Name: analysis of iophenoxic acid analogues in small indian mongoose (herpestes auropunctatus) sera for use as an oral rabies vaccination biological marker
Uploaded: 2019-05-31T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose Herpestes Auropunctatus Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker at JoVE.co

Denne forskningen ble støttet delvis av intramural forskningsprogram for det amerikanske Landbruksdepartementet, Animal and Plant Health inspeksjon service, Wildlife Services, National rabies Management program og IDT Biologika (Dessau-Rosslau, Tyskland).

Alle prosedyrer ble godkjent av USDA National Wildlife Research Center institusjonelle Animal Care og use Committee under godkjent forskning protokollen QA-2597.
Merk: følgende protokoll beskriver analyse prosedyren for å oppdage metyl-iophenoxic syre i Mongoose serum. Denne metoden er den endelige versjonen av en gjentakende prosess som begynte med analyse av etanol-iophenoxic syre i Mongoose serum. Under den første evalueringen av etanol-iophenoxic yre mindre modifikasjoner ble gjort til ...

<ol>
	<li>Nel, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mongoose+rabies+in+southern+Africa:+a+re-evaluation+based+on+molecular+epidemiology.">Mongoose rabies in southern Africa: a re-evaluation based on molecular epidemiology.</a> Virus Research. 109 (2), 165-173 (2005).</li><li>Zieger, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+phylogeography+of+rabies+in+Grenada,+West+Indies,+and+implications+for+control.">The phylogeography of rabies in Grenada, West Indies, and implications for control.</a> PLOS Neglected Tropical Diseases. 8 (10), e3251 (2004).</li><li>Monroe, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+surveillance+in+the+United+States+during+2014.">Rabies surveillance in the United States during 2014.</a> Journal of the American Veterinary Medical Association. 248 (7), 777-788 (2015).</li><li>Slate, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Status+of+oral+rabies+vaccination+in+wild+carnivores+in+the+United+States.">Status of oral rabies vaccination in wild carnivores in the United States.</a> Virus Research. 111, 68-76 (2005).</li><li>Blanton, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccination+of+small+Asian+mongoose+(Herpestes+javanicus)+against+rabies.">Vaccination of small Asian mongoose (Herpestes javanicus) against rabies.</a> Journal of Wildlife Diseases. 42 (3), 663-666 (2006).</li><li>Vos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+vaccination+of+captive+small+Indian+mongoose+(Herpestes+auropunctatus)+against+rabies.">Oral vaccination of captive small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus) against rabies.</a> Journal of Wildlife Diseases. 49 (4), 1033-1036 (2013).</li><li>Berentsen, A. R., Johnson, S. R., VerCauteren, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+ONRAB&#174;+bait+matrix+flavor+preference+by+mongoose+(Herpestes+auropunctatus)+in+Puerto+Rico:+Implications+for+Oral+Rabies+Vaccination.">Evaluation of ONRAB&#174; bait matrix flavor preference by mongoose (Herpestes auropunctatus) in Puerto Rico: Implications for Oral Rabies Vaccination.</a> Caribbean Journal of Science. 48 (1), 52-58 (2014).</li><li>Ortmann, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+studies+with+the+oral+rabies+virus+vaccine+strain+SPBN+GASGAS+in+the+small+Indian+mongoose+(Herpestes+auropunctatus).">Safety studies with the oral rabies virus vaccine strain SPBN GASGAS in the small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus).</a> BMC Veterinary Research. 14 (1), 90 (2018).</li><li>Linhart, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+field+evaluation+of+baits+for+delivering+oral+rabies+vaccines+to+raccoons+(Procyon+lotor).">A field evaluation of baits for delivering oral rabies vaccines to raccoons (Procyon lotor).</a> Journal of Wildlife Diseases. 30 (2), 185-194 (1994).</li><li>Fry, T. L., Atwood, T., Dunbar, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+rhodamine+B+as+a+biomarker+for+raccoons.">Evaluation of rhodamine B as a biomarker for raccoons.</a> Human Wildlife Interactions. 4 (2), 275-280 (2010).</li><li>Jones, C., Moller, H., Hamilton, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+potential+techniques+for+identifying+individual+stoats+(Mustela+erminea)+visiting+control+or+monitoring+stations.">A review of potential techniques for identifying individual stoats (Mustela erminea) visiting control or monitoring stations.</a> New Zealand Journal of Zoology. 31 (3), 193-203 (2004).</li><li>de Leeuw, A. N. S., Smith, G. C., Woods, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+iophenoxic+acid+to+assess+bait+uptake+by+European+badgers.">Use of iophenoxic acid to assess bait uptake by European badgers.</a> Advances in Vertebrate Pest Management. 4, 243-254 (2006).</li><li>Southey, A. K., Sleeman, D. P., Gormley, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sulfadimethoxine+and+rhodamine+B+as+oral+biomarkers+for+European+badgers+(Meles+meles).">Sulfadimethoxine and rhodamine B as oral biomarkers for European badgers (Meles meles).</a> Journal of Wildlife Diseases. 38 (2), 378-384 (2002).</li><li>Massei, G., Jones, A., Platt, T., Cowan, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+Acid+as+a+Long-Term+Marker+for+Wild+Boar.">Iophenoxic Acid as a Long-Term Marker for Wild Boar.</a> Journal of Wildlife Management. 73 (3), 458-461 (2009).</li><li>Creekmore, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Field+evaluation+of+baits+and+baiting+strategies+for+delivering+oral+vaccine+to+mongooses+in+Antigua,+West+Indies.">Field evaluation of baits and baiting strategies for delivering oral vaccine to mongooses in Antigua, West Indies.</a> Journal of Wildlife Diseases. 30 (4), 497-505 (1994).</li><li>Creekmore, T. E., Rock, R. E., Hurley, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+baiting+system+for+delivery+of+an+oral+plague+vaccine+to+black-tailed+prairie+dogs.">A baiting system for delivery of an oral plague vaccine to black-tailed prairie dogs.</a> Journal of Wildlife Diseases. 38 (1), 32-39 (2002).</li><li>Fernandez, J. R. R., Rocke, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Rhodamine+B+as+a+biomarker+for+oral+plague+vaccination+of+prairie+dogs.">Use of Rhodamine B as a biomarker for oral plague vaccination of prairie dogs.</a> Journal of Wildlife Diseases. 47 (3), 765-768 (2011).</li><li>Johnston, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+and+significance+of+tetracycline+stability+in+rabies+vaccine+baits.">Evaluation and significance of tetracycline stability in rabies vaccine baits.</a> Journal of Wildlife Diseases. 41 (3), 549-558 (2005).