Name: method to obtain pattern of breathing in senescent mice through unrestrained barometric plethysmography
Uploaded: 2020-04-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Method to Obtain Pattern of Breathing in Senescent Mice through Unrestrained Barometric Plethysmography at JoVE.com

Forfatterne vil gjerne takke Angela Le, Sarah Ruby og Marisa Mickey for deres arbeid med å opprettholde dyrekoloniene. Dette arbeidet ble finansiert av 1R15 HD076379 (L.R.D.), 3R15 HD076379 (L.R.D. for å støtte CNR), og McDevitt Undergraduate Research Fellowship in Natural Sciences (BEE).

Alle prosedyrer ble godkjent av Le Moyne College Institutional Animal Care and Use Committee. All bruk av dyr var i samsvar med retningslinjene som er beskrevet i Veiledningen for omsorg og bruk av laboratoriedyr8.
MERK: (Kritisk) Før eksperimentering, få alle nødvendige godkjenninger og opplæring som kreves for dyrebruk. Det er viktig at eksperimentererne er kjent med musenatferd og aktivitetsnivå, inkludert tegn på søvn, nød og / eller bevegel...

<ol>
	<li>DeRuisseau, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+deficits+contribute+to+respiratory+insufficiency+in+Pompe+disease.">Neural deficits contribute to respiratory insufficiency in Pompe disease.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (23), 9419-9424 (2009).</li><li>Ogier, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain-derived+neurotrophic+factor+expression+and+respiratory+function+improve+after+ampakine+treatment+in+a+mouse+model+of+Rett+syndrome.">Brain-derived neurotrophic factor expression and respiratory function improve after ampakine treatment in a mouse model of Rett syndrome.</a> Journal of Neuroscience. 27 (40), 10912-10917 (2007).</li><li>Ohshima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxic+ventilatory+response+during+light+and+dark+periods+and+the+involvement+of+histamine+H1+receptor+in+mice.">Hypoxic ventilatory response during light and dark periods and the involvement of histamine H1 receptor in mice.</a> American Journal of Physiology-Regulatory Integrative and Comparative Physiology. 293 (3), 1350-1356 (2007).</li><li>van Schaik, S. M., Enhorning, G., Vargas, I., Welliver, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+syncytial+virus+affects+pulmonary+function+in+BALB/c+mice.">Respiratory syncytial virus affects pulmonary function in BALB/c mice.</a> Journal of Infectious Diseases. 177 (2), 269-276 (1998).</li><li>Glaab, T., Taube, C., Braun, A., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasive+and+noninvasive+methods+for+studying+pulmonary+function+in+mice.">Invasive and noninvasive methods for studying pulmonary function in mice.</a> Respiratory Research. 8, (2007).</li><li>Loeven, A. M., Receno, C. N., Cunningham, C. M., DeRuisseau, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arterial+Blood+Sampling+in+Male+CD-1+and+C57BL/6J+Mice+with+1%+Isoflurane+is+Similar+to+Awake+Mice.">Arterial Blood Sampling in Male CD-1 and C57BL/6J Mice with 1% Isoflurane is Similar to Awake Mice.</a> Journal of Applied Physiology. , (2018).</li><li>Receno, C. N., Eassa, B. E., Reilly, D. P., Cunningham, C., DeRuisseau, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pattern+of+breathing+in+young+wild+type+and+Ts65Dn+mice+during+the+dark+and+light+cycle.">The pattern of breathing in young wild type and Ts65Dn mice during the dark and light cycle.