Name: design of cecal ligation and puncture and intranasal infection dual model of sepsis-induced immunosuppression
Uploaded: 2019-06-15T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Design of Cecal Ligation and Puncture and Intranasal Infection Dual Model of Sepsis-Induced Immunosuppression at JoVE.com

Diese Arbeit wurde von den National Institutes of Health Grants R01 AI138203-01, AI109317-04, AI101973-01 und AI097532-01A1 an M. W. unterstützt. Die Kerneinrichtungen der University of North Dakota wurden durch NIH-Stipendien (INBRE P20GM103442 und COBRE P20GM113123) unterstützt. Diese Arbeit wurde auch vom Key Program of National Nature Science Foundation of China (81530063) an Jianxin Jiang unterstützt. Die Geldgeber spielten keine Rolle bei der Studiengestaltung, Datenerhebung und -analyse, der Entscheidung zur Veröffentlichung oder der Vorbereitung des Manuskripts. Wir danken Marvin Leier (Center for Rural Health, University of North Dakota) für das Video.

Alle hier beschriebenen Methoden wurden in Übereinstimmung mit dem National Institute of Health Guide for Care and Use of Laboratory Animals durchgeführt und vom Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) der University of North Dakota zugelassen.
1. Cecal Ligation und Punktion
HINWEIS: Weibliche C57BL/6-Mäuse (Gewicht, 18-22 g; Alter, 6-8 Wochen) werden nach dem Zufallsprinzip in sechs Gruppen eingeteilt: Kontrollgruppe (Strg), Infektionsgruppe (SA für <...

<ol>
	<li>Singer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Third+International+Consensus+Definitions+for+Sepsis+and+Septic+Shock+(Sepsis-3).">The Third International Consensus Definitions for Sepsis and Septic Shock (Sepsis-3).</a> JAMA. 315 (8), 801-810 (2016).</li><li>Delano, M. J., Ward, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immune+system's+role+in+sepsis+progression,+resolution,+and+long-term+outcome.">The immune system's role in sepsis progression, resolution, and long-term outcome.</a> Immunological Reviews. 274 (1), 330-353 (2016).</li><li>Mayr, F. B., Yende, S., Angus, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+severe+sepsis.">Epidemiology of severe sepsis.</a> Virulence. 5 (1), 4-11 (2014).</li><li>Fleischmann, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+Global+Incidence+and+Mortality+of+Hospital-treated+Sepsis.+Current+Estimates+and+Limitations.">Assessment of Global Incidence and Mortality of Hospital-treated Sepsis. Current Estimates and Limitations.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 193 (3), 259-272 (2016).</li><li>Reinhart, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recognizing+Sepsis+as+a+Global+Health+Priority+-+A+WHO+Resolution.">Recognizing Sepsis as a Global Health Priority - A WHO Resolution.</a> The New England Journal of Medicine. 377 (5), 414-417 (2017).</li><li>Boomer, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunosuppression+in+patients+who+die+of+sepsis+and+multiple+organ+failure.">Immunosuppression in patients who die of sepsis and multiple organ failure.</a> JAMA. 306 (23), 2594-2605 (2011).</li><li>Hotchkiss, R. S., Monneret, G., Payen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sepsis-induced+immunosuppression:+from+cellular+dysfunctions+to+immunotherapy.">Sepsis-induced immunosuppression: from cellular dysfunctions to immunotherapy.</a> Nature Reviews Immunology. 13 (12), 862-874 (2013).</li><li>Dejager, L., Pinheiro, I., Dejonckheere, E., Libert, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cecal+ligation+and+puncture:+the+gold+standard+model+for+polymicrobial+sepsis?.">Cecal ligation and puncture: the gold standard model for polymicrobial sepsis?.</a> Trends in Microbiology. 19 (4), 198-208 (2011).</li><li>Rittirsch, D., Huber-Lang, M. S., Flierl, M. A., Ward, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodesign+of+experimental+sepsis+by+cecal+ligation+and+puncture.">Immunodesign of experimental sepsis by cecal ligation and puncture.</a> Nature Protocols. 4 (1), 31-36 (2009).</li><li>Hugunin, K. M. S., Fry, C., Shuster, K., Nemzek, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+tramadol+and+buprenorphine+on+select+immunologic+factors+in+a+cecal+ligation+and+puncture+model.">Effects of tramadol and buprenorphine on select immunologic factors in a cecal ligation and puncture model.</a> Shock. 34 (3), 250-260 (2010).</li><li>He, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Annexin+A2+Modulates+ROS+and+Impacts+Inflammatory+Response+via+IL-17+Signaling+in+Polymicrobial+Sepsis+Mice.">Annexin A2 Modulates ROS and Impacts Inflammatory Response via IL-17 Signaling in Polymicrobial Sepsis Mice.</a> PLoS Pathogens. 12 (7), 23 (2016).</li><li>Pu, Q. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atg7+Deficiency+Intensifies+Inflammasome+Activation+and+Pyroptosis+in+Pseudomonas+Sepsis.">Atg7 Deficiency Intensifies Inflammasome Activation and Pyroptosis in Pseudomonas Sepsis.</a> Journal of Immunology. 198 (8), 3205-3213 (2017).</li><li>Zanotti-Cavazzoni, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluid+resuscitation+influences+cardiovascular+performance+and+mortality+in+a+murine+model+of+sepsis.">Fluid resuscitation influences cardiovascular performance and mortality in a murine model of sepsis.</a> Intensive Care Medicine. 35 (4), 748-754 (2009).</li><li>Chin, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+macromolecular+approach+to+eradicate+multidrug+resistant+bacterial+infections+while+mitigating+drug+resistance+onset.">A macromolecular approach to eradicate multidrug resistant bacterial infections while mitigating drug resistance onset.</a> Nature Communications. 9 (1), 917 (2018).</li><li>Nascimento, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-33+contributes+to+sepsis-induced+long-term+immunosuppression+by+expanding+the+regulatory+T+cell+population.">IL-33 contributes to sepsis-induced long-term immunosuppression by expanding the regulatory T cell population.</a> Nature Communications. 8, 14919 (2017).</li><li>Deng, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+investigation+on+the+turning+point+of+over-inflammation+to+immunosuppression+in+CLP+mice+model+and+their+characteristics.">Systematic investigation on the turning point of over-inflammation to immunosuppression in CLP mice model and their characteristics.</a> International Immunopharmacology. 42, 49-58 (2017).</li></ol>