</li><li>Algeo, T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+rabies+vaccination+variation+in+tetracycline+biomarking+among+Ohio+Raccoons.">Oral rabies vaccination variation in tetracycline biomarking among Ohio Raccoons.</a> Journal of Wildlife Diseases. 49 (2), 332-337 (2013).</li><li>Crier, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetracyclines+as+a+fluorescent+marker+in+bones+and+teeth+of+rodents.">Tetracyclines as a fluorescent marker in bones and teeth of rodents.</a> Journal of Wildlife Management. 34 (4), 829-834 (1970).</li><li>Fisher, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+using+Rhodamine+B+as+a+marker+for+wildlife+studies.">Review of using Rhodamine B as a marker for wildlife studies.</a> Wildlife Society Bulletin. 27 (2), 318-329 (1999).</li><li>Knowlton, F. K., Savarie, P. J., Wahlgren, C. E., Hayes, D. J., Shumake, S. A., Bullard, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+marks+by+coyotes+ingesting+baits+containing+iophenoxic+acid,+Mirex+and+Rhodamine+B.">Physiological marks by coyotes ingesting baits containing iophenoxic acid, Mirex and Rhodamine B.</a> Vertebrate Pest Control and Management Materials. , 141-147 (1987).</li><li>Follmann, E. H., Savarie, P. J., Ritter, D. G., Baer, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+marking+of+arctic+foxes+with+iophenoxic+acid.">Plasma marking of arctic foxes with iophenoxic acid.</a> Journal of Wildlife Diseases. 23 (4), 709-712 (1987).</li><li>Saunders, G., Harris, S., Eason, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+acid+as+a+quantitative+bait+marker+for+foxes.">Iophenoxic acid as a quantitative bait marker for foxes.</a> Wildlife Research. 20, 297-302 (1993).</li><li>Hadidian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acceptance+of+simulated+oral+rabies+vaccine+baits+by+urban+raccoons.">Acceptance of simulated oral rabies vaccine baits by urban raccoons.</a> Journal of Wildlife Diseases. 25 (1), 1-9 (1989).</li><li>Sweetapple, P. J., Nugent, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+acid+as+a+serum+marker+for+red+deer+(Cervus+elaphus+scoticus).">Iophenoxic acid as a serum marker for red deer (Cervus elaphus scoticus).</a> Wildlife Research. 25, 649-654 (1998).</li><li>Ogilvie, S. C., Eason, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+iophenoxic+acid+and+rhodamine+B+for+marking+feral+ferrets+(Mustela+furo).">Evaluation of iophenoxic acid and rhodamine B for marking feral ferrets (Mustela furo).</a> New Zealand Journal of Zoology. 25 (2), 105-108 (1998).</li><li>Eason, C. T., Batcheler, D., Frampton, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+pharmacokinetics+of+iophenoxic+acid+in+cats+and+brushtail+possums.">Comparative pharmacokinetics of iophenoxic acid in cats and brushtail possums.</a> Wildlife Research. 21, 377-380 (1994).</li><li>Fisher, P. M., Marks, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+iophenoxic+acid+as+a+biomarker+for+swamp+wallabies+(Wallabia+bicolor).">Evaluation of iophenoxic acid as a biomarker for swamp wallabies (Wallabia bicolor).</a> Wildlife Research. 24, 97-103 (1997).</li><li>Baer, G. M., Shaddock, J. H., Hayes, D. J., Savarie, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+acid+as+a+serum+marker+in+carnivores.">Iophenoxic acid as a serum marker in carnivores.</a> Journal of Wildlife Management. 49 (1), 49-51 (1985).</li><li>Spurr, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+acid+as+a+systemic+blood+marker+for+assessment+of+bait+acceptance+by+stoats+(Mustela+ermine)+and+weasels+(Mustela+nivalis).">Iophenoxic acid as a systemic blood marker for assessment of bait acceptance by stoats (Mustela ermine) and weasels (Mustela nivalis).</a> New Zealand Journal of Zoology. 29 (2), 135-142 (2002).</li><li>Mudge, G. H., Strewler, G. J., Desbiens, N., Berndt, W. O., Wade, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excretion+and+distribution+of+iophenoxic+acid.">Excretion and distribution of iophenoxic acid.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 178 (1), 159-172 (1971).</li><li>Jones, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-performance+liquid+chromatographic+determination+of+iophenoxic+acid+in+serum.">High-performance liquid chromatographic determination of iophenoxic acid in serum.</a> Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications. 654 (2), 293-296 (1994).</li><li>Wiles, M. C., Campbell, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liquid+chromatography-electrospray+ionization+mass+spectrometry+for+direct+identification+and+quantification+of+iophenoxic+acid+in+serum.">Liquid chromatography-electrospray ionization mass spectrometry for direct identification and quantification of iophenoxic acid in serum.</a> Journal of Chromatography B. 832 (1), 144-157 (2006).</li><li>Ballesteros, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+by+LC/ESI-MS+of+iophenoxic+acid+derivatives+and+evaluation+as+markers+of+oral+baits+to+deliver+pharmaceuticals+to+wildlife.">Analysis by LC/ESI-MS of iophenoxic acid derivatives and evaluation as markers of oral baits to deliver pharmaceuticals to wildlife.</a> Journal of Chromatography B. 878 (22), 1997-2002 (2010).</li><li>Purdey, D. C., Petcu, M., King, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+protocol+for+detecting+two+systemic+bait+markers+(Rhodamine+B+and+iophenoxic+acid)+in+small+mammals.">A simplified protocol for detecting two systemic bait markers (Rhodamine B and iophenoxic acid) in small mammals.</a> New Zealand Journal of Zoology. 30 (3), 175-184 (2003).</li><li>Tobin, M. E., Koehler, A. E., Sugihara, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetracyclines+as+a+fluorescent+marker+in+bones+and+teeth+of+rodents.">Tetracyclines as a fluorescent marker in bones and teeth of rodents.</a> Journal of Wildlife Management. 60 (1), 202-207 (1996).</li><li>Briscoe, J. A., Syring, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+for+emergency+airway+and+vascular+access+in+special+species.">Techniques for emergency airway and vascular access in special species.</a> Seminars in Avian and Exotic Pet Medicine. 13 (3), 118-131 (2004).</li><li>Eason, C. T., Frampton, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+plasma+pharmacokinetics+of+iophenoxic+and+iopanoic+acids+in+goat.">The plasma pharmacokinetics of iophenoxic and iopanoic acids in goat.</a> Xenobiotica. 2 (2), 185-189 (1992).</li><li>Hilton, H. E., Dunn, A. M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mongooses: their natural history. , (1967).</li><li>Stevens, C. E., Hume, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Comparative physiology of the vertebrate digestive system. Second edition. , (1995).</li><li>National Rabies Management Program (NRMP). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Oral rabies vaccination draft operations manual. , (2009).</li></ol>

