Name: analysis of iophenoxic acid analogues in small indian mongoose (herpestes auropunctatus) sera for use as an oral rabies vaccination biological marker
Uploaded: 2019-05-31T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose Herpestes Auropunctatus Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker at JoVE.co

מחקר זה נתמך בחלקו על ידי תוכנית המחקר הפנים של מחלקת החקלאות של ארה ב, בעלי חיים ובריאות הצמח שירות, שירותי חיות הבר, התוכנית לניהול כלבת לאומי IDT ביולוגיקה (Dessau-Rosslau, גרמניה).

כל ההליכים אושרו על ידי ועדת המחקר הלאומית של משרד החקלאות של המרכז לחקר החי והשימוש תחת פרוטוקול מחקר מאושר QA-2597.
הערה: הפרוטוקול הבא מתאר את נוהל הניתוח כדי לזהות חומצה מללית בסרום נמייה. שיטה זו היא הגרסה הסופית של תהליך איטראטיבי שהחל בניתוח של חומצה אתיל-מורקסימית בסרום...

<ol>
	<li>Nel, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mongoose+rabies+in+southern+Africa:+a+re-evaluation+based+on+molecular+epidemiology.">Mongoose rabies in southern Africa: a re-evaluation based on molecular epidemiology.</a> Virus Research. 109 (2), 165-173 (2005).</li><li>Zieger, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+phylogeography+of+rabies+in+Grenada,+West+Indies,+and+implications+for+control.">The phylogeography of rabies in Grenada, West Indies, and implications for control.</a> PLOS Neglected Tropical Diseases. 8 (10), e3251 (2004).</li><li>Monroe, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+surveillance+in+the+United+States+during+2014.">Rabies surveillance in the United States during 2014.</a> Journal of the American Veterinary Medical Association. 248 (7), 777-788 (2015).</li><li>Slate, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Status+of+oral+rabies+vaccination+in+wild+carnivores+in+the+United+States.">Status of oral rabies vaccination in wild carnivores in the United States.</a> Virus Research. 111, 68-76 (2005).</li><li>Blanton, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccination+of+small+Asian+mongoose+(Herpestes+javanicus)+against+rabies.">Vaccination of small Asian mongoose (Herpestes javanicus) against rabies.</a> Journal of Wildlife Diseases. 42 (3), 663-666 (2006).</li><li>Vos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+vaccination+of+captive+small+Indian+mongoose+(Herpestes+auropunctatus)+against+rabies.">Oral vaccination of captive small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus) against rabies.</a> Journal of Wildlife Diseases. 49 (4), 1033-1036 (2013).</li><li>Berentsen, A. R., Johnson, S. R., VerCauteren, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+ONRAB&#174;+bait+matrix+flavor+preference+by+mongoose+(Herpestes+auropunctatus)+in+Puerto+Rico:+Implications+for+Oral+Rabies+Vaccination.">Evaluation of ONRAB&#174; bait matrix flavor preference by mongoose (Herpestes auropunctatus) in Puerto Rico: Implications for Oral Rabies Vaccination.</a> Caribbean Journal of Science. 48 (1), 52-58 (2014).</li><li>Ortmann, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+studies+with+the+oral+rabies+virus+vaccine+strain+SPBN+GASGAS+in+the+small+Indian+mongoose+(Herpestes+auropunctatus).">Safety studies with the oral rabies virus vaccine strain SPBN GASGAS in the small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus).</a> BMC Veterinary Research. 14 (1), 90 (2018).</li><li>Linhart, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+field+evaluation+of+baits+for+delivering+oral+rabies+vaccines+to+raccoons+(Procyon+lotor).">A field evaluation of baits for delivering oral rabies vaccines to raccoons (Procyon lotor).</a> Journal of Wildlife Diseases. 30 (2), 185-194 (1994).</li><li>Fry, T. L., Atwood, T., Dunbar, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+rhodamine+B+as+a+biomarker+for+raccoons.">Evaluation of rhodamine B as a biomarker for raccoons.</a> Human Wildlife Interactions. 4 (2), 275-280 (2010).</li><li>Jones, C., Moller, H., Hamilton, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+potential+techniques+for+identifying+individual+stoats+(Mustela+erminea)+visiting+control+or+monitoring+stations.">A review of potential techniques for identifying individual stoats (Mustela erminea) visiting control or monitoring stations.</a> New Zealand Journal of Zoology. 31 (3), 193-203 (2004).</li><li>de Leeuw, A. N. S., Smith, G. C., Woods, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+iophenoxic+acid+to+assess+bait+uptake+by+European+badgers.">Use of iophenoxic acid to assess bait uptake by European badgers.</a> Advances in Vertebrate Pest Management. 4, 243-254 (2006).</li><li>Southey, A. K., Sleeman, D. P., Gormley, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sulfadimethoxine+and+rhodamine+B+as+oral+biomarkers+for+European+badgers+(Meles+meles).">Sulfadimethoxine and rhodamine B as oral biomarkers for European badgers (Meles meles).</a> Journal of Wildlife Diseases. 38 (2), 378-384 (2002).</li><li>Massei, G., Jones, A., Platt, T., Cowan, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+Acid+as+a+Long-Term+Marker+for+Wild+Boar.">Iophenoxic Acid as a Long-Term Marker for Wild Boar.</a> Journal of Wildlife Management. 73 (3), 458-461 (2009).</li><li>Creekmore, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Field+evaluation+of+baits+and+baiting+strategies+for+delivering+oral+vaccine+to+mongooses+in+Antigua,+West+Indies.">Field evaluation of baits and baiting strategies for delivering oral vaccine to mongooses in Antigua, West Indies.</a> Journal of Wildlife Diseases. 30 (4), 497-505 (1994).</li><li>Creekmore, T. E., Rock, R. E., Hurley, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+baiting+system+for+delivery+of+an+oral+plague+vaccine+to+black-tailed+prairie+dogs.">A baiting system for delivery of an oral plague vaccine to black-tailed prairie dogs.</a> Journal of Wildlife Diseases. 38 (1), 32-39 (2002).</li><li>Fernandez, J. R. R., Rocke, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Rhodamine+B+as+a+biomarker+for+oral+plague+vaccination+of+prairie+dogs.">Use of Rhodamine B as a biomarker for oral plague vaccination of prairie dogs.</a> Journal of Wildlife Diseases. 47 (3), 765-768 (2011).</li><li>Johnston, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+and+significance+of+tetracycline+stability+in+rabies+vaccine+baits.">Evaluation and significance of tetracycline stability in rabies vaccine baits.</a> Journal of Wildlife Diseases. 41 (3), 549-558 (2005).</li><li>Algeo, T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+rabies+vaccination+variation+in+tetracycline+biomarking+among+Ohio+Raccoons.">Oral rabies vaccination variation in tetracycline biomarking among Ohio Raccoons.