Name: analysis of iophenoxic acid analogues in small indian mongoose (herpestes auropunctatus) sera for use as an oral rabies vaccination biological marker
Uploaded: 2019-05-31T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose Herpestes Auropunctatus Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker at JoVE.co

Bu araştırma, ABD Tarım Bakanlığı, hayvan ve bitki sağlığı gözetim hizmeti, yaban hayatı Hizmetleri, Ulusal Rabies yönetim programı ve ıDT Biologika (DESSAU-ROSSLAU, Almanya) ' nın intramural araştırma programı tarafından kısmen destekleniyordu.

Tüm prosedürler onaylı araştırma Protokolü QA-2597 altında USDA Ulusal Yaban hayatı araştırma merkezi 'nin kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır.
Not: aşağıdaki protokol, Mongoose serumda metil-iophenoxik asit tespit etmek için analiz prosedürü açıklanmaktadır. Bu yöntem, Mongoose serumda etil-iophenoxik asit analiziyle başlayan yinelemeli bir sürecin son sürümüdür. Etil-iophenoxik asidin ilk değerlendirilmesi sırasında yöntem...

<ol>
	<li>Nel, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mongoose+rabies+in+southern+Africa:+a+re-evaluation+based+on+molecular+epidemiology.">Mongoose rabies in southern Africa: a re-evaluation based on molecular epidemiology.</a> Virus Research. 109 (2), 165-173 (2005).</li><li>Zieger, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+phylogeography+of+rabies+in+Grenada,+West+Indies,+and+implications+for+control.">The phylogeography of rabies in Grenada, West Indies, and implications for control.</a> PLOS Neglected Tropical Diseases. 8 (10), e3251 (2004).</li><li>Monroe, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+surveillance+in+the+United+States+during+2014.">Rabies surveillance in the United States during 2014.</a> Journal of the American Veterinary Medical Association. 248 (7), 777-788 (2015).</li><li>Slate, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Status+of+oral+rabies+vaccination+in+wild+carnivores+in+the+United+States.">Status of oral rabies vaccination in wild carnivores in the United States.</a> Virus Research. 111, 68-76 (2005).</li><li>Blanton, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccination+of+small+Asian+mongoose+(Herpestes+javanicus)+against+rabies.">Vaccination of small Asian mongoose (Herpestes javanicus) against rabies.</a> Journal of Wildlife Diseases. 42 (3), 663-666 (2006).</li><li>Vos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+vaccination+of+captive+small+Indian+mongoose+(Herpestes+auropunctatus)+against+rabies.">Oral vaccination of captive small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus) against rabies.</a> Journal of Wildlife Diseases. 49 (4), 1033-1036 (2013).</li><li>Berentsen, A. R., Johnson, S. R., VerCauteren, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+ONRAB&#174;+bait+matrix+flavor+preference+by+mongoose+(Herpestes+auropunctatus)+in+Puerto+Rico:+Implications+for+Oral+Rabies+Vaccination.">Evaluation of ONRAB&#174; bait matrix flavor preference by mongoose (Herpestes auropunctatus) in Puerto Rico: Implications for Oral Rabies Vaccination.</a> Caribbean Journal of Science. 48 (1), 52-58 (2014).</li><li>Ortmann, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+studies+with+the+oral+rabies+virus+vaccine+strain+SPBN+GASGAS+in+the+small+Indian+mongoose+(Herpestes+auropunctatus).">Safety studies with the oral rabies virus vaccine strain SPBN GASGAS in the small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus).</a> BMC Veterinary Research. 14 (1), 90 (2018).</li><li>Linhart, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+field+evaluation+of+baits+for+delivering+oral+rabies+vaccines+to+raccoons+(Procyon+lotor).">A field evaluation of baits for delivering oral rabies vaccines to raccoons (Procyon lotor).</a> Journal of Wildlife Diseases. 30 (2), 185-194 (1994).</li><li>Fry, T. L., Atwood, T., Dunbar, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+rhodamine+B+as+a+biomarker+for+raccoons.">Evaluation of rhodamine B as a biomarker for raccoons.</a> Human Wildlife Interactions. 4 (2), 275-280 (2010).</li><li>Jones, C., Moller, H., Hamilton, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+potential+techniques+for+identifying+individual+stoats+(Mustela+erminea)+visiting+control+or+monitoring+stations.">A review of potential techniques for identifying individual stoats (Mustela erminea) visiting control or monitoring stations.</a> New Zealand Journal of Zoology. 31 (3), 193-203 (2004).</li><li>de Leeuw, A. N. S., Smith, G. C., Woods, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+iophenoxic+acid+to+assess+bait+uptake+by+European+badgers.">Use of iophenoxic acid to assess bait uptake by European badgers.</a> Advances in Vertebrate Pest Management. 4, 243-254 (2006).</li><li>Southey, A. K., Sleeman, D. P., Gormley, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sulfadimethoxine+and+rhodamine+B+as+oral+biomarkers+for+European+badgers+(Meles+meles).">Sulfadimethoxine and rhodamine B as oral biomarkers for European badgers (Meles meles).</a> Journal of Wildlife Diseases. 38 (2), 378-384 (2002).</li><li>Massei, G., Jones, A., Platt, T., Cowan, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+Acid+as+a+Long-Term+Marker+for+Wild+Boar.">Iophenoxic Acid as a Long-Term Marker for Wild Boar.</a> Journal of Wildlife Management. 73 (3), 458-461 (2009).</li><li>Creekmore, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Field+evaluation+of+baits+and+baiting+strategies+for+delivering+oral+vaccine+to+mongooses+in+Antigua,+West+Indies.">Field evaluation of baits and baiting strategies for delivering oral vaccine to mongooses in Antigua, West Indies.</a> Journal of Wildlife Diseases. 30 (4), 497-505 (1994).</li><li>Creekmore, T. E., Rock, R. E., Hurley, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+baiting+system+for+delivery+of+an+oral+plague+vaccine+to+black-tailed+prairie+dogs.">A baiting system for delivery of an oral plague vaccine to black-tailed prairie dogs.</a> Journal of Wildlife Diseases. 38 (1), 32-39 (2002).</li><li>Fernandez, J. R. R., Rocke, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Rhodamine+B+as+a+biomarker+for+oral+plague+vaccination+of+prairie+dogs.">Use of Rhodamine B as a biomarker for oral plague vaccination of prairie dogs.</a> Journal of Wildlife Diseases. 47 (3), 765-768 (2011).</li><li>Johnston, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+and+significance+of+tetracycline+stability+in+rabies+vaccine+baits.">Evaluation and significance of tetracycline stability in rabies vaccine baits.</a> Journal of Wildlife Diseases. 41 (3), 549-558 (2005).</li><li>Algeo, T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+rabies+vaccination+variation+in+tetracycline+biomarking+among+Ohio+Raccoons.">Oral rabies vaccination variation in tetracycline biomarking among Ohio Raccoons.