Name: design of cecal ligation and puncture and intranasal infection dual model of sepsis-induced immunosuppression
Uploaded: 2019-06-15T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Design of Cecal Ligation and Puncture and Intranasal Infection Dual Model of Sepsis-Induced Immunosuppression at JoVE.com

وقد تم دعم هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للمنح الصحية R01 AI138203-01، AI109317-04، AI101973-01، و AI097532-01A1 إلى M. W. وقد تلقت المرافق الأساسية لجامعة نورث داكوتا دعماً من المنح التي تمنحها المعاهد القومية للصحة (INBRE P20GM103442 وCOBRE P20GM113123). كما دعم هذا العمل البرنامج الرئيسي للمؤسسة الوطنية لعلوم الطبيعة في الصين (81530063) إلى جيانشين جيانغ. لم يكن للممولين أي دور في تصميم الدراسة، وجمع البيانات وتحليلها، وقرار نشر، أو إعداد المخطوطة. نشكر مارفن ليير (مركز الصحة الريفية، جامعة داكوتا الشمالية) على صنع الفيديو.

وقد أجريت جميع الأساليب الموصوفة هنا وفقا للمعهد الوطني للدليل الصحي لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية ووافقت عليها جامعة نورث داكوتا اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها (IACUC).
1. ربط وثقب Cecal
ملاحظة: تنقسم الفئران C57BL/6 الإناث (الوزن، 18-22 ز؛ العمر، 6-8 ...

<ol>
	<li>Singer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Third+International+Consensus+Definitions+for+Sepsis+and+Septic+Shock+(Sepsis-3).">The Third International Consensus Definitions for Sepsis and Septic Shock (Sepsis-3).</a> JAMA. 315 (8), 801-810 (2016).</li><li>Delano, M. J., Ward, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immune+system's+role+in+sepsis+progression,+resolution,+and+long-term+outcome.">The immune system's role in sepsis progression, resolution, and long-term outcome.</a> Immunological Reviews. 274 (1), 330-353 (2016).</li><li>Mayr, F. B., Yende, S., Angus, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+severe+sepsis.">Epidemiology of severe sepsis.</a> Virulence. 5 (1), 4-11 (2014).</li><li>Fleischmann, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+Global+Incidence+and+Mortality+of+Hospital-treated+Sepsis.+Current+Estimates+and+Limitations.">Assessment of Global Incidence and Mortality of Hospital-treated Sepsis. Current Estimates and Limitations.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 193 (3), 259-272 (2016).</li><li>Reinhart, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recognizing+Sepsis+as+a+Global+Health+Priority+-+A+WHO+Resolution.">Recognizing Sepsis as a Global Health Priority - A WHO Resolution.</a> The New England Journal of Medicine. 377 (5), 414-417 (2017).</li><li>Boomer, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunosuppression+in+patients+who+die+of+sepsis+and+multiple+organ+failure.">Immunosuppression in patients who die of sepsis and multiple organ failure.</a> JAMA. 306 (23), 2594-2605 (2011).</li><li>Hotchkiss, R. S., Monneret, G., Payen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sepsis-induced+immunosuppression:+from+cellular+dysfunctions+to+immunotherapy.">Sepsis-induced immunosuppression: from cellular dysfunctions to immunotherapy.</a> Nature Reviews Immunology. 13 (12), 862-874 (2013).</li><li>Dejager, L., Pinheiro, I., Dejonckheere, E., Libert, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cecal+ligation+and+puncture:+the+gold+standard+model+for+polymicrobial+sepsis?.">Cecal ligation and puncture: the gold standard model for polymicrobial sepsis?.</a> Trends in Microbiology. 19 (4), 198-208 (2011).</li><li>Rittirsch, D., Huber-Lang, M. S., Flierl, M. A., Ward, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodesign+of+experimental+sepsis+by+cecal+ligation+and+puncture.">Immunodesign of experimental sepsis by cecal ligation and puncture.</a> Nature Protocols. 4 (1), 31-36 (2009).</li><li>Hugunin, K. M. S., Fry, C., Shuster, K., Nemzek, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+tramadol+and+buprenorphine+on+select+immunologic+factors+in+a+cecal+ligation+and+puncture+model.">Effects of tramadol and buprenorphine on select immunologic factors in a cecal ligation and puncture model.</a> Shock. 34 (3), 250-260 (2010).</li><li>He, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Annexin+A2+Modulates+ROS+and+Impacts+Inflammatory+Response+via+IL-17+Signaling+in+Polymicrobial+Sepsis+Mice.">Annexin A2 Modulates ROS and Impacts Inflammatory Response via IL-17 Signaling in Polymicrobial Sepsis Mice.</a> PLoS Pathogens. 12 (7), 23 (2016).</li><li>Pu, Q. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atg7+Deficiency+Intensifies+Inflammasome+Activation+and+Pyroptosis+in+Pseudomonas+Sepsis.">Atg7 Deficiency Intensifies Inflammasome Activation and Pyroptosis in Pseudomonas Sepsis.</a> Journal of Immunology. 198 (8), 3205-3213 (2017).</li><li>Zanotti-Cavazzoni, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluid+resuscitation+influences+cardiovascular+performance+and+mortality+in+a+murine+model+of+sepsis.">Fluid resuscitation influences cardiovascular performance and mortality in a murine model of sepsis.</a> Intensive Care Medicine. 35 (4), 748-754 (2009).</li><li>Chin, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+macromolecular+approach+to+eradicate+multidrug+resistant+bacterial+infections+while+mitigating+drug+resistance+onset.">A macromolecular approach to eradicate multidrug resistant bacterial infections while mitigating drug resistance onset.</a> Nature Communications. 9 (1), 917 (2018).</li><li>Nascimento, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-33+contributes+to+sepsis-induced+long-term+immunosuppression+by+expanding+the+regulatory+T+cell+population.">IL-33 contributes to sepsis-induced long-term immunosuppression by expanding the regulatory T cell population.</a> Nature Communications. 8, 14919 (2017).</li><li>Deng, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+investigation+on+the+turning+point+of+over-inflammation+to+immunosuppression+in+CLP+mice+model+and+their+characteristics.">Systematic investigation on the turning point of over-inflammation to immunosuppression in CLP mice model and their characteristics.</a> International Immunopharmacology. 42, 49-58 (2017).</li></ol>

