Name: method to obtain pattern of breathing in senescent mice through unrestrained barometric plethysmography
Uploaded: 2020-04-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Method to Obtain Pattern of Breathing in Senescent Mice through Unrestrained Barometric Plethysmography at JoVE.com

Forfatterne vil gerne takke Angela Le, Sarah Ruby, og Marisa Mickey for deres arbejde med at opretholde de animalske kolonier. Dette arbejde blev finansieret af 1R15 HD076379 (L.R.D.), 3R15 HD076379 (L.R.D. til støtte for CNR) og McDevitt Undergraduate Research Fellowship in Natural Sciences (BEE).

Alle procedurer blev godkendt af Le Moyne College Institutional Animal Care and Use Committee. Al anvendelse af dyr var i overensstemmelse med de politikker, der er beskrevet i vejledningen om pleje og anvendelse af laboratoriedyr8.
BEMÆRK: (Kritisk) Før forsøg skal du indhente alle nødvendige godkendelser og den uddannelse, der kræves til brug i dyrene. Det er vigtigt, at eksperimentatorerne er fortrolige med musens adfærd og aktivitetsniveauer, ...

<ol>
	<li>DeRuisseau, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+deficits+contribute+to+respiratory+insufficiency+in+Pompe+disease.">Neural deficits contribute to respiratory insufficiency in Pompe disease.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (23), 9419-9424 (2009).</li><li>Ogier, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain-derived+neurotrophic+factor+expression+and+respiratory+function+improve+after+ampakine+treatment+in+a+mouse+model+of+Rett+syndrome.">Brain-derived neurotrophic factor expression and respiratory function improve after ampakine treatment in a mouse model of Rett syndrome.</a> Journal of Neuroscience. 27 (40), 10912-10917 (2007).</li><li>Ohshima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxic+ventilatory+response+during+light+and+dark+periods+and+the+involvement+of+histamine+H1+receptor+in+mice.">Hypoxic ventilatory response during light and dark periods and the involvement of histamine H1 receptor in mice.</a> American Journal of Physiology-Regulatory Integrative and Comparative Physiology. 293 (3), 1350-1356 (2007).</li><li>van Schaik, S. M., Enhorning, G., Vargas, I., Welliver, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+syncytial+virus+affects+pulmonary+function+in+BALB/c+mice.">Respiratory syncytial virus affects pulmonary function in BALB/c mice.</a> Journal of Infectious Diseases. 177 (2), 269-276 (1998).</li><li>Glaab, T., Taube, C., Braun, A., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasive+and+noninvasive+methods+for+studying+pulmonary+function+in+mice.">Invasive and noninvasive methods for studying pulmonary function in mice.</a> Respiratory Research. 8, (2007).</li><li>Loeven, A. M., Receno, C. N., Cunningham, C. M., DeRuisseau, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arterial+Blood+Sampling+in+Male+CD-1+and+C57BL/6J+Mice+with+1%+Isoflurane+is+Similar+to+Awake+Mice.">Arterial Blood Sampling in Male CD-1 and C57BL/6J Mice with 1% Isoflurane is Similar to Awake Mice.</a> Journal of Applied Physiology. , (2018).</li><li>Receno, C. N., Eassa, B. E., Reilly, D. P., Cunningham, C., DeRuisseau, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pattern+of+breathing+in+young+wild+type+and+Ts65Dn+mice+during+the+dark+and+light+cycle.">The pattern of breathing in young wild type and Ts65Dn mice during the dark and light cycle.</a> FASEB Journal. 32 (1), (2018).</li><li>Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, Inistitute fpr Laboratory Animal Research, Division on Earth and Life Studies, National Research Council of the National Academies. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, 8th edition. , (2011).</li><li>Receno, C. N., Glausen, T. G., DeRuisseau, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Saline+as+a+vehicle+control+does+not+alter+ventilation+in+male+CD-1+mice.">Saline as a vehicle control does not alter ventilation in male CD-1 mice.</a> Physiological Reports. 6 (10), (2018).</li><li>Shanksy, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+differences+in+behavioral+strategies:+Avoiding+interpretational+pitfalls.">Sex differences in behavioral strategies: Avoiding interpretational pitfalls.</a> Current Opinion in Neurobiology. 49, 95-98 (2018).</li><li>Kopp, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Locomotor+activity+rhythm+in+inbred+strains+of+mice:+implications+for+behavioural+studies.">Locomotor activity rhythm in inbred strains of mice: implications for behavioural studies.</a> Behavioural Brain Research. 125 (1-2), 93-96 (2001).</li><li>Teske, J. A., Perez-Leighton, C. E., Billington, C. J., Kotz, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methodological+considerations+for+measuring+spontaneous+physical+activity+in+rodents.">Methodological considerations for measuring spontaneous physical activity in rodents.</a> American Journal of Physiology-Regulatory Integrative and Comparative Physiology. 306 (10), 714-721 (2014).</li><li>Kabir, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+pattern+in+awake+rats:+Effects+of+motor+activity+and+of+alerting+stimuli.">Respiratory pattern in awake rats: Effects of motor activity and of alerting stimuli.</a> Physiology &amp; Behavior. 101 (1), 22-31 (2010).</li><li>Terada, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ventilatory+long-term+facilitation+in+mice+can+be+observed+during+both+sleep+and+wake+periods+and+depends+on+orexin.">Ventilatory long-term facilitation in mice can be observed during both sleep and wake periods and depends on orexin.</a> Journal of Applied Physiology. 104 (2), 499-507 (2008).</li><li>Friedman, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ventilatory+behavior+during+sleep+among+A/J+and+C57BL/6J+mouse+strains.">Ventilatory behavior during sleep among A/J and C57BL/6J mouse strains.</a> Journal of Applied Physiology. 97 (5), 1787-1795 (2004).</li><li>Drorbaugh, J. E., Fenn, W. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+barometric+method+for+measuring+ventilation+in+newborn+infants.">A barometric method for measuring ventilation in newborn infants.</a> Pediatrics. 16 (1), 81-87 (1955).</li><li>Seifert, E. L., Mortola, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+circadian+pattern+of+breathing+in+conscious+adult+rats.">The circadian pattern of breathing in conscious adult rats.</a> Respiration Physiology. 129 (3), 297-305 (2002).</li><li>Receno, C. N., Roffo, K. E., Mickey, M. C., DeRuisseau, K. C., DeRuisseau, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quiet+breathing+in+hindlimb+casted+mice.">Quiet breathing in hindlimb casted mice.</a> Respiratory Physiology &amp; Neurobiology. , 10 (2018).</li></ol>