Als Goldstandardmodell für die Sepsisforschung hat CLP eine Kombination aus drei Beleidigungen, darunter Gewebetrauma, das durch die Laparotomie verursacht wird, Nekrose aufgrund der Ligatur des Cecums und Infektionen als Folge einer mikrobiellen Leckage, die Peritonitis mit Translokation verursacht. von Bakterienin blut8 . Daher imitiert CLP die Komplexität menschlicher Sepsis besser als viele andere Modelle. Eine wesentliche Einschränkung des aktuellen CLP-Modells ist jedoch die Unfähigkeit,...

Sepsis initiiert ein komplexes Zusammenspiel von wirt pro-inflammatorischen und entzündungshemmenden Prozessen und zeichnet sich durch eine hyperinflammatorische Reaktion und nachfolgende Immunfunktionsstörung1,2aus. Sepsis stellt eine globale Gesundheitspriorität dar und verursacht eine hohe Zahl von Todesfällen auf Intensivstationen (IKUs)3. Die Inzidenz von Sepsis wird auf über 30 Millionen Fälle weltweit pro Jahr geschätzt, mit Sterblichkeitsraten von bis zu 30% trotz Fortschritten im ICU-Management4,5. Im Jahr 2017 verabschiedete die Weltgesundheitsorganisation eine Resolution zur Verbesserung der Prävention, Diagnose und Desmanagement dieser tödlichen Krankheit5. Jüngste Studien haben jedoch gezeigt, dass der Tod nicht auf eine primäre Infektion bei schweren septischen Patienten zurückzuführen ist, sondern auf eine sekundäre nosokomiale Infektion (insbesondere Lungenentzündung), die durch Immunsuppression verursacht wird6,7 . Daher ist es dringend erforderlich, die Mechanismen zu verstehen, warum septische Patienten sekundäre Infektionen entwickeln und effektivere Behandlungen entdecken. Hierin wird ein duales Modell beschrieben, das auch als Double-Hit-Modell bekannt ist, um das immunsuppressive Phänomen bei Patienten mit langwieriger Sepsis zu untersuchen.
Als Goldstandard-Experimentalmodell in der Forschung an polymikrobiellen Sepsis ist Cecal Ligation und Punktion (CLP) eine Operation, die sich durch Cecumligation und Perforation auszeichnet, die zu polymikrobieller Peritonitis und Sepsisbeiträgt 8,9 . Der pathophysiologische Prozess und die Zytokinprofile sowie die Kinetik und Die Größe ähneln der klinischen Sepsis. Die Position der Ligation, die Nadelgröße, die für die Punktion verwendet wird, und die Anzahl der Cecal-Punktionen sind wichtige Faktoren, die die Sterblichkeit nach CLP beeinflussen.
Die nosokomiale Lungenentzündung ist die Hauptursache für die Sterblichkeit bei schwerkranken Patienten mit Sepsis. Die wichtigsten Arten von Organismen, die schwere Sepsis verursachen, sind Staphylococcus aureus (20,5%), Pseudomonas-Arten (19,9%), Enterobacteriacae (hauptsächlich E. coli, 16,0%) und Pilze (19%). In der Zwischenzeit deuten neuere Studien auf eine zunehmende Inzidenz von grampositiven Organismen hin, die heute fast so häufig sind wie gramnegative Infektionen3.
Die in diesem Protokoll beschriebene Methode beinhaltet CLP, das als "erster Treffer" durchgeführt wird, um subleelle polymikrobielle Peritonitis zu induzieren, die eine Immunsuppressionsbedingung manifestiert. Das Verfahren beinhaltet auch die nachfolgende intranasale Instillation von S. aureus als "zweiten Treffer", um eine klinisch relevante Forschungsplattform zur Verfügung zu stellen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1009px;" width="1007">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">21 G 1 &#189; Needle</td>
			<td style="width:191px;">BD</td>
			<td style="width:201px;">BD305167</td>
			<td style="width:263px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ACK lysing buffer</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A10492-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:22px;width:355px;">Anti-mouse CD11b antibody</td>