</a> FASEB Journal. 32 (1), (2018).</li><li>Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, Inistitute fpr Laboratory Animal Research, Division on Earth and Life Studies, National Research Council of the National Academies. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, 8th edition. , (2011).</li><li>Receno, C. N., Glausen, T. G., DeRuisseau, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Saline+as+a+vehicle+control+does+not+alter+ventilation+in+male+CD-1+mice.">Saline as a vehicle control does not alter ventilation in male CD-1 mice.</a> Physiological Reports. 6 (10), (2018).</li><li>Shanksy, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+differences+in+behavioral+strategies:+Avoiding+interpretational+pitfalls.">Sex differences in behavioral strategies: Avoiding interpretational pitfalls.</a> Current Opinion in Neurobiology. 49, 95-98 (2018).</li><li>Kopp, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Locomotor+activity+rhythm+in+inbred+strains+of+mice:+implications+for+behavioural+studies.">Locomotor activity rhythm in inbred strains of mice: implications for behavioural studies.</a> Behavioural Brain Research. 125 (1-2), 93-96 (2001).</li><li>Teske, J. A., Perez-Leighton, C. E., Billington, C. J., Kotz, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methodological+considerations+for+measuring+spontaneous+physical+activity+in+rodents.">Methodological considerations for measuring spontaneous physical activity in rodents.</a> American Journal of Physiology-Regulatory Integrative and Comparative Physiology. 306 (10), 714-721 (2014).</li><li>Kabir, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+pattern+in+awake+rats:+Effects+of+motor+activity+and+of+alerting+stimuli.">Respiratory pattern in awake rats: Effects of motor activity and of alerting stimuli.</a> Physiology &amp; Behavior. 101 (1), 22-31 (2010).</li><li>Terada, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ventilatory+long-term+facilitation+in+mice+can+be+observed+during+both+sleep+and+wake+periods+and+depends+on+orexin.">Ventilatory long-term facilitation in mice can be observed during both sleep and wake periods and depends on orexin.</a> Journal of Applied Physiology. 104 (2), 499-507 (2008).</li><li>Friedman, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ventilatory+behavior+during+sleep+among+A/J+and+C57BL/6J+mouse+strains.">Ventilatory behavior during sleep among A/J and C57BL/6J mouse strains.</a> Journal of Applied Physiology. 97 (5), 1787-1795 (2004).</li><li>Drorbaugh, J. E., Fenn, W. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+barometric+method+for+measuring+ventilation+in+newborn+infants.">A barometric method for measuring ventilation in newborn infants.</a> Pediatrics. 16 (1), 81-87 (1955).</li><li>Seifert, E. L., Mortola, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+circadian+pattern+of+breathing+in+conscious+adult+rats.">The circadian pattern of breathing in conscious adult rats.</a> Respiration Physiology. 129 (3), 297-305 (2002).</li><li>Receno, C. N., Roffo, K. E., Mickey, M. C., DeRuisseau, K. C., DeRuisseau, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quiet+breathing+in+hindlimb+casted+mice.">Quiet breathing in hindlimb casted mice.</a> Respiratory Physiology &amp; Neurobiology. , 10 (2018).</li></ol>