كنموذج معيار الذهب لأبحاث الإنتان، CLP لديه مزيج من ثلاث إهانات، بما في ذلك صدمة الأنسجة الناجمة عن استئصال البطن، نخر بسبب ربط cecum، والعدوى نتيجة للتسرب الميكروبي الذي يسبب التهاب الجنب مع نقل من البكتيريا في الدم8. لذلك، CLP يحاكي تعقيد الإنتان البشري أفضل من العديد من النماذج ...

الإنتان يبدأ تفاعل معقد من المضيف الموالية للالتهابات والعمليات المضادة للالتهابات ويتميز استجابة فرط الالتهاب والخلل المناعي اللاحقة1،2. يمثل الإنتان أولوية صحية عالمية ويسبب عدداً كبيراً من الوفيات في وحدات العناية المركزة (ICUs)3. ويقدر معدل حدوث الإنتان بأكثر من 30 مليون حالة في جميع أنحاء العالم سنويا، مع ارتفاع معدلات الوفيات إلى 30 في المائة على الرغم من التقدم المحرز في إدارة وحدة العناية المركزة4و5. في عام 2017، اعتمدت منظمة الصحة العالمية قرارا لتحسين الوقاية والتشخيص، وإدارة هذا المرض القاتل5. ومع ذلك، أظهرت الدراسات الحديثة أن الوفاة لا تنتج عن العدوى الأولية في المرضى الذين يعانون من التفسخ الشديد ولكن بدلا من ذلك من العدوى الثانوية اللاهوائية (وخاصة الالتهاب الرئوي) التي تسببها كبت المناعة6،7 . لذلك، فهم آليات لماذا المرضى التفسخ تطوير العدوى الثانوية واكتشاف علاجات أكثر فعالية مطلوبة على وجه السرعة. هنا، يتم وصف نموذج مزدوج، والمعروف أيضا باسم نموذج ضرب مزدوج، لدراسة ظاهرة كبت المناعة التي تحدث في المرضى الذين يعانون من الإنتان المطول.
كما النموذج التجريبي معيار الذهب في البحوث على الإنتان متعدد الميكروبات، وربط الدق والثقب (CLP) هي عملية جراحية تتميز ربط وثقب، مما يسهم في التهاب البكاء متعدد الميكروبات والإنتان8،9 . العملية الفسيولوجية المرضية وملامح السيتوكين، جنبا إلى جنب مع الحركية والحجم، هي مماثلة للتعفن السريري. وضع الربط، وحجم الإبرة المستخدمة للثقب، وعدد من الثقوب الدقّة هي العوامل الرئيسية التي تؤثر على الوفيات بعد CLP.
الالتهاب الرئوي اللاوسطي هو السبب الرئيسي للوفيات بين المرضى الذين يعانون من أمراض خطيرة مع الإنتان. ويشمل النوع الرئيسي من الكائنات التي تسبب الإنتان الحاد المكورات العنقودية الذهبية (20.5 في المائة)، وأنواع الزائفة (19.9 في المائة)، والبكتيريا المعوية (أساساً الإشريكية القولونية، 16.0 في المائة)، والفطريات (19 في المائة). وفي الوقت نفسه، أشارت الدراسات الحديثة إلى زيادة حدوث الكائنات الحية إيجابية الغرام، والتي هي الآن تقريبا شائعة مثل الالتهابات السلبية للجرام3.
الطريقة الموصوفة في هذا البروتوكول تنطوي على CLP, يؤديها "الضربة الأولى" للحث على التهاب البيريتونات متعددة الميكروبات شبه القاتلة, الذي يظهر حالة كبت المناعة. ويشمل الإجراء أيضا ً تَسَمَلُسَاً داخل الأنف لاحقاً لـ S. aureus على أنه "الضربة الثانية" لتوفير منصة بحثية ذات صلة سريرياً.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1009px;" width="1007">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">21 G 1 &#189; Needle</td>
			<td style="width:191px;">BD</td>
			<td style="width:201px;">BD305167</td>
			<td style="width:263px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ACK lysing buffer</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A10492-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:22px;width:355px;">Anti-mouse CD11b antibody</td>
			<td style="width:191px;">Biolegend</td>
			<td style="width:201px;">101201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:355px;">Anti-mouse Ly-6G/Ly-6C (Gr-1) antibody</td>
			<td style="width:191px;">Biolegend</td>
			<td style="width:201px;">108401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">C57BL/6 mice&#160;</td>