</a> Journal of Wildlife Diseases. 49 (2), 332-337 (2013).</li><li>Crier, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetracyclines+as+a+fluorescent+marker+in+bones+and+teeth+of+rodents.">Tetracyclines as a fluorescent marker in bones and teeth of rodents.</a> Journal of Wildlife Management. 34 (4), 829-834 (1970).</li><li>Fisher, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+using+Rhodamine+B+as+a+marker+for+wildlife+studies.">Review of using Rhodamine B as a marker for wildlife studies.</a> Wildlife Society Bulletin. 27 (2), 318-329 (1999).</li><li>Knowlton, F. K., Savarie, P. J., Wahlgren, C. E., Hayes, D. J., Shumake, S. A., Bullard, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+marks+by+coyotes+ingesting+baits+containing+iophenoxic+acid,+Mirex+and+Rhodamine+B.">Physiological marks by coyotes ingesting baits containing iophenoxic acid, Mirex and Rhodamine B.</a> Vertebrate Pest Control and Management Materials. , 141-147 (1987).</li><li>Follmann, E. H., Savarie, P. J., Ritter, D. G., Baer, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+marking+of+arctic+foxes+with+iophenoxic+acid.">Plasma marking of arctic foxes with iophenoxic acid.</a> Journal of Wildlife Diseases. 23 (4), 709-712 (1987).</li><li>Saunders, G., Harris, S., Eason, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+acid+as+a+quantitative+bait+marker+for+foxes.">Iophenoxic acid as a quantitative bait marker for foxes.</a> Wildlife Research. 20, 297-302 (1993).</li><li>Hadidian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acceptance+of+simulated+oral+rabies+vaccine+baits+by+urban+raccoons.">Acceptance of simulated oral rabies vaccine baits by urban raccoons.</a> Journal of Wildlife Diseases. 25 (1), 1-9 (1989).</li><li>Sweetapple, P. J., Nugent, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+acid+as+a+serum+marker+for+red+deer+(Cervus+elaphus+scoticus).">Iophenoxic acid as a serum marker for red deer (Cervus elaphus scoticus).</a> Wildlife Research. 25, 649-654 (1998).</li><li>Ogilvie, S. C., Eason, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+iophenoxic+acid+and+rhodamine+B+for+marking+feral+ferrets+(Mustela+furo).">Evaluation of iophenoxic acid and rhodamine B for marking feral ferrets (Mustela furo).</a> New Zealand Journal of Zoology. 25 (2), 105-108 (1998).</li><li>Eason, C. T., Batcheler, D., Frampton, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+pharmacokinetics+of+iophenoxic+acid+in+cats+and+brushtail+possums.">Comparative pharmacokinetics of iophenoxic acid in cats and brushtail possums.</a> Wildlife Research. 21, 377-380 (1994).</li><li>Fisher, P. M., Marks, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+iophenoxic+acid+as+a+biomarker+for+swamp+wallabies+(Wallabia+bicolor).">Evaluation of iophenoxic acid as a biomarker for swamp wallabies (Wallabia bicolor).</a> Wildlife Research. 24, 97-103 (1997).</li><li>Baer, G. M., Shaddock, J. H., Hayes, D. J., Savarie, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+acid+as+a+serum+marker+in+carnivores.">Iophenoxic acid as a serum marker in carnivores.</a> Journal of Wildlife Management. 49 (1), 49-51 (1985).</li><li>Spurr, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+acid+as+a+systemic+blood+marker+for+assessment+of+bait+acceptance+by+stoats+(Mustela+ermine)+and+weasels+(Mustela+nivalis).">Iophenoxic acid as a systemic blood marker for assessment of bait acceptance by stoats (Mustela ermine) and weasels (Mustela nivalis).</a> New Zealand Journal of Zoology. 29 (2), 135-142 (2002).</li><li>Mudge, G. H., Strewler, G. J., Desbiens, N., Berndt, W. O., Wade, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excretion+and+distribution+of+iophenoxic+acid.">Excretion and distribution of iophenoxic acid.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 178 (1), 159-172 (1971).</li><li>Jones, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-performance+liquid+chromatographic+determination+of+iophenoxic+acid+in+serum.">High-performance liquid chromatographic determination of iophenoxic acid in serum.</a> Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications. 654 (2), 293-296 (1994).</li><li>Wiles, M. C., Campbell, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liquid+chromatography-electrospray+ionization+mass+spectrometry+for+direct+identification+and+quantification+of+iophenoxic+acid+in+serum.">Liquid chromatography-electrospray ionization mass spectrometry for direct identification and quantification of iophenoxic acid in serum.</a> Journal of Chromatography B. 832 (1), 144-157 (2006).</li><li>Ballesteros, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+by+LC/ESI-MS+of+iophenoxic+acid+derivatives+and+evaluation+as+markers+of+oral+baits+to+deliver+pharmaceuticals+to+wildlife.">Analysis by LC/ESI-MS of iophenoxic acid derivatives and evaluation as markers of oral baits to deliver pharmaceuticals to wildlife.</a> Journal of Chromatography B. 878 (22), 1997-2002 (2010).</li><li>Purdey, D. C., Petcu, M., King, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+protocol+for+detecting+two+systemic+bait+markers+(Rhodamine+B+and+iophenoxic+acid)+in+small+mammals.">A simplified protocol for detecting two systemic bait markers (Rhodamine B and iophenoxic acid) in small mammals.</a> New Zealand Journal of Zoology. 30 (3), 175-184 (2003).</li><li>Tobin, M. E., Koehler, A. E., Sugihara, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetracyclines+as+a+fluorescent+marker+in+bones+and+teeth+of+rodents.">Tetracyclines as a fluorescent marker in bones and teeth of rodents.</a> Journal of Wildlife Management. 60 (1), 202-207 (1996).</li><li>Briscoe, J. A., Syring, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+for+emergency+airway+and+vascular+access+in+special+species.">Techniques for emergency airway and vascular access in special species.</a> Seminars in Avian and Exotic Pet Medicine. 13 (3), 118-131 (2004).</li><li>Eason, C. T., Frampton, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+plasma+pharmacokinetics+of+iophenoxic+and+iopanoic+acids+in+goat.">The plasma pharmacokinetics of iophenoxic and iopanoic acids in goat.</a> Xenobiotica. 2 (2), 185-189 (1992).</li><li>Hilton, H. E., Dunn, A. M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mongooses: their natural history. , (1967).</li><li>Stevens, C. E., Hume, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Comparative physiology of the vertebrate digestive system. Second edition. , (1995).</li><li>National Rabies Management Program (NRMP). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Oral rabies vaccination draft operations manual. , (2009).</li></ol>