</a> Journal of Wildlife Diseases. 49 (2), 332-337 (2013).</li><li>Crier, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetracyclines+as+a+fluorescent+marker+in+bones+and+teeth+of+rodents.">Tetracyclines as a fluorescent marker in bones and teeth of rodents.</a> Journal of Wildlife Management. 34 (4), 829-834 (1970).</li><li>Fisher, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+using+Rhodamine+B+as+a+marker+for+wildlife+studies.">Review of using Rhodamine B as a marker for wildlife studies.</a> Wildlife Society Bulletin. 27 (2), 318-329 (1999).</li><li>Knowlton, F. K., Savarie, P. J., Wahlgren, C. E., Hayes, D. J., Shumake, S. A., Bullard, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+marks+by+coyotes+ingesting+baits+containing+iophenoxic+acid,+Mirex+and+Rhodamine+B.">Physiological marks by coyotes ingesting baits containing iophenoxic acid, Mirex and Rhodamine B.</a> Vertebrate Pest Control and Management Materials. , 141-147 (1987).</li><li>Follmann, E. H., Savarie, P. J., Ritter, D. G., Baer, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+marking+of+arctic+foxes+with+iophenoxic+acid.">Plasma marking of arctic foxes with iophenoxic acid.</a> Journal of Wildlife Diseases. 23 (4), 709-712 (1987).</li><li>Saunders, G., Harris, S., Eason, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+acid+as+a+quantitative+bait+marker+for+foxes.">Iophenoxic acid as a quantitative bait marker for foxes.</a> Wildlife Research. 20, 297-302 (1993).</li><li>Hadidian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acceptance+of+simulated+oral+rabies+vaccine+baits+by+urban+raccoons.">Acceptance of simulated oral rabies vaccine baits by urban raccoons.</a> Journal of Wildlife Diseases. 25 (1), 1-9 (1989).</li><li>Sweetapple, P. J., Nugent, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+acid+as+a+serum+marker+for+red+deer+(Cervus+elaphus+scoticus).">Iophenoxic acid as a serum marker for red deer (Cervus elaphus scoticus).</a> Wildlife Research. 25, 649-654 (1998).</li><li>Ogilvie, S. C., Eason, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+iophenoxic+acid+and+rhodamine+B+for+marking+feral+ferrets+(Mustela+furo).">Evaluation of iophenoxic acid and rhodamine B for marking feral ferrets (Mustela furo).</a> New Zealand Journal of Zoology. 25 (2), 105-108 (1998).</li><li>Eason, C. T., Batcheler, D., Frampton, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+pharmacokinetics+of+iophenoxic+acid+in+cats+and+brushtail+possums.">Comparative pharmacokinetics of iophenoxic acid in cats and brushtail possums.</a> Wildlife Research. 21, 377-380 (1994).</li><li>Fisher, P. M., Marks, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+iophenoxic+acid+as+a+biomarker+for+swamp+wallabies+(Wallabia+bicolor).">Evaluation of iophenoxic acid as a biomarker for swamp wallabies (Wallabia bicolor).</a> Wildlife Research. 24, 97-103 (1997).</li><li>Baer, G. M., Shaddock, J. H., Hayes, D. J., Savarie, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+acid+as+a+serum+marker+in+carnivores.">Iophenoxic acid as a serum marker in carnivores.</a> Journal of Wildlife Management. 49 (1), 49-51 (1985).</li><li>Spurr, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iophenoxic+acid+as+a+systemic+blood+marker+for+assessment+of+bait+acceptance+by+stoats+(Mustela+ermine)+and+weasels+(Mustela+nivalis).">Iophenoxic acid as a systemic blood marker for assessment of bait acceptance by stoats (Mustela ermine) and weasels (Mustela nivalis).</a> New Zealand Journal of Zoology. 29 (2), 135-142 (2002).</li><li>Mudge, G. H., Strewler, G. J., Desbiens, N., Berndt, W. O., Wade, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excretion+and+distribution+of+iophenoxic+acid.">Excretion and distribution of iophenoxic acid.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 178 (1), 159-172 (1971).</li><li>Jones, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-performance+liquid+chromatographic+determination+of+iophenoxic+acid+in+serum.">High-performance liquid chromatographic determination of iophenoxic acid in serum.</a> Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications. 654 (2), 293-296 (1994).</li><li>Wiles, M. C., Campbell, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liquid+chromatography-electrospray+ionization+mass+spectrometry+for+direct+identification+and+quantification+of+iophenoxic+acid+in+serum.">Liquid chromatography-electrospray ionization mass spectrometry for direct identification and quantification of iophenoxic acid in serum.</a> Journal of Chromatography B. 832 (1), 144-157 (2006).</li><li>Ballesteros, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+by+LC/ESI-MS+of+iophenoxic+acid+derivatives+and+evaluation+as+markers+of+oral+baits+to+deliver+pharmaceuticals+to+wildlife.">Analysis by LC/ESI-MS of iophenoxic acid derivatives and evaluation as markers of oral baits to deliver pharmaceuticals to wildlife.</a> Journal of Chromatography B. 878 (22), 1997-2002 (2010).</li><li>Purdey, D. C., Petcu, M., King, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+protocol+for+detecting+two+systemic+bait+markers+(Rhodamine+B+and+iophenoxic+acid)+in+small+mammals.">A simplified protocol for detecting two systemic bait markers (Rhodamine B and iophenoxic acid) in small mammals.</a> New Zealand Journal of Zoology. 30 (3), 175-184 (2003).</li><li>Tobin, M. E., Koehler, A. E., Sugihara, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetracyclines+as+a+fluorescent+marker+in+bones+and+teeth+of+rodents.">Tetracyclines as a fluorescent marker in bones and teeth of rodents.</a> Journal of Wildlife Management. 60 (1), 202-207 (1996).</li><li>Briscoe, J. A., Syring, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+for+emergency+airway+and+vascular+access+in+special+species.">Techniques for emergency airway and vascular access in special species.</a> Seminars in Avian and Exotic Pet Medicine. 13 (3), 118-131 (2004).</li><li>Eason, C. T., Frampton, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+plasma+pharmacokinetics+of+iophenoxic+and+iopanoic+acids+in+goat.">The plasma pharmacokinetics of iophenoxic and iopanoic acids in goat.</a> Xenobiotica. 2 (2), 185-189 (1992).</li><li>Hilton, H. E., Dunn, A. M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mongooses: their natural history. , (1967).</li><li>Stevens, C. E., Hume, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Comparative physiology of the vertebrate digestive system. Second edition. , (1995).</li><li>National Rabies Management Program (NRMP). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Oral rabies vaccination draft operations manual. , (2009).</li></ol>