			<td style="width:191px;">Harlan (Indianapolis)</td>
			<td style="width:201px;">C57BL/6NHsd</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Desk light</td>
			<td style="width:191px;">General Supply</td>
			<td style="width:201px;">General Supply</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Disinfecting wipes</td>
			<td style="width:191px;">Clorox</td>
			<td style="width:201px;">B07NV5JMCS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:22px;width:355px;">Electric razor</td>
			<td style="width:191px;">General Supply</td>
			<td style="width:201px;">General Supply</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:22px;width:355px;">ELISA kits (mouse IL-1&#946;, IL-6 and TNF&#945;)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td style="width:201px;">88-7013, 88-7064, and 88-7324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Iodine</td>
			<td style="width:191px;">Dynarex</td>
			<td style="width:201px;">B003U463PY</td>
			<td>PVP Iodine Wipes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Ketamine</td>
			<td style="width:191px;">FORT DODGE</td>
			<td style="width:201px;">NDC 0856-2013-01</td>
			<td>Amine hydrochloride injection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Laboratory scale</td>
			<td style="width:191px;">General Supply</td>
			<td style="width:201px;">General Supply</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">LB Agar, Miller</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:201px;">BP1425-500</td>
			<td>Molecular genetics, powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Micropipette</td>
			<td style="width:191px;">ErgoOne</td>
			<td style="width:201px;">7100-1100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Normal saline</td>
			<td style="width:191px;">General Supply</td>
			<td style="width:201px;">General Supply</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Polylined towel</td>
			<td>CardinalHealth, Convertors</td>
			<td>3520</td>
			<td style="width:263px;">Surgical drape, sterile, for single use only</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:22px;width:355px;">Silk suture, 4-0</td>
			<td style="width:191px;">DAVIS &#38; GECK</td>
			<td style="width:201px;">1123-31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Small animal needle holder</td>
			<td style="width:191px;">General Supply</td>
			<td style="width:201px;">General Supply</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Small animal surgery scissors</td>
			<td style="width:191px;">General Supply</td>
			<td style="width:201px;">General Supply</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Small animal surgical forceps</td>
			<td style="width:191px;">General Supply</td>
			<td style="width:201px;">General Supply</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Staphylococcus aureus</td>
			<td>ATCC</td>
			<td style="width:201px;">13301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Warm pad</td>
			<td style="width:191px;">General Supply</td>
			<td style="width:201px;">General Supply</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Xylazine</td>
			<td style="width:191px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:201px;">7361-61-7</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

