Name: orthotopic rat kidney transplantation: a novel and simplified surgical approach
Uploaded: 2019-05-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Rat Kidney Transplantation: A Novel and Simplified Surgical Approach at JoVE.com

Dette arbejde blev finansieret af en generøs gave fra Bombeck Family Estate.

Lewis (RT11) og Dark agouti (da) (RT1Aa) rotter blev købt fra kommercielle leverandører (Se tabellen over materialer). Disse fuldt MHC-mismatchede stammer bruges ofte til at studere akut renal allograft afvisning. Alle dyr blev opstaldet og vedligeholdt i henhold til National Institutes of Health (NIH) retningslinjer i en specifik patogen-fri facilitet på Johns Hopkins University. Alle procedurer blev godkendt af det institutionelle udvalg for dyrepasning og-brug.
<p class="j...

<ol>
	<li>Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actively+acquired+tolerance+of+foreign+cells.">Actively acquired tolerance of foreign cells.</a> Nature. 172 (4379), 603-606 (1953).</li><li>Murray, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+transplantation+(skin,+kidney,+heart)+and+the+plastic+surgeon.">Organ transplantation (skin, kidney, heart) and the plastic surgeon.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 47 (5), 425-431 (1971).</li><li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+heart+transplantation+in+mice.">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (6), e238 (2007).</li><li>Ruzza, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+heart+transplantation+in+rats:+improved+anesthetic+and+surgical+technique.">Heterotopic heart transplantation in rats: improved anesthetic and surgical technique.</a> Transplant Proceedings. 42 (9), 3828-3832 (2010).</li><li>Oldani, G., Lacotte, S., Morel, P., Mentha, G., Toso, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+liver+transplantation+in+rats.">Orthotopic liver transplantation in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e4143 (2012).</li><li>Lang, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoprivileged+status+of+the+liver+is+controlled+by+Toll-like+receptor+3+signaling.">Immunoprivileged status of the liver is controlled by Toll-like receptor 3 signaling.</a> Journal of Clinical Investigation. 116 (9), 2456-2463 (2006).</li><li>Sun, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+host+progenitor+cells+in+rat+liver+transplants.">Recruitment of host progenitor cells in rat liver transplants.</a> Hepatology. 49 (2), 587-597 (2009).</li><li>Orlando, G., Soker, S., Wood, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Operational+tolerance+after+liver+transplantation.">Operational tolerance after liver transplantation.</a> Journal of Hepatolgy. 50 (6), 1247-1257 (2009).</li><li>Lodhi, S. A., Lamb, K. E., Meier-Kriesche, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solid+organ+allograft+survival+improvement+in+the+United+States:+the+long-term+does+not+mirror+the+dramatic+short-term+success.">Solid organ allograft survival improvement in the United States: the long-term does not mirror the dramatic short-term success.</a> American Journal of Transplantation. 11 (6), 1226-1235 (2011).</li><li>Engels, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectrum+of+cancer+risk+among+US+solid+organ+transplant+recipients.">Spectrum of cancer risk among US solid organ transplant recipients.</a> Journal of the American Medical Association. 306 (17), 1891-1901 (2011).</li><li>Kasiske, B. L., Snyder, J. J., Gilbertson, D., Matas, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetes+mellitus+after+kidney+transplantation+in+the+United+States.">Diabetes mellitus after kidney transplantation in the United States.</a> American Journal of Transplantation. 3 (2), 178-185 (2003).</li><li>de Mattos, A. M., Olyaei, A. J., Bennett, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephrotoxicity+of+immunosuppressive+drugs:+long-term+consequences+and+challenges+for+the+future.">Nephrotoxicity of immunosuppressive drugs: long-term consequences and challenges for the future.</a> American Journal of Kidney Diseases. 35 (2), 333-346 (2000).</li><li>Hu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chimeric+Allografts+Induced+by+Short-Term+Treatment+With+Stem+Cell-Mobilizing+Agents+Result+in+Long-Term+Kidney+Transplant+Survival+Without+Immunosuppression:+A+Study+in+Rats.">Chimeric Allografts Induced by Short-Term Treatment With Stem Cell-Mobilizing Agents Result in Long-Term Kidney Transplant Survival Without Immunosuppression: A Study in Rats.</a> American Journal of Transplantation. 16 (7), 2055-2065 (2016).</li><li>Shrestha, B., Haylor, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+rat+models+of+chronic+allograft+nephropathy:+a+review.">Experimental rat models of chronic allograft nephropathy: a review.</a> International Journal of Nephrology and Renovascular Disease. 7, 315-322 (2014).</li><li>Fu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+transplantation+of+kidney+allografts+in+sensitized+rats+after+syngeneic+hematopoietic+stem+cell+transplantation+and+fludarabine.">Successful transplantation of kidney allografts in sensitized rats after syngeneic hematopoietic stem cell transplantation and fludarabine.</a> American Journal of Transplantation. 14 (10), 2375-2383 (2014).</li><li>Grau, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+Complex-Type+Deposits+in+the+Fischer-344+to+Lewis+Rat+Model+of+Renal+Transplantation+and+a+Subset+of+Human+Transplant+Glomerulopathy.">Immune Complex-Type Deposits in the Fischer-344 to Lewis Rat Model of Renal Transplantation and a Subset of Human Transplant Glomerulopathy.</a> Transplantation. 100 (5), 1004-1014 (2016).