LC-MS/MS yöntemi, Mongoose serumda Me-IPA ve et-ıPA doğru ölçmek için birden fazla reaksiyon izleme seçicilik kullanılan çalışmalar için geliştirilmiştir. MS/MS algılamanın seçiciliği Ayrıca, analizinden önce serum proteinleri çökeltmek için sadece Asetonitril bağlı basit bir temizleme protokolü için izin.
İophenoxic asitleri ACN içinde çözünür ama neredeyse suda çözünmez. ACN ekstraksiyon su dışlamak için, sodyum klorür açık bir su zorlamak için ekle...

Kuduz virüsü (RABV) bir negatif anlamda tek telli Lyssavirus, ve siparişler Carnivora ve Chiroptera içinde çeşitli yaban hayatı rezervuar türler arasında dolaşır. Firavun birden çok türü RABV rezervuar ve küçük Hint Firavun (Herpestes auropunctatus) Porto Riko ve Batı yarımküredeki diğer Karayip Adaları tek rezervuar1,2,3 . Yaban hayatı rezervuarında RABV sirkülasyonunun kontrolü genellikle oral kuduz aşısı (ORV) stratejisiyle gerçekleştirilir. ABD 'de (ABD), bu yönetim etkinliği USDA/APHIS/yaban hayatı Hizmetleri Ulusal Rabies yönetim programı (NRMP)4tarafından koordine edilir. Şu anda hiçbir yaban hayatı ORV programı Porto Riko bulunmaktadır. Kuduz aşıları ve Mongooses için çeşitli yem türleri içine araştırma Mongooses için bir ORV programı düşündürmektedir umut verici sonuçlar ile gerçekleştirilmiştir mümkündür5,6,7,8.
ORV etkisini izleme genellikle RV antikor seroprevalasyonu bir değişiklik değerlendirmek içerir hedef türler tarafından yem alımı tahmin dayanır. Ancak, bu strateji aktif bir yaban hayatı ORV programları veya RV enzootik ve arka plan seviyeleri rabv nötralize antikorlar (rvna) rezervuar türlerinde mevcut olan alanlarda zorlu olabilir. Bu gibi durumlarda, yem veya dış yem matrisinde yer alan bir biyomarker yararlı olabilir.
Çeşitli biyolojik belirteçleri rakunlar (Procyon rakun)9,10, stoats (Mustela Ermin)11,12, Avrupa porsuk (dahil olmak üzere çok sayıda türler, yem alımı izlemek için kullanılmıştır Meles meles) 13, Wild yaban domuzu (sus Scrofa)14, küçük Hint Mongooses15 ve çayır köpekleri (cynomysludovicianus)16,17, diğerleri arasında. ABD 'de, operasyonel ORV yemler genellikle yem Matrix üzerinde% 1 tetrasiklin biyomarker içerir, Bait alımını izlemek için18,19. Ancak, tetrasiklin kullanımı dezavantajları çevreye antibiyotik dağılımı üzerinde büyüyen bir endişe ve tetrasiklin tespiti genellikle invazif olduğunu, diş çıkarma veya hayvan imha gerektiren kemik elde etmek için örnekleri20. Rhodamine B çeşitli dokularda bir marker olarak değerlendirildi ve saç ve bıyık,10,21ultraviyole (UV) ışık ve floresans kullanılarak tespit edilebilir.
Iophenoxic asit (IPA), Coyotes (Canis Latrans)22, Arctic Fox (Vulpes Kar kekliği)23, Red Fox (Vulpes vulpes)24, rakunlar yem tüketimi değerlendirmek için kullanılan bir beyaz, kristalin tozu 9 , 25, yaban domuzu14, kırmızı geyik (Cervus elaphus scoticus)26, Avrupa porsuk12 ve yaban gelinciği (M. furosu)27, diğer birçok memeli türler arasında. IPA saklama süreleri bazı Keseliler28,29, en az 26 hafta içinde toynaklı26 ve üzerinde 52 hafta içi köpekler (Canis lupus familiaris)30daha az iki haftadan türler tarafından değişir. Bekletme süreleri de doza bağımlı31olabilir. İophenoxic asit serum albümin güçlü bağlar ve tarihsel kan iyot seviyeleri32ölçümü ile tespit edildi. Bu dolaylı yaklaşım yüksek performanslı sıvı kromatografi (HPLC) yöntemleri ile UV algılama33ile iophenoxic asit konsantrasyonlarını doğrudan ölçmek için, ve sonunda sıvı kromatografi ve kütle spektrometresi (LCMS) ile tespit edildi 34,35. Bu çalışmada, iophenoxic asidin iki analogunu ölçmek için birden fazla reaksiyon izleme (MRM) kullanan, tandem kütle spektrometresi (LC-MS/MS) yöntemi ile son derece hassas ve seçici bir sıvı kromatografi geliştirilmiştir. Amacımız bu LC-MS/MS yöntemini 2-(3-hidroksi-2 ' nin işaretleme yeteneğini değerlendirmek için kullanmak 4, 6-triiodobenzyl) propanoik asit (metil-IPA veya Me-ıPA) ve 2-(3-hidroksi-2, 4, 6-triiodobenzyl) butanoik asit (etil-IPA veya et-ıPA) ve bir ORV içinde teslim edildiğinde esir Mongooses için yem.
Mongooses, ticari olarak kullanılabilir füme sosis ve balık yağı ile kaplandı kafes tuzakları yakalanan canlı. Mongooses bireysel 60 cm x 60 cm x 40 cm paslanmaz çelik kafeslerde yer aldı ve bir günlük rasyon besleniyor ~ 50 g ticari kuru kedi maması, ticari olarak kullanılabilir Tavuk uyluk ile haftada iki kez tamamlayıcı. Su mevcut reklam Isteğe bağlıoldu. Biz iki türevleri IPA, etil-ipa ve metil-IPA, plasebo ORV baits içinde esir Mongooses teslim. Tüm yemler, toz tavuk yumurtası ve jelatin (malzeme tablosu) içeren bir dış kaplama (bundan sonra "yem matris") ile bir 28 mm x 20 mm x 9 mm folyo blister paketinden oluşmuştur. Baits içeren 0,7 mL su veya ıPA türevi ve ağırlığı yaklaşık 3 g, hangi ~ 2 g dış yem matris oldu.
Biz üç konsantrasyonda 16 esir Mongooses et-IPA teklif:% 0,14 (2,8 mg et-ıPA ~ 2 gr yem matrisinde; 3 erkek [m], 3 kadın [f]),% 0,4 (2,8 mg et-ıPA, 0,7 mL blister paket hacminde; 3M, 3F) ve% 1,0 (7,0 mL blister paket hacminde 0,7 mg etil-ıPA; 2m , 2F). Toplam doz 2,8 mg bir doz oranına karşılık gelir 5 mg/kg27,36 ve bir ortalama Firavun ağırlığı dayanmaktadır 560 g Porto Riko. Biz seçilmiş 1% en yüksek konsantrasyon olarak araştırma bazı Biyomarkörler için tat kaçınma ortaya çıkabilir konsantrasyonlarda > 1% bazı türler37. Biz sadece% 1 doz blister paketi olarak flokülasyon yeterli çözücü içinde çözünmesi çözünen engelledi eşit yem matrisine dahil edilecek. Bir kontrol grubu (2m, 1F) steril su ve hiçbir ıPA ile dolu yemler aldı. Günlük bakım rasyonlarının beslenmesini sırasında veya öncesinde sabah (~ 8 a.m.) Mongooses için yemler teklif ettik. Yem kalıntıları yaklaşık 24 saat sonra çıkarıldı. Biz tedavi öncesi kan örnekleri toplanan, bir gün sonrası tedavi ve daha sonra haftalık 8 hafta sonrası tedavi. Biz Isoflurane gaz inhalasyon tarafından anestezize Mongooses ve kadar toplanan 1,0 tüm kan ml kranial Vena Cava damara tarafından, yaban gelinciği38için açıklandığı gibi. Tüm kan örneklerini santrifüvlüyor, sera 'yı kriyovilere aktardık ve analiz olana kadar-80 °C ' de saklıyoruz. Tüm hayvanlar, tekrarlanan kanın etkilerini en aza indirmek için tüm zaman dilimlerinde örneklenmiş hayvanların sağlığını çeker. Kontrol hayvanları 0 gün, daha sonra haftada 8 hafta sonrası tedavi için örneklenen.