design of cecal ligation and puncture and intranasal infection dual model of sepsis-induced immunosuppression

الإنتان، وهو عدوى شديدة ومعقدة تهدد الحياة، ويتميز بعدم التوازن بين الاستجابات المؤيدة والمضادة للالتهابات في أجهزة متعددة. مع تطور العلاجات، ومعظم المرضى البقاء على قيد الحياة في مرحلة فرط الالتهاب ولكن التقدم إلى مرحلة كبت المناعة، مما يزيد من ظهور الالتهابات الثانوية. ولذلك، فإن تحسين فهم المسببات المرضية التي تكمن وراء الإصابات الثانوية المكتسبة في المستشفيات في مرحلة كبت المناعة أثناء الإنتان أمر ذو أهمية هائلة. ذكرت هنا هو نموذج لاختبار النتائج المعدية عن طريق خلق التهابات مزدوجة في الفئران. يتم استخدام إجراء جراحي قياسي للحث على التهاب البيريتون ات متعدد الميكروبات بواسطة ربط الخلايا الهوائية وثقب (CLP) وتليها عدوى داخل الأنف من المكورات العنقودية الذهبية لمحاكاة الالتهاب الرئوي الذي يحدث في قمع المناعة التي كثيرا ما ينظر إليها في المرضى الذين يعانون من التعفن. هذا النموذج المزدوج يمكن أن تعكس حالة كبت المناعة التي تحدث في المرضى الذين يعانون من الإنتان المطول والتعرض للعدوى الثانوية من الالتهاب الرئوي اللاعوري. وبالتالي، يوفر هذا النموذج نهجا تجريبيا بسيطا للتحقيق في وظائف الأعضاء المرضية للالتهاب الرئوي البكتيري الثانوي الناجم عن الإنتان، والتي يمكن استخدامها لاكتشاف علاجات جديدة للتعفن ومضاعفاته.

اعتمادا على التصميم التجريبي والإجراءات، تعرضت الفئران C57BL/6 لCLP، وبعد 3 أيام، كانت تدار البكتيريا داخلالأنف (الشكل1). كما هو مبين في الشكل 2، بدأت الفئران في الموت في 12 ساعة بعد تحريض من فِتَسَم ِيَكَة. توفي اثنين من الفئران في مجموعة CLP + SA وث...

Watch this Scientific Journal Video about Design of Cecal Ligation and Puncture and Intranasal Infection Dual Model of Sepsis-Induced Immunosuppression at JoVE.com

Design of Cecal Ligation and Puncture and Intranasal Infection Dual Model of Sepsis-Induced Immunosuppression

يصف هذا البروتوكول تقنيات لقياس النتائج المعدية الكامنة وراء العدوى الثانوية المكتسبة من المستشفيات في حالة كبت المناعة، أولاً عن طريق إنشاء ربط/ثقب الفئران بعد ذلك تحديها بعدوى داخل الأنف إلى إنشاء نموذج ذات صلة سريريا من الإنتان كبت المناعة.

تصميم ربط الدقّة النسّية والثقب والعدوى داخل الأنف نموذج مزدوج للكبت المناعي الناجم عن الإنتان

Sepsis, a severe and complicated life-threatening infection, is characterized by an imbalance between pro- and anti-inflammatory responses in multiple ...

