfen. Der Hauptvorteil dieser Methode ist, dass sie die Quantifizierung von Iophenoxsäure-Analogen in Teilen pro Milliarde Ebenen ermöglicht, mit einer einfachen Proteinfälltechnik.Kombinieren Sie für die mobile Phase A einen Milliliter Ameisensäure mit einem Liter reinem Ultrawasser. Kombinieren Sie für die mobile Phase B einen Milliliter Ameisensäure mit einem Liter Acetonitril. Kombinieren Sie für das Verdünnungsmittel einen Milliliter Trifluoressigsäure mit 200 Milliliter Acetonitril.Als nächstes wiegen etwa 10 Milligramm Methyl-IPA auf Mikrobilanz, und erfassen Sie die Masse auf plus oder minus 0001 Milligramm. Übertragen Sie den Methyl-IPA quantitativ auf einen 10 Milliliter-Volumenkolben der Klasse A mit vier bis fünf Milliliteracetonitril. Beschallen Sie für eine Minute, um alle Feststoffe aufzulösen und dann mit Acetonitril zu Volumen zu bringen.Etwa acht Milliliter pro Lager auf acht Milliliter Bernsteinglasfläschchen mit PTFE-gefütterten Kappen übertragen und die Proben bei Raumtemperatur lagern. Dann den Restbestand in gefährliche Abfälle überführen. Für die 25X-Bestände bereiten sieben Methyl-IPA-Bestände einen Vorrat an Methyl-IPA und Acetonitril mit etwa 200 Mikrogramm pro Milliliter vor.Einen Milliliter des Vorrats auf einen Fünf-Milliliter-Kolben übertragen und mit Acetonitril auf Volumen verdünnen. Dann den Vorrat in eine acht Milliliter Bernsteinglas-Durchstechflasche mit einer PTFE-gefütterten Kappe übertragen und bei Raumtemperatur lagern. Mit einem Wiederholungspipettor die sechs zusätzlichen 25-fachen Methyl-IPA-Bestände, die im Textprotokoll beschrieben sind, in acht Milliliter-Bernsteinglasfläschchen mit PTFE-gefütterten Kappen vorzubereiten und bei Raumtemperatur aufzubewahren.Für den 25-fachen Ersatzstoff 0,1 Milliliter des konzentrierten Ethyl-IPA-Bestands mit einer 100-Mikroliter-Glasspritze auf einen 10-Milliliter-Volumenkolben der Klasse A übertragen und dann mit Acetonitril zu Volumen verdünnen. Etwa acht Milliliter des Ersatzteils auf eine acht Milliliter Bernsteinglas-Durchstechflasche mit PTFE-gefütterter Kappe übertragen und bei Raumtemperatur lagern. Den Restbestand in gefährliche Abfälle übertragen.Als nächstes bereiten Sie 4X-Bestände vor, die sowohl Methyl-IPA als auch Ethyl-IPA in 10 Milliliter-Schraubglas-Auto-Sampler-Fläschchen enthalten, wie im Textprotokoll beschrieben. Um beispielsweise den Lagerwagen 4X7 vorzubereiten, fügen Sie 0,2 Milliliter des 25-Fach-Lagers sieben Methyl-IPA-Lagers zu einer Zwei-Milliliter-Durchstechflasche hinzu, indem Sie den Repeat Pipettor mit einer 0,5-Milliliter-Kapazität verwenden. Fügen Sie 0,2 Milliliter des 25X Ersatz-Ethyl-IPA-Lagers mit einem Repeat Pipettiermitt mit einer 0,5-Milliliter-Kapazitätsspitze hinzu.Fügen Sie 0,85 Milliliter Acetonitril mit einem Repeat Pipettor mit einer 1 Milliliter Kapazität Spitze. Die Durchstechflasche sicher und fünfmal invertieren, um sie zu mischen. Bereiten Sie anschließend die Standardkurve in zwei Milliliter-Schraub-Top-Auto-Sampler-Fläschchen vor, wie im Textprotokoll beschrieben.Um beispielsweise Standard sieben vorzubereiten, fügen Sie 0,2 Milliliter des 4X7-Lagers