Protokollen indeholder oplysninger om en stille vejrtrækning baseline i mus, samt indsamling af data om centrale apnø og augmented vejrtrækninger. De repræsentative resultater viser, at en 10 min stille baseline har et lignende mønster af vejrtrækning sammenlignet med et gennemsnit på fire 15 s anfald for en kohorte af gamle mus. Det er vigtigt, at de 15 s anfald ikke er statistisk forskellige, og disse grupper har heller ikke forskelle i variation fra hinanden ved hjælp af Levene's test. Disse data viser, at sel...

UBP er en almindelig teknik til vurdering af vejrtrækningsmønstre1,2,3,4. Ved denne metode anbringes musene i et lukket kammer, hvor trykforskelle mellem hovedkammeret (hvor dyret er anbragt) og et referencekammer filtreres gennem en pneutøchograf for at opnå værdier. Den resulterende UBP setup er noninvasive og uhæmmet og giver mulighed for respiratoriske foranstaltninger, der skal vurderes uden krav om anæstesi eller kirurgi. Derudover er denne teknik velegnet til undersøgelser, der kræver flere målinger i den samme mus over tid. Variabler såsom vejrtrækning frekvens, tidevandsvolumen, og minutter ventilation kan kvantificeres med denne metode, under et enkelt forsøg eller over flere forsøg. Hele kroppen UBP giver også målinger af peak strømme og respiratoriske cyklus varighed. Tilsammen kvantificerer disse parametre åndedrætsmønstret. De registrerede vejrtrækningsspor gør det også muligt at gennemgå dataene og tælle antallet af centrale apnø, der vises inden for en given tidsperiode. Dette antal kan bruges sammen med en analyse af tidevandsvolumen og inspiratorisk gange til at måle andre ændringer i åndedrætsmønsteret.
Mens flere noninvasive plethysmografi teknikker findes for direkte vurdering af pulmonal fysiologiske parametre, hele kroppen UBP giver mulighed for en måde at screene for respiratorisk funktion med minimal unødig stress til musen. Head-out plethysmografi, som udnytter tidevandmidtudløbflow foranstaltninger og er også noninvasive, er afhængig af tilbageholdenhed, ligesom mange andre typer af plethysmografi (f.eks dobbelt-kammer plethysmografi). Mens disse metoder har været anvendt i gnavere modeller til at måle luftvejene lydhørhed5, brug af hals kraver eller små fastholdelsesrør kan tage mus (vs andre arter) længere at akklimatisere til og returnere deres vejrtrækning til hvileniveauer.
Opnåelse af et optimalt luftåndende segment er en vigtig overvejelse for baseline sammenligninger. Den øgede brug af kommercielt tilgængelige plethysmografisystemer gør indsamling af åndedrætsmønstret muligt i mange laboratorier. Det er vigtigt, at åndedrætsmønsteret varierer i hele indsamlingsperioden, især for mus. Når det er sagt, er det nødvendigt at standardisere basisanalysen som et middel til at sikre, at forsøgseksperimenternes uddannelsesniveau ikke forvirrer resultaterne. Der er mange måder at indsamle en luft-vejrtrækning segment, der tjener som et område af variation mellem eksperimentelle design. Et eksempel omfatter gennemsnit de sidste 10-30 min data efter en tidligere defineret sæt tid i kammeret1, mens en anden metode indebærer at vente, indtil musen er synligt rolig i 5-10 min6. Sidstnævnte kan tage 2-3 h for at opnå, og i nogle tilfælde kan en retssag skal opgives, hvis musen ikke er rolig længe nok. Denne bekymring er en særlig vigtig overvejelse for stammer af mus, hvor observerede adfærd er mere ængstelig og excitable7. Disse mus kan tage længere tid at tilpasse sig kammeret miljø og kun bevare roen for korte byger af tid. Hvis du begrænser den tid, der afsættes til oprindelig samling, standardiserer kammertiden for hver mus.