השיטה LC-MS/MS שפותחה עבור המחקרים ניצל את הסלקטיביות של ניטור תגובה מרובה כדי לכמת את me-IPA ו-et-IPA בסרום נמייה. הסלקטיביות של זיהוי MS/MS מותר גם עבור פרוטוקול ניקוי פשוט להסתמך רק על acetonitrile כדי לזרז חלבונים מסרום לפני ניתוח.
החומצות הפוקסיאיות מסיסים ב-ACN אך הן כמעט לא מסיסות במים. כ...

וירוס כלבת (RABV) הוא הגיון שלילי אחד שנתקע lyssavirus, ו מסתובב בין מינים שונים של מאגר חיות הבר בתוך הזמנות טורפים וכפות. מינים מרובים של נמייה הם מאגרים של RABV, והנמייה ההודית הקטנה (הרסוויס אורובוטאוס) היא המאגר היחיד בפוארטו ריקו ובאיים הקאריביים בחצי הכדור המערבי1,2,3 . השליטה על מחזור RABV במאגרים של חיות הבר מושגת בדרך כלל באמצעות אסטרטגיה של חיסון נגד כלבת (ORV). בארצות הברית (ארה ב), פעילות ניהול זו מתואמת על ידי התוכנית לניהול כלבת משרד החקלאות/שירותי הטבע (NRMP)4. כרגע אין תוכנית ORV חיות בר קיים בפורטו ריקו. מחקר לחיסונים כלבת וסוגי פיתיון שונים עבור מונגוז נערך עם תוצאות מבטיחות המציעה תוכנית orv עבור מונגוז אפשרי5,6,7,8.
ניטור ההשפעה של ORV מסתמך על אומדן ספיגת הפיתיון על ידי מינים היעד, אשר בדרך כלל כרוך בהערכת שינוי של נוגדן RV seroprevalence. עם זאת, אסטרטגיה זו עשויה להיות מאתגרת באזורים עם תוכניות בעלי חיים הפעיל ORV או באזורים שבהם RV הוא ברמות הרקע enzootic ו של בעלי החיים לנטרול נוגדנים (RVNA) נמצאים מינים מאגר. במצבים כאלה, ניתן לעשות שימוש בסמנים הנכללים בפיתיון או במטריצת הפיתיון החיצונית.
סמנים ביולוגיים שונים שימשו כדי לפקח על ספיגת הפיתיון במינים רבים, כוללדביבונים (procyon לואטור)9,10, stoats (מוסטאלהארמין)11,12, גיריות אירופאיות ( מלוז מלכים) 13, חזירי בר (סוס)14, מונגוז הודית קטנה15 וכלבי ערבה (קינויסלדוסינוס)16,17, בין היתר. בארה ב, מבצעי orv בבית לעתים קרובות כוללים 1% טטרציקלין ביוארקר במטריקס הפיתיון כדי לפקח על ספיגת הפיתיון18,19. עם זאת, החסרונות לשימוש טטרציקלין כוללים דאגה גוברת על התפלגות של אנטיביוטיקה לסביבה ואיתור של טטרציקלין הוא פולשני בדרך כלל, המחייב שאיבת שיניים או הרס של בעל החיים כדי להשיג עצם . דוגמיות של20 Rhodamine B כבר הוערך כסמן במגוון של רקמות ניתן להבחין באמצעות אולטרה סגול (UV) אור וזריחה בשיער ושפמונים10,21.
חומצה וולקסימית (IPA) היא אבקה לבנה וגבישית ששימשו להערכת צריכת הפיתיון בזאבי ערבות (כלב לאטטרנס)22, שועל ארקטי (וולפסי לגונה)23,שועל אדום (וולפסי)24, דביבונים מיכל בן 10 , 25, בר חזיר14, צבאים אדומים (סרבייוס אלאפיוס סקוקוס)26, גיריות אירופאיות12 וחמוסים (מ. furo)27, בין מינים אחרים של יונקים. זמני שמירה של IPA משתנה על ידי מינים מתוך פחות משבועיים בכמה חיות כיס28,29, לפחות 26 שבועות בפרסתנים26 ומעל 52 שבועות כלבים ביתיים (כלב זאב משפחה)30. זמני השמירה עשויים להיות גם תלויים במינון31. חומצה והאנקסימית נקשר בחוזקה לאלבומין הנסיוב והוא זוהה היסטורית על ידי מדידת רמות יוד בדם32. גישה עקיפה זו הייתה מתבצעת באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים כדי למדוד במישרין את ריכוזי החומצה המיאוקסיליים עם זיהוי UV33, ובסופו של דבר עם כרומטוגרפיה נוזלית וספקטרומטר מסה (lcms) . 34,35. עבור מחקר זה, כרומטוגרפיה מאוד רגיש וסלקטיבי של נוזל עם מספר ספקטרומטר מאסיבי (LC-MS/MS) שיטת פותחה העושה שליטה מרובה התגובה (MRM) כדי לכמת שני אנמים אנלוגיים של חומצה ולבן. המטרה שלנו היתה להשתמש בשיטה זו LC-MS/MS כדי להעריך את היכולת סימון של 2-(3-הידרוxy-2, 4, 6-טרייודובנזיל חומצה (מתיל-IPA או me-IPA) ו 2-(3-הידרוxy-2, 4, 6-טרייודובנזיל) חומצה בוטאית (אתיל-IPA או et-IPA) וכאשר נמסר ORV פיתיון. למונגוסים שבשבי
מונגוסס היו חיים שנתפסו במלכודות כלוב עם נקניקים מעושנים זמין מסחרית שמן דגים. Mongooses היו שוכנו בודדים 60 ס מ x 60 ס"מ x 40 ס מ כלובי פלדת אל-חלד האכיל הקצבה יומית של ~ 50 g מסחרי מזון חתול יבש, שיושלם פעמיים בשבוע עם ירך עוף זמין מסחרית. . המים היו זמינים לפרסום הבאנו שני נגזרים של IPA, אתיל-ipa ו-מתיל-ipa, בשבי מונגוז ב פלצבו orv baits. כל פיתיונות היו מורכבים 28 מ"מ x 20 מ"מ x 9 מ"מ חבילת שלפוחית לסכל עם ציפוי חיצוני (להלן" מטריצה הפיתיון ") המכיל אבקת עוף ביצה ו ג'לטין (טבלת חומרים). Baits הכיל 0.7 mL של נגזרות מים או IPA ושקל כ 3 גרם, אשר ~ 2 g היה מטריצה הפיתיון החיצוני.
הצענו 16 בשבי מונגוז-IPA בשלושה ריכוזים 0.14% (2.8 מ ג et-IPA ב ~ 2 g מטריצה פיתיון; 3 גברים [m], 3 נקבות [f]), 0.4% (2.8 mg et-IPA ב-0.7 mL חבילת נפח שלפוחית; 3m, 3m), ו-1.0% (7.0 mg אתיל-IPA בשנת 0.7 שלפוחית לארוז נפח; 2m , 2f). המינון הכולל של 2.8 mg מקביל לשיעור מינון של 5 מ"ג/ק"ג27,36 והוא מבוסס על משקל נמייה ממוצע של 560 g בפורטו ריקו. בחרנו 1% כריכוז הגבוה ביותר כמו מחקר מרמז על שנאת הטעם כמה בסמנים עשויים להתרחש בריכוזים > 1% מינים מסוימים37. הצענו את המנה היחידה בחבילת השלפוחית כחומר מונע את המסיסות מלהתמוסס בממס מספיק כדי להיות משולב באופן שווה לתוך מטריצת הפיתיון. קבוצת שליטה אחת (2m, 1f) קיבלה פיתיונות מלא מים סטרילי ללא IPA. הצענו פיתיונות למונגוסס בבוקר (~ 8 בבוקר) במהלך או לפני האכלה הקצבה היומית שלהם. שרידי הפיתיון הוסרו לאחר כ -24 שעות. אספנו דגימות דם לפני טיפול, יום אחד לאחר הטיפול ולאחר מכן שבועי עד 8 שבועות לאחר הטיפול. אנו מלדמים מונגוז על ידי שאיפת של גז isof, ונאסף עד 1.0 mL של דם שלם על ידי והניקוב של הווריד הגולגולתית כפי שתוארה עבור חמוסים38. אנחנו centrifuged דגימות דם שלמות, העבירו את סרה לקריובקבוקונים ואחסנו אותם ב-80 ° צ' עד לניתוח. לא כל החיות נדגמו במהלך כל פרקי הזמן כדי למזער את ההשפעות של הדם החוזר על בריאותם של בעלי החיים. שליטה בעלי חיים שנדגמו ביום 0, ואז שבועי של עד 8 שבועות לאחר הטיפול.
שמנו אותי-IPA בשלושה ריכוזים: 0.035% (0.7 mg), 0.07% (1.4 mg) ו-0.14% (2.8 mg), כל שולבו בתוך מטריצה הפיתיון, עם 2 זכרים ו-2 נקבות לכל קבוצת הטיפול. שני זכרים ושתי נקבות קיבלו את המנה המלאה במים סטריליים ובלי IPA. שעות ההנפקה וההרדמה מתוארות לעיל. אספנו דגימות דם לפני טיפול ביום 1, ולאחר מכן שבוע עד 4 שבועות לאחר הטיפול.
בדקנו את הסרום מידע עבור נורמליות ואמצעים מוערכים עבור ריכוזי הסרום IPA של קבוצות טיפול שונות. השתמשנו במודל מעורב ליניארי כדי להשוות ריכוזי הסרום et-IPA במאגר על פני אנשים. סוג פיתיון (מטריקס/שלפוחית pack) היה השפעה קבועה בנוסף ליום ניסיוני, בעוד מזהה בעלי חיים היה השפעה אקראית. כל ההליכים הנוהלים באמצעות תוכנה סטטיסטיתמשותפת (טבלת חומרים) ומשמעות הוערך ב α = 0.05.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1036px;" width="1036">