إعداد الماوس لعملية جراحية. حلق الربع السفلي من البطن باستخدام شفرة حلاقة وتطهير المنطقة باليود. ضع الماوس على سطح عمل نظيف على ظهره مع توجيه الرأس بعيدًا عن المشغل.إجراء شق الجلد طولي حوالي نصف سنتيمتر في أسفل البطن الأيسر. يجب الحرص على عدم اختراق تجويف البريتوني. استخدم مقص صغير لتمديد الشق حوالي 1-2 سنتيمتر.جعل شق العضلي للوصول إلى تجويف البريتوني. في معظم الحالات ، يكون ال cecum على الجانب الأيسر من البطن. عزل الـ(سيكوم)باستخدام ملقط حادة، تشريحية، وبلطف وبعناية فضح الأعوم من خلال شق. الخطوة الرابعة هي الربط. موقف الربط على cecum يحدد مستوى شدة الإنتان.الربط ما يقرب من 75٪ من cecum يؤدي إلى الإنتان الشديد. ligating 50٪ من cecum يحفز الإنتان متوسط المستوى. في حين أن ربط 25٪ أو أقل من الأعوس سيؤدي إلى تعفن الدم طفيفة.ليغيت الأعون في الموقع المعين. تأكد من عدم ligate صمام ileocecal. الخطوة الخامسة هي ثقب الـ(سيكوم)باستخدام إبرة، ثقب الأعوم مع واحد من خلال ومن خلال ثقب في منتصف الطريق بين الربط وطرف من الأعوم. تأكد من عدم ثقب أي أوعية دموية. لضمان وجود ثقب كامل ، بثق قطرة صغيرة من البراز من كل من ثقوب الإبر.استبدال بعناية cecum في تجويف البطن. أغلق عضلات البطن عن طريق وضع خياطة بسيطة على التوالي وإغلاق الجلد. تنظيف الجلد مع اليود.حقن الماوس مع محلول ملحي مسبق الدفء لإنعاش. ضع الفأرة مرة أخرى في القفص مع إمكانية وصول غير محدودة إلى الطعام والماء. بعد حوالي ثلاثة أيام من الربط cecal وثقب أو إجراء CLP، ونحن نخضع الماوس لضربة ثانية مع عدوى داخل الأنف لتحفيز الالتهاب الرئوي الذي يحدث في كثير من الأحيان في تعفن الدم.اقترب من رقبة الفأر من الخلف ، بسلاسة ولطف. الإبهام وسببة اليد اليسرى تشكل موقف على شكل حرف U. عقد الرقبة مباشرة وراء الأذنين حتى يتم تقييد رأس الماوس تماما.إدخال العدوى داخل الأنف. باستخدام ماصة 100 ميكرولتر، وغرس سلالة المكورات العنقودية aureus intranasally. عقد الماوس في وضع مستقيم، إسقاط ببطء اثنين إلى ثلاثة ميكرولترات من الحل البكتيري في كل من أنف الماوس.رفع الماوس صعودا وهبوطا مع رأسه صعودا وذيل لأسفل للمساعدة في حل البكتيرية دخول القصبة الهوائية. رفع الماوس بسرعة بسرعة مع خفض بلطف وببطء. كرر تقطير 15 مرة أو حتى يتم غرس كل محلول البكتيرية.الخطوة الأخيرة هي إنهاء الإجراء. وضع الماوس على الفراش الزاوية في حوالي زاوية 35 درجة لاسترداد. تأكد من أن الماوس على ظهره مع رأسه وضع.مشاهدة الماوس للتأكد من أنه تم استردادها تماما من التخدير والعملية. بعد تسطيح الفراش، ضع الماوس مرة أخرى في القفص مع إمكانية وصول غير محدودة إلى الطعام والماء. بدأت الفئران تموت في حوالي 12 ساعة بعد تحريض التهاب الصفاق.وكان معدل الوفيات أعلى بكثير بالنسبة للفئران مع CLP قبل الالتهاب الرئوي. ثلاثة أيام بعد الجراحة، وكان الفئران CLP أكثر الوفيات مع إدارة داخل الأنف من المكورات العنقودية أوريوس. زادت مستويات السيتوكينات المصلية الموالية للالتهابات بشكل كبير في 24 ساعة بعد تقطير البكتيريا في الفئران الإنتان بالمقارنة مع الفئران التي كان CLP وحدها أو الشام تشغيل الفئران مع إصابة ثانية.ومع ذلك ، أظهرت الفئران مزدوجة ضرب انخفاض كبير في مستويات السيتوكين السوائل BAL بالمقارنة مع كل من SA وجراحة الشام بالإضافة إلى الفئران SA. وبالتالي CLP يضعف الدفاع المضيف ويزيد من التعرض للعدوى. هذا النموذج المزدوج ضرب هو أداة قيمة لفهم الآليات الجزيئية للتفاعل المضيف الممرض، والتي قد تفتح الطريق لتطوير جديدة، فعالة الأدوية والعلاجات الأخرى لعدوى الحشرات الخارقة.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

