Name: method to obtain pattern of breathing in senescent mice through unrestrained barometric plethysmography
Uploaded: 2020-04-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Method to Obtain Pattern of Breathing in Senescent Mice through Unrestrained Barometric Plethysmography at JoVE.com

Författarna vill tacka Angela Le, Sarah Ruby och Marisa Mickey för deras arbete med att upprätthålla djurkolonierna. Detta arbete finansierades av 1R15 HD076379 (L.R.D.), 3R15 HD076379 (L.R.D. för att stödja CNR) och McDevitt Undergraduate Research Fellowship in Natural Sciences (BEE).

Alla förfaranden godkändes av Le Moyne College Institutional Animal Care and Use Committee. All användning av djur överensstämde med de riktlinjer som beskrivs i handledningen för skötsel och användning av försöksdjur8.
OBS: (Kritisk) Före försök, inhämta alla nödvändiga godkännanden och utbildning som krävs för djuranvändning. Det är viktigt att experimentörerna är bekanta med musen beteenden och aktivitetsnivåer, inklusive teck...

<ol>
	<li>DeRuisseau, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+deficits+contribute+to+respiratory+insufficiency+in+Pompe+disease.">Neural deficits contribute to respiratory insufficiency in Pompe disease.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (23), 9419-9424 (2009).</li><li>Ogier, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain-derived+neurotrophic+factor+expression+and+respiratory+function+improve+after+ampakine+treatment+in+a+mouse+model+of+Rett+syndrome.">Brain-derived neurotrophic factor expression and respiratory function improve after ampakine treatment in a mouse model of Rett syndrome.</a> Journal of Neuroscience. 27 (40), 10912-10917 (2007).</li><li>Ohshima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxic+ventilatory+response+during+light+and+dark+periods+and+the+involvement+of+histamine+H1+receptor+in+mice.">Hypoxic ventilatory response during light and dark periods and the involvement of histamine H1 receptor in mice.</a> American Journal of Physiology-Regulatory Integrative and Comparative Physiology. 293 (3), 1350-1356 (2007).</li><li>van Schaik, S. M., Enhorning, G., Vargas, I., Welliver, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+syncytial+virus+affects+pulmonary+function+in+BALB/c+mice.">Respiratory syncytial virus affects pulmonary function in BALB/c mice.</a> Journal of Infectious Diseases. 177 (2), 269-276 (1998).</li><li>Glaab, T., Taube, C., Braun, A., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasive+and+noninvasive+methods+for+studying+pulmonary+function+in+mice.">Invasive and noninvasive methods for studying pulmonary function in mice.</a> Respiratory Research. 8, (2007).</li><li>Loeven, A. M., Receno, C. N., Cunningham, C. M., DeRuisseau, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arterial+Blood+Sampling+in+Male+CD-1+and+C57BL/6J+Mice+with+1%+Isoflurane+is+Similar+to+Awake+Mice.">Arterial Blood Sampling in Male CD-1 and C57BL/6J Mice with 1% Isoflurane is Similar to Awake Mice.</a> Journal of Applied Physiology. , (2018).</li><li>Receno, C. N., Eassa, B. E., Reilly, D. P., Cunningham, C., DeRuisseau, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pattern+of+breathing+in+young+wild+type+and+Ts65Dn+mice+during+the+dark+and+light+cycle.">The pattern of breathing in young wild type and Ts65Dn mice during the dark and light cycle.