	<tbody>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">Acetonitrile, Optima grade</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">A996</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">Analytical balance</td>
			<td style="width:193px;">Mettler Toledo</td>
			<td style="width:304px;">XS204</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:380px;">C18 column, 2.1 x 50 mm, 2.5-&#181;m particle size</td>
			<td style="width:193px;">Waters Corp.</td>
			<td style="width:304px;">186003085</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">ESI Source</td>
			<td style="width:193px;">Agilent&#160;</td>
			<td style="width:304px;">G1958-65138</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:380px;">Ethyl-iophenoxic acid, 97 %</td>
			<td style="width:193px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;">Lot MKBP5399V</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:380px;">Formic acid, LC/MS grade</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">A117</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:380px;">LCMS software</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">MassHunter Data Acquisition and Quantitative Analysis</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:380px;">Methyl-iophenoxic acid, 97 % (w/w)</td>
			<td style="width:193px;">PR EuroChem Ltd.</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;">Lot PR0709514717</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">Microanalytical balance</td>
			<td style="width:193px;">Mettler Toledo</td>
			<td style="width:304px;">XP6U</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">Microcentrifuge</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">5415C</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">MS/MS</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">G6470A</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:380px;">N-Evap</td>
			<td style="width:193px;">Organomation</td>
			<td style="width:304px;">115</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:380px;">Oral Rabies Vaccine Baits</td>
			<td style="width:193px;">IDT Biologika, Dessau Rossleau, Germany</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">Propyl-iophenoxic acid, 99 % (w/w)</td>
			<td style="width:193px;">PR EuroChem Ltd.</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;">Lot PR100612108RR</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:380px;">Repeat pipettor</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">M4</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:380px;">Screw-top autosampler vial caps, PTFE-lined</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">5190-7024</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:25px;width:380px;">Sodium chloride, Certified ACS grade</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">S271</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:380px;">Statistical Software Package</td>
			<td style="width:193px;">SAS Institute, Cary, North Carolina, USA</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:380px;">Trifluoroacetic acid, 99 %</td>
			<td style="width:193px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:304px;">L06374</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;width:380px;">UPLC</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">1290 Series</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:380px;">Vortex Mixer</td>
			<td style="width:193px;">Glas-Col</td>
			<td style="width:304px;">099A PV6</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">0.2-mL pipettor tips</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">30089.413</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">0.5-mL pipettor tips</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">30089.421</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">1.5-mL microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">14-666-325</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:380px;">1250-&#181;L capacity pipette tips</td>
			<td style="width:193px;">GeneMate</td>
			<td style="width:304px;">P-1233-1250</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:380px;">1-mL pipettor tips</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">30089.43</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:380px;">2-mL amber screw-top autosampler vials</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">5182-0716</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">5-mL pipettor tips</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">30089.456</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">80-position microcentrifuge tube rack</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">05-541-2</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:380px;">8-mL amber vials with PTFE-lined caps</td>
			<td style="width:193px;">Wheaton</td>
			<td style="width:304px;">224754</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:380px;">70 % (v/v) isopropanol</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">A459</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">100-1000 &#181;L air displacement pipette</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">ES-100</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of iophenoxic acid analogues in small indian mongoose (herpestes auropunctatus) sera for use as an oral rabies vaccination biological marker