Protokollen gir informasjon om en stille pustegrunnlinje hos mus, samt innsamling av data om sentrale apnéer og forsterkede åndedrag. De representative resultatene viser at en 10 min stille grunnlinje har et lignende pustemønster sammenlignet med et gjennomsnitt på fire 15 s anfall for en kohort av gamle mus. Viktigere, de 15 s bouts er ikke statistisk annerledes, og disse gruppene har heller ikke forskjeller i variasjon fra hverandre ved hjelp av Levenes test. Disse dataene viser at selv en kort kamp er tilstrekkeli...

UBP er en vanlig teknikk for vurdering av pustemønstre1,2,3,4. I denne metoden plasseres mus i et lukket kammer hvor trykkforskjeller mellom hovedkammeret (hvor dyret er plassert) og et referansekammer filtreres gjennom en pneumotakolografi for å oppnå verdier. Det resulterende UBP-oppsettet er ikke-invasivt og uhemmet og gjør det mulig å vurdere åndedrettstiltak uten krav om anestesi eller kirurgi. I tillegg er denne teknikken egnet for studier som krever flere målinger i samme mus over tid. Variabler som pustefrekvens, tidevannsvolum og minuttventilasjon kan kvantifiseres med denne metoden, under en enkelt studie eller over flere studier. Hele kroppen UBP gir også tiltak for toppstrømmer og respiratorisk syklus varighet. Sammen kvantifiserer disse parametrene pustemønsteret. De registrerte pustesporene gjør det også mulig å gjennomgå dataene og telle antall sentrale apnéer som vises innen en gitt tidsperiode. Dette tallet kan brukes sammen med en analyse av tidevannsvolum og inspiratoriske tider for å måle andre endringer i pustemønsteret.
Mens flere ikke-invasive plethysmography teknikker eksisterer for direkte vurdering av lungefysiologiske parametere, helkroppenUBP gjør det mulig å screene for respiratorisk funksjon med minimal unødig stress til musen. Head-out plethysmography, som benytter tidevannsmideksitoriske strømningstiltak og er også ikke-invasiv, er avhengig av tilbakeholdenhet, som mange andre typer plethysmography (f.eks dobbeltkammerplethysmography). Mens disse metodene har blitt brukt i gnagermodeller for å måle luftveisrespons5, kan bruk av nakkekrager eller små sikkerhetsrør ta mus (vs. andre arter) lengre tid å akklimatisere seg til og returnere pusten til hvilenivåer.
Å oppnå et optimalt luftpustende segment er en viktig vurdering for sammenligninger ved baseline. Den økte bruken av kommersielt tilgjengelige plethysmography systemer gjør innsamling av mønster-of-breathing data mulig i mange laboratorier. Viktigere er pustemønsteret variabelt gjennom hele innsamlingsperioden, spesielt for mus. Med det sagt er det nødvendig å standardisere baselineanalyse som et middel for å sikre at treningsnivået til eksperimenterere ikke forvirrer resultater. Det er mange måter å samle et luftpustende segment på, og fungerer som et variasjonsområde mellom eksperimentelle design. Et eksempel inkluderer snitt de siste 10-30 min med data etter et tidligere definert sett med tid innenfor kammeret1, mens en annen metode innebærer å vente til musen er synlig rolig for 5-10 min6. Sistnevnte kan ta 2-3 h for å oppnå, og i noen tilfeller kan en rettssak måtte forlates hvis musen ikke er rolig lenge nok. Denne bekymringen er en spesielt viktig vurdering for stammer av mus der observert atferd er mer engstelig og spennende7. Disse musene kan ta lengre tid å tilpasse seg kammermiljøet og bare forbli rolig for korte utbrudd av tid. Begrense tiden viet til baseline samling standardiserer kammeret tid for hver mus.
Det er avgjørende at eksperimenterere får en passende grunnlinje som omfatter hvileatferdverdier i musen, men også forekommer i tide. Derfor er målet med denne rapporten å gi en beskrivelse av metoder som brukes til å oppnå korte stille baselineverdier for pusteparametere hos mus. Videre rapporterer vi at apnéer og forsterkede åndedrag kan kvantifiseres i løpet av den første timen i kammeret.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1331px;" width="1330">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Carbon Dioxide Analyzer</td>
			<td style="width:135px;">AEI Technologies</td>
			<td style="width:119px;">CD-3A&#160;</td>
			<td style="width:727px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Carbon Dioxide Sensor</td>
			<td style="width:135px;">AEI Technologies</td>
			<td style="width:119px;">&#160;P-61B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Computer</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>must be compliant with Ponemah requirements</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Drierite beads</td>
			<td style="width:135px;">PermaPure LLC</td>
			<td style="width:119px;">DM-AR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Flow Control</td>
			<td style="width:135px;">AEI Technologies</td>
			<td style="width:119px;">R-1</td>
			<td>vacuum</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Flowmeter</td>
			<td style="width:135px;">TSI</td>
			<td align="right" style="width:119px;">4100</td>
			<td>need one per chamber and one for vacuum</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Gas Mixer</td>
			<td style="width:135px;">MCQ Instruments</td>
			<td style="width:119px;">GB-103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Gas Tanks</td>
			<td style="width:135px;">Haun</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>100% oxygen, 100% carbon dioxide, 100% nitrogen - food grade, or pre-mixed tanks for nomal room air and gas challenges</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Oxygen Analyzer</td>
			<td style="width:135px;">AEI Technologies</td>
			<td style="width:119px;">S-3A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Oxygen Sensor</td>
			<td style="width:135px;">AEI Technologies</td>
			<td style="width:119px;">&#160;N-22M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Polyurethane Tubing</td>
			<td style="width:135px;">SMC</td>
			<td style="width:119px;">TUS 0604 Y-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Ponemah Software</td>
			<td style="width:135px;">DSI</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Small Rodent Chamber</td>
			<td style="width:135px;">Buxco/DSI</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Thermometer (LifeChip System)</td>
			<td style="width:135px;">Destron-Fearing</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>any type of thermometer to take accurate body temperatures is appropriate, but the use of implantable chips allows for minimal disturbance to animal for taking several body temperature measurements while the animal is still in the UBP chamber&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Transducers</td>
			<td style="width:135px;">Validyne</td>
			<td style="width:119px;">DP45</td>
			<td>need one per chamber&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:351px;">Whole Body Plethysmography System&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Data Science International (DSI)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Includes ACQ-7700, pressure/temperature probes, etc.&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