Bana-IPA üç konsantrasyonda teslim: 0,035% (0,7 mg), 0,07% (1,4 mg) ve 0,14% (2,8 mg), tüm yem matrisine dahil, 2 erkek ve 2 kadın tedavi grubu başına. İki erkek ve iki kadın steril su ve hiçbir ıPA dolu yemler aldı. Yem teklif süreleri ve Firavun anestezi yukarıda açıklanmıştır. Biz 1 gün tedavi öncesi kan örnekleri toplanan ve sonra haftalık 4 hafta sonrası tedavi.
Serum ıPA konsantrasyonlarının farklı tedavi grupları için normallik ve tahmini araçlar için test ettik. Bir doğrusal karma modeli, bireyler arasında havuza alınan ortalama serum et-ıPA konsantrasyonlarını karşılaştırmak için kullandık. Yem türü (matris/blister paketi) deneysel gün ek olarak sabit bir etkiye sahip, hayvan KIMLIĞI rastgele bir etkisi iken. Tüm prosedürler ortak istatistiksel yazılım (malzeme tablosu) kullanılarak çalıştırılmıştı ve önemi α = 0,05 olarak değerlendirildi.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1036px;" width="1036">
	<tbody>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">Acetonitrile, Optima grade</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">A996</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">Analytical balance</td>
			<td style="width:193px;">Mettler Toledo</td>
			<td style="width:304px;">XS204</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:380px;">C18 column, 2.1 x 50 mm, 2.5-&#181;m particle size</td>
			<td style="width:193px;">Waters Corp.</td>
			<td style="width:304px;">186003085</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">ESI Source</td>
			<td style="width:193px;">Agilent&#160;</td>
			<td style="width:304px;">G1958-65138</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:380px;">Ethyl-iophenoxic acid, 97 %</td>
			<td style="width:193px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;">Lot MKBP5399V</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:380px;">Formic acid, LC/MS grade</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">A117</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:380px;">LCMS software</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">MassHunter Data Acquisition and Quantitative Analysis</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:380px;">Methyl-iophenoxic acid, 97 % (w/w)</td>
			<td style="width:193px;">PR EuroChem Ltd.</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;">Lot PR0709514717</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">Microanalytical balance</td>
			<td style="width:193px;">Mettler Toledo</td>
			<td style="width:304px;">XP6U</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">Microcentrifuge</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">5415C</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">MS/MS</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">G6470A</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:380px;">N-Evap</td>
			<td style="width:193px;">Organomation</td>
			<td style="width:304px;">115</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:380px;">Oral Rabies Vaccine Baits</td>
			<td style="width:193px;">IDT Biologika, Dessau Rossleau, Germany</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">Propyl-iophenoxic acid, 99 % (w/w)</td>
			<td style="width:193px;">PR EuroChem Ltd.</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;">Lot PR100612108RR</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:380px;">Repeat pipettor</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">M4</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:380px;">Screw-top autosampler vial caps, PTFE-lined</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">5190-7024</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:25px;width:380px;">Sodium chloride, Certified ACS grade</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">S271</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:380px;">Statistical Software Package</td>
			<td style="width:193px;">SAS Institute, Cary, North Carolina, USA</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:380px;">Trifluoroacetic acid, 99 %</td>
			<td style="width:193px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:304px;">L06374</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;width:380px;">UPLC</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">1290 Series</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:380px;">Vortex Mixer</td>
			<td style="width:193px;">Glas-Col</td>
			<td style="width:304px;">099A PV6</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">0.2-mL pipettor tips</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">30089.413</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">0.5-mL pipettor tips</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">30089.421</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">1.5-mL microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">14-666-325</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:380px;">1250-&#181;L capacity pipette tips</td>
			<td style="width:193px;">GeneMate</td>
			<td style="width:304px;">P-1233-1250</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:380px;">1-mL pipettor tips</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">30089.43</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:380px;">2-mL amber screw-top autosampler vials</td>
			<td style="width:193px;">Agilent</td>
			<td style="width:304px;">5182-0716</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:380px;">5-mL pipettor tips</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">30089.456</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">80-position microcentrifuge tube rack</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">05-541-2</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:380px;">8-mL amber vials with PTFE-lined caps</td>
			<td style="width:193px;">Wheaton</td>
			<td style="width:304px;">224754</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:380px;">70 % (v/v) isopropanol</td>
			<td style="width:193px;">Fisher</td>
			<td style="width:304px;">A459</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:380px;">100-1000 &#181;L air displacement pipette</td>
			<td style="width:193px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:304px;">ES-100</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of iophenoxic acid analogues in small indian mongoose (herpestes auropunctatus) sera for use as an oral rabies vaccination biological marker