Det er afgørende, at eksperimentatorer opnår en passende baseline, der omfatter hvileadfærdsværdier i musen, men også forekommer rettidigt. Derfor er formålet med denne rapport at give en beskrivelse af de metoder, der anvendes til at opnå korte stille baseline værdier for vejrtrækning parametre i mus. Desuden rapporterer vi, at apnø og augmented vejrtrækninger kan kvantificeres i løbet af den første time i kammeret.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1331px;" width="1330">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Carbon Dioxide Analyzer</td>
			<td style="width:135px;">AEI Technologies</td>
			<td style="width:119px;">CD-3A&#160;</td>
			<td style="width:727px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Carbon Dioxide Sensor</td>
			<td style="width:135px;">AEI Technologies</td>
			<td style="width:119px;">&#160;P-61B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Computer</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>must be compliant with Ponemah requirements</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Drierite beads</td>
			<td style="width:135px;">PermaPure LLC</td>
			<td style="width:119px;">DM-AR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Flow Control</td>
			<td style="width:135px;">AEI Technologies</td>
			<td style="width:119px;">R-1</td>
			<td>vacuum</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Flowmeter</td>
			<td style="width:135px;">TSI</td>
			<td align="right" style="width:119px;">4100</td>
			<td>need one per chamber and one for vacuum</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Gas Mixer</td>
			<td style="width:135px;">MCQ Instruments</td>
			<td style="width:119px;">GB-103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Gas Tanks</td>
			<td style="width:135px;">Haun</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>100% oxygen, 100% carbon dioxide, 100% nitrogen - food grade, or pre-mixed tanks for nomal room air and gas challenges</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Oxygen Analyzer</td>
			<td style="width:135px;">AEI Technologies</td>
			<td style="width:119px;">S-3A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Oxygen Sensor</td>
			<td style="width:135px;">AEI Technologies</td>
			<td style="width:119px;">&#160;N-22M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Polyurethane Tubing</td>
			<td style="width:135px;">SMC</td>
			<td style="width:119px;">TUS 0604 Y-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Ponemah Software</td>
			<td style="width:135px;">DSI</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Small Rodent Chamber</td>
			<td style="width:135px;">Buxco/DSI</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Thermometer (LifeChip System)</td>
			<td style="width:135px;">Destron-Fearing</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>any type of thermometer to take accurate body temperatures is appropriate, but the use of implantable chips allows for minimal disturbance to animal for taking several body temperature measurements while the animal is still in the UBP chamber&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Transducers</td>
			<td style="width:135px;">Validyne</td>
			<td style="width:119px;">DP45</td>
			<td>need one per chamber&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:351px;">Whole Body Plethysmography System&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Data Science International (DSI)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Includes ACQ-7700, pressure/temperature probes, etc.&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