method to obtain pattern of breathing in senescent mice through unrestrained barometric plethysmography

Uhemmet barometrisk plethysmography (UBP) er en metode for å kvantifisere pustemønsteret hos mus, hvor pustefrekvens, tidevannsvolum og minuttventilasjon rapporteres rutinemessig. Videre kan informasjon samles inn om nevrale utgang av pusting, inkludert eksistensen av sentrale apnéer og forsterkede åndedrag. En viktig vurdering for UBP er å oppnå et pustesegment med en minimal innvirkning av engstelig eller aktiv atferd, for å belyse responsen på pusteutfordringer. Her presenterer vi en protokoll som gjør det mulig for korte, stille grunnlinjer å få i eldre mus, sammenlignbarmed å vente på lengre anfall av stille pusting. Bruken av kortere tidssegmenter er verdifull, da noen stammer av mus kan bli stadig mer spennende eller engstelig, og lengre perioder med stille pust kan ikke oppnås innen rimelig tidsramme. Vi plasserte 22 måneder gamle mus i et UBP-kammer og sammenlignet fire 15 s stille pustesegmenter mellom minutter 60-120 til en lengre 10 min stille pusteperiode som tok 2-3 h å skaffe seg. Vi fikk også tellinger av sentrale apnéer og forsterkede åndedrag før de stille pustesegmentene, etter en 30 min kjennskapsperiode. Vi viser at 10 min stille pusting kan sammenlignes med å bruke en mye kortere 15-talls varighet. I tillegg kan tiden som fører opp til disse 15 stille pustesegmentene brukes til å samle inn data om apnéer av sentral opprinnelse. Denne protokollen gjør det mulig for forskere å samle inn mønster-of-breathing data i en bestemt tidsperiode og gjør stille baseline tiltak mulig for mus som kan vise økte mengder excitable atferd. UBP-metoden i seg selv gir en nyttig og ikke-invasiv måte å samle inn pustemønstret data på og gjør det mulig for mus å bli testet over flere tidspunkter.

Resultatene av UBP som en evaluering av pustemønster hos 16 alderen (22 måneder gamle) mus utført under normal luftgass (20,93% O2 med balansert N2) rapporteres. Analysen inkluderte først en sammenligning av et lengre 10 min stille pustesegment (som tok over 2 timer å oppnå) versus gjennomsnittet av fire korte 15 s segmenter (kvantifisert i løpet av minutter 60-120). En representativ flyt sporing av stille pusting, hvor pusten er konsistent med ingen aktiv pusteatferd, er gitt i <strong class...

Watch this Scientific Journal Video about Method to Obtain Pattern of Breathing in Senescent Mice through Unrestrained Barometric Plethysmography at JoVE.com

Method to Obtain Pattern of Breathing in Senescent Mice through Unrestrained Barometric Plethysmography

Uhemmet barometrisk plethysmography brukes til å kvantifisere pustemønsteret i våkne mus. Vi viser at 15 s segmenter under en standardisert protokoll viser lignende verdier som en lengre varighet av stille pusting. Denne metodikken gjør det også mulig å kvantifisere apné og forsterkede åndedrag i løpet av den første timen i kammeret.