Küçük Hint firavunkaz (Herpestes auropunctatus) Porto Riko kuduz VIRÜSÜ (rabv) bir rezervuar ve hayvan kuduz olguların% 70 üzerinde oluşur yıllık bildirdi. Yaban hayatı rezervuarında RABV sirkülasyonunun kontrolü genellikle oral kuduz aşısı (ORV) stratejisiyle gerçekleştirilir. Şu anda hiçbir yaban hayatı ORV programı Porto Riko bulunmaktadır. Sözlü kuduz aşıları ve Mongooses için çeşitli yem türleri içine araştırma umut verici sonuçlar ile yapılmıştır. ORV başarısı izleme genellikle RABV nötralize antikorlar (RVNA) sonrası aşılama bir değişiklik değerlendirmek içerir hedef türler tarafından yem alımı tahmin dayanır. Bu strateji aktif bir yaban hayatı ORV programı veya rabv enzootik ve rvna arka plan seviyeleri rezervuar türlerinde mevcut olan alanlarda yorumlamak zor olabilir. Bu gibi durumlarda, aşıyla veya yem matrisine dahil edilen bir biyomarker yararlı olabilir. Biz 16 esir Mongooses plasebo ORV yemler içeren etil-iophenoxic asit (et-IPA) konsantrasyonlarda 0,4% ve 1% yem içinde ve 0,14% dış yem matrisinde. Ayrıca, dış yem matrisinde% 0,035,% 0,07 ve% 0,14 konsantrasyonlarda metil-iophenoxik asit (Me-IPA) içeren 12 esir Mongooses ORV yemler teklif ettik. Biz yem teklif önce bir serum örnek toplanan ve daha sonra haftada sekiz hafta sonrası teklif için. Sera 'dan Asetonitril içine ve sıvı kromatografi/kütle spektrometresi kullanılarak ölçülmüş ıophenoxic asitleri ayıklandık. Et-IPA veya Me-ıPA için sera sıvı kromatografi-kütle spektrometresi ile incelendi. Sırasıyla et ve Me-IPA için en az sekiz ve dört hafta yeterli işaretleme yeteneği bulduk. Her iki ıPA türevleri Mongooses ORV yem alımı alan değerlendirilmesi için uygun olabilir. Mongoose serumunda işaretçinin uzun ömürlü olması nedeniyle, ardışık değerlendirmeler sırasında aynı ıPA türevlerini kullanarak dikkat çekmelidir.

