Name: single-molecule tracking microscopy - a tool for determining the diffusive states of cytosolic molecules
Uploaded: 2019-09-05T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Single-Molecule Tracking Microscopy - A Tool for Determining the Diffusive States of Cytosolic Molecules at JoVE.com

Мы благодарим Алеся Ахимович и Тингя Нан за критическое прочтение рукописи. Мы благодарим Эда Холла (Ed Hall), старшего научного сотрудника группы Advanced Research Computing Services в Университете Вирджинии, за помощь в настройке процедур оптимизации, используемых в этой работе. Финансирование этой работы было предоставлено Университетом Вирджинии.

1. Двухсексовая точечная калибровка
ПРИМЕЧАНИЕ: Изображения, описанные в этом и следующих разделах приобретаются с помощью специально голой перевернутой флуоресценции микроскоп, как описано в Rocha и др.23. Та же процедура применима к различным реализациям микр?...

Критическим фактором для успешного применения представленного протокола является обеспечение того, чтобы одномолекулярные сигналы были хорошо отделены друг от друга (т.е. они должны быть редкими в пространстве и во времени(Дополнительный Mov. 1)). Если в клетке одновременно нах?...

Изучение диффузивного поведения биомолекул дает представление об их биологических функциях. Методы, основанные на флуоресценции, стали ценными инструментами для наблюдения за биомолекулами в их родной клеточной среде. Восстановление флуоресценции после фотоотрубения (FRAP) и флуоресцентной корреляции спектроскопии (FCS)1 обеспечивают ансамбль-средний диффузивного поведения. И наоборот, одномолекулярная локализация микроскопии позволяет наблюдать за отдельными флуоресцентно отмеченными молекулами с высоким пространственным и временным разрешением2,3,4. Наблюдение отдельных молекул выгодно, так как интересующий белок может существовать в различных диффузивных состояниях. Например, два легко различимых диффузионных состояния возникают, когда транскрипционный регулятор, такой как CueR в Escherichia coli,свободно рассеивается в цитозоле или связывается с последовательностью ДНК и становится обездвижемым по шкале времени измерения5 . Одномолекулярное слежение обеспечивает инструмент для непосредственного наблюдения за этими различными состояниями, и для их разрешения не требуется сложных анализов. Тем не менее, становится все более сложным для решения нескольких диффузивных государств и их населения фракций в тех случаях, когда их диффузионные ставки более похожи. Например, из-за зависимости размера коэффициента диффузии различные состояния олигомеризации белка проявляются как различные диффузионные состояния6,7,8,9 , 10. Такие случаи требуют комплексного подхода с точки зрения сбора, обработки и анализа данных.
Критическим фактором, влияющим на диффузивные темпы цитосолильных молекул, является эффект заточения клеточной границы. Ограничения, наложенные на молекулярное движение границами бактериальных клеток, приводят к тому, что измеренная скорость диффузии цитосолильных молекул выглядит медленнее, чем если бы то же самое движение происходило в неограниченном пространстве. Для очень медленно рассеивающихся молекул эффект клеточного заточения незначителен из-за отсутствия столкновений с границей. В таких случаях, это может быть возможным для точного решения диффузионных состояний путем установки распределения молекулярных смещений, r, или очевидной диффузии коэффициенты, D ,с помощью аналитических моделей, основанных на уравнениях для броуновского движения ( случайная диффузия)11,12,13. Однако для быстро распространяющих цитосолильных молекул экспериментальные распределения больше не напоминают те, которые получены для неограниченного броуновского движения из-за столкновений диффузионных молекул с границами клеток. Эффекты заключения должны быть учтены для точного определения неограниченных коэффициентов диффузии флуоресцентно обозначенных молекул. Несколько подходов были недавно разработаны для учета последствий заключения либо (полу-) аналитически 5,14,15,16 или численно через Монте-Карло моделирования Броуновская диффузия6,10,16,17,18,19.
Здесь мы предоставляем интегрированный протокол для сбора и анализа данных одномолекулярной локализации микроскопии с особым акцентом на одномолекулярное отслеживание. Конечная цель протокола заключается в разрешении диффузивных состояний флуоресцентно обозначенных цитосолильных белков внутри, в данном случае, бактериальных клеток в форме стержня. Наша работа основывается на предыдущем протоколе для одномолекулярной слежения, в котором полимераза ДНК, PolI, было показано, существуют в ДНК связаны и несвязанное состояние диффузии анализа20. Здесь мы расширяем одномолекулярный анализ слежения до 3D-измерений и выполняем более реалистичные вычислительные симуляции для разрешения и количественной оценки нескольких диффузивных состояний, одновременно присутствующих в клетках. Данные приобретаются с помощью домашнего 3D супер-разрешение флуоресценции микроскоп, который способен определить 3D положение флуоресцентных излучателей с помощью изображения с двойной селипс точки распространения-функции (DHPSF)21,22. Необработанные одномолекулярные изображения обрабатываются с помощью специально написанного программного обеспечения для извлечения 3D одномолекулярных локализаций, которые затем объединяются в одномолекулярные траектории. Тысячи траекторий объединяются для генерации распределения явных коэффициентов диффузии. На последнем этапе экспериментальные дистрибутивы соответствуют численно генерируемым дистрибутивам, полученным с помощью моделирования броуновского движения Монте-Карло в ограниченном объеме. Мы применяем этот протокол для решения диффузивных состояний белка секреционной системы типа 3 Ysc, в живых Yersinia enterocolitica. Из-за своей модульной природы, наш протокол, как правило, применим к любому типу одномолекулярных или одночастиц слежения эксперимента в произвольной геометрии клеток.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>2,6-diaminopimelic acid</td>