</li><li>Vogelbacher, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bortezomib+and+sirolimus+inhibit+the+chronic+active+antibody-mediated+rejection+in+experimental+renal+transplantation+in+the+rat.">Bortezomib and sirolimus inhibit the chronic active antibody-mediated rejection in experimental renal transplantation in the rat.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 25 (11), 3764-3773 (2010).</li><li>Fisher, B., Lee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvascular+surgical+techniques+in+research,+with+special+reference+to+renal+transplantation+in+the+rat.">Microvascular surgical techniques in research, with special reference to renal transplantation in the rat.</a> Surgery. 58 (5), 904-914 (1965).</li><li>Mahabir, R. N., Guttmann, R. D., Lindquist, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+transplantation+in+the+inbred+rat.+X.+A+model+of+"weak+histoincompatibility"+by+major+locus+matching.">Renal transplantation in the inbred rat. X. A model of "weak histoincompatibility" by major locus matching.</a> Transplantation. 8 (4), 369-378 (1969).</li><li>Wang, J. J., Hockenheimer, S., Bickerstaff, A. A., Hadley, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+renal+transplantation+procedure.">Murine renal transplantation procedure.</a> Journal of Visualized Experiments. (29), e1150 (2009).</li><li>Bickerstaff, A. A., Wang, J. J., Pelletier, R. P., Orosz, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+renal+allografts:+spontaneous+acceptance+is+associated+with+regulated+T+cell-mediated+immunity.">Murine renal allografts: spontaneous acceptance is associated with regulated T cell-mediated immunity.</a> Journal of Immunology. 167 (9), 4821-4827 (2001).</li><li>Silber, S. J., Crudop, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+transplantation+in+inbred+rats.">Kidney transplantation in inbred rats.</a> American Journal of Surgery. 125 (5), 551-553 (1973).</li><li>D'Silva, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+kidney+transplantation+update+with+special+reference+to+vesical+calculi.">Rat kidney transplantation update with special reference to vesical calculi.</a> Microsurgery. 11 (2), 169-176 (1990).</li><li>Yin, M., Booster, M. H., Bogaard, A. E. J. M., Kootstra, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+technique+to+harvest+two+kidneys+from+one+donor+rat+for+transplantation.">A simple technique to harvest two kidneys from one donor rat for transplantation.</a> Lab Animal. 28 (4), 387-390 (1994).</li><li>Lopez-Neblina, F., Toledo-Pereyra, L. H., Suzuki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrarapid+orthotopic+technique+for+renal+transplantation+in+the+rat.">Ultrarapid orthotopic technique for renal transplantation in the rat.</a> Microsurgery. 15 (4), 274-278 (1994).</li><li>Blom, D., Orloff, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+more+versatile+and+reliable+method+for+renal+transplantation+in+the+rat.">A more versatile and reliable method for renal transplantation in the rat.</a> Microsurgery. 18 (4), 267-269 (1998).</li><li>Engelbrecht, G., Kahn, D., Duminy, F., Hickman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+rapid+technique+for+renal+transplantation+in+the+rat.">New rapid technique for renal transplantation in the rat.</a> Microsurgery. 13 (6), 340-344 (1992).</li><li>Kline, R., Churchill, M., Churchill, P., Bidani, A., Schwartz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+osmolality-low+pH+flush+solutions+improve+renal+transplant+function+in+rats.">High osmolality-low pH flush solutions improve renal transplant function in rats.</a> Urology Research. 19 (2), 81-86 (1991).</li><li>Fray, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+by+which+renin+secretion+from+perfused+rat+kidneys+is+stimulated+by+isoprenaline+and+inhibited+by+high+perfusion+pressure.">Mechanism by which renin secretion from perfused rat kidneys is stimulated by isoprenaline and inhibited by high perfusion pressure.</a> The Journal of Physiology. 308, 1-13 (1980).</li><li>Fry, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+vascular+endothelial+changes+associated+with+increased+blood+velocity+gradients.">Acute vascular endothelial changes associated with increased blood velocity gradients.</a> Circulation Research. 22 (2), 165-197 (1968).</li><li>Pahlavan, P. S., Smallegange, C., Adams, M. A., Schumacher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+transplantation+procedures+in+rats:+assessments,+complications,+and+management.">Kidney transplantation procedures in rats: assessments, complications, and management.</a> Microsurgery. 26 (5), 404-411 (2006).</li><li>Savas, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+transplantation+in+the+rat--a+new+simple,+non-suture+technique.">Renal transplantation in the rat--a new simple, non-suture technique.</a> Urology Research. 13 (2), 91-93 (1985).</li><li>Fabre, J., Lim, S. H., Morris, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+transplantation+in+the+rat:+details+of+a+technique.">Renal transplantation in the rat: details of a technique.</a> The Austalian and New Zealand Journal of Surgery. 41 (1), 69-75 (1971).</li><li>Cameron, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chimeric+Allografts+Induced+by+Short-Term+Treatment+With+Stem+Cell+Mobilizing+Agents+Result+in+Long-Term+Kidney+Transplant+Survival+Without+Immunosuppression:+II,+Study+in+Miniature+Swine.">Chimeric Allografts Induced by Short-Term Treatment With Stem Cell Mobilizing Agents Result in Long-Term Kidney Transplant Survival Without Immunosuppression: II, Study in Miniature Swine.</a> American Journal of Transplantation. 16 (7), 2066-2076 (2016).</li></ol>