method to obtain pattern of breathing in senescent mice through unrestrained barometric plethysmography

Uhæmmet barometrisk plethysmografi (UBP) er en metode til kvantificering af åndedrætsmønsteret hos mus, hvor vejrtrækningsfrekvens, tidevandsvolumen og minutventilation rutinemæssigt rapporteres. Desuden kan der indsamles oplysninger om neurale output af vejrtrækning, herunder eksistensen af centrale apnø og augmented vejrtrækninger. En vigtig overvejelse for UBP er at opnå en vejrtrækning segment med en minimal effekt af ængstelig eller aktiv adfærd, at belyse svaret på vejrtrækning udfordringer. Her præsenterer vi en protokol, der giver mulighed for korte, rolige baselines, der skal opnås i alderen mus, kan sammenlignes med at vente på længere anfald af stille vejrtrækning. Brugen af kortere tidsegmenter er værdifuld, da nogle stammer af mus kan være mere og mere ophidselige eller ængstelige, og længere perioder med stille vejrtrækning kan ikke opnås inden for en rimelig tidsramme. Vi placerede 22 måneder gamle mus i et UBP-kammer og sammenlignede fire 15 s stille vejrtrækningssegmenter mellem minutter 60-120 til en længere 10 minutters stille vejrtrækningsperiode, der tog 2-3 timer at erhverve. Vi opnåede også optællinger af centrale apnø og augmented vejrtrækninger forud for de stille vejrtrækningsegmenter efter en 30 minutters familiarization periode. Vi viser, at 10 min stille vejrtrækning kan sammenlignes med at bruge en meget kortere 15 s varighed. Derudover kan tiden op til disse 15 s stille vejrtrækning segmenter bruges til at indsamle data om apnø af central oprindelse. Denne protokol gør det muligt for efterforskere at indsamle mønstre-of-vejrtrækning data i et bestemt tidsrum og gør stille baseline foranstaltninger muligt for mus, der kan udvise øgede mængder af overgearet adfærd. UBP-metoden i sig selv giver en nyttig og noninvasive måde at indsamle mønstre-of-vejrtrækning data og giver mulighed for mus, der skal testes over flere tidspunkter.

Resultaterne af UBP som en vurdering af åndedrætsmønstret hos 16 gamle (22 måneder gamle) mus, der udføres under normal luftgas (20,93% O2 med afbalanceret N2) rapporteres. Analysen omfattede først en sammenligning af et længere 10 min stille vejrtrækningsegment (som tog over 2 timer at opnå) i forhold til gennemsnittet af fire korte 15 s segmenter (kvantificeret inden for minutter 60-120). En repræsentativ flow sporing af stille vejrtrækning, hvor vejrtrækning er i overensstemmelse med ...

Watch this Scientific Journal Video about Method to Obtain Pattern of Breathing in Senescent Mice through Unrestrained Barometric Plethysmography at JoVE.com

Method to Obtain Pattern of Breathing in Senescent Mice through Unrestrained Barometric Plethysmography

Uhæmmet barometerplethysmografi bruges til at kvantificere mønstret for vejrtrækning i vågen mus. Vi viser, at 15 s segmenter under en standardiseret protokol viser lignende værdier til en længere varighed af stille vejrtrækning. Denne metode giver også mulighed for kvantificering af apnø og augmented vejrtrækninger i løbet af den første time i kammeret.