הנמייה ההודית הקטנה היא מאגר של וירוס כלבת (RABV) בפוארטו ריקו, וכוללת מעל 70% ממקרי כלבת בעלי חיים שדווחו מדי שנה. השליטה של מחזור RABV במאגרים של חיות הבר מושגת בדרך כלל על ידי אסטרטגיה של חיסון לכלבת אוראלי (ORV). כרגע אין תוכנית ORV חיות בר קיים בפורטו ריקו. מחקר על חיסונים לכלבת אוראלי וסוגי פיתיון שונים עבור מונגוז נערכו עם תוצאות מבטיחות. ניטור ההצלחה של ORV מסתמך על אומדן ספיגת הפיתיון על ידי מינים היעד, אשר בדרך כלל כרוך בהערכת שינוי ב-RABV נוגדנים נטרול (RVNA) לאחר החיסון. אסטרטגיה זו עלולה להיות קשה לפרש באזורים עם תוכנית החיות הפעיל ORV או באזורים שבהם RABV הוא ברמות הרקע enzootic ו-RVNA הם נמצאים מינים המאגר. במצבים כאלה, משולב בסמנים עם החיסון או מטריצה הפיתיון עשוי להיות שימושי. הצענו 16 בשבי מונגוסס פלצבו ORV המכיל את חומצה אתיל-מאוקסימית (et-IPA) בריכוזים של 0.4% ו 1% בתוך הפיתיון ו 0.14% במטריקס הפיתיון החיצוני. כמו כן, הצענו 12 מונגוז ORV בשבי מכיל חומצה מועלת (me-IPA) בריכוזים של 0.035%, 0.07% ו 0.14% ב מטריצה הפיתיון החיצוני. אספנו דגימת נסיוב לפני הצעת הפיתיון ושבוע לאחר מכן עד שמונה שבועות שלאחר ההנפקה. הצלחנו לחלץ את חומצות הנלואוקמית מסרה לתוך השימוש בספקטרומטר כרומטוגרפיה/ספקטרומטריה כרומטוגרפית נוזלית. בעזרת ספקטרומטר כרומטוגרפיה. נוזלי מאסיבי מצאנו יכולת סימון נאותה לפחות שמונה וארבעה שבועות עבור et-ו-IPA, בהתאמה. נגזרות IPA שני יכול להיות מתאים להערכת שטח של ספיגת פיתיון ORV ב mongooses. בשל תוחלת החיים של הסמן ב נמייה, הטיפול חייב להילקח כדי לא לבלבל את התוצאות באמצעות נגזרות IPA אותו במהלך הערכות רצופות.