I dette manuskript beskriver vi den kirurgiske metode for ortotopic KT i rotter i detaljer, herunder alt det nødvendige udstyr, der er nødvendigt for at udføre denne procedure (figur 5). I 1965 udgav Fisher og Lee den første rapport om KT i rotter, som blev starten på et spændende efterforsknings felt18. Siden da er der blevet indført mange ændringer for at forbedre denne models reproducerbarhed. Det har fungeret som en effektiv dyremodel for at studere iskæm...

Historisk set blev de første transplantations afstødnings undersøgelser udført af Brent og Medawar ved hjælp af hudtransplantationer i gnavere1. Det blev hurtigt klart, at huden har forskellige immunologiske egenskaber, hvilket gør det til et meget immunogent organ, der er forskelligt i afvisning fra andre vaskulariserede solide organer2. Rotteundersøgelser af massiv organtransplantation afvisning er sædvanligvis begrænset til hjerte, lever, og nyretransplantationer. Selv om hver af disse organer er egnet til at studere afvisning, der er fordele og ulemper for hver af dem. Hjertetransplantationer er ofte transplanteret ind i maven og anastomosed til aorta og Vena cava, med modtagerens indfødte hjerte på plads3. Dette genopretter ikke humane kliniske, anatomiske og fysiologiske tilstande. Derudover er hjerter meget følsomme over for kold iskæmi og skal reperfanvendes fortrinsvis inden for 1 time for at være i stand til at inddrive deres funktion4. Levertransplantationer er generelt anses for at være kirurgisk mere udfordrende og tidsfølsomme til at udføre. Efter fjernelse af den indfødte lever, donor leveren skal implanteres og reperfanvendes inden for 30 min da modtagerne ikke kan vare længere uden en fungerende leveren5. Den hepatiske arterie, portal vene, og især galde kanalen rekonstruktion kræver raffinerede kirurgiske færdigheder. Ud over de kirurgiske udfordringer, leveren er kendt for at besidde tolerogene egenskaber og gnavere og mennesker kan blive operationelt tolerant6,7,8. Nyrerne, i modsætning til de førnævnte organer, kan transplanteret i en ortotopic mode, er kendt for at være et immunogent organ med konsekvente, reproducerbare afvisning episoder (hvis ikke immun supprimeret), og giver mulighed for langvarig kold iskæmi gange af flere Timer. Dette gør rotte nyretransplantation en ideel model for at studere allograft afvisning og tolerance.
Nyretransplantation (KT) er det foretrukne Behandlingsvalg for patienter med nyresygdom i slutstadiet. I løbet af de sidste par årtier, kortsigtede overlevelse resultater efter KT har forbedret dramatisk, men langsigtede overlevelse resultater er stagnerende9. Konventionelle Immunsuppressive regimer forbliver standard anti-afvisning terapi. Kronisk brug af immunosuppressive terapier forårsager imidlertid signifikant sygelighed og dødelighed, såsom nefrotoksicitet, diabetes og sekundære maligniteter10,11,12. På lang sigt, kronisk antistof-og cellulær-medieret afvisning truer transplantat overlevelse, med begrænsede terapeutiske muligheder til rådighed.
Et vigtigt mål i transplantation er induktion af transplantations tolerance for at undgå behovet for kronisk immunsuppression. Rotte KT-modellen er et robust værktøj til at undersøge den immunologiske afstødnings proces og til at evaluere nye tilgange til immun moduleringen og transplantations tolerancen. Rotten fungerer også som en egnet model til at studere akut og kronisk celle-og antistof-medieret afvisning13,14,15,16,17. Denne kirurgiske model har vist sig at være et pålideligt, reproducerbart og omkostningseffektivt værktøj til at studere forskellige aspekter af allograft afvisning og tolerance. Det er ofte bruges til at teste nye tolerance-inducerende protokoller forud for gennemføre dyre og besværlige store dyreforsøg. Udførelse af KT i rotter kræver omfattende kirurgisk træning og ekspertise for at nå overlevelsesrater på > 90%. I dette manuskript og i den ledsagende instruktionsvideo giver vi en trinvis skitse for ortotopic KT i rotter, som det med succes er udført i mange år på vores institution.
Før påbegyndelse af enhver procedure, donor og modtager udvælgelse er kritisk og afhænger af karakteren af eksperimentet. Ideelt set bør donorer og recipienter veje mellem 220 – 260 g og være mellem 8 – 12 ugers alderen. Dyr under 220 g har arterier med lille diameter, vener og ureters, hvilket gør anastomose i recipienten særlig udfordrende. Mindre blodtab kan forårsage hypovolæmi og føre til døden hos mindre dyr. Dyr tungere end 260 g viser mere fedt omkring deres fartøjer, og fartøjs isolation vil kræve mere operative tid og øge den kolde iskæmi tid.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1012px;" width="1011">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Buprenorphine HCL</td>
			<td style="width:167px;">Reckitt Benckiser Healthcare UK</td>
			<td style="width:167px;">NDC12496-0757-5</td>
			<td style="width:463px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dissecting forceps, curved</td>
			<td style="width:167px;">Zhenbang, China</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td style="width:463px;">11cm Flat handle&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Heparin sodium injection USP</td>
			<td style="width:167px;">Sagent Pharmaceuticals&#160;</td>
			<td style="width:167px;">NDC25021-400-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro-forceps, straight, smooth</td>
			<td style="width:167px;">Jingzhong, China</td>
			<td style="width:167px;">WA3010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro needle holder</td>
			<td style="width:167px;">Jingzhong, China</td>
			<td style="width:167px;">WA2010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro vessel clamps</td>
			<td style="width:167px;">Jingzhong, China</td>
			<td style="width:167px;">WA40120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro spring sciccor 1</td>
			<td style="width:167px;">ROBOZ</td>
			<td style="width:167px;">RS-5620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro spring sciccor 2</td>
			<td style="width:167px;">F.S.T.</td>
			<td style="width:167px;">91501-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro spring sciccor 3</td>
			<td style="width:167px;">Zhenbang, China</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td style="width:463px;">8.5cm Vannas,curved</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Prograf (Tacrolimus/FK506)</td>
			<td style="width:167px;">Astellas</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Rats</td>
			<td style="width:167px;">Charles River &#38; Taconic Biosciences&#160;</td>
			<td style="width:167px;">LEW/Crl &#38; DA-M&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Shaver</td>
			<td style="width:167px;">Wahl</td>
			<td>79600-2101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Suture 4-0</td>
			<td style="width:167px;">Ethicon</td>
			<td style="width:167px;">J304H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Suture, 4-0&#160;</td>
			<td style="width:167px;">Ethicon</td>
			<td style="width:167px;">683G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Suture, 10-0&#160;</td>
			<td style="width:167px;">Ethicon</td>
			<td style="width:167px;">2820G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Syringes &#38; Needles</td>
			<td style="width:167px;">BD</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Thread, 8-0</td>
			<td style="width:167px;">Ashaway</td>
			<td style="width:167px;">75290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ureteral cuff</td>
			<td style="width:167px;">Microlumen</td>
			<td style="width:167px;">160-1</td>
			<td>Polymide Tubing, Diameter 0.41 mm&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Venous cuff</td>
			<td style="width:167px;">Intramedic BD</td>
			<td style="width:167px;">7441</td>
			<td>PE-200 Non-radiopaque polyethylene tubing ID: 1.4 mm, OD: 1.9 mm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