Me-ıPA analizinden temsil iyon kromatogram Şekil 1' de sunulmaktadır. Kontrol Mongoose serum (Şekil 1a) et-IPA (vekil analit) ve Me-IPA yokluğunda belirtilen bekletme süresi tutma süresini gösterir. Kalite kontrol örneği (Şekil 1B), Me-IPA ' l e l i-ipa temel ayrımı ve Me-IPA için nicelik belirteci ve niteleyici geçişleri gösterir. Şekil 1C , 33,5 μg/m...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose Herpestes Auropunctatus Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker at JoVE.co

Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose Herpestes Auropunctatus Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker

Biz bir biyomarker olarak etil veya metil iophenoxic asit ile esir Mongooses plasebo oral kuduz aşı yemleri teklif ve tandem kütle spektrometresi (LC-MS/MS) yöntemi ile yeni bir sıvı kromatografi kullanılarak doğrulanmış yem alım.

Küçük Hint firavunları (Herpestes Auropunctatus) sera bir oral kuduz aşılama biyolojik Marker olarak kullanım Için Iophenoxic asit analogları Analizi

The small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus) is a reservoir of rabies virus (RABV) in Puerto Rico and comprises over 70% of animal rabies cases ...

Firavun serumundaki iofenoksik asidi tespit etmek ve ölçmek için bir prosedür belirledik. Sonuçlar, iofenoksik asit in türlerde beta alımını doğrulamak için biyolojik bir belirteç olarak kullanılabilir öneririz. Bu yöntemin en büyük avantajı, protein çökeltme tekniğini basit bir şekilde kullanarak, milyar seviyelerinde iofenoksik asit analoglarının ölçülmesine olanak sağlamasıdır.Mobil faz A için, bir mililitre formik asidi bir litre ultra saf su yla birleştirin. Mobil faz B için, bir mililitre formik asidi bir litre asetonitril ile birleştirin. Dilüent için, bir mililitre trifloroasetik asidi 200 mililitre asetonitril ile birleştirin.Daha sonra, mikro denge üzerinde yaklaşık 10 miligram metil-IPA tartın ve kütleyi artı veya eksi 0001 miligrama kaydedin. Metil-IPA'yı 4-5 mililitre asetonitril kullanarak 10 mililitrelik a volumetrik bir şişeye nakledin. Sonicate bir dakika için tüm katı çözünür ve daha sonra asetonitril ile hacim getirmek.Ptfe kaplı kapaklı sekiz mililitrelik kehribar cam şişelere her stoğun yaklaşık sekiz mililitresini aktarın ve numuneleri oda sıcaklığında saklayın. Daha sonra, kalan stoktehlikeli atık aktarın. 25X stok için yedi metil-IPA stok mililitre başına yaklaşık 200 mikrogram metil-IPA ve asetonitril bir stok hazırlamak.Bir mililitre stoğu nisbi bir şişeye aktarın ve asetonitril ile hacime seyreltin. Daha sonra, ptfe kaplı kapak ve oda sıcaklığında saklamak ile sekiz mililitrelik kehribar cam şişe stok aktarın. Tekrar pipettor kullanarak, ptfe kaplı kapaklar ve oda sıcaklığında saklamak ile sekiz mililitrelik kehribar cam şişeler metin protokolünde açıklanan altı ek 25X metil-IPA stokları hazırlamak.25X vekil stok için, 100 mikrolitre cam şırınga kullanarak 10 mililitre sınıf bir hacimsel şişe konsantre etil-IPA stok 0.1 mililitre aktarın ve daha sonra asetonitril ile hacim seyreltmek. Ptfe kaplı kapak lı sekiz mililitrelik kehribar cam şişeye yaklaşık sekiz mililitre vekil stok aktarın ve oda sıcaklığında saklayın. Kalan stoku tehlikeli atıklara aktarın.Daha sonra, metin protokolünde açıklandığı gibi, 10 mililitrelik vidalı cam oto örnekleyici şişelerinde hem metil-IPA hem de etil-IPA içeren 4X stoklar hazırlayın. Örneğin, stok 4X7 hazırlamak için, 0,5 mililitre kapasiteli ucu ile tekrar pipettor kullanarak iki mililitrelik şişe iki mililitre lik şişe 25X stok yedi metil-IPA stok 0,2 mililitre ekleyin. 0,5 mililitre kapasiteli ucu ile tekrar pipettor kullanarak 25X vekil etil-IPA stok 0,2 mililitre ekleyin.Bir mililitre kapasiteli ucu ile tekrar pipettor kullanarak asetonitril 0,85 mililitre ekleyin. Şişeyi güvenli bir şekilde kaplayın ve karıştırmak için beş kez ters çevirin. Bunu takiben, metin protokolünde açıklandığı gibi iki mililitre vidaüstü otomatik örnekleyici şişeleri standart eğriyi hazırlayın.Örneğin, standart yedi hazırlamak için, 0,5 mililitre kapasiteli ucu ile tekrar pipettor kullanarak, iki mililitrelik bir şişe için 4X7 stok0,2 mililitre ekleyin. Bir mililitre kapasiteli ucu olan tekrar pipettor kullanarak 0,6 mililitre ultra saflıktaki iyonize su ekleyin. Şişeleri güvenli bir şekilde kaplayın ve karıştırmak için beş kez ters çevirin.Her numune için, 200 ila 300 miligram sodyum klorür içeren 1,5 mililitrelik mikro santrifüj tüp hazırlayın ve tüpleri 80 pozisyonda plastik rafta düzenleyin. Her örnek için, bir 1,5 mililitrelik mikro santrifüj tüp a ve ikinci bir mikro santrifüj tüp olarak etiket B.80 pozisyon plastik raf tüpleri düzenleyin. Bir sınıf iki biyogüvenlik kabine serum ekstraksiyon için gerekli aşağıdaki malzeme ve ekipman yerleştirin: mikro santrifüj tüpler, bir girdap karıştırıcı, 0.5 mililitre ve beş mililitre kapasiteli ipuçları ile tekrar pipet, 1000 mikrolitre ipuçları ile 100 ila 1000 mikrolitre hava deplasman pipet, yaklaşık 100 mililitre her diluent ve ultra saflıkİyonlu su geçirmez, biyolojik atık ve biyolojik atık.Daha sonra, dondurulmuş depolama ve biyogüvenlik kabininde oda sıcaklığına sıcak serum örnekleri çıkarın. Vortex örneklemeden önce her serum örneğini karıştırın. 