			<td>Chem Impex International</td>
			<td>5411</td>
			<td>Necessary for growth of Y. enterocolitica cells used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4f lenses</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>AC508-080-A</td>
			<td>f = 80mm, 2&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>514 nm laser</td>
			<td>Coherent</td>
			<td>Genesis MX514 MTM</td>
			<td>Use for fluorescence excitation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>agarose</td>
			<td>Inivtrogen</td>
			<td>16520100</td>
			<td>Used to make gel pads to mount liquid bacterial sample on microscope.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ammonium chloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A9434</td>
			<td>M2G ingredient.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bandpass filter</td>
			<td>Chroma</td>
			<td>ET510/bp</td>
			<td>Excitation pathway.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Heart Infusion</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>53286</td>
			<td>Growth media for Y. enterocolitica.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>calcium chloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>223506</td>
			<td>M2G ingredient.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>camera</td>
			<td>Imaging Source</td>
			<td>DMK 23UP031</td>
			<td>Camera for phase contrast imaging.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dielectric phase mask</td>
			<td>Double Helix, LLC</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Produces DHPSF signal.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disodium phosphate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>795410</td>
			<td>M2G ingredient.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethylenediaminetetraacetic acid</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S311-100</td>
			<td>Chelates Ca2+. Induces secretion in the T3SS.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>flip mirror</td>
			<td>Newport</td>
			<td>8892-K</td>
			<td>Allows for switching between fluorescence and phase contrast pathways.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fluospheres</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>F8792</td>
			<td>Fluorescent beads. 540/560 exication and emission wavelengths. 40 nm diameter.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass cover slip</td>
			<td>VWR</td>
			<td>16004-302</td>
			<td>#1.5, 22mmx22mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glucose</td>
			<td>Chem Impex International</td>
			<td>811</td>
			<td>M2G ingredient.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>immersion oil</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>Z-81025</td>
			<td>Placed on objective lens.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iron(II) sulfate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F0518</td>
			<td>M2G ingredient.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>long pass filter</td>
			<td>Semrock</td>
			<td>LP02-514RU-25</td>
			<td>Emission pathway.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>magnesium sulfate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S25414A</td>
			<td>M2G ingredient.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microscope platform</td>
			<td>Mad City Labs</td>
			<td>custom</td>
			<td>Platform for inverted microscope.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>nalidixic acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>N4382</td>
			<td>Y. enterocolitica cells used are resistant to nalidixic acid.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>objective lens</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>1-U2B991</td>
			<td>60X, 1.4 NA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ozone cleaner</td>
			<td>Novascan</td>
			<td>PSD-UV4</td>
			<td>Used to eliminate background fluorescence on glass cover slips.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>potassium phosphate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>795488</td>
			<td>M2G ingredient.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red LED</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>M625L3</td>
			<td>Illuminates sample for phase contrast imaging. 625nm.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sCMOS camera</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td>ORCA-Flash 4.0 V2</td>
			<td>Camera for fluorescence imaging.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>short pass filter</td>
			<td>Chroma</td>
			<td>ET700SP-2P8</td>
			<td>Emission pathway.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tube lens</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>AC508-180-A</td>
			<td>f=180 mm, 2&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yersinia enterocolitica dHOPEMTasd</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Strain AD4442, eYFP-YscQ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>zero-order quarter-wave plate</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>WPQ05M-514</td>
			<td>Excitation pathway.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