			<td style="width:191px;">Biolegend</td>
			<td style="width:201px;">101201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:355px;">Anti-mouse Ly-6G/Ly-6C (Gr-1) antibody</td>
			<td style="width:191px;">Biolegend</td>
			<td style="width:201px;">108401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">C57BL/6 mice&#160;</td>
			<td style="width:191px;">Harlan (Indianapolis)</td>
			<td style="width:201px;">C57BL/6NHsd</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Desk light</td>
			<td style="width:191px;">General Supply</td>
			<td style="width:201px;">General Supply</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Disinfecting wipes</td>
			<td style="width:191px;">Clorox</td>
			<td style="width:201px;">B07NV5JMCS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:22px;width:355px;">Electric razor</td>
			<td style="width:191px;">General Supply</td>
			<td style="width:201px;">General Supply</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:22px;width:355px;">ELISA kits (mouse IL-1&#946;, IL-6 and TNF&#945;)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td style="width:201px;">88-7013, 88-7064, and 88-7324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Iodine</td>
			<td style="width:191px;">Dynarex</td>
			<td style="width:201px;">B003U463PY</td>
			<td>PVP Iodine Wipes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Ketamine</td>
			<td style="width:191px;">FORT DODGE</td>
			<td style="width:201px;">NDC 0856-2013-01</td>
			<td>Amine hydrochloride injection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Laboratory scale</td>
			<td style="width:191px;">General Supply</td>
			<td style="width:201px;">General Supply</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">LB Agar, Miller</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:201px;">BP1425-500</td>
			<td>Molecular genetics, powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Micropipette</td>
			<td style="width:191px;">ErgoOne</td>
			<td style="width:201px;">7100-1100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Normal saline</td>
			<td style="width:191px;">General Supply</td>
			<td style="width:201px;">General Supply</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Polylined towel</td>
			<td>CardinalHealth, Convertors</td>
			<td>3520</td>
			<td style="width:263px;">Surgical drape, sterile, for single use only</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:22px;width:355px;">Silk suture, 4-0</td>
			<td style="width:191px;">DAVIS &#38; GECK</td>
			<td style="width:201px;">1123-31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Small animal needle holder</td>
			<td style="width:191px;">General Supply</td>
			<td style="width:201px;">General Supply</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Small animal surgery scissors</td>
			<td style="width:191px;">General Supply</td>
			<td style="width:201px;">General Supply</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Small animal surgical forceps</td>
			<td style="width:191px;">General Supply</td>
			<td style="width:201px;">General Supply</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Staphylococcus aureus</td>
			<td>ATCC</td>
			<td style="width:201px;">13301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Warm pad</td>
			<td style="width:191px;">General Supply</td>
			<td style="width:201px;">General Supply</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Xylazine</td>
			<td style="width:191px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:201px;">7361-61-7</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

design of cecal ligation and puncture and intranasal infection dual model of sepsis-induced immunosuppression

