Name: analysis of iophenoxic acid analogues in small indian mongoose (herpestes auropunctatus) sera for use as an oral rabies vaccination biological marker
Uploaded: 2019-05-31T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose Herpestes Auropunctatus Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker at JoVE.co

Denna forskning stöddes delvis av interna forskningsprogram av det amerikanska departementet för jordbruk, djur-och växtskydds inspektion service, Wildlife Services, nationella rabies Management program och IDT biologika (Dessau-Rosslau, Tyskland).

Alla förfaranden godkändes av USDA National Wildlife Research Centers institutionella djuromsorg och användning kommittén under godkända Research Protocol QA-2597.
Anmärkning: följande protokoll beskriver analys proceduren för att detektera metyl-iofenoxic syra i Mongoose serum. Denna metod är den slutgiltiga versionen av en iterativ process som inleddes med analys av etyl-iofenoxic syra i Mongoose serum. Under den första utvärderingen av etyliofenoxic-syra gjordes smärre ändringa...

<ol>
	<li>Nel, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mongoose+rabies+in+southern+Africa:+a+re-evaluation+based+on+molecular+epidemiology.">Mongoose rabies in southern Africa: a re-evaluation based on molecular epidemiology.</a> Virus Research. 109 (2), 165-173 (2005).</li><li>Zieger, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+phylogeography+of+rabies+in+Grenada,+West+Indies,+and+implications+for+control.">The phylogeography of rabies in Grenada, West Indies, and implications for control.</a> PLOS Neglected Tropical Diseases. 8 (10), e3251 (2004).</li><li>Monroe, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+surveillance+in+the+United+States+during+2014.">Rabies surveillance in the United States during 2014.</a> Journal of the American Veterinary Medical Association. 248 (7), 777-788 (2015).</li><li>Slate, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Status+of+oral+rabies+vaccination+in+wild+carnivores+in+the+United+States.">Status of oral rabies vaccination in wild carnivores in the United States.</a> Virus Research. 111, 68-76 (2005).</li><li>Blanton, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccination+of+small+Asian+mongoose+(Herpestes+javanicus)+against+rabies.">Vaccination of small Asian mongoose (Herpestes javanicus) against rabies.</a> Journal of Wildlife Diseases. 42 (3), 663-666 (2006).</li><li>Vos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+vaccination+of+captive+small+Indian+mongoose+(Herpestes+auropunctatus)+against+rabies.">Oral vaccination of captive small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus) against rabies.</a> Journal of Wildlife Diseases. 49 (4), 1033-1036 (2013).</li><li>Berentsen, A. R., Johnson, S. R., VerCauteren, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+ONRAB&#174;+bait+matrix+flavor+preference+by+mongoose+(Herpestes+auropunctatus)+in+Puerto+Rico:+Implications+for+Oral+Rabies+Vaccination.">Evaluation of ONRAB&#174; bait matrix flavor preference by mongoose (Herpestes auropunctatus) in Puerto Rico: Implications for Oral Rabies Vaccination.</a> Caribbean Journal of Science. 48 (1), 52-58 (2014).</li><li>Ortmann, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+studies+with+the+oral+rabies+virus+vaccine+strain+SPBN+GASGAS+in+the+small+Indian+mongoose+(Herpestes+auropunctatus).">Safety studies with the oral rabies virus vaccine strain SPBN GASGAS in the small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus).</a> BMC Veterinary Research. 14 (1), 90 (2018).</li><li>Linhart, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+field+evaluation+of+baits+for+delivering+oral+rabies+vaccines+to+raccoons+(Procyon+lotor).">A field evaluation of baits for delivering oral rabies vaccines to raccoons (Procyon lotor).</a> Journal of Wildlife Diseases. 30 (2), 185-194 (1994).</li><li>Fry, T. L., Atwood, T., Dunbar, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+rhodamine+B+as+a+biomarker+for+raccoons.">Evaluation of rhodamine B as a biomarker for raccoons.</a> Human Wildlife Interactions. 4 (2), 275-280 (2010).</li><li>Jones, C., Moller, H., Hamilton, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+potential+techniques+for+identifying+individual+stoats+(Mustela+erminea)+visiting+control+or+monitoring+stations.">A review of potential techniques for identifying individual stoats (Mustela erminea) visiting control or monitoring stations.</a> New Zealand Journal of Zoology. 31 (3), 193-203 (2004).</li><li>de Leeuw, A. N. S., Smith, G. C., Woods, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+iophenoxic+acid+to+assess+bait+uptake+by+European+badgers.">Use of iophenoxic acid to assess bait uptake by European badgers.</a> Advances in Vertebrate Pest Management. 4, 243-254 (2006).</li><li>Southey, A. K., Sleeman, D. P., Gormley, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sulfadimethoxine+and+rhodamine+B+as+oral+biomarkers+for+European+badgers+(Meles+meles).">Sulfadimethoxine and rhodamine B as oral biomarkers for European badgers (Meles meles).</a> Journal of Wildlife Diseases. 38 (2), 378-384 (2002).</li><li>Massei, G., Jones, A., Platt, T., Cowan, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+Acid+as+a+Long-Term+Marker+for+Wild+Boar.">Iophenoxic Acid as a Long-Term Marker for Wild Boar.</a> Journal of Wildlife Management. 73 (3), 458-461 (2009).</li><li>Creekmore, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Field+evaluation+of+baits+and+baiting+strategies+for+delivering+oral+vaccine+to+mongooses+in+Antigua,+West+Indies.">Field evaluation of baits and baiting strategies for delivering oral vaccine to mongooses in Antigua, West Indies.</a> Journal of Wildlife Diseases. 30 (4), 497-505 (1994).</li><li>Creekmore, T. E., Rock, R. E., Hurley, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+baiting+system+for+delivery+of+an+oral+plague+vaccine+to+black-tailed+prairie+dogs.">A baiting system for delivery of an oral plague vaccine to black-tailed prairie dogs.</a> Journal of Wildlife Diseases. 38 (1), 32-39 (2002).</li><li>Fernandez, J. R. R., Rocke, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Rhodamine+B+as+a+biomarker+for+oral+plague+vaccination+of+prairie+dogs.">Use of Rhodamine B as a biomarker for oral plague vaccination of prairie dogs.</a> Journal of Wildlife Diseases. 47 (3), 765-768 (2011).</li><li>Johnston, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+and+significance+of+tetracycline+stability+in+rabies+vaccine+baits.">Evaluation and significance of tetracycline stability in rabies vaccine baits.</a> Journal of Wildlife Diseases. 41 (3), 549-558 (2005).