single-molecule tracking microscopy - a tool for determining the diffusive states of cytosolic molecules

Одномолекулярная локализационная микроскопия зондирует положение и движения отдельных молекул в живых клетках с десятками нанометров пространственного и миллисекундного височного разрешения. Эти возможности делают одномолекулярную микроскопию локализации идеально подходящей для изучения биологических функций молекулярного уровня в физиологически значимых средах. Здесь мы демонстрируем интегрированный протокол для приобретения и обработки/анализа данных отслеживания одной молекулы для извлечения различных диффузивных состояний, которые может проявлять сявряющий белок. Эта информация может быть использована для количественной оценки формирования молекулярного комплекса в живых клетках. Мы предоставляем подробное описание эксперимента по локализации на основе 3D-молекулы на основе камеры, а также последующих шагов по обработке данных, которые дают траектории отдельных молекул. Эти траектории затем анализируются с помощью численного анализа для извлечения распространенных диффузивных состояний флуоресцентно обозначенных молекул и относительного изобилия этих состояний. Основа анализа основана на стохастической моделировании внутриклеточных броуновских диффузионных траекторий, которые пространственно ограничены произвольной геометрией клеток. На основе смоделированных траекторий, сырые одномолекулярные изображения генерируются и анализируются так же, как экспериментальные изображения. Таким образом, экспериментальные ограничения точности и точности, которые трудно откалибровать экспериментально, явно включены в аналитический рабочий процесс. Коэффициент диффузии и относительные фракции населения в преобладающих диффузионных состояниях определяются путем установки распределения экспериментальных значений с использованием линейных комбинаций смоделированных распределений. Мы демонстрируем полезность нашего протокола путем разрешения диффузивных состояний белка, который проявляет различные диффузионные состояния при формировании гомо- и гетеро-олигомерных комплексов в цитозоле бактериального патогена.

В описанных здесь экспериментальных условиях (20 000 кадров, длина траектории минимум 4 локализации) и в зависимости от уровня экспрессии флуоресцентно обозначенных термоядерных белков, приблизительно 200-3000 локализаций дают 10-150 траектории могут быть сгенерированы на яч...

Watch this Scientific Journal Video about Single-Molecule Tracking Microscopy - A Tool for Determining the Diffusive States of Cytosolic Molecules at JoVE.com

Single-Molecule Tracking Microscopy - A Tool for Determining the Diffusive States of Cytosolic Molecules

3D одномолекулярная микроскопия локализации используется для зондирования пространственных положений и траекторий движения флуоресцентно обозначенных белков в живых бактериальных клетках. Экспериментальный протокол анализа данных, описанный в данном документе, определяет распространенное диффузное поведение цитосолильных белков на основе объединенных одномолекулярных траекторий.

Одномолекулярная слежение за микроскопией - инструмент для определения диффузивных состояний цитосолильных молекул

Single-molecule localization microscopy probes the position and motions of individual molecules in living cells with tens of nanometer spatial and ...