</a> FASEB Journal. 32 (1), (2018).</li><li>Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, Inistitute fpr Laboratory Animal Research, Division on Earth and Life Studies, National Research Council of the National Academies. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, 8th edition. , (2011).</li><li>Receno, C. N., Glausen, T. G., DeRuisseau, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Saline+as+a+vehicle+control+does+not+alter+ventilation+in+male+CD-1+mice.">Saline as a vehicle control does not alter ventilation in male CD-1 mice.</a> Physiological Reports. 6 (10), (2018).</li><li>Shanksy, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+differences+in+behavioral+strategies:+Avoiding+interpretational+pitfalls.">Sex differences in behavioral strategies: Avoiding interpretational pitfalls.</a> Current Opinion in Neurobiology. 49, 95-98 (2018).</li><li>Kopp, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Locomotor+activity+rhythm+in+inbred+strains+of+mice:+implications+for+behavioural+studies.">Locomotor activity rhythm in inbred strains of mice: implications for behavioural studies.</a> Behavioural Brain Research. 125 (1-2), 93-96 (2001).</li><li>Teske, J. A., Perez-Leighton, C. E., Billington, C. J., Kotz, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methodological+considerations+for+measuring+spontaneous+physical+activity+in+rodents.">Methodological considerations for measuring spontaneous physical activity in rodents.</a> American Journal of Physiology-Regulatory Integrative and Comparative Physiology. 306 (10), 714-721 (2014).</li><li>Kabir, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+pattern+in+awake+rats:+Effects+of+motor+activity+and+of+alerting+stimuli.">Respiratory pattern in awake rats: Effects of motor activity and of alerting stimuli.</a> Physiology &amp; Behavior. 101 (1), 22-31 (2010).</li><li>Terada, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ventilatory+long-term+facilitation+in+mice+can+be+observed+during+both+sleep+and+wake+periods+and+depends+on+orexin.">Ventilatory long-term facilitation in mice can be observed during both sleep and wake periods and depends on orexin.</a> Journal of Applied Physiology. 104 (2), 499-507 (2008).</li><li>Friedman, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ventilatory+behavior+during+sleep+among+A/J+and+C57BL/6J+mouse+strains.">Ventilatory behavior during sleep among A/J and C57BL/6J mouse strains.</a> Journal of Applied Physiology. 97 (5), 1787-1795 (2004).</li><li>Drorbaugh, J. E., Fenn, W. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+barometric+method+for+measuring+ventilation+in+newborn+infants.">A barometric method for measuring ventilation in newborn infants.</a> Pediatrics. 16 (1), 81-87 (1955).</li><li>Seifert, E. L., Mortola, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+circadian+pattern+of+breathing+in+conscious+adult+rats.">The circadian pattern of breathing in conscious adult rats.</a> Respiration Physiology. 129 (3), 297-305 (2002).</li><li>Receno, C. N., Roffo, K. E., Mickey, M. C., DeRuisseau, K. C., DeRuisseau, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quiet+breathing+in+hindlimb+casted+mice.">Quiet breathing in hindlimb casted mice.</a> Respiratory Physiology &amp; Neurobiology. , 10 (2018).</li></ol>