orthotopic rat kidney transplantation: a novel and simplified surgical approach

Nyretransplantation giver øget overlevelsesrater og forbedret livskvalitet for patienter med nyresygdom i slutstadiet, sammenlignet med enhver form for renal substitutionsterapi. I løbet af de sidste par årtier, er rotte nyretransplantation model blevet brugt til at studere de immunologiske fænomener af afvisning og tolerance. Denne model er blevet et uundværligt redskab til at teste nye immunmodulerende lægemidler og regimer forud for at fortsætte med dyre prækliniske store dyreforsøg.
Denne protokol giver en detaljeret oversigt over, hvordan man pålideligt udføre ortotopic nyretransplantation i rotter. Denne protokol indeholder tre karakteristiske trin, der øger sandsynligheden for succes: perfusion af donor nyre ved skylning gennem portalen vene og brugen af et manchet system til anastomose de renale vener og ureters, derved faldende kolde og varme iskæmi gange. Ved hjælp af denne teknik har vi opnået overlevelsesrater ud over 6 måneder med normal serum-kreatinin hos dyr med murinsynogene eller tolerante nyretransplantationer. Afhængigt af undersøgelsens formål kan denne model modificeres ved præ-eller post transplantations behandlinger for at studere akut, kronisk, cellulær eller antistof-medieret afvisning. Det er en reproducerbar, pålidelig og omkostningseffektiv dyremodel til at studere forskellige aspekter af nyretransplantation.

Vi udførte murinsynogene (n = 5) og allogene nyretransplantationer (n = 5). Dyr med en syngen transplantation opnåede langvarig overlevelse uden immunsuppressiv behandling. Dyr, der fik en allogen transplantation uden immunsuppression, afviste deres transplantat og bukkede under for nyresvigt med en Median overlevelse på 8 dage (figur 4a). Det gennemsnitlige serum-kreatinin steg beskedent i den syngeneatiske gruppe, mens det steg med 14 gange i den allog...

Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Rat Kidney Transplantation: A Novel and Simplified Surgical Approach at JoVE.com

Orthotopic Rat Kidney Transplantation: A Novel and Simplified Surgical Approach

Formålet med dette manuskript og protokol er at forklare og demonstrere i detaljer den kirurgiske procedure af ortotopic nyretransplantation i rotter. Denne metode er forenklet for at opnå den korrekte perfusion af donor nyre og forkorte reperfusion tid ved hjælp af venøs og urinveje manchet anastomose teknik.

Ortotopic rotte nyre transplantation: en roman og forenklet kirurgisk tilgang

Kidney transplantation offers increased survival rates and improved quality of life for patients with end-stage renal disease, as compared to any type of ...