</li><li>Algeo, T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+rabies+vaccination+variation+in+tetracycline+biomarking+among+Ohio+Raccoons.">Oral rabies vaccination variation in tetracycline biomarking among Ohio Raccoons.</a> Journal of Wildlife Diseases. 49 (2), 332-337 (2013).</li><li>Crier, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetracyclines+as+a+fluorescent+marker+in+bones+and+teeth+of+rodents.">Tetracyclines as a fluorescent marker in bones and teeth of rodents.</a> Journal of Wildlife Management. 34 (4), 829-834 (1970).</li><li>Fisher, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+using+Rhodamine+B+as+a+marker+for+wildlife+studies.">Review of using Rhodamine B as a marker for wildlife studies.</a> Wildlife Society Bulletin. 27 (2), 318-329 (1999).</li><li>Knowlton, F. K., Savarie, P. J., Wahlgren, C. E., Hayes, D. J., Shumake, S. A., Bullard, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+marks+by+coyotes+ingesting+baits+containing+iophenoxic+acid,+Mirex+and+Rhodamine+B.">Physiological marks by coyotes ingesting baits containing iophenoxic acid, Mirex and Rhodamine B.</a> Vertebrate Pest Control and Management Materials. , 141-147 (1987).</li><li>Follmann, E. H., Savarie, P. J., Ritter, D. G., Baer, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+marking+of+arctic+foxes+with+iophenoxic+acid.">Plasma marking of arctic foxes with iophenoxic acid.</a> Journal of Wildlife Diseases. 23 (4), 709-712 (1987).</li><li>Saunders, G., Harris, S., Eason, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+acid+as+a+quantitative+bait+marker+for+foxes.">Iophenoxic acid as a quantitative bait marker for foxes.</a> Wildlife Research. 20, 297-302 (1993).</li><li>Hadidian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acceptance+of+simulated+oral+rabies+vaccine+baits+by+urban+raccoons.">Acceptance of simulated oral rabies vaccine baits by urban raccoons.</a> Journal of Wildlife Diseases. 25 (1), 1-9 (1989).</li><li>Sweetapple, P. J., Nugent, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+acid+as+a+serum+marker+for+red+deer+(Cervus+elaphus+scoticus).">Iophenoxic acid as a serum marker for red deer (Cervus elaphus scoticus).</a> Wildlife Research. 25, 649-654 (1998).</li><li>Ogilvie, S. C., Eason, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+iophenoxic+acid+and+rhodamine+B+for+marking+feral+ferrets+(Mustela+furo).">Evaluation of iophenoxic acid and rhodamine B for marking feral ferrets (Mustela furo).</a> New Zealand Journal of Zoology. 25 (2), 105-108 (1998).</li><li>Eason, C. T., Batcheler, D., Frampton, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+pharmacokinetics+of+iophenoxic+acid+in+cats+and+brushtail+possums.">Comparative pharmacokinetics of iophenoxic acid in cats and brushtail possums.</a> Wildlife Research. 21, 377-380 (1994).</li><li>Fisher, P. M., Marks, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+iophenoxic+acid+as+a+biomarker+for+swamp+wallabies+(Wallabia+bicolor).">Evaluation of iophenoxic acid as a biomarker for swamp wallabies (Wallabia bicolor).</a> Wildlife Research. 24, 97-103 (1997).</li><li>Baer, G. M., Shaddock, J. H., Hayes, D. J., Savarie, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+acid+as+a+serum+marker+in+carnivores.">Iophenoxic acid as a serum marker in carnivores.</a> Journal of Wildlife Management. 49 (1), 49-51 (1985).</li><li>Spurr, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+acid+as+a+systemic+blood+marker+for+assessment+of+bait+acceptance+by+stoats+(Mustela+ermine)+and+weasels+(Mustela+nivalis).">Iophenoxic acid as a systemic blood marker for assessment of bait acceptance by stoats (Mustela ermine) and weasels (Mustela nivalis).</a> New Zealand Journal of Zoology. 29 (2), 135-142 (2002).</li><li>Mudge, G. H., Strewler, G. J., Desbiens, N., Berndt, W. O., Wade, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excretion+and+distribution+of+iophenoxic+acid.">Excretion and distribution of iophenoxic acid.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 178 (1), 159-172 (1971).</li><li>Jones, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-performance+liquid+chromatographic+determination+of+iophenoxic+acid+in+serum.">High-performance liquid chromatographic determination of iophenoxic acid in serum.</a> Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications. 654 (2), 293-296 (1994).</li><li>Wiles, M. C., Campbell, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liquid+chromatography-electrospray+ionization+mass+spectrometry+for+direct+identification+and+quantification+of+iophenoxic+acid+in+serum.">Liquid chromatography-electrospray ionization mass spectrometry for direct identification and quantification of iophenoxic acid in serum.</a> Journal of Chromatography B. 832 (1), 144-157 (2006).</li><li>Ballesteros, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+by+LC/ESI-MS+of+iophenoxic+acid+derivatives+and+evaluation+as+markers+of+oral+baits+to+deliver+pharmaceuticals+to+wildlife.">Analysis by LC/ESI-MS of iophenoxic acid derivatives and evaluation as markers of oral baits to deliver pharmaceuticals to wildlife.</a> Journal of Chromatography B. 878 (22), 1997-2002 (2010).</li><li>Purdey, D. C., Petcu, M., King, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+protocol+for+detecting+two+systemic+bait+markers+(Rhodamine+B+and+iophenoxic+acid)+in+small+mammals.">A simplified protocol for detecting two systemic bait markers (Rhodamine B and iophenoxic acid) in small mammals.</a> New Zealand Journal of Zoology. 30 (3), 175-184 (2003).</li><li>Tobin, M. E., Koehler, A. E., Sugihara, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetracyclines+as+a+fluorescent+marker+in+bones+and+teeth+of+rodents.">Tetracyclines as a fluorescent marker in bones and teeth of rodents.</a> Journal of Wildlife Management. 60 (1), 202-207 (1996).</li><li>Briscoe, J. A., Syring, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+for+emergency+airway+and+vascular+access+in+special+species.">Techniques for emergency airway and vascular access in special species.</a> Seminars in Avian and Exotic Pet Medicine. 13 (3), 118-131 (2004).</li><li>Eason, C. T., Frampton, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+plasma+pharmacokinetics+of+iophenoxic+and+iopanoic+acids+in+goat.">The plasma pharmacokinetics of iophenoxic and iopanoic acids in goat.</a> Xenobiotica. 2 (2), 185-189 (1992).</li><li>Hilton, H. E., Dunn, A. M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mongooses: their natural history. , (1967).</li><li>Stevens, C. E., Hume, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Comparative physiology of the vertebrate digestive system. Second edition. , (1995).</li><li>National Rabies Management Program (NRMP). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Oral rabies vaccination draft operations manual. , (2009).</li></ol>