zu einer Zwei-Milliliter-Durchstechflasche hinzu, indem Sie einen Wiederholtpipettor mit einer 0,5-Milliliter-Kapazität verwenden. Fügen Sie 0,6 Milliliter ultrareinheitsionisiertes Wasser mit einem Repeat Pipettor mit einer 1 Milliliter-Kapazitätsspitze hinzu. Die Fläschchen sicher und fünfmal invertieren, um sie zu mischen.Für jede Probe ein 1,5 Milliliter Mikrozentrifugenrohr mit 200 bis 300 Milligramm Natriumchlorid zubereiten und die Rohre in einem 80-Positionen-Kunststoffregal anordnen. Etikettieren Sie für jede Probe ein 1,5 Milliliter Mikrozentrifugenrohr als A und ein zweites Mikrozentrifugenrohr als B.Arrange the tubes in a 80 position plastic rack. Legen Sie die folgenden Materialien und Ausrüstungen für die Serumextraktion in einen Biosicherheitsschrank der Klasse zwei: die Mikrozentrifugenrohre, einen Wirbelmischer, einen Repeat Pipettiergerät mit 0,5 Milliliter und fünf Milliliter Fassungsspitzen, eine 100 bis 1000 Mikroliter Luftverdrängungspipette mit 1000 Mikroliter Spitzen, Behälter mit jeweils ca. 100 Milliliter n.V. verdünntem und ultrareiniger ionisiertes Wasser und Biorisikobehälter.Als nächstes entfernen Sie Serumproben aus der tiefgefrorenen Lagerung und wärmen Sie sich auf Raumtemperatur im Biosicherheitsschrank. Wirbel mischen Sie jede Serumprobe vor der Probenahme. Mit einem Repeat Pipettor mit einer 0,5-Milliliter-Kapazitätsspitze 05 Milliliter Mongoserum in Tube A geben und 05 Milliliter des 25-fachen Ersatzstocks hinzufügen.Dann fügen Sie 0,95 Milliliter Verdünnungsmittel zu Rohr A mit einem Repeat Pipettor mit einer Fünf-Milliliter-Kapazitätsspitze. Die Rohre sicher verkapseln und 10 bis 15 Sekunden lang wirbeln. Als Nächstes fügen Sie das Kontrollmongooseserum zu Tube A.Fortify jede der 4QC-Proben mit me-IPA mit einem Repeat Pipettor mit einer 0,5 Milliliter Kapazität Spitze.Fügen Sie den QC-Proben 25-fache Ersatzbestände hinzu. Fügen Sie dann das Verdünnern zu den QC-Proben hinzu. Kappen Sie die Rohre und Wirbel mischen.Das vorgewogene Natriumchlorid in Tube A geben und dreimal für acht bis zwölf Sekunden mischen. Wischen Sie dann die Außenflächen des Durchstechflaschels mit Rohr A mit 70% Isopropanol ab. Nach dem Entfernen der Proben aus dem Biosicherheitsschrank, Zentrifugenrohr A bei 1200 mal G für eine Minute, um die wässrigen und Acetonitril-Phasen zu trennen.Pipette 0,8 Milliliter der oberen Acetonitrilphase zu Tube B, mit einer 100 bis 1000 Mikroliter Luftverschiebungspipette. Die restliche Lösung in Rohr A in gefährliche Abfälle geben und das leere Rohr in einem biogefährlichen Abfallbehälter entsorgen. Entfernen Sie nun Acetonitril und Trifluoresestik aus Röhre B mit einem sanften Fluss von Stickstoffgas in einem 45 Grad Celsius Wasserbad.Fügen Sie 0,25 Milliliter Acetonitril in Tube B mit einem Repeat Pipettor und Wirbelmischung für vier bis fünf Sekunden. Dann Zentrifuge bei 1200 mal G für zwei bis vier Sekunden, um die Flüssigkeit in der Unterseite des Rohres zu sammeln. Nach der Zentrifugation 0,75 Milliliter ultrareines deionisiertes Wasser mit einem Repeat Pipettor mit einer Fünf-Milliliter-Kapazität und Wirbelmischung für vier bis fünf