Den LC-MS/MS metoden utviklet for studiene benyttet selektivitet av flere reaksjons overvåkning å nøyaktig kvantifisere Me-IPA og et-IPA i Mongoose serum. Selektivitet av MS/MS deteksjon også tillatt for en enkel oppryddings-up protokoll stole utelukkende på acetonitril å utløse proteiner fra serum før analyse.
Iophenoxic syrer er løselig i ACN, men er praktisk talt uløselig i vann. For å utelukke vann fra ACN-ekstraksjon ble natriumklorid tilsatt for å fremtvinge et klart vann: AC...

Rabiat virus (RABV) er en negativ fornemme enkelt strandet lyssavirus, og sirkulerer blant Miscellaneous Wildlife reservoar Art innen ordrene rovdyr og Chiroptera. Flere arter av Mongoose er reservoarer av RABV, og den lille indiske Mongoose (Herpestes auropunctatus) er det eneste reservoaret i Puerto Rico og andre karibiske øyer i den vestlige halvkule1,2,3 . Kontroll av RABV sirkulasjon i dyreliv reservoarer er vanligvis oppnås gjennom en strategi for oral rabies vaksinasjon (ORV). Inne det Amerika (oss), denne ledelse aktivitet er koordinert av USDA/APHIS/Wildlife tjenestene nasjonal rabiat ledelse program (NRMP)4. For tiden ingen dyreliv ORV program finnes i Puerto Rico. Forskning i Rabies vaksiner og ulike agn typer for mongooses har blitt gjennomført med lovende resultater antyder en ORV program for mongooses er mulig5,6,7,8.
Overvåking virkningen av ORV er avhengig av estimering agn opptak av målet arter, som vanligvis innebærer å evaluere en endring i RV antistoff seroprevalensdata. Imidlertid kan denne strategien være utfordrende i områder med et aktivt dyreliv ORV programmer eller i områder hvor RV er enzootic og bakgrunn nivåer av RABV nøytralisere antistoffer (RVNA) er til stede i reservoar arter. I slike situasjoner, en biomarkør inkludert i agn eller eksterne agn matrise kan være nyttig.
Ulike biologiske markører har blitt brukt til å overvåke agn opptak i mange arter, inkludert vaskebjørn(Procyon lotor)9,10, stoats (Mustela hermelin)11,12, European Badgers ( Meles Meles) 13, villsvin (SUS Scrofa)14, små indiske mongooses15 og Prairie Dogs (Cynomysludovicianus)16,17, blant andre. I USA, operative ORV agn inkluderer ofte en 1% Tetracycline biomarkør i agn Matrix å overvåke agn opptak18,19. Men ulempene med bruk av Tetracycline inkludere en økende bekymring over fordelingen av antibiotika i miljøet og at påvisning av Tetracycline er vanligvis invasiv, krever tann trekking eller ødeleggelse av dyret for å få bein prøvene20. Rhodamine B har blitt evaluert som en markør i en rekke vev og kan oppdages ved hjelp av ultrafiolett (UV) lys og fluorescens i hår og kinnskjegg10,21.
Iophenoxic acid (IPA) er et hvitt, krystallinsk pulver som har blitt brukt til å evaluere agn forbruket i Coyotes (Canis latrans)22, Arctic Fox(små lagopus)23, Red Fox (små små)24, vaskebjørn 9 andre priser , 25, villsvin14, hjort (Cervus elaphus scoticus)26, europeiske Badgers12 og oppspore (M. Furo)27, blant flere andre pattedyrarter. Oppbevaring ganger av IPA varierer etter arter fra mindre enn to uker i noen marsupials28,29, til minst 26 uker i hjortevilt26 og over 52 uker i innenlandske hunder (Canis lupus familiaris)30. Oppbevaringstiden kan også være dose avhengig31. Iophenoxic acid binder sterkt til serum albumin og ble historisk oppdaget ved å måle blod jod nivåer32. Denne indirekte tilnærmingen ble fortrengt av høy ytelse flytende kromatografi (HPLC) metoder for å direkte måle iophenoxic syre konsentrasjoner med UV-deteksjon33, og til slutt med flytende kromatografi og masse MASSESPEKTROMETRI (LCMS) 34,35. For denne studien, en svært følsom og selektiv væske kromatografi med tandem masse massespektrometri (LC-MS/MS) metoden ble utviklet som utnytter flere reaksjons overvåking (MRM) å kvantifisere to analoger av iophenoxic syre. Vårt mål var å bruke denne LC-MS/MS metode for å evaluere merkingen evne til 2-(3-AHA-2, 4, 6-triiodobenzyl) propanoic acid (metyl-IPA eller Me-IPA) og 2-(3-AHA-2, 4, 6-triiodobenzyl) butanoic acid (etanol-IPA eller et-IPA) og når den leveres i en ORV agn til fange mongooses.
Mongooses ble levende fanget i bur feller agnet med kommersielt tilgjengelige røkt pølser og fiskeolje. Mongooses ble plassert i individuelle 60 cm x 60 cm x 40 cm rustfritt stål bur og matet en daglig rasjon av ~ 50 g kommersiell tørr kattemat, supplert to ganger per uke med en kommersielt tilgjengelig kylling lår. Vann var tilgjengelig Ad lib. Vi leverte to derivater av IPA, etanol-IPA og metyl-IPA, til fange mongooses i placebo ORV agn. Alle agn var sammensatt av en 28 mm x 20 mm x 9 mm folie blisteren pakke med et eksternt belegg (heretter "agn Matrix") som inneholder pulverisert kylling egg og gelatin (tabell over materialer). Agn inneholdt 0,7 mL vann eller IPA derivat og veide ca 3 g, hvorav ~ 2 g var den eksterne agn matrise.
Vi tilbød 16 fange mongooses et-IPA i tre konsentrasjoner: 0,14% (2,8 mg et-IPA i ~ 2 g agn matrise; 3 hanner [m], 3 kvinner [f]), 0,4% (2,8 mg et-IPA i 0,7 mL pakkevolum; 3m, 3F) og 1,0% (7,0 mg etanol-IPA i 0,7 mL pakkevolum; 2m , 2F). Den totale dosen på 2,8 mg tilsvarer en dose rate på 5 mg/kg27,36 og er basert på en gjennomsnittlig Mongoose vekt på 560 g i Puerto Rico. Vi valgte 1% som den høyeste konsentrasjonen som forskning antyder smak aversjon mot noen biomarkører kan forekomme ved konsentrasjoner > 1% i enkelte arter37. Vi tilbød kun 1% dose i pakningen da flokk ule Rings forhindret stoff fra å oppløses i væsken som var tilstrekkelig innlemmet i agn matrisen. En kontrollgruppe (2m, 1F) fikk agn fylt med sterilt vann og ingen IPA. Vi tilbød agn til mongooses i morgen (~ 8 am) under eller før fôring av deres daglige vedlikehold rasjon. Agn rester ble fjernet etter ca 24 timer. Vi samlet blodprøver før behandling, en dag etter behandling og ukentlig opp til 8 uker etter behandling. Vi anesthetized mongooses ved innånding av isoflurane gass og samlet opp til 1,0 mL av hele blodet ved venepunksjon av skallen vena cava som beskrevet for oppspore38. Vi sentrifugert hele blodprøver, overført Sera til cryovials og lagret dem ved-80 ° c til analyse. Ikke alle dyrene ble samplet under alle tidsperioder for å minimere virkningene av gjentatte blodprøver på helsen til dyrene. Kontroll dyr ble samplet på dag 0, deretter ukentlig i opptil 8 uker etter behandling.