3D одномекулярное отслеживание может определить субклеточную локализацию и поведение движения отдельных белков. Наблюдение за движением белка в живой клетке дает важные сведения о его взаимодействии с связывающими партнерами в его родной среде. Представленный здесь метод обеспечивает общую основу для анализа данных слежения за одной молекулой для разрешения диффузных состояний биологических молекул.Он может быть применен как к 2D, так и к 3D траекториям, которые ограничиваются произвольно сформированными объемами клеток. После депонирования флуоресцентного шарика в заранее подготовленной агарозной площадке, как описано в сопроводительном текстовом протоколе, поместите его на квитанцию крышки микроскопа и закрепите крышку скольжения к держателю образца микроскопа. Затем держатель образца устанавливается на перевернутый флуоресцентный микроскоп.Затем инициализируйте графический пользовательский интерфейс микроскопа; здесь для управления инструментами используется специально написанное программное обеспечение в MATLAB. Инициализировать программное обеспечение камеры HCImage Live. Во вкладке Захват под разделом Управления камерой установите время экспозиции до 0,03 секунды, а затем нажмите Live, чтобы начать прямую трансляцию камеры.Нажмите соответствующую кнопку Open Laser на интерфейсе GUI, чтобы разблокировать лазер и возбудить флуоресцентные бусы на агарозной площадке. Просмотр флуоресценции излучения на камеру с помощью режима живого потока. Отрегулируйте положения X и Y стадии микроскопа, нажав стрелки XY-позиции под разделом Micro-Positioning Stage пользовательского интерфейса, чтобы распоидать по крайней мере одну флуоресцентную шарик в центре поля зрения.При необходимости измените размер шага, нажав на поле падения ниже стрелок. Далее отрегулируйте положение на этапе микроскопа, нажав на стрелки позиции под разделом Nano-Positioning Stage. Установите ориентацию двойной спирали точки распространения функции флуоресцентного шарика, чтобы быть вертикальной.Эта вертикальная ориентация определяется как отправная точка калибровки. Сканирование 30 шагов выше и ниже стартовой позиции в 50 нанометров шагом. Запись 10 кадров на каждом шагу с использованием времени экспозиции 0,03 секунды.Чтобы начать автоматическое получение данных, нажмите на кнопку Перейти под калибровку. Центрифуга один миллилитр теплового шока Yersinia enterocolitica культуры в 5000 раз тяжести в течение трех минут при комнатной температуре затем удалить культуру и отказаться от супернатанта. Вымойте гранулы три раза с одним миллилитров M2G средств массовой информации.После окончательного полоскания, повторно гранулы бактерий в 250 микролитров M2G средств массовой информации. Далее добавить флуоресцентные бусы для использования в качестве фидуциальных маркеров. Флуоресцентный шарик решение должно быть добавлено так, что Есть только один-два бусинки на поле зрения при просмотре в микроскоп.Аккуратно смешайте подвеску вихрем, чтобы отделить любые агрегированные клетки и пластины 1,5 микролитров подвески на 1,5 до 2%agarose площадку, сделанную с M2G, а затем инвертировать площадку и поместить его на озоно-очищенный микроскоп крышка скольжения. Добавьте каплю масла погружения на цель микроскопа и поместите держатель образца на стадию микроскопа и закрепляйте его на месте. Инициализируйте графический пользовательский интерфейс для управления камерой микроскопа, этапом образца и лазерами возбуждения, а затем инициализируйте программное обеспечение камеры.Во вкладке Захват под разделом Управления камерой установите время экспозиции до 0,025 секунды, а затем нажмите Live, чтобы начать прямую трансляцию камеры. Отрегулируйте положения X и Y стадии микроскопа, нажав стрелки XY-позиции под разделом Micro-Positioning Stage, чтобы сканировать вокруг образца и найти поле зрения с соответствующей плотной популяцией бактериальных клеток. Чтобы максимизировать пропускную способность данных, плотность ячеек на крышке должна быть как можно выше без перекрытия или прикосновения клеток друг к другу.Поле зрения должно также включать по крайней мере один флуоресцентный шарик в качестве фидуциального маркера, с тем чтобы сдвиг стадии можно было измерить при сборе данных. Затем отрегулируйте положение в стадии микроскопа, нажав на стрелки позиции под разделом Nano-Positioning Stage, чтобы флуоресцентные бусины'double-helix point-spread-function доли были вертикальными. Затем перейдите к последовательности и выберите Настройки сканирования.Измените количество кадров до 20 000. Затем выберите папку сохранения назначения, нажав на кнопку, помеченную тремя точками. Наконец нажмите Кнопку Начать собирать до 20 000 кадров камеры, используя короткое время экспозиции 0,025 секунды.