כרומטוגרמות מייצגת מתוך ניתוח me-IPA מוצגות באיור 1. סרום נמייה השליטה (איור 1A) ממחיש את זמן השמירה של ET-ipa (מחליף) והעדר ME-ipa בזמן ההחזקה המצוין. דגימת בקרת האיכות (איור 1B) ממחישה את ההפרדה הבסיסית של ME-ipa מ-ET-ipa וכן את מעברי הקוונט ...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose Herpestes Auropunctatus Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker at JoVE.co

Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose Herpestes Auropunctatus Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker

הצענו בשבי מונגוז פלצבו בכלבת אוראלי חיסון פיתיונות עם החומצה אתיל או מתיל בצורת ביוארקר וספיגת פיתיון מאומת באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית הרומן עם טנדם המסה (LC-ms/MS) שיטה.

ניתוח של חומצה והידרוקסימית מקבילים בנמייה הודית קטנה (הרבלס) סרה לשימוש בתור חיסון בעל פה כלבת מרקר ביולוגי

The small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus) is a reservoir of rabies virus (RABV) in Puerto Rico and comprises over 70% of animal rabies cases ...

התווינו הליך לגילוי וכימות של חומצה איופונוקסית בסרום נמייה. התוצאות מראות כי חומצה iophenoxic עשוי לשמש סמן ביולוגי כדי לאמת ספיגת בטא במין. היתרון העיקרי של שיטה זו הוא שהיא מאפשרת כימות של אנלוגים חומצה iophenoxic בחלקים לכל מיליארד רמות, באמצעות פשוט לבצע טכניקת משקעים חלבון.עבור שלב A נייד, לשלב מיליליטר אחד של חומצה פורמית עם ליטר אחד של מים טהורים במיוחד. עבור שלב B נייד, לשלב מיליליטר אחד של חומצה פורמית עם ליטר אחד של אצטוניטריל. עבור diluent, לשלב מיליליטר אחד של חומצה trifluoroacetic עם 200 מיליליטר של אצטוניטריל.לאחר מכן, לשקול כ 10 מיליגרם של מתיל-IPA על מיקרו איזון, ולהקליט את המסה פלוס או מינוס 0001 מיליגרם. מעבירים באופן כמותי את המתיל-IPA לבקבוק נפח מסוג A בנפח 10 מיליליטר, תוך שימוש בארבעה עד חמישה מיליליטר של אצטוניטריל. Sonicate במשך דקה אחת כדי להמיס את כל המוצקים ולאחר מכן להביא נפח עם אצטוניטריל.מעבירים כשמונה מיליליטר של כל מלאי לשמונה בקבוקוני זכוכית ענבר מיליליטר עם כובעים מצופים PTFE ולאחסן את הדגימות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, להעביר את המלאי הנותר לפסולת מסוכנת. עבור מניית 25X שבע מניות מתיל-IPA להכין מלאי של מתיל-IPA ואצטוניטריל בכ 200 מיקרוגרם למיליליטר.מעבירים מיליליטר אחד של המניה לבקבוק חמישה מיליליטר ומדללים לנפח עם אצטוניטריל. לאחר מכן, להעביר את המלאי לבקבוקון זכוכית ענבר שמונה מיליליטר עם כובע מצופה PTFE ולאחסן בטמפרטורת החדר. באמצעות pipettor חוזר, להכין את שש מניות מתיל-IPA 25X נוספות המתוארות בפרוטוקול הטקסט בשמונה בקבוקוני זכוכית ענבר מיליליטר עם כובעים מצופים PTFE ולאחסן בטמפרטורת החדר.עבור מלאי פונדקאית 25X, להעביר 0.1 מיליליטר של מלאי אתיל-IPA מרוכז לבקבוק נפח מחלקה 10 מיליליטר באמצעות מזרק זכוכית 100 microliter ולאחר מכן לדלל לנפח עם אצטוניטריל. מעבירים כשמונה מיליליטר של המלאי הפונדקאי לבקבוקון זכוכית ענבר 8 מיליליטר עם כובע מצופה PTFE ומאחסנים בטמפרטורת החדר. העבר את המלאי הנותר לפסולת מסוכנת.לאחר מכן, הכינו מניות 4X המכילות גם מתיל-IPA וגם אתיל-IPA בבקבוקוני סמפלר אוטומטיים מזכוכית 10 מיליליטר, כמתואר בפרוטוקול הטקסט. לדוגמה, כדי להכין מלאי 4X7, הוסף 0.2 מיליליטר של מלאי 25X שבע מניות מתיל-IPA לבקבוקון שני מיליליטר באמצעות pipettor חוזר עם קצה קיבולת 0.5 מיליליטר. הוסף 0.2 מיליליטר של מלאי אתיל-IPA פונדקאי 25X באמצעות pipettor חוזר עם קצה קיבולת 0.5 מיליליטר.הוסף 0.85 מיליליטר של אצטוניטריל באמצעות צינור חוזר עם קצה קיבולת מיליליטר אחד. מכסים את הבקבוקון בצורה מאובטחת והפוך חמש פעמים כדי לערבב. לאחר מכן, הכן את העקומה הסטנדרטית בשני בקבוקונים אוטומטיים מיליליטר של סמפלר אוטומטי כמתואר בפרוטוקול הטקסט.לדוגמה, כדי להכין שבעה סטנדרטיים, הוסף 0.2 מיליליטר של מלאי 4X7 לבקבוקון שני מיליליטר, באמצעות צינור חוזר עם קצה קיבולת של 0.5 מיליליטר. הוסף 0.6 מיליליטר של מים מיוננים טוהר אולטרה באמצעות pipettor חוזר עם קצה קיבולת מיליליטר אחד. מכסים את הבקבוקונים בצורה מאובטחת והפוך חמש פעמים כדי לערבב.עבור כל מדגם, להכין צינור מיקרו צנטריפוגה 1.5 מיליליטר המכיל 200 עד 300 מיליגרם של נתרן כלורי ולסדר את הצינורות במתלה פלסטיק 80 עמדה. עבור כל מדגם, סמן צינור מיקרו צנטריפוגה מיקרו אחד 1.5 מיליליטר כמו A וצינור מיקרו צנטריפוגה שני כמו B.Arrange הצינורות במתלה פלסטיק 80 עמדה. מניחים את החומרים והציוד הבאים הדרושים להפקת סרום בארונות ביה-בטיחות מדרגה 2: צינורות המיקרו צנטריפוגה, מערבל מערבולת, צינור חוזר עם 0.5 מיליליטר וחמישה טיפים קיבולת מיליליטר, 100 עד 1000 פיפטה תזוזת אוויר microliter עם 1000 טיפים microliter, מיכלים עם כ 100 מיליליטר כל אחד מים מיוננים diluent ו טוהר אולטרה, מיכל פסולת biohazard.