Vi leverte Me-IPA i tre konsentrasjoner: 0,035% (0,7 mg), 0,07% (1,4 mg) og 0,14% (2,8 mg), alle innlemmet i agn matrise, med 2 hanner og 2 kvinner per behandling gruppe. To menn og to kvinner fikk agn fylt med sterilt vann og ingen IPA. Agn tilbyr ganger og Mongoose anestesi er beskrevet ovenfor. Vi samlet blodprøver før behandling på dag 1, og deretter ukentlig opptil 4 uker etter behandling.
Vi testet serumkonsentrasjon data for normalitet og estimert middel for serum IPA konsentrasjoner av ulike behandlingsgrupper. Vi brukte en lineær blandet modell for å sammenligne bety serum et-IPA konsentrasjoner samlet på tvers av individer. Agn type (Matrix/bli Ste pakning) var en fast effekt i tillegg til eksperimentell dag, mens dyr ID var en tilfeldig effekt. Alle prosedyrer ble kjørt med vanlig statistisk programvare (tabell av materialer) og betydning ble evaluert ved α = 0,05.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1036px;" width="1036">
	<tbody>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">Acetonitrile, Optima grade</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">A996</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">Analytical balance</td>
			<td style="width:193px;">Mettler Toledo</td>
			<td style="width:304px;">XS204</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:380px;">C18 column, 2.1 x 50 mm, 2.5-&#181;m particle size</td>
			<td style="width:193px;">Waters Corp.</td>
			<td style="width:304px;">186003085</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">ESI Source</td>
			<td style="width:193px;">Agilent&#160;</td>
			<td style="width:304px;">G1958-65138</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:380px;">Ethyl-iophenoxic acid, 97 %</td>
			<td style="width:193px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;">Lot MKBP5399V</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:380px;">Formic acid, LC/MS grade</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">A117</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:380px;">LCMS software</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">MassHunter Data Acquisition and Quantitative Analysis</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:380px;">Methyl-iophenoxic acid, 97 % (w/w)</td>
			<td style="width:193px;">PR EuroChem Ltd.</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;">Lot PR0709514717</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">Microanalytical balance</td>
			<td style="width:193px;">Mettler Toledo</td>
			<td style="width:304px;">XP6U</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">Microcentrifuge</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">5415C</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">MS/MS</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">G6470A</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:380px;">N-Evap</td>
			<td style="width:193px;">Organomation</td>
			<td style="width:304px;">115</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:380px;">Oral Rabies Vaccine Baits</td>
			<td style="width:193px;">IDT Biologika, Dessau Rossleau, Germany</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">Propyl-iophenoxic acid, 99 % (w/w)</td>
			<td style="width:193px;">PR EuroChem Ltd.</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;">Lot PR100612108RR</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:380px;">Repeat pipettor</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">M4</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:380px;">Screw-top autosampler vial caps, PTFE-lined</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">5190-7024</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:25px;width:380px;">Sodium chloride, Certified ACS grade</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">S271</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:380px;">Statistical Software Package</td>
			<td style="width:193px;">SAS Institute, Cary, North Carolina, USA</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:380px;">Trifluoroacetic acid, 99 %</td>
			<td style="width:193px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:304px;">L06374</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;width:380px;">UPLC</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">1290 Series</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:380px;">Vortex Mixer</td>
			<td style="width:193px;">Glas-Col</td>
			<td style="width:304px;">099A PV6</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">0.2-mL pipettor tips</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">30089.413</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">0.5-mL pipettor tips</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">30089.421</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">1.5-mL microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">14-666-325</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:380px;">1250-&#181;L capacity pipette tips</td>
			<td style="width:193px;">GeneMate</td>
			<td style="width:304px;">P-1233-1250</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:380px;">1-mL pipettor tips</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">30089.43</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:380px;">2-mL amber screw-top autosampler vials</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">5182-0716</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">5-mL pipettor tips</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">30089.456</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">80-position microcentrifuge tube rack</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">05-541-2</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:380px;">8-mL amber vials with PTFE-lined caps</td>
			<td style="width:193px;">Wheaton</td>
			<td style="width:304px;">224754</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:380px;">70 % (v/v) isopropanol</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">A459</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">100-1000 &#181;L air displacement pipette</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">ES-100</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of iophenoxic acid analogues in small indian mongoose (herpestes auropunctatus) sera for use as an oral rabies vaccination biological marker