Metode til at opnå mønster af vejrtrækning i senescent mus gennem uhæmmet barometrisk plethysmografi

Unrestrained barometric plethysmography (UBP) is a method for quantifying the pattern of breathing in mice, where breathing frequency, tidal volume, and ...

Denne protokol kan bruges til at måle mønstre af vejrtrækning i mus. Vigtigere, det kan minimere virkningen af aktiv adfærd i genetisk modificerede stammer, der kan forvirre resultater. De største fordele ved denne teknik er, at den er ikke-invasiv, og at den ikke kræver brug af bedøvelses- eller stressfremkaldende begrænsninger.Begynd med at sikre, at alle slanger og rør er forbundet til barometeret plethysmografkammer og ved at forbinde et gastilstrømningsrør og et vakuumudstrømningsrør direkte til det barometriske plethysmografikammer. For at kalibrere den lave strøm ind i kammeret, indstille strømmen ind og ud af kammeret til nul og fjerne flowrøret ind i kammeret. Sluk for vakuum og indtast et nul i den lave enhed celle for at registrere nul flow i 7700 forstærker opsætning af barometrisk plethysmograf software.Derefter sættes indstrømsrøret på igen, og tænd for vakuumstrømmen for at kalibrere det høje flow og lade 20,93 % iltafbalanceret nitrogengas flyde gennem barometrisk plethysmografikammer fra gasblanderen. Derefter skal du konvertere tilløbsværdien målt fra flowmåleren fra liter pr. minut til milliliter pr. sekund, og klik på den høje enhedscelle for at indtaste værdien i milliliter pr. sekund. Dobbeltklik på høj cal, skift klokkeslæt til tre sekunder, og klik på Målpunkt.Lad derefter 7700 forstærker setup fanen åben for at kalibrere de metaboliske analysatorer til barometer plethysmografi software. For at kalibrere den metaboliske analysator, i gasmixer program, indstille gasmixeren til 20,93% ilt og 79,07% kvælstof. Og på den metaboliske analysator, indstille ilt kalibreringsniveauet til 20,93%, og kuldioxid til 0%Drej skiven tilbage til prøve, når de relevante værdier er blevet indtastet på gasanalysatorer til at indstille den høje ilt og lav kuldioxid procent.Klik på ABCD 4 fanen af barometrisk plethysmografi software og indtast 20,93 under høj enhed af C2 linje for ilt. Under høj cal skal du ændre tiden til tre sekunder og klikke på Mål. Indtast nul under lav cal af C3-linjen for kuldioxid.Derefter ændre tiden til tre sekunder og klik på Mål under lav cal. I gasblanderprogrammet skal du ændre iltværdien til 10 % og kuldioxidværdien til 5 %, og vent flere minutter på, at gasstrømmen tilpasser sig disse værdier. På de metaboliske analysatorer skal du dreje justeringsknapperne for at kalibrere kuldioxiden til 5%, idet du skal passe på at dreje skiven tilbage til prøve, når værdierne er kalibreret.Når du har kontrolleret, at analysatoraflæsningerne er stabile, skal du klikke på høj enhed under C3 og indtaste fem for kuldioxid. Skift derefter højt niveau til tre sekunder, og klik på Mål. Klik på lav enhed under C2-indstillingen, og indtast 10 for ilt, og klik på lav cal, indtast tre sekunder, og klik på Mål.Skift gasmixeren tilbage til 20,93% ilt og 79,07% nitrogen og vent flere minutter på, at kammeret tilpasser sig disse værdier. Kør rutinemæssigt yderligere kalibreringer med certificerede gastanke for at bekræfte, at flowblanderen og oxygen-kuldioxid analysatorer fungerer korrekt. Når de metaboliske analysatorer er kalibreret, skal flowmålerne, der er forbundet til det barometriske plethysmografkammer, kontrolleres igen, og luftstrømmen ind og ud af kammeret justeres til hastigheder, der er passende for forsøget.Når alle indstillingerne er anvendt på den barometriske plethysmografisoftware, skal du klikke på Luk under fanen Anskaffelse. For uhæmmet barometer plethysmografi, registrere vægt og indledende kropstemperatur af musen, før du returnerer musen til sit hjem bur.Vent 10 minutter på at indsamle baggrundsilt- og kuldioxiddata