LC-MS/MS-metoden som utvecklats för studierna utnyttjade selektivitet av multipel reaktion övervakning för att exakt kvantifiera me-IPA och et-IPA i Mongoose serum. Selektiviteten i MS/MS-detektion tillät också ett enkelt saneringsprotokoll som enbart förlitade sig på acetonitril för att fälla ut proteiner från serum före analys.
Iofenoxiska syror är lösliga i ACN men är praktiskt taget olösliga i vatten. För att utesluta vatten från ACN-utvinningen tillsätts natriumklorid f?...

Rabies virus (RABV) är en negativ känsla enda strandsatta lyssavirus, och cirkulerar bland olika djurarter reservoar inom ordningarna Carnivora och Chiroptera. Flera arter av Mongoose är reservoarer av RABV, och den lilla indiska Mongoose(Herpestes auropunctatus) är den enda reservoaren i Puerto Rico och andra karibiska öarna på västrahalvklotet 1,2,3 . Kontrollen av RABV cirkulation i Wildlife reservoarer är typiskt åstadkommas genom en strategi för oral rabies vaccination (ORV). I USA (USA), denna förvaltning verksamhet samordnas av USDA/APHIS/Wildlife Services National rabies Management program (NRMP)4. För närvarande ingen Wildlife ORV program finns i Puerto Rico. Forskning om rabiesvaccin och olika agn typer för manguser har utförts med lovande resultat tyder på ett ORV program för manguser är möjligt5,6,7,8.
Övervakning av effekterna av ORV förlitar sig på uppskattning av bete upptag av målarter, som vanligtvis innebär att utvärdera en förändring i RV antikropp seroprevalens. Men, denna strategi kan vara utmanande i områden med en aktiv Wildlife ORV program eller i områden där RV är enzootisk och bakgrundsnivåer av rabv neutraliserande antikroppar (rvna) är närvarande i reservoararter. I sådana situationer kan en biomarkör som ingår i betet eller den externa bete matrisen vara användbar.
Olika biologiska markörer har använts för att övervaka bete upptaget i många arter, inklusive tvättbjörnar (Procyon lotor)9,10, stoats (Mustela hermelinen)11,12, European grävlingar ( Meles Meles) 13, vildsvin (Sus scrofa)14, små indiska Manguster15 och präriehundar (cynomysludovicianus)16,17, bland annat. I USA, operativa ORV beten ofta omfatta en 1% tetracyklin biomarkör i agn matrisen för att övervaka bete upptag18,19. Emellertid, nackdelar med användningen av tetracyklin inkluderar en växande oro över distributionen av antibiotika i miljön och att upptäcka tetracyklin är typiskt invasiv, kräver tandutdragning eller destruktion av djuret för att få ben prover20. Rhodamine B har utvärderats som en markör i en mängd olika vävnader och kan detekteras med ultraviolett (UV) ljus och fluorescens i hår och morrhår10,21.
Iophenoxic Acid (IPA) är ett vitt, kristallint pulver som har använts för att utvärdera bete konsumtion i Coyotes(Canis latrans)22, fjäll räv (Vulpes Lagopus)23, Red Fox (Vulpes vulpes)24, tvättbjörnar 9 , 25, vildsvin14, kronhjort (Cervus elaphus scoticus)26, Europeiska grävlingar12 och illrar (M. FURO)27, bland flera andra däggdjursarter. Retentionstiden för IPA varierar mellan arter från mindre än två veckor i vissa pungdjur28,29, till minst 26 veckor i hov-och klövdjuren26 och över 52 veckor hos tamhundar (Canis lupus familiaris)30. Retentionstider kan också vara dosberoende31. Iofenoxic syra binder starkt till serumalbumin och upptäcktes historiskt genom att mäta blod jod nivåer32. Detta indirekta tillvägagångssätt har ersatts av högpresterande vätskekromatografi (HPLC) metoder för att direkt mäta iophenoxic Acid koncentrationer med UV-detektion33, och så småningom med vätskekromatografi och masspektrometri (LCMS) 34,35. För denna studie utvecklades en mycket känslig och selektiv vätskekromatografi med tandem mass spektrometri (LC-MS/MS) metod som utnyttjar multipla reaktionsövervakning (MRM) för att kvantifiera två analoger av iofenoxic syra. Vårt mål var att använda denna LC-MS/MS metod för att utvärdera märkningen förmåga 2-(3-hydroxy-2, 4, 6-trijodbenzyl) propansyra (metyl-IPA eller me-IPA) och 2-(3-hydroxy-2, 4, 6-triiodobenzyl) butansyra (etyl-IPA eller et-IPA) och när den levereras i en ORV bete till fångenskap Mongooses.
Mongooses var levande fångas i bur fällor agnade med kommersiellt tillgängliga rökt korv och fiskolja. Mongooses var inrymt i enskilda 60 cm x 60 cm x 40 cm rostfrittstål burar och matas en daglig ransonera av ~ 50 g kommersiell torr kattmat, kompletteras två gånger per vecka med en kommersiellt tillgänglig kycklinglår. Vatten fanns tillgängligt AD libitum. Vi levererade två derivat av IPA, etyl-IPA och metyl-IPA, till fångenskap Manguster i placebo ORV beten. Alla beten bestod av en 28 mm x 20 mm x 9 mm folie Blisterförpackning med en extern beläggning (härefter "bete Matrix") som innehåller pulveriserad kyckling ägg och gelatin (tabell över material). Beten innehöll 0,7 mL vatten eller IPA-derivat och vägde cirka 3 g, varav ~ 2 g var den externa agn Matrix.
Vi erbjöd 16 captive Manguster et-IPA i tre koncentrationer: 0,14% (2,8 mg et-IPA i ~ 2 g bete matris; 3 hanar [m], 3 honor [f]), 0,4% (2,8 mg et-IPA i 0,7 ml blisterförpackning volym; 3m, 3F), och 1,0% (7,0 mg etyl-IPA i 0,7 ml blisterförpackning volym; 2m , 2F). Den sammanlagda dosen av 2,8 mg motsvarar till en dossats av 5 mg/kg27,36 och baseras på en genomsnittlig Mongoose väger av 560 g i Puerto Rico. Vi valde 1% som den högsta koncentrationen eftersom forskning tyder på att vissa biomarkörer kan ha en smak mot riskaversion vid koncentrationer > 1% hos vissa arter37. Vi erbjöd endast 1%-dosen i blisterförpackningen eftersom flockningen hindrade lösningens upplösning i lösningsmedlet tillräckligt för att integreras jämnt i bete matrisen. En kontrollgrupp (2m, 1f) fick beten fyllda med sterilt vatten och ingen IPA. Vi erbjöd beten till Manguster på morgonen (~ 8 a.m.) under eller före utfodring av deras dagliga underhåll ransonera. Betet kvarstod avlägsnades efter ca 24 timmar. Vi samlade blodprov före behandling, en dag efter behandling och sedan veckovis upp till 8 veckor efter behandling. Vi sövda Manguster genom inandning av isofluran gas och samlas upp till 1,0 ml helblod genom venipunktering av kranial Vena Cava som beskrivs för illrar38. Vi centrifugerar hela blodprov, överfört serum till kryovials och lagrat dem vid-80 ° c till analys. Alla djur provtogs inte under alla tidsperioder för att minimera effekterna av upprepade blod dragningar på djurens hälsa. Kontrolldjuren provtogs på dag 0, sedan veckovis i upp till 8 veckor efter behandling.