Vores laboratorium på Johns Hopkins har udført små dyr nyre og levertransplantation med over to årtiers erfaring. Denne specifikke protokol skitserer kritiske trin, der er nødvendige for en vellykket udførelse ortopisk nyretransplantation hos rotter. For at øge sandsynligheden og reproducerbarheden af succes, vores protokol indeholder tre karakteristiske trin, perfusion af donor nyre gennem portalen vene og brugen af en manchet system til at anastomose nyrerne og urinledere.Demonstration af denne procedure vil være Dr.Le Qi, en kandidat studerende i vores laboratorium. For at begynde denne procedure, bedøve donor rotte som beskrevet i tekstprotokollen. Placer rotten i en liggende position og immobilisere lemmerne med sterile afdækningstape.Påfør et øjensmøremiddel, og steriliser det kirurgiske felt som beskrevet i tekstprotokollen. Forud for det første snit, sørg for, at rotten er tilstrækkeligt bedøvet ved at kontrollere fraværet af tå knivspids tilbagetrækning refleks. Brug saks, starte med at gøre en stor langsgående midterlinjen hud og muskel snit fra symphysis pubis til xiphoid og indtast bughulen.Dæk tarmen med en fugtig steril gaze og flytte den til højre lateral side af maven udsætter aorta, vena cava, og venstre nyre. Påfør en milliliter forvarmet saltvand med en en cc sprøjte for at holde tarmene og maveorganerne fugtige og ved en normal temperatur. Påfør en anden fugtig gaze til at dække og mobilisere maven og milt kraniel til nyrerne.Derefter tilsættes en lille fugtig gaze til at dække den eksponerede nyre. Brug mikrokirurgiske dissekerekræft til at isolere og mobilisere den venstre nyrearterie og vene fra bindevævet og hinanden. Nu isolere venstre nyrevene ved cauterizing venstre gonadal vene og isolere venstre nyrearterie ved cauterizing binyrearterien.Efter at mobilisere aorta og vena cava overlegen og ringere end den venstre renal pedicle ved at dissekere bindevæv med dissekere snørke. Divider og mobilisere ureter fra bindevævet ved hjælp af dissekere kraftbefængte, derefter bruge mikro saks til at foretage en diagonal snit i en længde på cirka to centimeter målt fra nyrebækkenet. Sæt en polyamid manchet halvvejs ind i ureter og fastgør manchetten ved at placere en knude med 8-0 silkesutur.Mobilisere venstre nyre ved at adskille det fra perinephric fedt ved hjælp af dissekere spind eller mikro saks. Lad fedtkapslen i nyrerne være fastgjort og brug dette sted til håndtering af nyrerne. Nu administrere 200 enheder af heparin ved hjælp af en sprøjte med en 27 gauge nål gennem penis vene.Tryk injektionsstedet med en vatpind i mindst et minut for at undgå blødning. Identificer portalvenen og den underlegne vena cava. Udsætter den underlegne vena cava.Forbered dig på at skylle nyrerne ved at injicere 50 milliliter koldt saltvand blandet med 500 enheder af heparin i portalen vene ved hjælp af en 16 gauge nål. Før rødmen, skære ringere vena cava på infrahepatisk niveau og skære portalen vene hale på nålen indsættelsesstedet at tillade blodet at komme ud af cirkulationen. Begynd at skylle nyrerne ved gradvist at tilføre saltvandsopløsningen.Overhold en farveændring af nyrerne fra mørkerød til en ensartet grå eller bleg farve. Efter rødmen, ligate nyrearterien og vene proksimale til aorta og vena cava. Placer den skyllede nyre i en petriskål, der indeholder koldt saltvand på is, før donorens krop fjernes fra det kirurgiske område.Når nyrerne er i koldt saltvand, fastsætte og immobilisere håndtaget på venen manchet og forsigtigt trække nyrevene gennem manchetten. Fastgør derefter nyrevenen over manchetten ved at placere tre knob ved hjælp af 8-0 silkesutur. For at begynde modtagerproceduren skal du gentage trinene fra donorproceduren til heparinadministration.Derefter placere