Metode for å oppnå pustemønster i senescent mus gjennom uhemmet barometrisk plethysmography

Unrestrained barometric plethysmography (UBP) is a method for quantifying the pattern of breathing in mice, where breathing frequency, tidal volume, and ...

Denne protokollen kan brukes til å måle pustemønstre hos mus. Viktigere, Det kan minimere virkningen av aktiv atferd i genmodifiserte stammer som kan forvirrende resultater. De viktigste fordelene med denne teknikken er at den ikke er invasiv og at den ikke krever bruk av bedøvelse eller stressfremkallende begrensninger.Begynn med å sørge for at alle slangene og rørene er koblet til det barometriske plethysmographkammeret og ved å koble et gasstilførselsrør og et vakuumutstrømningsrør direkte til det barometriske plethysmografikammeret. For å kalibrere den lave strømmen inn i kammeret, sett strømmen inn og ut av kammeret til null og fjern strømningsrøret inn i kammeret. Slå av vakuumet og skriv inn en null i cellen med lav enhet for å registrere nullstrømmen i 7700-forsterkeroppsettet til den barometriske plethysmograph-programvaren.Sett deretter på tilsigsrøret igjen og slå på vakuumstrømmen for å kalibrere den høye strømmen og for å tillate 20,93% oksygenbalansert nitrogengass å strømme gjennom det barometriske plethysmografikammeret fra gassmikseren. Deretter konverterer du tilsigsverdien målt fra strømningsmåleren fra liter per minutt til milliliter per sekund og klikker på cellen med høy enhet for å angi verdien i milliliter per sekund. Dobbeltklikk høy cal, endre tiden til tre sekunder og klikk Mål.Deretter lar du kategorien 7700 forsterkeroppsett åpne for å kalibrere metabolske analysatorer til den barometriske plethysmografiprogramvaren. For å kalibrere metabolsk analysator, i gassmikserprogrammet, sett gassmikseren til 20,93% oksygen og 79,07% nitrogen. Og på metabolsk analysator, sett oksygenkalibreringsnivået til 20,93%, og karbondioksidet til 0% Skru hjulet tilbake for å prøve når de riktige verdiene er angitt på gassanalysatorene for å sette høy oksygen og lav karbondioksidprosent.Klikk på ABCD 4-fanen i den barometriske plethysmografiprogramvaren og skriv inn 20,93 under høy enhet av C2-linjen for oksygen. Endre tiden til tre sekunder under høy kalori, og klikk Mål. Angi null under lav cal av C3-linjen for karbondioksid.Endre deretter tiden til tre sekunder, og klikk mål under lav cal. I gassmikserprogrammet endrer du oksygenverdien til 10 %, og karbondioksidverdien til 5 %, og venter i flere minutter på at gassstrømmen tilpasser seg disse verdiene. På metabolske analysatorer, vri justeringsknotter for å kalibrere karbondioksid til 5%ta vare på å slå hjulet tilbake for å prøve når verdiene er kalibrert.Etter å ha sjekket at analysatoravlesningene er stabile, klikker du høyenhet under C3 og skriver inn fem for karbondioksid. Deretter endrer du høy cal til tre sekunder og klikker mål. Klikk lav enhet under C2-alternativet, og skriv inn 10 for oksygen og klikk lavt kalori, skriv inn tre sekunder og klikk Mål.Bytt gassmikseren tilbake til 20,93% oksygen og 79,07% nitrogen og vent flere minutter for kammeret å tilpasse seg disse verdiene. Kjør rutinemessig flere kalibreringer med sertifiserte gasstanker for å bekrefte at strømningsmikseren og oksygen-karbondioksidanalysatorene fungerer som de skal. Når metabolske analysatorer er kalibrert, sjekk strømningsmålerne som er koblet til det barometriske plethysmographkammeret og justere luftstrømmen inn og ut av kammeret til priser som passer for eksperimentet.Når alle innstillingene er brukt på den barometriske plethysmography-programvaren, klikker du Lukk i kategorien Oppkjøp, gi filen et navn og klikker OK for å starte opptaket. For uhemmet barometrisk plethysmografi, registrer vekten og den første