Protokollet ger information om en tyst andningsbaslinje hos möss, samt samla in data om centrala apnéer och förstärkta andetag. De representativa resultaten visar att en 10 min tyst baslinje har ett liknande andningsmönster jämfört med i genomsnitt fyra 15 s anfall för en kohort av gamla möss. Viktigt är att 15 s skjutningar är inte statistiskt annorlunda, inte heller dessa grupper har skillnader i variation från varandra med Levene test. Dessa data visar att även en kort skjutningen är tillräcklig för at...

UBP är en vanlig teknik för bedömning av andningsmönster1,,2,,3,4. I denna metod placeras möss i en sluten kammare där tryckskillnader mellan huvudkammaren (där djuret är inrymt) och en referenskammare filtreras genom en pneumotachograf för att erhålla värden. Den resulterande UBP setup är noninvasive och ohämmad och gör det möjligt för luftvägarna åtgärder som skall bedömas utan krav på anestesi eller kirurgi. Dessutom är denna teknik lämplig för studier som kräver flera mätningar i samma mus över tiden. Variabler som andningsfrekvens, tidvattenvolym och minutventilation kan kvantifieras med denna metod, under en enda studie eller över flera försök. Hela kroppen UBP ger också åtgärder för topp flöden och andningscykeln varaktighet. Tillsammans kvantifierar dessa parametrar andningsmönstret. De registrerade andningsspåren gör det också möjligt att granska data och räkna antalet centrala apnéer som visas inom en viss tidsperiod. Detta antal kan användas tillsammans med en analys av tidvattenvolym och inandningstider för att mäta andra förändringar i andningsmönstret.
Medan flera noninvasive plethysmography tekniker finns för direkt bedömning av pulmonell fysiologiska parametrar, hela kroppen UBP möjliggör ett sätt att skärmen för andningsfunktion med minimal onödig stress till musen. Head-out plethysmography, som använder tidvatten midexpiratory flöde åtgärder och är också noninvasive, förlitar sig på återhållsamhet, liksom många andra typer av plethysmography (t.ex. dubbel-kammare plethysmography). Även om dessa metoder har använts i gnagare modeller för att mäta luftvägarna lyhördhet5,användning av hals kragar eller små fasthållningsanordningar kan ta möss (jämfört med andra arter) längre tid att acklimatisera sig till och återgå sin andning till vilonivåer.
Att få ett optimalt luftandningssegment är en viktig faktor för jämförelser vid baslinjen. Den ökade användningen av kommersiellt tillgängliga plethysmography system gör samla mönster-of-andning data möjligt i många laboratorier. Viktigt är att andningsmönstret varierar under hela insamlingsperioden, särskilt för möss. Med det sagt är det nödvändigt att standardisera baslinjeanalys som ett sätt att se till att utbildningsnivå av försökskarperger inte förvirrar resultaten. Det finns många sätt att samla in en luft-andning segment, som fungerar som ett område av variation mellan experimentell design. Ett exempel är i genomsnitt den slutliga 10-30 min data efter en tidigare definierad uppsättning tid inom kammaren1, medan en annan metod innebär att vänta tills musen är synligt lugn i 5-10 min6. Den senare kan ta 2–3 h att uppnå och i vissa fall kan en rättegång behöva överges om musen inte är lugn tillräckligt länge. Denna oro är en särskilt viktig faktor för stammar av möss där observerade beteenden är mer oroliga och retbara7. Dessa möss kan ta längre tid att anpassa sig till kammaren miljön och bara behålla lugnet för korta skurar av tid. Om du begränsar den tid som ägnas åt baslinjesamling standardiseras kammartiden för varje mus.
Det är viktigt att försökslösa får en lämplig baslinje som omfattar vilande beteendevärden i musen men också sker i tid. Därför är målet med denna rapport att ge en beskrivning av metoder som används för att få korta tysta baslinjevärden för andningsparametrar hos möss. Dessutom rapporterar vi att apnéer och förstärkta andetag kan kvantifieras under den första timmen i kammaren.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1331px;" width="1330">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Carbon Dioxide Analyzer</td>
			<td style="width:135px;">AEI Technologies</td>
			<td style="width:119px;">CD-3A&#160;</td>
			<td style="width:727px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Carbon Dioxide Sensor</td>
			<td style="width:135px;">AEI Technologies</td>
			<td style="width:119px;">&#160;P-61B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Computer</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>must be compliant with Ponemah requirements</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Drierite beads</td>
			<td style="width:135px;">PermaPure LLC</td>
			<td style="width:119px;">DM-AR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Flow Control</td>
			<td style="width:135px;">AEI Technologies</td>
			<td style="width:119px;">R-1</td>
			<td>vacuum</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Flowmeter</td>
			<td style="width:135px;">TSI</td>
			<td align="right" style="width:119px;">4100</td>
			<td>need one per chamber and one for vacuum</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Gas Mixer</td>
			<td style="width:135px;">MCQ Instruments</td>
			<td style="width:119px;">GB-103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Gas Tanks</td>
			<td style="width:135px;">Haun</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>100% oxygen, 100% carbon dioxide, 100% nitrogen - food grade, or pre-mixed tanks for nomal room air and gas challenges</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Oxygen Analyzer</td>
			<td style="width:135px;">AEI Technologies</td>
			<td style="width:119px;">S-3A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Oxygen Sensor</td>
			<td style="width:135px;">AEI Technologies</td>
			<td style="width:119px;">&#160;N-22M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Polyurethane Tubing</td>
			<td style="width:135px;">SMC</td>
			<td style="width:119px;">TUS 0604 Y-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Ponemah Software</td>
			<td style="width:135px;">DSI</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Small Rodent Chamber</td>
			<td style="width:135px;">Buxco/DSI</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Thermometer (LifeChip System)</td>
			<td style="width:135px;">Destron-Fearing</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>any type of thermometer to take accurate body temperatures is appropriate, but the use of implantable chips allows for minimal disturbance to animal for taking several body temperature measurements while the animal is still in the UBP chamber&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">Transducers</td>
			<td style="width:135px;">Validyne</td>
			<td style="width:119px;">DP45</td>
			<td>need one per chamber&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:351px;">Whole Body Plethysmography System&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Data Science International (DSI)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Includes ACQ-7700, pressure/temperature probes, etc.&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