Sekunden in Tube B hinzufügen.Zentrifuge bei 1200 mal G für eine Minute, um die Probe zu klären. Dann 0,75 Milliliter des Überstandes mit einer 1000-Mikroliter-Luftverdrängungspipette in eine Auto-Probe-Durchstechflasche geben und die Pipettenspitzen im Biohazard-Abfallbehälter entsorgen. Kappen Sie jede Auto-Sampler-Durchstechflasche sicher für die LC-MS/MS-Analyse.Die restliche Lösung in Rohr B in gefährliche Abfälle geben und das leere Rohr in einem Biogefahrabfallbehälter entsorgen. Konfigurieren Sie den LC-MS/MS mit allen im Textprotokoll beschriebenen Parametern. Schalten Sie den LC-MS/MS ein und lassen Sie die Säule 70 Grad Celsius erreichen, bevor Sie den Durchfluss auf 0,8 Milliliter pro Minute einstellen.Richten Sie eine Sequenz in der Datenerfassungssoftware ein, um die Standardkurve vor und nach jedem Stapel zu injizieren, die aus Qualitätskontrollproben und unbekannten Proben besteht. Injizieren Sie alle Normen und Proben und erfassen Sie MR-Ionenchromatogramme anhand der im Textprotokoll aufgeführten Parameter. Schalten Sie nach Abschluss der Sequenz den LC-MS/MS aus und entsorgen Sie alle Auto-Probenehmer-Fläschchen in gefährlichen Abfällen.Das Ionenchromatogramm des Kontrollmongooseserums veranschaulicht die Retentionszeit von Ethyl-IPA und das Fehlen von Methyl-IPA zur angegebenen Retentionszeit. Das Ionenchromatogramm der Qualitätskontrollprobe veranschaulicht die Basistrennung von Methyl-IPA von Ethyl-IPA sowie die Quantifizier- und Qualifiziererübergänge für Methyl-IPA. Das Ionenchromatogramm der repräsentativen Probe aus der Studie zeigt eine beobachtete Serumkonzentration von 33,5 Mikrogramm pro Mikroliter Methyl-IPA.Die Genauigkeits- und Präzisionsergebnisse für mit Methyl-IPA angereichertes Kontrollmangusteserum werden hier gezeigt. Die prozentuale Erholung lag zwischen 96,9 und 109 %Die relative Abweichung von 3,4 % betrug 3,4 %1,7 % bzw. 2,3 %. Die Genauigkeits- und Präzisionsergebnisse für mit Ethyl-IPA angereichertes Kontrollmangusteserum werden hier gezeigt.Die prozentuale Erholung reichte von 89,5 bis 115%Die relative Standardabweichung von 4,3% betrug 4,3%1,5%2,3%5,6% bzw. 1,1%. Alle Gänse, die Ethyl-IPA- und Methyl-IPA-Köder anboten, verbrauchten innerhalb der 24-Stunden-Zeitbeschränkung mindestens 25 % des Köders und wiesen quantifizierbare Ethyl-IPA- und Methyl-IPA-Werte in ihren Seren auf. Der potenzielle Nutzen der Methode könnte erhöht werden, indem der LC-MS so konfiguriert wird, dass Daten für andere Iophenoxsäureanaloga wie Propyl- und Butyl-Iophenoxsäure gesammelt werden.Wir haben das Personal aufgefordert, die jüngsten Empfehlungen des Beratenden Ausschusses für Impfpraktiken oder seines institutionellen Ausschusses für biologische Sicherheit zu konsultieren, um Zusagen zu erhalten, ob eine Vorexpositionsimpfung für Tollwut erforderlich ist. Die Abschnitte 2.3 bis 2.6 dieses Protokolls, das die Arbeit mit unverdünntem Serum beinhaltet, sollten in einem Biosicherheitsschrank der Klasse 2 durchgeführt werden.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose (Herpestes Auropunctatus) Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker

An Analytical Tool-box for Comprehensive Biochemical, Structural and Transcriptome Evaluation of Oral Biofilms Mediated by Mutans Streptococci

Ein analytisches Werkzeug-Box für umfassende biochemische, strukturelle und Transkriptom Evaluation of Oral Biofilme von Mutans Streptokokken Mediated

Biofilms are highly dynamic, organized and structured communities of microbial cells enmeshed in an extracellular matrix of variable density and ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

Introducing Schubspannung in der Studie der bakteriellen Adhäsion

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

Eine Einführung in die parasitischen Wespen<em&gt; Drosophila</em&gt; Und die antiparasitäre Immune Response

Most known parasitoid wasp species attack the larval or pupal stages of Drosophila. While Trichopria drosophilae infect the pupal stages of the host (Fig. ...

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization (LNA flow-FISH): a Method for Bacterial Small RNA Detection

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization LNA flow-FISH: a Method for Bacterial Small RNA Detection

Locked Nucleic Acid Durchflusszytometrie-Fluoreszenz In situ Hybridisierung (LNA Flow-FISH): Eine Methode für die bakterielle RNA-Detektion

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a powerful technique that is used to detect and localize specific nucleic acid sequences in the cellular ...

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Die Verwendung von<em&gt; Galleria mellon</em&gt; Als Modellorganismus zum Studium<em&gt; Legionella pneumophila</em&gt; Infektion

Legionella pneumophila, the causative agent of a severe pneumonia named Legionnaires&#39; disease, is an important human pathogen that infects and ...

Intralymphatic Immunotherapy and Vaccination in Mice

Intralymphatische Immuntherapie und Impfungen bei Mäusen

Vaccines are typically injected subcutaneously or intramuscularly for stimulation of immune responses. The success of this requires efficient drainage of ...

Porphyromonas gingivalis as a Model Organism for Assessing Interaction of Anaerobic Bacteria with Host Cells

Porphyromonas gingivalis as a Model Organism for Assessing Interaction of Anaerobic Bacteria with Host Cells

Porphyromonas gingivalis als Modellorganismus für die Beurteilung der Interaktion von anaeroben Bakterien mit Wirtszellen

Anaerobic bacteria far outnumber aerobes in many human niches such as the gut, mouth, and vagina. Furthermore, anaerobic infections are common and ...

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Einrichtung eines Setup-Hochdurchsatz-Screening für kleine Moleküle, die Modulate c-di-GMP-Signalisierung in<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em

Bacterial resistance to traditional antibiotics has driven research attempts to identify new drug targets in recently discovered regulatory pathways. ...

In Vitro Methods for Comparing Target Binding and CDC Induction Between Therapeutic Antibodies: Applications in Biosimilarity Analysis

In Vitro Methods for Comparing Target Binding and CDC Induction Between Therapeutic Antibodies: Applications in Biosimilarity Analysis

In - vitro - Methoden zum Vergleich der Zielbindungs und CDC Induktion zwischen Therapeutische Antikörper: Anwendungen in Biosimilarity Analyse

Therapeutic monoclonal antibodies (mAbs) are relevant to the treatment of different pathologies, including cancers. The development of biosimilar mAbs by ...

In Vitro ELISA Test to Evaluate Rabies Vaccine Potency

In Vitro ELISA-Test zur Bewertung der Wirksamkeit von Tollwut-Impfstoffen

The growing global concern for the animal welfare is encouraging manufacturers and the National Control Laboratories (OMCLs) to follow the 3Rs strategy ...