fra det tomme kammer, før du placerer musen i kammeret. I løbet af den første time skal du dokumentere dyrets adfærd med detaljerede noter, der omfatter de specifikke værdier for ind- og udstrømningen af kammeret. Ved slutningen af kammeret tilvænning, se for segmenter af stille vejrtrækning for de næste 60 minutter at tage kropstemperatur målinger hver 10 minutter, når du bruger en implantabel enhed.Pas på at blive fortrolig med generelle mus adfærd, således at tilfælde af rolig vejrtrækning uden sniffing, grooming eller udforske kan identificeres korrekt. I slutningen af forsøget skal musen returneres til buret og rengøres og tørres grundigt af udstyret. For en metabolisme analyse, åbne metaboliske panel i softwaren og få gennemsnittet af de første 10 minutter af ilt og kuldioxid niveauer fra, når kammeret var tomt.Få vist flowpanelet for den barometriske plethysmografisoftware, og højreklik på Analysér attribut for at angive passende parametre. For et mønster af vejrtrækning analyse, bekræfte gange for de 15 sekunder af stille vejrtrækning ved hjælp af noter om dyrs adfærd samt flow panel sporing. Indtast derefter tiderne under åben parserdialog fra fanen dataparser, og klik på Parser-visningstilstand for kun at vise de specifikke 15-sekunders interessesegmenter.Hvis du vil analysere apnø og forøget ånde, skal du afslutte parservisningstilstanden i den åbne korrektur og klikke på Opsætning af P3 Installation og Graf for at vælge Sidevisning som type og fem som antallet af ruder. Minus to ind i boksen med navnet lav og to i boksen, der er mærket højt for flowmål i milliliter pr. sekund, og påfør ændringerne. Rul derefter til 30-minutters mærket på flowsporingspanelet, og tæl derefter apnø og forstærkede vejrtrækninger manuelt i perioden på 30 til 60 minutter, efter at musen blev placeret i kammeret.Til denne analyse er perioder med suspenderet vejrtrækning, der varer længere end eller lig med 0,5 sekunder, tegn på en apnø. Forstærkede vejrtrækninger indikeres af en kraftig stigning i vejrtrækningssporene over 1,25 milliliter pr. sekund efterfulgt af et kraftigt fald under minus 0,75 milliliter pr. sekund. Denne repræsentative flow sporing af stille vejrtrækning i en 22 måneder gammel mus er typisk for et mønster, hvor vejrtrækningen er i overensstemmelse med ingen aktiv vejrtrækning adfærd.Dette åndedrætsmønster er fra et mere aktivt segment, hvor musene udforskede kammerets sniffing og/eller grooming og er ikke ideel til den type vejrtrækningssamling, der anvendes til denne metode. Den parameter, der blev valgt til vurdering af mulige mønster af vejrtrækningsforskelle mellem de to tidspunkter, var vejrtrækningsfrekvens, tidevandsvolumen, minutventilation, tidevandsvolumeninspiratorisk tidsforhold og minutventilation af udstødt kuldioxid. Yderligere analyse blev udført med hver af de fire 15-sekunders baseline segmenter for frekvens, tidevandsvolumen, minut ventilation, tidevandsvolumen inspiratorisk tidsforhold, og minut ventilation udvist kuldioxid ratio.Der blev ikke fundet signifikante forskelle mellem nogen af tidspunkterne og ingen forskelle i variabiliteten mellem nogen af de fire tidssegmenter for ethvert mønster af vejrtrækningsmål. Kvantificering af antallet af apnø og forstærkede vejrtrækninger observeret for hvert dyr i løbet af minutter 30 til 60 af den uhæmmede barometriske plethysmografi protokol viste, at alderen dyr fremvist et stort antal apnøs og tilstedeværelsen af forstærkede vejrtrækninger inden for en 30-minutters span. Forskere kan også ansætte gas udfordringer såsom hypoxi eller hyperkapni at dokumentere eventuelle ændringer i vejrtrækning mønster som følge af en intervention eller terapi.Denne teknik giver et middel til at karakterisere mønstre af vejrtrækning i små gnavere og genetisk modificerede dyrestammer, der kan udvise forskellige adfærdsmæssige forskelle.