method to obtain pattern of breathing in senescent mice through unrestrained barometric plethysmography

Ohämmad barometrisk plethysmography (UBP) är en metod för att kvantifiera mönstret för andning hos möss, där andningsfrekvens, tidvattenvolym och minut ventilation rutinmässigt rapporteras. Dessutom kan information samlas in om den neurala produktionen av andning, inklusive förekomsten av centrala apnéer och förstärkta andetag. En viktig faktor för UBP är att få en andning segment med en minimal inverkan av oroliga eller aktiva beteenden, att belysa svaret på andningsutmaningar. Här presenterar vi ett protokoll som gör det möjligt att erhålla korta, tysta baslinjer hos äldre möss, jämförbart med att vänta på längre anfall av tyst andning. Användningen av kortare tidssegment är värdefullt, eftersom vissa stammar av möss kan bli alltmer retbara eller ängsliga, och längre perioder av tyst andning kanske inte uppnås inom en rimlig tidsram. Vi placerade 22 månader gamla möss i en UBP kammare och jämförde fyra 15 s tyst andning segment mellan minuter 60-120 till en längre 10 min tyst andning period som tog 2-3 h att förvärva. Vi fick också räknas av centrala apnéer och förstärkta andetag före den tysta andning segment, efter en 30 min förtrogenhet period. Vi visar att 10 min tyst andning är jämförbar med att använda en mycket kortare 15 s varaktighet. Dessutom kan tiden fram till dessa 15 s tysta andningssegment användas för att samla in data om apnéer av centralt ursprung. Detta protokoll gör det möjligt för utredare att samla in mönster-of-andning data i en viss tid och gör tyst baslinje åtgärder genomförbara för möss som kan uppvisar ökade mängder retbara beteende. Själva UBP-metoden är ett användbart och icke-invasivt sätt att samla in mönster-of-andning data och gör det möjligt för möss som ska testas över flera tidpunkter.

Resultaten av UBP som en utvärdering av andningsmönster hos 16 äldre (22 månader gamla) möss som utförs under normal luftgas (20,93% O2 med balanserad N2) rapporteras. Analysen inkluderade först en jämförelse av ett längre 10 min tyst andningssegment (som tog över 2 h att få) jämfört med genomsnittet av fyra korta 15 s segment (kvantifieras inom minut 60–120). En representativ flödesspårning av tyst andning, där andningen är förenlig med inga aktiva andningsbeteenden, finns i <s...

Watch this Scientific Journal Video about Method to Obtain Pattern of Breathing in Senescent Mice through Unrestrained Barometric Plethysmography at JoVE.com

Method to Obtain Pattern of Breathing in Senescent Mice through Unrestrained Barometric Plethysmography

Ohämmad barometrisk plethysmografi används för att kvantifiera andningsmönstret hos vakna möss. Vi visar att 15 s segment under ett standardiserat protokoll visar liknande värden som en längre tid av tyst andning. Denna metod möjliggör också kvantifiering av apné och förstärkta andetag under den första timmen i kammaren.