Vi levererade mig-IPA i tre koncentrationer: 0,035% (0,7 mg), 0,07% (1,4 mg) och 0,14% (2,8 mg), alla införlivas i Bait Matrix, med 2 hanar och 2 honor per behandlingsgrupp. Två hanar och två honor fick beten fyllda med sterilt vatten och ingen IPA. Bete erbjuder tider och Mongoose anestesi beskrivs ovan. Vi insamlade blodprov före behandling dag 1, och sedan veckovis upp till 4 veckor efter behandling.
Vi testade serum koncentrations data för normaliteten och uppskattade medel för SERUMIPA-koncentrationer av olika behandlingsgrupper. Vi använde en linjär blandad modell för att jämföra medelvärdet serum et-IPA koncentrationer poolade mellan individer. Bete typ (Matrix/blister Pack) var en fast effekt utöver experimentell dag, medan djur-ID var en slumpmässig effekt. Alla procedurer kördes med hjälp av gemensam statistisk programvara (tabell över material) och signifikans utvärderades vid α = 0,05.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1036px;" width="1036">
	<tbody>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">Acetonitrile, Optima grade</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">A996</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">Analytical balance</td>
			<td style="width:193px;">Mettler Toledo</td>
			<td style="width:304px;">XS204</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:380px;">C18 column, 2.1 x 50 mm, 2.5-&#181;m particle size</td>
			<td style="width:193px;">Waters Corp.</td>
			<td style="width:304px;">186003085</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">ESI Source</td>
			<td style="width:193px;">Agilent&#160;</td>
			<td style="width:304px;">G1958-65138</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:380px;">Ethyl-iophenoxic acid, 97 %</td>
			<td style="width:193px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;">Lot MKBP5399V</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:380px;">Formic acid, LC/MS grade</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">A117</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:380px;">LCMS software</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">MassHunter Data Acquisition and Quantitative Analysis</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:380px;">Methyl-iophenoxic acid, 97 % (w/w)</td>
			<td style="width:193px;">PR EuroChem Ltd.</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;">Lot PR0709514717</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">Microanalytical balance</td>
			<td style="width:193px;">Mettler Toledo</td>
			<td style="width:304px;">XP6U</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">Microcentrifuge</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">5415C</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">MS/MS</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">G6470A</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:380px;">N-Evap</td>
			<td style="width:193px;">Organomation</td>
			<td style="width:304px;">115</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:380px;">Oral Rabies Vaccine Baits</td>
			<td style="width:193px;">IDT Biologika, Dessau Rossleau, Germany</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">Propyl-iophenoxic acid, 99 % (w/w)</td>
			<td style="width:193px;">PR EuroChem Ltd.</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;">Lot PR100612108RR</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:380px;">Repeat pipettor</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">M4</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:380px;">Screw-top autosampler vial caps, PTFE-lined</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">5190-7024</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:25px;width:380px;">Sodium chloride, Certified ACS grade</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">S271</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:380px;">Statistical Software Package</td>
			<td style="width:193px;">SAS Institute, Cary, North Carolina, USA</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:380px;">Trifluoroacetic acid, 99 %</td>
			<td style="width:193px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:304px;">L06374</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;width:380px;">UPLC</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">1290 Series</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:380px;">Vortex Mixer</td>
			<td style="width:193px;">Glas-Col</td>
			<td style="width:304px;">099A PV6</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">0.2-mL pipettor tips</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">30089.413</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">0.5-mL pipettor tips</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">30089.421</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">1.5-mL microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">14-666-325</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:380px;">1250-&#181;L capacity pipette tips</td>
			<td style="width:193px;">GeneMate</td>
			<td style="width:304px;">P-1233-1250</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:380px;">1-mL pipettor tips</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">30089.43</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:380px;">2-mL amber screw-top autosampler vials</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">5182-0716</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">5-mL pipettor tips</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">30089.456</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">80-position microcentrifuge tube rack</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">05-541-2</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:380px;">8-mL amber vials with PTFE-lined caps</td>
			<td style="width:193px;">Wheaton</td>
			<td style="width:304px;">224754</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:380px;">70 % (v/v) isopropanol</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">A459</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">100-1000 &#181;L air displacement pipette</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">ES-100</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of iophenoxic acid analogues in small indian mongoose (herpestes auropunctatus) sera for use as an oral rabies vaccination biological marker