0,5 mililitre kapasiteli bir pipettor kullanarak, tüp A içine 05 mililitre firavun faresi serumu dağıtın ve 25X vekil stok 05 mililitre ekleyin.Daha sonra 5 mililitre kapasiteli bir ucu olan tekrar pipettor kullanarak A tüpüne 0,95 mililitre dilüent ekleyin. Tüpleri güvenli bir şekilde kaplayın ve girdap 10 ila 15 saniye karıştırın. Daha sonra, kontrol mongoose serumtüp A.Fortify me-IPA ile 0.5 mililitre kapasiteli ucu ile tekrar pipettor kullanarak 4QC örneklerinin her ekleyin.QC örneklerine 25X vekil stok ekleyin. Daha sonra, QC örneklerine dilüent ekleyin. Tüpleri ve girdap karışımını kaplayın.Önceden tartılmış sodyum klorürtüp A ve girdap karışımı içine sekiz ila 12 saniye için üç kez dağıtın. Daha sonra, %70 isopropanol kullanarak A tüpü içeren şişe rafının dış yüzeylerini silin. Biyogüvenlik kabininden numuneleri çıkardıktan sonra, santrifüj tüpü A 1200 kez G'de bir dakika sulu ve asetonitil fazları ayırmak için.Pipet 0.8 mililitre üst asetonitril fazı ile B tüpüne, 100 ila 1000 mikrolitrelik hava deplasman pipeti kullanır. A tüpündeki kalan çözeltiyi tehlikeli atıklara aktarın ve boş tüpü biyolojik olarak tehlikeli bir atık kabına atın. Şimdi, 45 santigrat derece su banyosunda hafif bir azot gazı akışıyla Asetonitril ve trifloroasetik tüpünden çıkar.Dört ila beş saniye boyunca tekrar pipettor ve girdap karışımı kullanarak b tüpüne 0,25 mililitre asetonitril ekleyin. Daha sonra, 1200 kez G'de 2-4 saniye boyunca tüpün altındaki sıvıyı toplamak için santrifüj. Santrifüjden sonra, b tüpüne 5 mililitre kapasiteli bir pipet torcu kullanarak 4-5 saniye boyunca 0,75 mililitre ultra saf deiyonize su ekleyin.Numuneyi netleştirmek için 1200 kez G'de bir dakika lığına santrifüj. Daha sonra, 1000 mikrolitrelik hava deplasman pipetini kullanarak 0,75 mililitre süpernatantı otomatik numune leyici şişeye aktarın ve pipet uçlarını biyolojik tehlike atık kabına atın. LC-MS/MS analizi için her otomatik numune şişeyi güvenli bir şekilde kapla.B tüpünde kalan çözeltiyi tehlikeli atıklara aktarın ve boş tüpü biyolojik olarak tehlikeli bir atık kabına atın. LC-MS/MS'i metin protokolünde açıklanan tüm parametrelerle yapılandırın. LC-MS/MS'nin gücü ve akış hızını dakikada 0,8 mililitreye ayarlamadan önce sütunun 70 santigrat dereceye ulaşmasını bekleyin.Kalite kontrol örnekleri ve bilinmeyen örneklerden oluşan her partiden önce ve sonra standart eğriyi enjekte etmek için veri toplama yazılımında bir sıra ayarlayın. Tüm standartları ve numuneleri enjekte edin ve metin protokolünde listelenen parametreleri kullanarak MR iyon kromatogramları edinin. Dizi tamamlandıktan sonra, LC-MS/MS'i kapatın ve tüm otomatik numune şişelerini tehlikeli atıklara atın.Kontrol mongoose serumunun iyon kromatogramı, etil-IPA'nın bekletme süresini ve belirtilen tutma süresinde metil-IPA'nın eksikliğini göstermektedir. Kalite kontrol numunesinin iyon kromatogramı, metil-IPA'nın etil-IPA'dan temel ayrıştırMasını ve metil-IPA için niceleyici ve niteleyici geçişlerini göstermektedir. Çalışmadan alınan temsili numunenin iyon kromatogramı, metil-IPA mikrolitresi başına 33,5 mikrogram serum konsantrasyonu gösterdi.Metil-IPA ile güçlendirilmiş kontrol mongoose serumu için doğruluk ve kesin sonuçlar burada gösterilmiştir. Yüzde geri kazanımlar %96,9 ile %109 arasında değişmekteydi Üç istihkak seviyesindeki yüzde göreceli sapma sırasıyla %3,4%1,7 ve %2,3 idi. Etil-IPA ile güçlendirilmiş kontrol mongoose serumiçin doğruluk ve hassas sonuçlar burada gösterilmiştir.Yüzde geri kazanımlar %89,5 ile %115 arasında değişmekteydi Beş istihkak seviyesindeki yüzde bağıl standart sapma sırasıyla %4,3 %1,5%2,3%5,6 ve %1,1 idi. Tüm mongooses etil-IPA ve metil-IPA yem 24 saat kısıtlama içinde yem en az% 25 tüketilen sunulan ve etil-IPA ve metil-IPA ölçülebilir düzeyleri vardı, onların sera, sırasıyla. Yöntemin potansiyel yararı, LC-MS'nin propil ve bütil iofenoksik asit gibi diğer iofenoksik asit analogları için veri toplamak üzere yapılandırılarak artırılabilir.Personeli, aşı lama uygulamaları danışma komitesinin veya ön maruziyet aşısının gerekli olup olmadığı konusunda rehberlik için kurumsal biyogüvenlik komitesinin en son tavsiyelerine danışmaya teşvik ettik. Seyreltilmemiş serum la çalışmayı içeren bu protokolün 2.3 ile 2.6.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose (Herpestes Auropunctatus) Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker

An Analytical Tool-box for Comprehensive Biochemical, Structural and Transcriptome Evaluation of Oral Biofilms Mediated by Mutans Streptococci

Analitik Oral Biyofilmler Kapsamlı biyokimyasal, yapısal ve Transcriptome Değerlendirme Aracı-box mutans Streptokok tarafından aracılığı ile

Biofilms are highly dynamic, organized and structured communities of microbial cells enmeshed in an extracellular matrix of variable density and ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

Bakteriyel Yapışma Çalışma Kesme Stres Tanıtımı

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

Paraziter Eşek Arıları Bir Giriş<em&gt; Drosophila</em&gt; Ve antiparaziter İmmün Yanıt

Most known parasitoid wasp species attack the larval or pupal stages of Drosophila. While Trichopria drosophilae infect the pupal stages of the host (Fig. ...

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization (LNA flow-FISH): a Method for Bacterial Small RNA Detection

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization LNA flow-FISH: a Method for Bacterial Small RNA Detection

Kilitli Nükleik Asit Sitometrisi-floresan Yerinde Hibridizasyon (LNA akış FISH): Bakteriyel Küçük RNA Algılama Yöntemi

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a powerful technique that is used to detect and localize specific nucleic acid sequences in the cellular ...

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Kullanımı<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Bir Model Organizma olarak Eğitim için<em&gt; Legionella pneumophila</em&gt; Enfeksiyon

Legionella pneumophila, the causative agent of a severe pneumonia named Legionnaires&#39; disease, is an important human pathogen that infects and ...

Intralymphatic Immunotherapy and Vaccination in Mice

Fare intralenfatik immünoterapi ve Aşılama

Vaccines are typically injected subcutaneously or intramuscularly for stimulation of immune responses. The success of this requires efficient drainage of ...

Porphyromonas gingivalis as a Model Organism for Assessing Interaction of Anaerobic Bacteria with Host Cells

Porphyromonas gingivalis as a Model Organism for Assessing Interaction of Anaerobic Bacteria with Host Cells

Ana Hücreleri ile Anaerobik Bakteriler Etkileşim değerlendirilmesi için bir model organizma olarak Porphyromonas gingivalis

Anaerobic bacteria far outnumber aerobes in many human niches such as the gut, mouth, and vagina. Furthermore, anaerobic infections are common and ...

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Modüle c-di-GMP sinyal İşte Küçük Moleküller Tarama için Yüksek verim Kur kurulması<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em

Bacterial resistance to traditional antibiotics has driven research attempts to identify new drug targets in recently discovered regulatory pathways. ...

In Vitro Methods for Comparing Target Binding and CDC Induction Between Therapeutic Antibodies: Applications in Biosimilarity Analysis

In Vitro Methods for Comparing Target Binding and CDC Induction Between Therapeutic Antibodies: Applications in Biosimilarity Analysis

Terapötik Antikorlar Arasındaki Hedef Bağlanma ve CDC İndüksiyonunu Karşılaştırmak İçin İn Vitro Yöntemler: Biyoeşdeğerlik Analizindeki Uygulamalar

Therapeutic monoclonal antibodies (mAbs) are relevant to the treatment of different pathologies, including cancers. The development of biosimilar mAbs by ...

In Vitro ELISA Test to Evaluate Rabies Vaccine Potency

In Vitro ELISA Testi Kuduz Aşısı Potens Değerlendirmek için

The growing global concern for the animal welfare is encouraging manufacturers and the National Control Laboratories (OMCLs) to follow the 3Rs strategy ...