Metod för att få mönster av andning i senescent möss genom ohämmad barometrisk plethysmography

Unrestrained barometric plethysmography (UBP) is a method for quantifying the pattern of breathing in mice, where breathing frequency, tidal volume, and ...

Detta protokoll kan användas för att mäta mönster av andning hos möss. Viktigt, Det kan minimera effekten av aktiva beteenden i genetiskt modifierade stammar som kan förvirra resultat. De största fördelarna med denna teknik är att den är noninvasiv och att den inte kräver användning av bedövningsmedel eller stressframkallande begränsningar.Börja med att se till att alla slangar och rör är anslutna till barometrisk plethysmograph kammare och genom att ansluta ett gasinflödesrör och ett vakuumutflödesrör direkt till den barometer plethysmografikammaren. För att kalibrera det låga flödet in i kammaren, ställ in flödet in i och ut ur kammaren på noll och ta bort flödesröret in i kammaren. Stäng av vakuumet och ange en nolla i lågenhetscellen för att registrera nollflödet i 7700-förstärkarinställningen av programvaran barometrisk pletysmograf.Sedan återfästa inflödesröret och slå på vakuumflöde för att kalibrera det höga flödet och för att 20,93%syrebalanserad kvävegas ska flöda genom den barometer plethysmografikammaren från gasblandaren. Därefter omvandlar du inflödesvärdet mätt från flödesmätaren från liter per minut till milliliter per sekund och klickar på cellen med hög enhet för att ange värdet i milliliter per sekund. Dubbelklicka på högkale, ändra tiden till tre sekunder och klicka på Mät.Lämna sedan 7700 förstärkaren setup fliken öppen för att kalibrera metabola analysatorer till barometrisk pletysmografi programvara. För att kalibrera den metaboliska analysatorn, i gasblandaren programmet, ställa in gasmixer till 20,93%syre och 79,07%kväve. Och på den metaboliska analysatorn, ställ in syrekalibreringsnivån till 20,93%och koldioxiden till 0%Vrid ratten tillbaka för att prov när lämpliga värden har matats in på gasanalysatorerna för att ställa in hög syrehalt och låg koldioxidprocent.Klicka på ABCD 4 fliken i barometer plethysmography programvara och ange 20,93 under hög enhet av C2-linjen för syre. Under hög cal ändrar du tiden till tre sekunder och klickar på Mät. Ange noll under låg cal av C3-linjen för koldioxid.Ändra sedan tiden till tre sekunder och klicka på Mät under låg cal. I gasblandarens program ändrar du syrevärdet till 10 %och koldioxidvärdet till 5 %och väntar i flera minuter på att gasflödet ska anpassa sig till dessa värden. På metabola analysatorer, vrid justeringsrattar för att kalibrera koldioxid till 5% noga med att vrida ratten tillbaka för att prov när värdena har kalibrerats.Efter kontroll av att analysatorn avläsningar är stabila, klicka hög enhet under C3 och ange fem för koldioxid. Ändra sedan hög cal till tre sekunder och klicka på Mät. Klicka på låg enhet under alternativet C2 och ange 10 för syre och klicka låg cal, ingång tre sekunder och klicka på Mät.Ändra tillbaka gasblandaren till 20,93 %syre och 79,07 %kväve och vänta flera minuter på att kammaren anpassar sig till dessa värden. Rutinmässigt köra ytterligare kalibreringar med certifierade gastankar för att bekräfta flödesblandaren och syre-koldioxid analysatorer presterar korrekt. När de metabola analysatorerna har kalibrerats, kontrollera om flödesmätarna som är anslutna till den barometriska plethysmograph-kammaren och justera luftflödet in i och ut ur kammaren till priser som är lämpliga för experimentet.När alla inställningar har tillämpats på den barometriska plethysmography programvara, klicka på Stäng i fliken Förvärv. Hit Start Förvärv, namn på filen och klicka på OK för att börja inspelningen. För ohämmad barometrisk pletysmografi, registrera vikten och den initiala kroppstemperaturen på musen innan du returnerar musen till sin hembur.Vänta 10 minuter