to atramatiske mikrovessel klemmer på venstre nyrearterie og vene proksimale til aorta og vena cava. Ligate modtageren nyre vene proksimale til indløbet af nyrerne. Skyl nyrevenen med hepariniseret saltvand for at fjerne alt det resterende blod ud af karret.Skub den ligaterede nyrevene over den manchetten nyrevene, der tidligere var placeret i donornyren. Fastgør derefter venen med en 8-0 silkesutur. Bevar den samme positionelle orientering, når du sikrer nyrevenen over manchetten.Ligate nyrearterien proksimalt til indløbet af modtageren nyre. Skyl det med hepariniseret saltvand for at fjerne overskydende blod i karret. Nu ligate ureter på niveau med den nederste pol af venstre nyre.Mobilisere nyren fra perinephric fedt og fjerne den indfødte nyre. Udfør en end-to-end anastomose af nyrearterien med 8-10 afbrudt suturer ved hjælp af en 10-0 nylon sutur. Manøvrer arterien ved hjælp af utilsigtet lag.Fjern karklemmerne for at starte nyrerne igen. Start med at fjerne klemmen på venen efterfulgt af klemmen på arterien. Brug en steril vatpind til at tilføje let tryk til eventuelle oser områder omkring anastomose regionen.Et par minutter bør være tilstrækkeligt til at opnå et patent anastomose. Overhold kort nyrerne for at vurdere, om der er tilstrækkelig perfusion. Umiddelbart efter re-perfusion, nyrerne bør ændre farve og gradvist genvinde sin naturlige mørkerøde farve efter et par minutter.Synlig peristaltik af urinlederen og onsite urinproduktion er undertiden observeret. Afslut ved at indsætte den eksponerede spids af ureteral manchetten i modtageren ureter og fastgør modtageren ureter med en 8-0 silke slips. For at holde donor og modtager ureters i position, binde enderne af hver ureter side til hinanden.Eventuelt nephrectomize højre nyre ved at binde den nyre pedicle med en 3-0 silke sutur. Fjern alle gaze fra bughulen og returnere alle organer til deres naturlige position. Derefter sprøjte en milliliter saltvand over tarmene for at holde dem fugtige.Luk maven ved hjælp af en 4-0 absorberbar sutur på rectus musklen og en 4-0 silke sutur til at lukke huden lag i en afbrudt måde. Placer dyret i et rent bur med adgang til ad libitum vand og mad og give mulighed for nyttiggørelse på en 37 grader Celsius varmepude. Overhold genvindingen i en til to timer, før dyret returneres tilbage til dyreanlægget.Dyr med en syngeneisk nyretransplantation opnåede overlevelse på lang sigt uden immunsuppressiv behandling. Omvendt afviste dyr, der fik allogen nyretransplantation uden immunsuppression, deres transplantat og bukkede under for nyresvigt med en median overlevelse på otte dage. Gennemsnitlig serum kreatinin steg beskedent i den syngeneiske gruppe, mens det steg med 14 gange i den allogene gruppe.Ved explantation viste den makroskopiske opfattelse af den syngeneiske nyre allograph ikke nogen abnormiteter. Nyrefarve og interne strukturer forblev intakt. I modsætning hertil præsenterede nyre allografer af afviste dyr røde hæmoragiske pletter med ødelæggelsen af de interne strukturer.Hæmatoxylin og Eosin pletter af syngeneic grafts vist tynde glomerulære kapillær sløjfer med normale antal endotelceller og mesangialceller. Afviste allografer viste ødelagt glomerular strukturer med tegn på betændelse og tubulitis. CD8 positive farvning blev udført for at bekræfte T-celle medieret afvisning.Mens syngeneic allographs viste meget få CD8 positive T-celler, de afviste allografer viste et betydeligt højere antal CD8 positive celler i og omkring glomeruli og tubuli bekræfter T-celle medieret afvisning. Denne model giver betydelig indsigt i de immunologiske fænomener af afvisning, tolerance, og donor-vært interaktioner bane vejen for udviklingen af terapeutiske kliniske indgreb i fast organtransplantation.