Det liten indisk Mongoose (Herpestes auropunctatus) er en reservoar av rabiat virus (RABV) inne Barnslig Rico og omfatter over 70% av dyr rabiat sakene rapportere årlig. Kontroll av RABV sirkulasjon i dyreliv reservoarer er vanligvis oppnås ved en strategi for oral rabies vaksinasjon (ORV). For tiden ingen dyreliv ORV program finnes i Puerto Rico. Forskning på oral Rabies vaksiner og ulike agn typer for mongooses har blitt gjennomført med lovende resultater. Overvåking suksessen ORV er avhengig av estimering agn opptak av målet arter, som vanligvis innebærer å evaluere en endring i RABV nøytralisere antistoffer (RVNA) post vaksinasjon. Denne strategien kan være vanskelig å tolke i områder med et aktivt dyreliv ORV program eller i områder hvor RABV er enzootic og bakgrunn nivåer av RVNA er til stede i reservoar arter. I slike situasjoner, en biomarkør innarbeidet med vaksinen eller agn matrise kan være nyttig. Vi tilbød 16 fange mongooses placebo ORV agn inneholder etanol-iophenoxic acid (et-IPA) i konsentrasjoner av 0,4% og 1% inne i agn og 0,14% i den eksterne agn matrise. Vi har også tilbudt 12 fange mongooses ORV agn inneholder metyl-iophenoxic acid (Me-IPA) i konsentrasjoner av 0,035%, 0,07% og 0,14% i den eksterne agn matrise. Vi samlet en serum prøve før agn tilbud og deretter ukentlig i opptil åtte uker etter tilbud. Vi hentet Iophenoxic syrer fra Sera i acetonitril og kvantifisert ved hjelp av flytende kromatografi/masse massespektrometri. Vi analyserte Sera for et-IPA eller Me-IPA av flytende kromatografi-masse massespektrometri. Vi fant tilstrekkelig merking evne i minst åtte og fire uker for et-og Me-IPA, henholdsvis. Begge IPA-derivater kan være egnet for felt evaluering av ORV agn opptak i mongooses. På grunn av levetiden av markøren i Mongoose Sera, må forsiktighet tas for å ikke forvirre resultater ved å bruke samme IPA derivat under påfølgende evalueringer.