Den lilla indiska Mongoose (Herpestes auropunctatus) är en reservoar av rabiesvirus (rabv) i Puerto Rico och omfattar över 70% av djur rabies fall rapporteras årligen. Kontrollen av RABV cirkulation i Wildlife reservoarer är typiskt åstadkommas genom en strategi för oral rabies vaccination (ORV). För närvarande ingen Wildlife ORV program finns i Puerto Rico. Forskning om orala rabiesvaccin och olika typer av bete för manguser har genomförts med lovande resultat. Övervaka framgången för ORV förlitar sig på uppskattning av bete upptag av målarter, som vanligtvis innebär att utvärdera en förändring i RABV neutraliserande antikroppar (RVNA) efter vaccination. Denna strategi kan vara svår att tolka i områden med en aktiv Wildlife ORV program eller i områden där rabv är enzootisk och bakgrundsnivåer av rvna är närvarande i reservoararter. I sådana situationer kan en biomarkör som ingår i vaccinet eller bete matrisen vara användbar. Vi erbjöd 16 captive Manguster placebo ORV beten som innehåller etyl-iofenoxic syra (et-IPA) i koncentrationer av 0,4% och 1% inne i betet och 0,14% i den externa bete matris. Vi erbjöd också 12 captive Manguster ORV beten som innehåller metyl-iofenoxic Acid (ME-IPA) i koncentrationer av 0,035%, 0,07% och 0,14% i den externa Bait Matrix. Vi samlat ett serumprov före bete erbjudande och sedan veckovis för upp till åtta veckor efter erbjudande. Vi extraherade Iophenoxic syror från sera till acetonitril och kvantifieras med hjälp av vätskekromatografi/masspektrometri. Vi analyserade serum för et-IPA eller me-IPA genom vätskekromatografi-masspektrometri. Vi fann tillräcklig märkning förmåga för minst åtta och fyra veckor för et-och Me-IPA, respektive. Båda IPA-derivaten kan vara lämpliga för fältutvärdering av ORV-bete i Mongooses. På grund av markörens livslängd i Mungo serum måste man vara noga med att inte blanda ihop resultat genom att använda samma IPA-derivat under efterföljande utvärderingar.