Research

JoVE Journal

Behavior

The Crossmodal Congruency Task as a Means to Obtain an Objective Behavioral Measure in the Rubber Hand Illusion Paradigm

Den Crossmodal Congruency opgave som middel til at opnå et mål Behavioral måling på Rubber Hand Illusion Paradigm

The rubber hand illusion (RHI) is a popular experimental paradigm. Participants view touch on an artificial rubber hand while the participants' own hidden ...

Uncovering Beat Deafness: Detecting Rhythm Disorders with Synchronized Finger Tapping and Perceptual Timing Tasks

Afsløring beat Døvhed: Afsløring rytmeforstyrrelser med synkroniseret Finger Tapping og Sanselig Timing Opgaver

A set of behavioral tasks for assessing perceptual and sensorimotor timing abilities in the general population (i.e., non-musicians) is presented here ...

The Modified Hole Board - Measuring Behavior, Cognition and Social Interaction in Mice and Rats

Den modificerede Hole Board - Måling Behavior, Erkendelse og social interaktion hos mus og rotter

This protocol describes the modified hole board (mHB), which combines features from a traditional hole board and open field and is designed to measure ...

Psychophysical Tracking Method to Measure Taste Preferences in Children and Adults

Psykofysiske Tracking metode til at måle smagspræferencer hos børn og voksne

The Monell two-series, forced-choice, paired-comparison tracking method provides a reliable measure of sweet taste preferences from childhood to ...

The Rodent Psychomotor Vigilance Test (rPVT): A Method for Assessing Neurobehavioral Performance in Rats and Mice

The Rodent Psychomotor Vigilance Test rPVT: A Method for Assessing Neurobehavioral Performance in Rats and Mice

Den gnaver Psykomotorisk Årvågenhed Test (rPVT): en metode til vurdering neurobehavioral Performance i rotter og mus

The human Psychomotor Vigilance Test (PVT) is a widely used procedure for measuring changes in fatigue and sustained attention. The present article ...

Evaluating the Anti-depression Effect of Xiaoyaosan on Chronically-stressed Mice

Evaluering af anti-depressiv effekt af Xiaoyaosan på kronisk stressede mus

In addition to the standardized use of antidepressant medications and psychotherapy, the usage of traditional Chinese medicine has lead to an overall ...

An Automated Method to Determine the Performance of Drosophila in Response to Temperature Changes in Space and Time

An Automated Method to Determine the Performance of Drosophila in Response to Temperature Changes in Space and Time

En automatiseret metode til at bestemme effektiviteten af Drosophila reaktion på temperaturændringer i rum og tid

Temperature is a ubiquitous environmental factor that affects how species distribute and behave. Different species of Drosophila fruit flies have specific ...

Modified Blood Collection from Tail Veins of Non-anesthetized Mice with a Vacuum Blood Collection System and Eyeglass Magnifier

Modificerede blod samling fra hale vener af ikke-bedøvede mus med en vakuum blod System til indsamling og monokel Forstørrelsesglas

Blood sample collection is the basis of experimental animal research. It is of importance to obtain adequate blood samples for various research purposes. ...

A Laboratory Method to Measure Contagious Yawning in Rats

En laboratoriemetode til måling af smitsom Ymarkise i rotter

Communication is an essential aspect of animal social life. Animals may influence one another and come together in schools, flocks, and herds. ...

Investigation into Deep Breathing through Measurement of Ventilatory Parameters and Observation of Breathing Patterns

Undersøgelse af dyb vejrtrækning gennem måling af Ventilatoriske parametre og observation af åndedræts mønstre

In this protocol, two deep breathing patterns were shown to 15 participants to determine an easy yet effective method of breathing exercise for future ...