för att samla in data bakgrund syre och koldioxid från den tomma kammaren innan du placerar musen i kammaren. Under den första timmen, dokumentera beteendet hos djuret med detaljerade anteckningar som inkluderar de specifika värdena för in och utflödet av kammaren. I slutet av kammaren tillvänjning, titta på segment av tyst andning för de kommande 60 minuterna med kroppstemperatur mätningar var 10 minuter när du använder en implanterbar enhet.Var noga med att bli bekant med allmänna musbeteenden så att fall av lugn andning utan att sniffa, grooming eller utforska kan identifieras på lämpligt sätt. I slutet av experimentet, tillbaka musen till sin bur och grundligt rengöra och torka av utrustningen. För en metabolismanalys, öppna metabola panelen i programvaran och få genomsnittet av de första 10 minuterna av syre och koldioxid nivåer från när kammaren var tom.Visa flödespanelen för den barometer plethysmography programvara och högerklicka analysera attribut för att ange lämpliga parametrar. För ett mönster av andningsanalys, bekräfta tiderna för 15 sekunder av tyst andning med hjälp av anteckningar om djurs beteende samt flödespanelen spårning. Ange sedan tiderna under öppen parser dialog från fliken dataparser och klicka på Tolkar Visa läge för att visa endast de specifika 15-sekunders segment av intresse.Om du vill analysera apnéer och förstärkt andedräkt går du i den öppna granskningsfilen ut ur tolkningsläget och klickar på Installationsprogrammet för P3-inställningar och grafinställning för att välja Sidvisning som typ och fem som antal fönsterrutor. Skriv in minus två i rutan märkt låg och två i rutan märkt högt för flödet åtgärder i milliliter per sekund och tillämpa ändringarna. Bläddra sedan till 30-minutersmarkeringen på flödesspårningspanelen och räkna apnéerna manuellt och förstärkta andetag för 30 till 60-minutersperioden efter att musen placerats i kammaren.För denna analys är perioder av suspenderad andning som varar längre än eller lika med 0,5 sekunder ett tecken på en apné. Förstärkta andetag indikeras av en kraftig ökning av andningsspåret över 1,25 milliliter per sekund följt av en kraftig minskning under minus 0,75 milliliter per sekund. Denna representativa flöde spårning av tyst andning i en 22-månader gammal mus är typiskt för ett mönster där andningen är förenlig med inga aktiva andningsbeteenden.Detta andningsmönster är från ett mer aktivt segment under vilket mössen utforskade kammaren sniffa och / eller grooming och är inte idealisk för den typ av andningsinsamling som används för denna metod. Den parameter som valts för bedömning av möjliga mönster av andning skillnader mellan de två tidpunkterna var andningsfrekvens, tidvattenvolym, minut ventilation, tidvattenvolym inandningstid förhållandet och minut ventilation utvisas koldioxid förhållandet. Ytterligare analys utfördes med var och en av de fyra 15-sekunders baslinje segment för frekvens, tidvattenvolym, minut ventilation, tidvattenvolym inandningstid förhållandet och minut ventilation utvisas koldioxid förhållandet.Inga signifikanta skillnader mellan någon av tidpunkterna och inga skillnader i variabiliteten mellan något av de fyra tidssegmenten för något andningsmåttsmönster hittades. Kvantifiering av antalet apnéer och förstärkta andetag som observerats för varje djur under minuter 30 till 60 av den ohämmade barometrisk pletysmografi protokollet visade att åldrade djur utställningsmonter ett stort antal apnéer och förekomsten av förstärkta andetag inom en 30-minuters span. Forskare kan också anställa gas utmaningar såsom hypoxi eller hyperkapni att dokumentera eventuella förändringar i andningsmönstret till följd av en intervention eller terapi.Denna teknik ger ett sätt att karakterisera mönster av andning hos små gnagare och genetiskt modifierade djurstammar som kan uppvisa distinkta beteendemässiga skillnader.