После завершения, блокировать лазерное освещение, нажав соответствующую кнопку Close Laser в графическом пользовательском интерфейсе. Затем соберите 200 кадров темных изображений, используя то же время экспозиции. Проверьте поле рядом со светодиодом Thorlabs, а затем нажмите Toggle Mirror Up.This включит светодиодный свет над образцом и переключит микроскоп с пути флуоресценции на фазовую контрастную дорожку.Инициализируйте программное обеспечение для сбора данных на пути контрастности фазы и нажмите кнопку Start/Stop Live Display, чтобы просмотреть прямую трансляцию с камеры. Затем нажмите Capture and Go, чтобы сохранить изображение, чтобы собрать фазовое контрастное изображение ячеек в текущем поле зрения. Fit флуоресцентный шарик для использования в качестве фидуциального маркера.Найти и поместить все локализации и все кадры камеры, используя пороговые значения шаблона, описанные в текстовом протоколе. В разделе Локализация DHPSF SM gui Easy-DHPSF нажмите Run, чтобы соответствовать одномекулярными сигналами, а затем нажмите OK на следующие всплывающие окна, чтобы сохранить настройки по умолчанию. Программное обеспечение найдет одномекулярные сигналы флуоресценции, которые напоминают двойную спираль точки распространения функции, а затем попытаться соответствовать им с помощью двойной гауссийской модели.При запуске скрипта пользователь увидит отображение необработанных данных изображения, а также реконструированное изображение успешно установленных одномекулярных сигналов. Используя специально написанное программное обеспечение в MATLAB, начните с ручного выбора пяти пар контрольных токов во всплывающем окне, приблизительно оценивая и нажимая на клеточные столбы тех же пяти ячеек как в одномерных данных локализации, так и в контурах клеток. Удалить ячейки, содержащие менее 10 локализаций, и удалить ячейки, которые расположены частично вне поля зрения, а затем удалить любые дополнительные нежелательные ячейки во всплывающем окне, нажав внутри их контур ячейки.Наконец, назначьте локализации, на которых находится граница контура ячейки, этой ячейке. Откажитесь от любых локализаций, не расположенных в пределах контура ячейки. Важнейшим фактором успешного применения этого протокола является обеспечение того, чтобы одномекулярные сигналы хорошо отделялись друг от друга.Если в клетке одновременно находится более одной флуоресцентной молекулы, то локализация может быть неправильно назначена на траекторию другой молекулы. Этот протокол работает, чтобы устранить проблему увязки, отбрасывая любые траектории, для которых две или более локализаций одновременно присутствуют в одной ячейке. Таким образом, если одномекулярные сигналы слишком плотны, большое количество этих данных автоматически отбрасывается во время обработки.В зависимости от уровня экспрессии флуоресцентно помеченных белков синтеза, на клетку может быть сгенерировано от 200 до 3000 локализаций. Эти локализации могут дать от 10 до 150 траекторий. Для получения хорошо отобранных распределений необходимо большое количество траекторий.Здесь показана гистограмма видимых диффузионных коэффициентов для почти 80 000 одномолекулярных траекторий энтероколитика типа 3 секреции белка Ysc' помечена флуоресцентным белком eYFP. Иске связывается с мембранными инжезомами, что приводит к фракции молекул, около 24%, которые не рассеиваются, о чем свидетельствует распределение, показанные черным. Оставшиеся молекулы Ysc' свободно рассеиваются в цитозоле.В ходе метода, описанного здесь, установлено, что неопределимые молекулы Ysc, по крайней мере, в трех различных диффузных состояниях. Этот вывод был сделан путем установки распределения очевидных диффузионных коэффициентов с библиотекой смоделированных дистрибутивных распределений с известными диффузионные коэффициенты. При попытке разрешить множественные диффузивные состояния необходимо собрать несколько тысяч одномекулярных траекторий, чтобы обеспечить очень хорошую выборку видимых диффузионных коэффициентов.Одномекулярное отслеживание может быть выполнено в клетках дикого типа или в генетических мутантах удаления, чтобы определить, проявляются ли конкретные диффузные состояния только тогда, когда присутствует молекулярный связующий партнер. Решая диффузные состояния цитозоловых белков и белковых комплексов с помощью 3D-одномекулярного слежения, исследователи могут определить, где, когда и как в живых клетках образуются олигомерные белковые комплексы. Работа с высокоскоростных лазерных источников и живых патогенов человека может быть чрезвычайно опасным.Всегда должны соблюдаться соответствующие протоколы лазерной безопасности и биобезопасности.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