לאחר מכן, הסר דגימות סרום מאחסון קפוא וחם לטמפרטורת החדר בארון biosafety. מערבולת מערבבת כל דגימת סרום לפני הדגימה. באמצעות pipettor חוזר עם קצה קיבולת 0.5 מיליליטר, לחלק 05 מיליליטר של סרום נמייה לתוך צינור A ולהוסיף 05 מיליליטר של מלאי פונדקאית 25X.לאחר מכן להוסיף 0.95 מיליליטר של diluent לצינור A באמצעות pipettor חוזר עם קצה קיבולת חמישה מיליליטר. מכסים את הצינורות בצורה מאובטחת ומערבולת מערבבים במשך 10 עד 15 שניות. לאחר מכן, הוסף את סרום נמיית הבקרה לצינור A.Fortify כל אחת מדגימות 4QC עם me-IPA באמצעות pipettor חוזר עם קצה קיבולת 0.5 מיליליטר.הוסף מלאי פונדקאי 25X לדגימות QC. לאחר מכן, הוסף את הדילואנט לדגימות QC. מכסים את הצינורות ואת תערובת המערבולת.מחלקים את הנתרן כלורי ששוקל מראש לצינור A ומערבולת מערבבים שלוש פעמים במשך שמונה עד 12 שניות. לאחר מכן, נגב את המשטחים החיצוניים של ארון התקשורת הבקבוקי המכיל צינור A באמצעות 70% isopropanol. לאחר הסרת הדגימות מן הארון biosafety, צינור צנטריפוגה A ב 1200 פעמים G במשך דקה אחת כדי להפריד את שלבי aqueous ו acetonitrile.פיפטה 0.8 מיליליטר של שלב האצטוניטריל העליון לצינור B, באמצעות פיפטה תזוזת אוויר 100 עד 1000 מיקרוליטר. מעבירים את הפתרון הנותר בצינור A לפסולת מסוכנת ומשליכים את הצינור הריק במיכל פסולת ביולוגית. עכשיו, להסיר אצטוניטריל ו trifluoroacetic מצינור B עם זרימה עדינה של גז חנקן באמבט מים 45 מעלות צלזיוס.מוסיפים 0.25 מיליליטר של אצטוניטריל לצינור B באמצעות צינור חוזר ומערבולת לערבב במשך ארבע עד חמש שניות. לאחר מכן, צנטריפוגה ב 1200 פעמים G במשך שתיים עד ארבע שניות כדי לאסוף את הנוזל בתחתית הצינור. לאחר הצנטריפוגה, להוסיף 0.75 מיליליטר של מים deionized טהור במיוחד צינור B באמצעות pipettor חוזר עם קצה קיבולת חמישה מיליליטר תערובת מערבולת במשך ארבע עד חמש שניות.צנטריפוגה ב 1200 פעמים G לדקה אחת כדי להבהיר את המדגם. לאחר מכן, להעביר 0.75 מיליליטר של supernatant לבקבוקון סמפלר אוטומטי באמצעות פיפטה תזוזת אוויר 1000 מיקרוליטר ולהשליך את טיפים פיפטה במיכל פסולת biohazard. תכסה כל בקבוקון סמפלר אוטומטי בצורה מאובטחת לניתוח LC-MS/MS.מעבירים את הפתרון הנותר בצינור B לפסולת מסוכנת ומשליכים את הצינור הריק במיכל פסולת ביולוגית. קבע את תצורת ה- LC-MS/MS עם כל הפרמטרים המתוארים בפרוטוקול הטקסט. לחץ על LC-MS/MS ואפשר לעמודה להגיע ל- 70 מעלות צלזיוס לפני הגדרת קצב הזרימה ל- 0.8 מיליליטר לדקה.הגדר רצף בתוכנת רכישת הנתונים כדי להזריק את העקומה הסטנדרטית לפני ואחרי כל אצווה המורכבת מדגימות בקרת איכות ודגימות לא ידועות. הזרק את כל התקנים והדגימות והרכוש כרומטוגרמות MR ion באמצעות פרמטרים המפורטים בפרוטוקול הטקסט. לאחר השלמת הרצף, כבה את ה- LC-MS/MS והשליך את כל בקבוקוני הדגימה האוטומטית בפסולת מסוכנת.כרומטוגרמת היונים של סרום נמיית הבקרה ממחישה את זמן השמירה של אתיל-IPA ואת היעדר מתיל-IPA בזמן השמירה המצוין. כרומטוגרמת היונים של דגימת בקרת האיכות ממחישה את ההפרדה הבסיסית של מתיל-IPA מהאתיל-IPA, כמו גם את מעברי הכימות והמזהה עבור מתיל-IPA. כרומטוגרמת היונים של המדגם הייצוגי מהמחקר מראה ריכוז סרום שנצפה של 33.5 מיקרוגרם למיקרוליטר של מתיל-IPA.תוצאות הדיוק והדיוק של סרום נמיית בקרה המבוצר במתיל-IPA מוצגות כאן. אחוזי ההחלמה נעו בין 96.9% ל-109% החריגה היחסית בשלוש רמות הביצורים הייתה 3.4%-1.7% ו-2.3% בהתאמה. תוצאות הדיוק והדיוק עבור סרום נמייה שליטה מבוצר עם אתיל-IPA מוצגים כאן.אחוזי ההחלמה נעו בין 89.5% ל-115% סטיית התקן היחסית בחמש רמות הביצורים הייתה 4.3%1.5%2.3%-5.6% ו-1.1% בהתאמה. כל הנמיות הציעו אתיל-IPA ופיתיונות מתיל-IPA צרכו לפחות 25% מהפיתיון בתוך אילוץ הזמן של 24 שעות, והיתה להם רמות ניתנות לכימות של אתיל-IPA ומתיל-IPA בסרה שלהם, בהתאמה. השירות הפוטנציאלי של השיטה יכול להיות מוגברת על ידי קביעת התצורה של LC-MS כדי לאסוף נתונים עבור אנלוגים אחרים חומצה iophenoxic, כגון פרופיל וחומצה iophenoxic butyl.עודדנו את העובדים להתייעץ עם ההמלצות האחרונות של הוועדה המייעצת על נוהלי חיסון, או ועדת האבטחה הביולוגית המוסדית שלהם להנחיה האם יש צורך בחיסון נגד כלבת. סעיפים 2.3 עד 2.6 של פרוטוקול זה מעורבים עבודה עם סרום לא מזוהה צריך להתבצע בקבינט biosafety בכיתה 2.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose (Herpestes Auropunctatus) Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker

An Analytical Tool-box for Comprehensive Biochemical, Structural and Transcriptome Evaluation of Oral Biofilms Mediated by Mutans Streptococci

כלי אנליטי תיבת להערכת ביוכימיים, מבנית Transcriptome מקיף של Biofilms אוראלי בתיווך Mutans streptococci

Biofilms are highly dynamic, organized and structured communities of microbial cells enmeshed in an extracellular matrix of variable density and ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

היכרות עם מתח שאר בחקר הדבקה חיידקית

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

מבוא של צרעות טפיליות<em&gt; תסיסנית</em&gt; ואת התגובה החיסונית Antiparasite

Most known parasitoid wasp species attack the larval or pupal stages of Drosophila. While Trichopria drosophilae infect the pupal stages of the host (Fig. ...

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization (LNA flow-FISH): a Method for Bacterial Small RNA Detection

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization LNA flow-FISH: a Method for Bacterial Small RNA Detection

נעול חומצות גרעין תזרים cytometry פלואורסצנציה באתרו</emהכלאה> (LNA זרימה FISH): שיטה לגילוי חיידקי RNA קטנים

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a powerful technique that is used to detect and localize specific nucleic acid sequences in the cellular ...

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

שימוש<em&gt; Mellonella Galleria</em&gt; כאורגניזם מודל לחקר<em&gt; הלגיונלה pneumophila</em&gt; זיהום

Legionella pneumophila, the causative agent of a severe pneumonia named Legionnaires&#39; disease, is an important human pathogen that infects and ...

Intralymphatic Immunotherapy and Vaccination in Mice

Intralymphatic חיסוני וחיסון בעכברים

Vaccines are typically injected subcutaneously or intramuscularly for stimulation of immune responses. The success of this requires efficient drainage of ...

Porphyromonas gingivalis as a Model Organism for Assessing Interaction of Anaerobic Bacteria with Host Cells

Porphyromonas gingivalis as a Model Organism for Assessing Interaction of Anaerobic Bacteria with Host Cells

gingivalis Porphyromonas כאורגניזם מודל להערכת אינטראקציה של חיידקים אנאירוביים עם תאי מארח

Anaerobic bacteria far outnumber aerobes in many human niches such as the gut, mouth, and vagina. Furthermore, anaerobic infections are common and ...

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

הקמת הגדרת תפוקה גבוהה להקרנה מולקולות קטנות לווסת ג-di-GMP איתות<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em

Bacterial resistance to traditional antibiotics has driven research attempts to identify new drug targets in recently discovered regulatory pathways. ...

In Vitro Methods for Comparing Target Binding and CDC Induction Between Therapeutic Antibodies: Applications in Biosimilarity Analysis

In Vitro Methods for Comparing Target Binding and CDC Induction Between Therapeutic Antibodies: Applications in Biosimilarity Analysis

שיטות ויטרו להשוואת יעד מחייב CDC אינדוקציה בין נוגדנים טיפוליים: יישומים ניתוח Biosimilarity

Therapeutic monoclonal antibodies (mAbs) are relevant to the treatment of different pathologies, including cancers. The development of biosimilar mAbs by ...

In Vitro ELISA Test to Evaluate Rabies Vaccine Potency

בדיקת מחוץ גופית מבחן להערכת כלבת חיסון עוצמת

The growing global concern for the animal welfare is encouraging manufacturers and the National Control Laboratories (OMCLs) to follow the 3Rs strategy ...