Sepsis, eine schwere und komplizierte lebensbedrohliche Infektion, ist durch ein Ungleichgewicht zwischen pro- und entzündungshemmenden Reaktionen in mehreren Organen gekennzeichnet. Mit der Entwicklung von Therapien überleben die meisten Patienten die hyperinflammatorische Phase, kommen aber zu einer immunsuppressiven Phase, die das Auftreten von Sekundärinfektionen erhöht. Daher ist ein verbessertes Verständnis der pathogenese zugrunde liegenden sekundären Krankenhaus-erworbenen Infektionen in der immunsuppressiven Phase während der Sepsis von enormer Bedeutung. Hier wird berichtet, dass ein Modell, um infektiöse Ergebnisse zu testen, indem Sie Doppelschlag-Infektionen bei Mäusen. Ein Standard-Chirurgisches Verfahren wird verwendet, um polymikrobielle Peritonitis durch Cecal Ligation und Punktion (CLP) zu induzieren, gefolgt von einer intranasalen Infektion von Staphylococcus aureus, um Einelungenentzündung zu simulieren, die bei der Immunsuppression auftritt, die häufig beobachtet wird bei septischen Patienten. Dieses duale Modell kann den immunsuppressiven Zustand widerspiegeln, der bei Patienten mit langwieriger Sepsis und Anfälligkeit für sekundäre Infektionen durch nosokomiale Lungenentzündung auftritt. Daher bietet dieses Modell einen einfachen experimentellen Ansatz zur Untersuchung der Pathophysiologie der Sepsis-induzierten sekundären bakteriellen Lungenentzündung, die für die Entdeckung neuartiger Behandlungen für Sepsis und ihre Komplikationen verwendet werden kann.

Je nach experimentellem Design und Verfahren wurden C57BL/6-Mäuse CLP unterzogen, und nach 3 Tagen wurden ihnen intranasal Bakterien verabreicht (Abbildung 1). Wie in Abbildung 2dargestellt, begannen die Mäuse nach der Induktion der Peritonitis bei 12 h zu sterben. Zwei Mäuse in der CLP+SA-Gruppe und drei Mäuse in der CLP+NS-Gruppe starben vor der intranasalen S. aureus-Instillation. Bei nicht infizierten nicht oder ...

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Design of Cecal Ligation and Puncture and Intranasal Infection Dual Model of Sepsis-Induced Immunosuppression

Dieses Protokoll beschreibt Techniken zur Messung von infektiösen Ergebnissen, die sekundären Krankenhausinfektionen im immunsuppressiven Zustand zugrunde liegen, indem sie zunächst Cecal-Ligations-/Punktionsmäuse einrichten und sie mit intranasalen Infektionen herausfordern, um ein klinisch relevantes Modell der Immunsuppressionssepsis zu erstellen.

Design von Cecal Ligation und Punktion und Intranasal Infection Dual Model of Sepsis-Induced Immunosuppression

Sepsis, a severe and complicated life-threatening infection, is characterized by an imbalance between pro- and anti-inflammatory responses in multiple ...