kroppstemperaturen til musen før du returnerer musen til sitt hjem bur.Vent 10 minutter for å samle inn bakgrunns oksygen- og karbondioksiddata fra det tomme kammeret før du plasserer musen i kammeret. I løpet av den første timen dokumenterer du dyrets oppførsel og tar detaljerte notater som inkluderer de spesifikke verdiene til inn- og utstrømningen av kammeret. På slutten av kammeret habituation, se etter segmenter av stille pust for de neste 60 minuttene tar kroppstemperaturmålinger hvert 10.Pass på å bli kjent med generell museatferd slik at tilfeller av rolig pusting uten sniffing, grooming eller utforsking kan identifiseres på riktig måte. På slutten av eksperimentet, returnere musen til buret og grundig rengjøre og tørke ned utstyret. For en metabolismeanalyse, åpne metabolske panelet i programvaren og få gjennomsnittet av de første 10 minuttene av oksygen- og karbondioksidnivåene fra da kammeret var tomt.Vis flytpanelet i den barometriske plethysmografiprogramvaren, og høyreklikk analyser attributt for å angi passende parametere. For et mønster av pusteanalyse, bekreft tidene for de 15 sekundene med stille pust ved hjelp av notater om dyrs oppførsel samt flytpanelsporing. Angi deretter klokkeslettene under åpen parserdialog fra dataparserfanen, og klikk Analysevisningsmodus for å vise bare de spesifikke 15-sekunders segmentene av interesse.Hvis du vil analysere apnéer og utvidet pust, går du ut av parservisningsmodus i den åpne gjennomgangsfilen og klikker oppsett p3 oppsett og grafoppsett for å velge Sidevisning som type og fem som antall ruter. Skriv inn minus to i boksen merket lavt og to i boksen merket høyt for strømningsmålene i milliliter per sekund og bruk endringene. Deretter blar du til 30-minutters merket på strømningssporingspanelet og teller manuelt apnéene og de økte åndedragene i perioden 30 til 60 minutter etter at musen ble plassert i kammeret.For denne analysen er perioder med suspendert pust som varer lenger enn eller lik 0,5 sekunder, et tegn på en apné. Forsterkede åndedrag indikeres av en kraftig økning i pustespor over 1,25 milliliter per sekund etterfulgt av en kraftig reduksjon under minus 0,75 milliliter per sekund. Denne representative flytsporingen av stille pusting i en 22 måneder gammel mus er typisk for et mønster der pusten er konsistent uten aktiv pusteatferd.Dette pustemønsteret er fra et mer aktivt segment der musene utforsket kammeret sniffing og / eller grooming og er ikke ideell for den type pustesamling som brukes til denne metodikken. Parameteren som ble valgt for vurdering av mulig mønster av pusteforskjeller mellom de to tidspunktene var pustefrekvens, tidevannsvolum, minuttventilasjon, tidevannsvolum inspiratorisk tidsforhold og minuttventilasjon utvist karbondioksidforhold. Videre analyse ble utført med hvert av de fire 15-sekunders baselinesegmentene for frekvens, tidevannsvolum, minuttventilasjon, tidevannsvolum inspiratorisk tidsforhold og minuttventilasjon utvist karbondioksidforhold.Det ble ikke funnet noen signifikante forskjeller mellom noen av tidspunktene og ingen forskjeller i variasjonen mellom noen av de fire tidssegmentene for noe pustemønster. Kvantifisering av antall apnéer og utvidede åndedrag observert for hvert dyr i løpet av minutter 30 til 60 av den uhemmet barometriske plethysmografi protokollen viste at eldre dyr viste et høyt antall apnéer og tilstedeværelsen av forsterkede åndedrag innen en 30-minutters periode. Forskere kan også bruke gassutfordringer som hypoksi eller hyperkapnia for å dokumentere eventuelle endringer i pustemønsteret som følge av en intervensjon eller terapi.Denne teknikken gir et middel for å karakterisere pustemønstre hos små gnagere og genmodifiserte dyrestammer som kan vise tydelige atferdsforskjeller.