Representative ion-kromatogrammene fra en Me-IPA-analyse presenteres i figur 1. Kontrollen Mongoose serum (figur 1a) illustrerer Oppbevaringstiden til et-IPA (surrogat analytt) og fraværet av Me-IPA på angitt oppbevaringstid. Utvalget av kvalitetskontroll (fig. 1b) illustrerer den Baseline separasjon av Me-IPA fra et-IPA, samt Kvantifikatoren og kvalifiserings overganger for Me-IPA. <strong class="...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose Herpestes Auropunctatus Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker at JoVE.co

Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose Herpestes Auropunctatus Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker

Vi tilbød fange mongooses placebo muntlig Rabiat vaccine agn med etanol eller metyl iophenoxic syren som biomarkør og bekreftet agn opptak ved hjelp av en roman flytende kromatografi med tandem masse massespektrometri (LC-MS/MS) metoden.

Analyse av Iophenoxic acid analoger i Small Indian Mongoose (Herpestes Auropunctatus) Sera for bruk som en oral rabies vaksinasjon biologisk markør

The small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus) is a reservoir of rabies virus (RABV) in Puerto Rico and comprises over 70% of animal rabies cases ...

Vi skisserte en prosedyre for å oppdage og kvantifisere iophenoxic acid i mongoose serum. Resultatene tyder på at iophenoxic acid kan brukes som en biologisk markør for å verifisere betaopptak i arten. Den største fordelen med denne metoden er at den gjør det mulig å kvantifisere iophenoxic acid analoger på deler per milliard nivåer, ved hjelp av en enkel å utføre protein nedbør teknikk.For mobil fase A, kombiner en milliliter maursyre med en liter ultra rent vann. For mobil fase B, kombinere en milliliter maursyre med en liter acetonitril. For fortynningsmiddelet, kombinere en milliliter trifluorotaksyre med 200 milliliter acetonitril.Deretter veier ca 10 milligram metyl-IPA på mikrobalanse, og registrerer massen til pluss eller minus 0001 milligram. Kvantitativt overføre metyl-IPA til en 10 milliliter klasse En volumetrisk kolbe, ved hjelp av fire til fem milliliter acetonitril. Sonicate i ett minutt for å oppløse alle faste stoffer og deretter bringe til volum med acetonitril.Overfør omtrent åtte milliliter av hver lager til åtte milliliter ravglass hetteglass med PTFE-lined caps og lagre prøvene ved romtemperatur. Deretter overfører du gjenværende lager til farlig avfall. For 25X lager syv metyl-IPA lager forberede en bestand av metyl-IPA og acetonitril på ca 200 mikrogram per milliliter.Overfør en milliliter av aksjen til en fem milliliter kolbe og fortynne til volum med acetonitril. Deretter overfører du aksjen til et åtte milliliter gult hetteglass med en PTFE-foret hette og oppbevares ved romtemperatur. Ved hjelp av en gjentatt pipettor, forberede de seks ekstra 25X metyl-IPA aksjer beskrevet i tekstprotokollen i åtte milliliter gult glass hetteglass med PTFE-lined caps og lagre ved romtemperatur.For 25X surrogat lager, overføre 0,1 milliliter konsentrert etyl-IPA lager til en 10 milliliter klasse En volumetrisk kolbe ved hjelp av en 100 mikroliter glass sprøyte og deretter fortynnes til volum med acetonitril. Overfør omtrent åtte milliliter av surrogatlageret til et åtte milliliter gult hetteglass med PTFE-foret hette og oppbevar ved romtemperatur. Overfør gjenværende lager til farlig avfall.Deretter forbereder du 4X-lagre som inneholder både metyl-IPA og etyl-IPA i 10 milliliter skrue-top glass auto sampler hetteglass, som beskrevet i tekstprotokollen. For eksempel, for å forberede lager 4X7, legg til 0,2 milliliter av 25X lager syv metyl-IPA lager til en to milliliter hetteglass ved hjelp av repeat pipettor med en 0,5 milliliter kapasitetsspiss. Tilsett 0,2 milliliter av 25X surrogatetyl-IPA-lager ved hjelp av en gjentatt pipettor med en 0,5 milliliter kapasitetsspiss.Tilsett 0,85 milliliter acetonitril ved hjelp av en gjentatt pipettor med en en milliliter kapasitetsspiss. Cap hetteglasset sikkert og invertere fem ganger for å blande. Etter dette klargjør du standardkurven i to milliliter automatiske prøveglass på skruetopp som beskrevet i tekstprotokollen.Hvis du for eksempel vil klargjøre standard syv, legger du til 0,2 milliliter av 4X7-lageret til et to milliliter hetteglass, ved hjelp av en gjentatt pipettor med en kapasitetsspiss på 0,5 milliliter. Tilsett 0,6 milliliter ultra renhet ionisert vann ved hjelp av en gjentatt pipettor med en ett milliliter kapasitetsspiss. Cap hetteglassene sikkert og invertere fem ganger for å blande.For hver prøve, forberede en 1,5 milliliter mikro sentrifuge rør som inneholder 200 til 300 milligram natriumklorid og ordne rørene i en 80 posisjon plaststativ. For hver prøve, merk en 1,5 milliliter mikro sentrifuge rør som A og en annen mikro sentrifuge rør som B.Ordne rørene i en 80 posisjon plaststativ. Plasser følgende materialer og utstyr som trengs for serumavsug i et biosikkerhetsskap i klasse to: mikrosentriderifugrørene, en vortex mikser, en gjentatt pipettor med 0,5 milliliter