Bereiten Sie die Maus für eine Operation vor. Rasieren Sie die unteren Quadranten des Bauches mit einem Rasiermesser und desinfizieren Sie den Bereich mit Jod. Legen Sie die Maus auf eine saubere Arbeitsfläche auf dem Rücken, wobei der Kopf vom Bediener weg zeigt.Machen Sie einen längsigen Hautschnitt etwa einen halben Zentimeter lang im linken Unterbauch. Achten Sie darauf, nicht in die Peritonealhöhle einzudringen. Verwenden Sie eine kleine Schere, um den Schnitt um etwa ein bis zwei Zentimeter zu verlängern.Machen Sie einen intramuskulären Schnitt, um Zugang in die Peritonealhöhle zu erhalten. In den meisten Fällen befindet sich das Cecum auf der linken Seite des Bauches. Isolieren Sie das Cecum.Mit stumpfen, anatomischen Zangen, sanft und sorgfältig aussetzen das Cecum durch den Schnitt. Schritt vier ist die Ligation. Die Position der Ligation auf dem Cecum bestimmt den Schweregrad der Sepsis.Etwa 75 % des Cecums verursachen eine schwere Sepsis. Die Liganierung von 50% des Cecums induziert eine Sepsis auf mittlerer Ebene. Während die Liganzierung von 25 % oder weniger des Cecums zu einer geringfügigen Sepsis führen wird.Ligate das Cecum an der angegebenen Position. Achten Sie darauf, das Ileocecal-Ventil nicht zu ligte. Schritt fünf ist, das Cecum zu durchstechen.Mit einer Nadel, perforieren Sie das Cecum mit einem einzigen Durchgang und durch Punktion auf halbem Weg zwischen der Ligation und der Spitze des Cecums. Stellen Sie sicher, dass Sie keine Blutgefäße durchstechen. Um eine vollständige Punktion zu gewährleisten, extrudieren Sie ein kleines Tröpfchen Kot aus beiden Nadellöchern.Ersetzen Sie das Cecum vorsichtig in die Bauchhöhle. Schließen Sie die Bauchmuskulatur, indem Sie einfache laufende Nähte anwenden und die Haut schließen. Reinigen Sie die Haut mit Jod.Injizieren Sie die Maus mit einer vorgewärmten Herz-/Mittellösung, um zu reanimieren. Legen Sie die Maus zurück in den Käfig mit unbegrenztem Zugang zu Nahrung und Wasser. Nach etwa drei Tagen nach der Cecal Ligation und Punktion oder dem CLP-Verfahren unterziehen wir die Maus einem zweiten Schlag mit einer intranasalen Infektion, um eine Lungenentzündung zu stimulieren, die häufig bei Sepsis auftritt.Nähern Sie sich dem Hals der Maus von hinten, sanft und sanft. Daumen und Zeigefinger der linken Hand bilden eine U-förmige Position. Halten Sie den Hals direkt hinter den Ohren, so dass der Mauskopf vollständig zurückhaltend ist.Führen Sie die intranasale Infektion ein. Mit einer 100-Mikroliter-Pipette den Staphylococcus aureus-Stamm intranasal einflößen. Halten Sie die Maus in einer aufrechten Position, fallen sie langsam zwei bis drei Mikroliter der bakteriellen Lösung in beide Nasenlöcher der Maus.Heben Sie die Maus nach oben und unten mit dem Kopf nach oben und Schwanz nach unten, um die bakterielle Lösung in die Luftröhre zu helfen. Heben Sie die Maus schnell nach oben, während Sie sie sanft und langsam senken. Wiederholen Sie die Instillation 15 Mal oder bis die gesamte bakterielle Lösung eingeflößt ist.Der letzte Schritt besteht darin, den Vorgang abzuschließen. Legen Sie die Maus auf die abgewinkelte Bettwäsche in etwa einem 35-Grad-Winkel, um sich zu erholen. Stellen Sie sicher, dass die Maus auf dem Rücken mit dem Kopf aufgelegt ist.Beobachten Sie die Maus, um sicherzustellen, dass es vollständig aus der Anästhesie und dem Verfahren wiederhergestellt ist. Nach dem Abflachen der Bettwäsche, legen Sie die Maus zurück in den Käfig mit unbegrenztem Zugang zu Nahrung und Wasser. Mäuse begannen etwa 12 Stunden nach der Induktion der Peritonitis zu sterben.Die Sterblichkeit war bei Mäusen mit CLP vor einer Lungenentzündung viel höher. Drei Tage nach der Operation hatten CLP-Mäuse mehr Sterblichkeit mit einer intranasalen Verabreichung von Staphylococcus aureus. Die Konzentrationen von serum pro-inflammatorischen Zytokinen stiegen signifikant 24 Stunden nach der bakteriellen Instillation bei Sepsismäusen im Vergleich zu den Mäusen, die CLP allein hatten oder die Sham-Mäuse mit einem zweiten Treffer operierten.Jedoch, Doppelschlag Mäuse zeigten signifikante Abnahme der BAL-Flüssigkeit Zytokin-Spiegel im Vergleich zu SA und Sham Chirurgie plus SA-Mäuse. Daher beeinträchtigt CLP die Wirtsabwehr und erhöht die Anfälligkeit für Infektionen. Dieses Dual-Hit-Modell ist ein wertvolles Werkzeug, um die molekularen Mechanismen für die Wirts-Pathogen-Interaktion zu verstehen, die den Weg zur Entwicklung neuer, wirksamer Medikamente und anderer Therapeutika für Superug-Infektionen eröffnen kann.

Research

JoVE Journal

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Die Verwendung von<em&gt; Galleria mellon</em&gt; Als Modellorganismus zum Studium<em&gt; Legionella pneumophila</em&gt; Infektion

Legionella pneumophila, the causative agent of a severe pneumonia named Legionnaires&#39; disease, is an important human pathogen that infects and ...

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