Representativa jonkromatogram från en me-IPA-analys presenteras i figur 1. Kontroll Mongoose serum (figur 1a) illustrerar retentionstiden för et-IPA (surrogat analyte) och frånvaron av me-IPA vid den indikerade retentionstiden. Kvalitetskontroll provet (figur 1b) illustrerar baslinjen separation av me-IPA från et-IPA samt kvantifierare och kval övergångar för me-IPA. Figur...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose Herpestes Auropunctatus Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker at JoVE.co

Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose Herpestes Auropunctatus Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker

Vi erbjöd captive Manguster placebo oral rabies vaccin beten med etyl eller metyl-iofenoxic syra som en biomarkör och kontrollerat bete upptag med hjälp av en ny vätskekromatografi med tandem masspektrometri (LC-MS/MS) metod.

Analys av Iophenoxic Acid-analoger i små indiska Mongoose (Herpestes auropunctatus) sera för användning som en oral rabiesvaccination biologisk markör

The small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus) is a reservoir of rabies virus (RABV) in Puerto Rico and comprises over 70% of animal rabies cases ...

Vi skisserade ett förfarande för att upptäcka och kvantifiera iophenoxic syra i mongoose serum. Resultaten tyder på att iophenoxic syra kan användas som en biologisk markör för att verifiera betaupptag i arten. Den största fördelen med denna metod är att den möjliggör kvantifiering av iophenoxic syra analoger på delar per miljard nivåer, med hjälp av en enkel att utföra proteinutfällning teknik.För mobil fas A, kombinera en milliliter myrsyra med en liter ultra rent vatten. För mobil fas B, kombinera en milliliter myrsyra med en liter acetonitril. För spädningsvätskan, kombinera en milliliter av trifluoroättiksyra med 200 milliliter acetonitril.Nästa, väga cirka 10 milligram metyl-IPA på mikrobalans, och spela in massan till plus eller minus 0001 milligram. Överför kvantitativt metyl-IPA till en 10 milliliter klass A-volymetrisk kolv, med fyra till fem milliliter acetonitril. Sonikera i en minut för att lösa upp alla fasta ämnen och sedan ta till volym med acetonitril.Överför cirka åtta milliliter av varje bestånd till åtta milliliter bärnstensfärgade glasflaskor med PTFE-fodrade lock och förvara proverna i rumstemperatur. Sedan överför du det återstående lagret till farligt avfall. För 25X lager sju metyl-IPA lager förbereda ett lager av metyl-IPA och acetonitril på cirka 200 mikrogram per milliliter.Överför en milliliter av beståndet till en fem milliliterkolv och späd till volym med acetonitril. Sedan, överför beståndet till en åtta milliliter bärnsten glasflaska med en PTFE-fodrad mössa och förvara i rumstemperatur. Med hjälp av en upprepa pipettor, förbereda de sex ytterligare 25X metyl-IPA lager som beskrivs i texten protokollet i åtta milliliter bärnstensfärgade glasflaskor med PTFE-fodrade mössor och förvara i rumstemperatur.För 25X-surrogatbeståndet överför 0,1 milliliter av det koncentrerade etyl-IPA-beståndet till en volymetriska kolv klass A av 100 milliliter och späd sedan ut till volym med acetonitril. Överför cirka åtta milliliter av surrogatbeståndet till en åtta milliliter bärnstensfärgad glasflaska med PTFE-fodrad mössa och förvara i rumstemperatur. Överför kvarvarande lager till farligt avfall.Därefter förbereda 4X lager som innehåller både metyl-IPA och etyl-IPA i 10 milliliter skruv-top glas auto sampler injektionsflaskor, som beskrivs i textprotokollet. Till exempel, för att förbereda lager 4X7, tillsätt 0,2 milliliter av 25X lager sju metyl-IPA lager till en två milliliter injektionsflaska med hjälp av upprepa pipettor med en 0,5 milliliter kapacitet spets. Tillsätt 0,2 milliliter av 25X surrogat etyl-IPA lager med hjälp av en upprepa pipettor med en 0,5 milliliter kapacitet spets.Tillsätt 0,85 milliliter acetonitril med hjälp av en repeterpipettor med en spets för en milliliterkapacitet. Kapa injektionsflaskan säkert och invertera fem gånger för att blanda. Efter detta, förbereda standardkurvan i två milliliter skruv-top auto sampler injektionsflaska enligt beskrivningen i textprotokollet.Till exempel, för att förbereda standard sju, tillsätt 0,2 milliliter av 4X7-lagret till en två milliliter injektionsflaska, med hjälp av en upprepad pipettor med en 0,5 milliliter kapacitet spets. Tillsätt 0,6 milliliter ultra renhet joniserat vatten med hjälp av en upprepa pipettor med en en milliliter kapacitet spets. Kapa injektionsflaskan ordentligt och invertera fem gånger för att blanda.För varje prov, förbereda en 1,5 milliliter mikro centrifug röret som innehåller 200 till 300 milligram natriumklorid och ordna rören i en 80 position plast rack. För varje prov, etikett en 1,5 milliliter mikro centrifugrör som A och en andra mikro centrifugrör som B.Ordna rören i en 80 position plastställ. Placera följande material och utrustning som behövs för serumutsug i ett skåp för biosäkerhet av klass två:mikrocentrifugrören, en virvelblandare, en repeterpipettor med 0,5 milliliter och fem