og fem milliliter kapasitetsspisser, en 100 til 1000 mikroliter luftforskyvningspipette med 1000 mikroliterspisser, beholdere med en ca. 100 milliliter hver av fortynnings- og ultrarenhetsioniserte vann og biohazard avfallsbeholder.Deretter fjerner du serumprøver fra frossen lagring og varm til romtemperatur i biosikkerhetsskapet. Vortex blander hver serumprøve før prøvetaking. Bruk en gjentatt pipettor med en 0,5 milliliter kapasitetsspiss, dispenser 05 milliliter mongooseserum i rør A og tilsett 05 milliliter av 25X surrogatlager.Tilsett deretter 0,95 milliliter fortynningsrør til rør A ved hjelp av en gjentatt pipettor med en fem milliliter kapasitetsspiss. Cap rørene sikkert og vortex mix i 10 til 15 sekunder. Deretter legger du til kontrollmongooseserumet til rør A.Befest hver av 4QC-prøvene med me-IPA ved hjelp av en gjentatt pipettor med en kapasitetsspiss på 0,5 milliliter.Legg til 25X surrogat lager til QC prøver. Deretter legger du til fortynningsmiddelet i QC-prøvene. Cap rørene og vortex mix.Dispenser den forhåndsveide natriumkloriden i rør A og vortexblanding tre ganger i åtte til 12 sekunder. Tørk deretter av de utvendige overflatene på hetteglassstativet som inneholder rør A ved hjelp av 70 % isopropanol. Etter å ha fjernet prøvene fra biosikkerhetsskapet, sentrifugerør A ved 1200 ganger G i ett minutt for å skille vandige og acetonitrilfaser.Pipette 0,8 milliliter av den øvre acetonitrilfasen til rør B, ved hjelp av en 100 til 1000 mikroliter luftforskyvning pipette. Overfør den gjenværende oppløsningen i rør A til farlig avfall og kast det tomme røret i en beholder for biologisk farlig avfall. Fjern nå acetonitril og trifluoroacetisk fra rør B med en mild strøm av nitrogengass i et 45 grader Celsius vannbad.Tilsett 0,25 milliliter acetonitril til rør B ved hjelp av en gjentatt pipettor og vortex mix i fire til fem sekunder. Deretter sentrifuge ved 1200 ganger G i to til fire sekunder for å samle væsken i bunnen av røret. Etter sentrifugering, tilsett 0,75 milliliter ultra rent deionisert vann til rør B ved hjelp av en gjentatt pipettor med en fem milliliter kapasitetsspiss og vortexblanding i fire til fem sekunder.Sentrifuge ved 1200 ganger G i ett minutt for å klargjøre prøven. Deretter overfører du 0,75 milliliter av supernatanten til et automatisk prøvehette hetteglass ved hjelp av en 1000 mikroliters luftforskyvningspipette og kast pipettespissene i den biohazard avfallsbeholderen. Cap hvert automatisk sampler hetteglass sikkert for LC-MS / MS analyse.Overfør den gjenværende oppløsningen i rør B til farlig avfall og kast det tomme røret i en beholder for biologisk farlig avfall. Konfigurer LC-MS/MS med alle parametere som er beskrevet i tekstprotokollen. Strøm på LC-MS/MS og la kolonnen nå 70 grader Celsius før du setter strømningshastigheten til 0,8 milliliter per minutt.Definer en sekvens i datainnsamlingsprogramvaren for å injisere standardkurven før og etter hver batch som består av kvalitetskontrolleksempler og ukjente eksempler. Injiser alle standarder og prøver og tilegne mr ionkromatrammer ved hjelp av parametere som er oppført i tekstprotokollen. Når sekvensen er fullført, slår du av LC-MS/MS og avheder alle automatiske prøvehette ampuller i farlig avfall.Imkromatrammet til kontrollmongooseserumet illustrerer oppbevaringstiden for etyl-IPA og fraværet av metyl-IPA på angitt oppbevaringstid. Imromatogrammet i kvalitetskontrollprøven illustrerer baselineseparasjonen av metyl-IPA fra etyl-IPA, samt kvantifieren og kvalifiseringsovergangene for metyl-IPA. Imromatogrammet i den representative prøven fra studien viser en observert serumkonsentrasjon på 33,5 mikrogram per mikroliter metyl-IPA.Nøyaktigheten og presisjonsresultatene for kontroll mongoose serum befestet med metyl-IPA er vist her. Prosentvise gjenopprettinger varierte fra 96,9 til 109 %Prosent relative avviket på de tre befestningsnivåene var henholdsvis 3,4 %1,7 % og 2,3 %. Nøyaktigheten og presisjonsresultatene for kontroll mongoose serum befestet med etyl-IPA er vist her.Prosentvise gjenopprettinger varierte fra 89,5 til 115 %Prosent relativ standardavvik på de fem befestningsnivåene var henholdsvis 4,3 %1,5 %2,3 %5,6 % og 1,1 %. Alle mongooses tilbudt etyl-IPA og metyl-IPA agn konsumert minst 25% av agn innen 24 timers tidsbegrensning og hadde kvantifiserbare nivåer av etyl-IPA og metyl-IPA i deres sera, henholdsvis. Den potensielle nytten av metoden kan økes ved å konfigurere LC-MS til å samle inn data for andre iophenoxic acid analoger, som propyl og butyl iophenoxic acid.Vi oppfordret personell til å konsultere de nyeste anbefalingene fra rådgivende komité om immuniseringspraksis, eller deres institusjonelle biosikkerhetskomité for veiledning om preexposure rabies vaksinasjon er nødvendig. Avsnitt 2.3 til og med 2.6 i denne protokollen som involverer arbeid med ufortynnet serum, bør utføres i et biosikkerhetsskap i klasse to.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose (Herpestes Auropunctatus) Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker