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and ...

Surgical Procedures for a Rat Model of Partial Orthotopic Liver Transplantation with Hepatic Arterial Reconstruction

Kirurgiske procedurer for en rottemodel af partiel ortotopisk levertransplantation med hepatisk arteriel Genopbygning

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats using a whole or partial graft is an indispensable experimental model for transplantation research, such as ...

Cardiopulmonary Bypass in a Mouse Model: A Novel Approach

Hjertemassage Bypass i en musemodel: en ny tilgang

As prolonged cardiopulmonary bypass becomes more essential during cardiac interventions, an increasing clinical demand arises for procedure optimization ...

A Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation Using a Novel Magnetic Anastomosis Technique for Suprahepatic Vena Cava Reconstruction

En rotte Model af Orthotopic levertransplantation ved hjælp af en roman magnetiske anastomose teknik for Suprahepatic Vena Cava genopbygning

The rat model of orthotopic liver transplantation (OLT) is essential for transplant research. It is a very sophisticated animal model and requires a steep ...

A Pre-Clinical Porcine Model of Orthotopic Heart Transplantation

En præklinisk Porcin model af Ortotopisk hjerte transplantation

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart ...

Reduced Complications after Arterial Reconnection in a Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation

Reduceret komplikationer efter arteriel gentilslutning i en rotte model af ortopisk levertransplantation

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation ...

Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry

Ortopisk nyre auto-transplantation i en porcine model ved hjælp af 24 timers organbevarelse og kontinuerlig telemetri

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for ...

Robot-Assisted Kidney Transplantation

Robotassisteret nyretransplantation

This paper describes robot-assisted kidney transplantation (RAKT) from a living donor. The robot is docked between the parted legs of the patient, placed ...