milliliterkapacitetsspetsar, en 100 till 1000 mikroliter luftförskjutningspipets med 1000 mikroliterspetsar, behållare med en cirka 100 milliliter vardera av spädningsvätska och ultra renhet joniserat vatten, och biohazard avfallsbehållare.Därefter ta bort serumprover från fryst förvaring och varm till rumstemperatur i biosäkerhetsskåpet. Vortex blanda varje serumprov före provtagning. Med hjälp av en upprepad pipettor med en 0,5 milliliter kapacitet spets, dispensera 05 milliliter mongoose serum i rör A och tillsätt 05 milliliter av 25X surrogat lager.Tillsätt sedan 0,95 milliliter spädningsmedel till rör A med hjälp av en repeterpipettor med fem milliliter kapacitetsspets. Kapa rören säkert och vortex blanda i 10 till 15 sekunder. Lägg därefter till reglagemongoserumet i tub A.Fortify var och en av 4QC-proverna med me-IPA med hjälp av en upprepad pipettor med en 0,5 milliliter kapacitetsspets.Lägg till 25X surrogatlager i QC-proverna. Lägg sedan till spädningsvätskan i QC-proverna. Cap rören och vortex mix.Fördela den förvägda natriumkloriden i tub A och vortexblandning tre gånger i åtta till 12 sekunder. Torka sedan av de utvändiga ytorna på injektionsflaskans rack som innehåller tub A med hjälp av 70%isopropanol. Efter att proverna har avlägsnats från biosäkerhetsskåpet, centrifugröret A vid 1200 gånger G i en minut för att separera vatten- och acetonitrilfaserna.Pipett 0,8 milliliter av den övre acetonitrilfasen till tub B, med hjälp av en 100 till 1000 mikroliter luftförskjutningspipett. Överför den återstående lösningen i rör A till farligt avfall och kasta det tomma röret i en behållare för biologiskt riskavfall. Nu, ta bort acetonitril och trifluoracetic från rör B med ett försiktigt flöde av kvävegas i en 45 grader Celsius vattenbad.Tillsätt 0,25 milliliter acetonitril till tub B med hjälp av en upprepa pipettor och virvelblandning i fyra till fem sekunder. Sedan centrifug vid 1200 gånger G i två till fyra sekunder för att samla vätskan i botten av röret. Efter centrifugeringen, tillsätt 0,75 milliliter ultra pure deionized vatten till rör B med hjälp av en upprepa pipettor med en fem milliliter kapacitet spets och vortex mix i fyra till fem sekunder.Centrifugera vid 1200 gånger G i en minut för att klargöra provet. Överför sedan 0,75 milliliter av supernatanten till en injektionsflaska med auto sampler med hjälp av en 1000 mikroliter luftförskjutningspipett och kassera pipettspetsarna i behållaren för biohazardavfall. Kapa varje injektionsflaska med auto sampler säkert för LC-MS/MS-analys.Överför den återstående lösningen i rör B till farligt avfall och kasta det tomma röret i en behållare för biologiskt riskavfall. Konfigurera LC-MS/MS med alla parametrar som beskrivs i textprotokollet. Ström på LC-MS/MS och låt kolonnen nå 70 grader Celsius innan du ställer in flödeshastigheten till 0,8 milliliter per minut.Ställ in en sekvens i datainsamlingsprogramvaran för att injicera standardkurvan före och efter varje sats bestående av kvalitetskontrollprover och okända prover. Injicera alla standarder och prover och skaffa MR-jonkromatogram med hjälp av parametrar som anges i textprotokollet. Efter sekvenskomplettering ska du stänga av LC-MS/MS och kassera alla injektionsblad för auto sampler i farligt avfall.Jonkromatogrammet för bekämpning mongoose serum illustrerar retentionstiden för etyl-IPA och frånvaron av metyl-IPA vid den angivna retentionstiden. Kvalitetskontrollprovets jonkromatogram illustrerar baslinjeseparationen av metyl-IPA från etyl-IPA, samt kvantifierare och kvalificerarövergångar för metyl-IPA. Jonkromatogrammet av det representativa provet från studien visar en observerad serumkoncentration på 33,5 mikrogram per mikroliter av metyl-IPA.Noggrannheten och precisionsresultaten för kontroll mongoose serum berikade med metyl-IPA visas här. Procent återvinning varierade från 96,9 till 109%Den procent relativa avvikelsen på de tre befästningsnivåerna var 3,4%1,7%och 2,3%respektive. Noggrannheten och precisionsresultaten för kontroll mongoose serum berikade med etyl-IPA visas här.Procent återvinning varierade från 89,5 till 115%Den procent relativa standardavvikelsen vid de fem befästningsnivåerna var 4,3%1,5%2,3%5,6%och 1,1%respektive. Alla mongooses erbjuds etyl-IPA och metyl-IPA beten konsumeras minst 25%av betet inom 24 timmars tidsbegränsning och hade kvantifierbara nivåer av etyl-IPA och metyl-IPA i deras sera, respektive. Den potentiella nyttan av metoden skulle kunna ökas genom att konfigurera LC-MS för att samla in data för andra iophenoxic syra analoger, såsom propyl och butyl iophenoxic syra.Vi uppmuntrade personalen att konsultera de senaste rekommendationerna från den rådgivande kommittén för immuniseringspraxis, eller deras institutionella biosäkerhetskommitté för vägledning om huruvida preexposure rabies vaccination krävs. Avsnitt 2.3 genom 2.6 i detta protokoll som omfattar arbetar med outspädd serum bör utföras i en klass två biosäkerhet skåp.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose (Herpestes Auropunctatus) Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker

An Analytical Tool-box for Comprehensive Biochemical, Structural and Transcriptome Evaluation of Oral Biofilms Mediated by Mutans Streptococci

En analytisk verktygslåda för omfattande biokemiska, struktur-och transkriptom Utvärdering av Oral Biofilmer medieras av mutans streptokocker

Biofilms are highly dynamic, organized and structured communities of microbial cells enmeshed in an extracellular matrix of variable density and ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

Introduktion Shear stress i studien av bakteriell vidhäftning

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

En introduktion till parasitsteklar av<em&gt; Drosophila</em&gt; Och Antiparasite immunsvar

Most known parasitoid wasp species attack the larval or pupal stages of Drosophila. While Trichopria drosophilae infect the pupal stages of the host (Fig. ...

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization (LNA flow-FISH): a Method for Bacterial Small RNA Detection

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization LNA flow-FISH: a Method for Bacterial Small RNA Detection

Låst nukleinsyra Flödescytometri-fluorescens På plats Hybridisering (LNA flow-FISH): En metod för bakteriell små RNA-detektering

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a powerful technique that is used to detect and localize specific nucleic acid sequences in the cellular ...

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Användning av<em&gt; Galleria mellon</em&gt; Som modellorganism för att studera<em&gt; Legionella pneumophila</em&gt; Infektion

Legionella pneumophila, the causative agent of a severe pneumonia named Legionnaires&#39; disease, is an important human pathogen that infects and ...

Intralymphatic Immunotherapy and Vaccination in Mice

Intralymfatisk Immunterapi och vaccination hos möss

Vaccines are typically injected subcutaneously or intramuscularly for stimulation of immune responses. The success of this requires efficient drainage of ...

Porphyromonas gingivalis as a Model Organism for Assessing Interaction of Anaerobic Bacteria with Host Cells

Porphyromonas gingivalis as a Model Organism for Assessing Interaction of Anaerobic Bacteria with Host Cells

Porphyromonas gingivalis som modellorganism för att bedöma Interaktion av anaeroba bakterier med värdceller

Anaerobic bacteria far outnumber aerobes in many human niches such as the gut, mouth, and vagina. Furthermore, anaerobic infections are common and ...

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Inrättandet av en hög kapacitet Setup för screening av små molekyler som modulerar c-di-GMP Signalering i<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em

Bacterial resistance to traditional antibiotics has driven research attempts to identify new drug targets in recently discovered regulatory pathways. ...

In Vitro Methods for Comparing Target Binding and CDC Induction Between Therapeutic Antibodies: Applications in Biosimilarity Analysis

In Vitro Methods for Comparing Target Binding and CDC Induction Between Therapeutic Antibodies: Applications in Biosimilarity Analysis

In vitro- metoder för att jämföra målbindning och CDC-induktion mellan terapeutiska antikroppar: applikationer i biosimilaritetsanalys

Therapeutic monoclonal antibodies (mAbs) are relevant to the treatment of different pathologies, including cancers. The development of biosimilar mAbs by ...

In Vitro ELISA Test to Evaluate Rabies Vaccine Potency

In Vitro ELISA Test för att utvärdera rabiesvaccin potens

The growing global concern for the animal welfare is encouraging manufacturers and the National Control Laboratories (OMCLs) to follow the 3Rs strategy ...