An Analytical Tool-box for Comprehensive Biochemical, Structural and Transcriptome Evaluation of Oral Biofilms Mediated by Mutans Streptococci

Biofilms are highly dynamic, organized and structured communities of microbial cells enmeshed in an extracellular matrix of variable density and ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

Most known parasitoid wasp species attack the larval or pupal stages of Drosophila. While Trichopria drosophilae infect the pupal stages of the host (Fig. ...

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization (LNA flow-FISH): a Method for Bacterial Small RNA Detection

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization LNA flow-FISH: a Method for Bacterial Small RNA Detection

Stengte Nucleic Acid flowcytometrisystemer-fluorescens In situ Hybridisering (LNA flow-FISH): En metode for Bakteriell små RNA Detection

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a powerful technique that is used to detect and localize specific nucleic acid sequences in the cellular ...

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Ved å bruke<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Som modellorganisme for å studere<em&gt; Legionella pneumophila</em&gt; Infeksjon

Legionella pneumophila, the causative agent of a severe pneumonia named Legionnaires&#39; disease, is an important human pathogen that infects and ...

Intralymphatic Immunotherapy and Vaccination in Mice

Intralymphatic Immunterapi og vaksinasjons i Mus

Vaccines are typically injected subcutaneously or intramuscularly for stimulation of immune responses. The success of this requires efficient drainage of ...

Porphyromonas gingivalis as a Model Organism for Assessing Interaction of Anaerobic Bacteria with Host Cells

Porphyromonas gingivalis as a Model Organism for Assessing Interaction of Anaerobic Bacteria with Host Cells

Porphyromonas gingivalis som modellorganisme for Assessing Interaksjon av anaerobe bakterier med vertsceller

Anaerobic bacteria far outnumber aerobes in many human niches such as the gut, mouth, and vagina. Furthermore, anaerobic infections are common and ...

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Etablering av en High-throughput Oppsett for screening små molekyler som modulerer c-di-GMP signalering i<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em

Bacterial resistance to traditional antibiotics has driven research attempts to identify new drug targets in recently discovered regulatory pathways. ...

In Vitro Methods for Comparing Target Binding and CDC Induction Between Therapeutic Antibodies: Applications in Biosimilarity Analysis

In Vitro Methods for Comparing Target Binding and CDC Induction Between Therapeutic Antibodies: Applications in Biosimilarity Analysis

In vitro- metoder for sammenligning av målbinding og CDC-induksjon mellom terapeutiske antistoffer: applikasjoner i biosimilaritetsanalyse

Therapeutic monoclonal antibodies (mAbs) are relevant to the treatment of different pathologies, including cancers. The development of biosimilar mAbs by ...

In Vitro ELISA Test to Evaluate Rabies Vaccine Potency

In Vitro ELISA Test for å evaluere Rabies vaksine styrke

The growing global concern for the animal welfare is encouraging manufacturers and the National Control Laboratories (OMCLs) to follow the 3Rs strategy ...