Research

JoVE Journal

Behavior

The Crossmodal Congruency Task as a Means to Obtain an Objective Behavioral Measure in the Rubber Hand Illusion Paradigm

Den Crossmodal kongruens Task som ett sätt att få en objektiv Behavioral Mät i gummihand Illusion Paradigm

The rubber hand illusion (RHI) is a popular experimental paradigm. Participants view touch on an artificial rubber hand while the participants' own hidden ...

Uncovering Beat Deafness: Detecting Rhythm Disorders with Synchronized Finger Tapping and Perceptual Timing Tasks

Avslöjande Vispa Dövhet: Upptäcka rytmrubbningar med Synkroniserad Finger Tapping och Perceptuella Timing Uppgifter

A set of behavioral tasks for assessing perceptual and sensorimotor timing abilities in the general population (i.e., non-musicians) is presented here ...

The Modified Hole Board - Measuring Behavior, Cognition and Social Interaction in Mice and Rats

Den modifierade Hole Board - Mätning Beteende, Kognition och social interaktion i möss och råttor

This protocol describes the modified hole board (mHB), which combines features from a traditional hole board and open field and is designed to measure ...

Psychophysical Tracking Method to Measure Taste Preferences in Children and Adults

Psyko Tracking metod för att mäta smakpreferenser hos barn och vuxna

The Monell two-series, forced-choice, paired-comparison tracking method provides a reliable measure of sweet taste preferences from childhood to ...

The Rodent Psychomotor Vigilance Test (rPVT): A Method for Assessing Neurobehavioral Performance in Rats and Mice

The Rodent Psychomotor Vigilance Test rPVT: A Method for Assessing Neurobehavioral Performance in Rats and Mice

Gnagare Psyko Vigilance Test (rPVT): En metod för bedömning neurobehavioral Performance i råttor och möss

The human Psychomotor Vigilance Test (PVT) is a widely used procedure for measuring changes in fatigue and sustained attention. The present article ...

Evaluating the Anti-depression Effect of Xiaoyaosan on Chronically-stressed Mice

Utvärdera den antidepressiva effekten av Xiaoyaosan på kroniskt-stressade möss

In addition to the standardized use of antidepressant medications and psychotherapy, the usage of traditional Chinese medicine has lead to an overall ...

An Automated Method to Determine the Performance of Drosophila in Response to Temperature Changes in Space and Time

An Automated Method to Determine the Performance of Drosophila in Response to Temperature Changes in Space and Time

En automatiserad metod för att bestämma prestandan hos Drosophila svar på temperaturförändringar i tid och rum

Temperature is a ubiquitous environmental factor that affects how species distribute and behave. Different species of Drosophila fruit flies have specific ...

Modified Blood Collection from Tail Veins of Non-anesthetized Mice with a Vacuum Blood Collection System and Eyeglass Magnifier

Modifierade blodinsamling från svans venerna i icke-sövd möss med en vakuum blod insamlingssystem och glasögon Skärmförstoraren

Blood sample collection is the basis of experimental animal research. It is of importance to obtain adequate blood samples for various research purposes. ...

A Laboratory Method to Measure Contagious Yawning in Rats

En laboratorie metod för att mäta smittsam gäspningar i råttor

Communication is an essential aspect of animal social life. Animals may influence one another and come together in schools, flocks, and herds. ...

Investigation into Deep Breathing through Measurement of Ventilatory Parameters and Observation of Breathing Patterns

Undersökning av djup andning genom mätning av Ventilatoriska parametrar och observation av andningsmönster

In this protocol, two deep breathing patterns were shown to 15 participants to determine an easy yet effective method of breathing exercise for future ...