Research

JoVE Journal

Behavior

The Crossmodal Congruency Task as a Means to Obtain an Objective Behavioral Measure in the Rubber Hand Illusion Paradigm

Den Crossmodal congruency Task som et middel for å oppnå et mål Behavioral Mål for Gummi Hånd Illusion Paradigm

The rubber hand illusion (RHI) is a popular experimental paradigm. Participants view touch on an artificial rubber hand while the participants' own hidden ...

Uncovering Beat Deafness: Detecting Rhythm Disorders with Synchronized Finger Tapping and Perceptual Timing Tasks

Avdekke Beat døvhet: Oppdager rytmeforstyrrelser med Synkronisert Finger Tapping og Perceptual Timing Oppgaver

A set of behavioral tasks for assessing perceptual and sensorimotor timing abilities in the general population (i.e., non-musicians) is presented here ...

The Modified Hole Board - Measuring Behavior, Cognition and Social Interaction in Mice and Rats

Forandringer Hole Board - Måling Behavior, kognisjon og sosialt samspill i mus og rotter

This protocol describes the modified hole board (mHB), which combines features from a traditional hole board and open field and is designed to measure ...

Psychophysical Tracking Method to Measure Taste Preferences in Children and Adults

Psyko Tracking metode for å måle smakspreferanser hos barn og voksne

The Monell two-series, forced-choice, paired-comparison tracking method provides a reliable measure of sweet taste preferences from childhood to ...

The Rodent Psychomotor Vigilance Test (rPVT): A Method for Assessing Neurobehavioral Performance in Rats and Mice

The Rodent Psychomotor Vigilance Test rPVT: A Method for Assessing Neurobehavioral Performance in Rats and Mice

Den gnager Psyko Årvåkenhet Test (rPVT): En metode for å vurdere nevroevne hos rotter og mus

The human Psychomotor Vigilance Test (PVT) is a widely used procedure for measuring changes in fatigue and sustained attention. The present article ...

Evaluating the Anti-depression Effect of Xiaoyaosan on Chronically-stressed Mice

Evaluere anti-depressive effekten av Xiaoyaosan på kronisk-stresset mus

In addition to the standardized use of antidepressant medications and psychotherapy, the usage of traditional Chinese medicine has lead to an overall ...

An Automated Method to Determine the Performance of Drosophila in Response to Temperature Changes in Space and Time

An Automated Method to Determine the Performance of Drosophila in Response to Temperature Changes in Space and Time

En automatisert metode for å avgjøre ytelsen til Drosophila svar temperaturendringer i rom og tid

Temperature is a ubiquitous environmental factor that affects how species distribute and behave. Different species of Drosophila fruit flies have specific ...

Modified Blood Collection from Tail Veins of Non-anesthetized Mice with a Vacuum Blood Collection System and Eyeglass Magnifier

Endret blod samling fra halen årer av ikke-anesthetized mus med et vakuum blod samling System og øyeglasset Forstørrelsesprogram

Blood sample collection is the basis of experimental animal research. It is of importance to obtain adequate blood samples for various research purposes. ...

A Laboratory Method to Measure Contagious Yawning in Rats

En laboratorium metoden å mål smittsom gjesping inne rotter

Communication is an essential aspect of animal social life. Animals may influence one another and come together in schools, flocks, and herds. ...

Investigation into Deep Breathing through Measurement of Ventilatory Parameters and Observation of Breathing Patterns

Gransking dyp pusting gjennom måling av ventilatory parametere og observasjon av puste mønstre

In this protocol, two deep breathing patterns were shown to 15 participants to determine an easy yet effective method of breathing exercise for future ...