توصيف الاستجابات الالتهابية خلال الاستعمار داخل الشرج مع الالتهاب الرئوي العقدي

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

استخدام<em&gt; غاليريا mellonella</em&gt; كما كائن نموذج لدراسة<em&gt; البكتيريا المستروحة</em&gt; عدوى

Legionella pneumophila, the causative agent of a severe pneumonia named Legionnaires&#39; disease, is an important human pathogen that infects and ...

Cecal Ligation and Puncture-induced Sepsis as a Model To Study Autophagy in Mice

الأعور ربط والبزل التي يسببها تعفن الدم نموذجا لدراسة الالتهام الذاتي في الفئران

Experimental sepsis can be induced in mice using the cecal ligation and puncture (CLP) method, which causes polymicrobial sepsis. Here, a protocol is ...

Methods to Evaluate Cytotoxicity and Immunosuppression of Combustible Tobacco Product Preparations

طرائق لتقييم السمسة والمناعة من احتراق التبغ الاستعدادات المنتج

Among other pathophysiological changes, chronic exposure to cigarette smoke causes inflammation and immune suppression, which have been linked to ...

Intranasal Administration of Recombinant Influenza Vaccines in Chimeric Mouse Models to Study Mucosal Immunity

إدارة الأنف المؤتلف لقاحات الأنفلونزا في همي ماوس نماذج لدراسة الأغشية المخاطية الحصانة

Vaccines are one of the greatest achievements of mankind, and have saved millions of lives over the last century. Paradoxically, little is known about the ...

Protective Efficacy and Pulmonary Immune Response Following Subcutaneous and Intranasal BCG Administration in Mice

الحماية فعالية والرئوي الاستجابة المناعية بعد تحت الجلد والطريق الأنفي BCG الإدارة في الفئران

Despite global coverage of intradermal BCG vaccination, tuberculosis remains one of the most prevalent infectious diseases in the world. Preclinical data ...

A Platform of Anti-biofilm Assays Suited to the Exploration of Natural Compound Libraries

ومنصة للفحوصات مكافحة بيوفيلم مناسبة لاستكشاف المكتبات مركب طبيعي

Biofilms are regarded as one of the most challenging topics of modern biomedicine, and they are potentially responsible for over 80% of ...

Establishment of the Dual Humanized TK-NOG Mouse Model for HIV-associated Liver Pathogenesis

إنشاء نموذج الماوس ثنائي الأنسنة TK-NOG لمسببات أمراض الكبد المرتبطة بفيروس نقص المناعة البشرية

Despite the increased life expectancy of patients infected with human immunodeficiency virus-1 (HIV-1), liver disease has emerged as a common cause of ...

A Positioning Device for the Placement of Mice During Intranasal siRNA Delivery to the Central Nervous System

جهاز تحديد المواقع لوضع الفئران أثناء تسليم siRNA داخل الأنف إلى الجهاز العصبي المركزي

Intranasal (IN) drug delivery to the brain has emerged as a promising method to bypass the blood-brain barrier (BBB) for the delivery of drugs into the ...

Intranasal Immunization and Milk Collection in Studies of Maternal Immunization in New Zealand White Rabbits (Oryctolagus cuniculus)

Intranasal Immunization and Milk Collection in Studies of Maternal Immunization in New Zealand White Rabbits Oryctolagus cuniculus

التحصين داخل النعوس وجمع الحليب في دراسات تحصين الأمهات في نيوزيلندا الأرانب البيضاء (Oryctolagus cuniculus)

Due to similarities in placentation and antibody transfer with humans, rabbits are an excellent model of maternal immunization. Additional advantages of ...