High Precision FRET at Single-molecule Level for Biomolecule Structure Determination

Высокая точность FRET на уровне одиночной молекулы для определения структуры биомолекулы

A protocol on how to perform high-precision interdye distance measurements using F&#246;rster resonance energy transfer (FRET) at the single-molecule ...

A Simple, Robust, and High Throughput Single Molecule Flow Stretching Assay Implementation for Studying Transport of Molecules Along DNA

Простая, прочная и высокая пропускная способность одной молекулы потока растяжения Assay осуществления для изучения транспорт молекул вдоль ДНК

We describe a simple, robust and high throughput single molecule flow-stretching assay for studying 1D diffusion of molecules along DNA. In this assay, ...

Single-molecule Manipulation of G-quadruplexes by Magnetic Tweezers

Одноместный молекула манипуляции G-quadruplexes, Магнитные пинцеты

Non-canonical nucleic acid secondary structure G-quadruplexes (G4) are involved in diverse cellular processes, such as DNA replication, transcription, RNA ...

Covalent Immobilization of Proteins for the Single Molecule Force Spectroscopy

Ковалентной иммобилизации белков для одной молекулы силой спектроскопии

In recent years, atomic force microscopy (AFM) based single molecule force spectroscopy (SMFS) extended our understanding of molecular properties and ...

Proteome-wide Quantification of Labeling Homogeneity at the Single Molecule Level

Количественная оценка протеома общесистемной маркировки однородность на уровне одной молекулы

Cell proteomes are often characterized using electrophoresis assays, where all species of proteins in the cells are non-specifically labeled with a ...

Production of Dynein and Kinesin Motor Ensembles on DNA Origami Nanostructures for Single Molecule Observation

Производство динамовских и кинезинских моторных ансамблей на наноструктурах ДНК оригами для наблюдения за одной молекулой

Cytoskeletal motors are responsible for a wide variety of functions in eukaryotic cells, including mitosis, cargo transport, cellular motility, and ...

Conventional BODIPY Conjugates for Live-Cell Super-Resolution Microscopy and Single-Molecule Tracking

Обычные BODIPY конъюгирует для микроскопии с суперразрешением Live-Cell и одномолекулярного слежения

Single molecule localization microscopy (SMLM) techniques overcome the optical diffraction limit of conventional fluorescence microscopy and can resolve ...

An In Vitro Single-Molecule Imaging Assay for the Analysis of Cap-Dependent Translation Kinetics

An In Vitro Single-Molecule Imaging Assay for the Analysis of Cap-Dependent Translation Kinetics

In Vitro одномекулярной визуализации анализ для анализа Cap-зависимых Перевод Кинетики

Cap-dependent protein synthesis is the predominant translation pathway in eukaryotic cells. While various biochemical and genetic approaches have allowed ...

Single Cell Analysis Of Transcriptionally Active Alleles By Single Molecule FISH

Одноклеточный анализ транскрипционно активных аллелей одной молекулой FISH

Gene transcription is an essential process in cell biology, and allows cells to interpret and respond to internal and external cues. Traditional bulk ...

Making Precise and Accurate Single-Molecule FRET Measurements using the Open-Source smfBox

Проведение точных и точных одномолекулярных измерений FRET с помощью smfBox с открытым исходным кодом

The smfBox is a recently developed cost-effective, open-source instrument for single-molecule F&#246;rster Resonance Energy Transfer (smFRET), which makes ...