Name: orthotopic rat kidney transplantation: a novel and simplified surgical approach
Uploaded: 2019-05-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Rat Kidney Transplantation: A Novel and Simplified Surgical Approach at JoVE.com

Dit werk werd gefinancierd door een gulle gift van het Bombeck familielandgoed.

Lewis (RT11) en Dark AGOUTI (da) (RT1Aa) ratten werden gekocht bij commerciële leveranciers (Zie de tabel van de materialen). Deze volledig MHC-niet-gematchte stammen worden vaak gebruikt om acute renale Allograft afwijzing te bestuderen. Alle dieren werden gehuisvest en onderhouden volgens de nationale instituten van gezondheid (NIH) richtlijnen in een specifieke ziekteverwekker-vrije faciliteit aan de Johns Hopkins University. Alle procedures werden goedgekeurd door de institutio...

<ol>
	<li>Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actively+acquired+tolerance+of+foreign+cells.">Actively acquired tolerance of foreign cells.</a> Nature. 172 (4379), 603-606 (1953).</li><li>Murray, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+transplantation+(skin,+kidney,+heart)+and+the+plastic+surgeon.">Organ transplantation (skin, kidney, heart) and the plastic surgeon.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 47 (5), 425-431 (1971).</li><li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+heart+transplantation+in+mice.">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (6), e238 (2007).</li><li>Ruzza, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+heart+transplantation+in+rats:+improved+anesthetic+and+surgical+technique.">Heterotopic heart transplantation in rats: improved anesthetic and surgical technique.</a> Transplant Proceedings. 42 (9), 3828-3832 (2010).</li><li>Oldani, G., Lacotte, S., Morel, P., Mentha, G., Toso, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+liver+transplantation+in+rats.">Orthotopic liver transplantation in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e4143 (2012).</li><li>Lang, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoprivileged+status+of+the+liver+is+controlled+by+Toll-like+receptor+3+signaling.">Immunoprivileged status of the liver is controlled by Toll-like receptor 3 signaling.</a> Journal of Clinical Investigation. 116 (9), 2456-2463 (2006).</li><li>Sun, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+host+progenitor+cells+in+rat+liver+transplants.">Recruitment of host progenitor cells in rat liver transplants.</a> Hepatology. 49 (2), 587-597 (2009).</li><li>Orlando, G., Soker, S., Wood, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Operational+tolerance+after+liver+transplantation.">Operational tolerance after liver transplantation.</a> Journal of Hepatolgy. 50 (6), 1247-1257 (2009).</li><li>Lodhi, S. A., Lamb, K. E., Meier-Kriesche, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solid+organ+allograft+survival+improvement+in+the+United+States:+the+long-term+does+not+mirror+the+dramatic+short-term+success.">Solid organ allograft survival improvement in the United States: the long-term does not mirror the dramatic short-term success.</a> American Journal of Transplantation. 11 (6), 1226-1235 (2011).</li><li>Engels, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectrum+of+cancer+risk+among+US+solid+organ+transplant+recipients.">Spectrum of cancer risk among US solid organ transplant recipients.</a> Journal of the American Medical Association. 306 (17), 1891-1901 (2011).</li><li>Kasiske, B. L., Snyder, J. J., Gilbertson, D., Matas, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetes+mellitus+after+kidney+transplantation+in+the+United+States.">Diabetes mellitus after kidney transplantation in the United States.</a> American Journal of Transplantation. 3 (2), 178-185 (2003).</li><li>de Mattos, A. M., Olyaei, A. J., Bennett, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephrotoxicity+of+immunosuppressive+drugs:+long-term+consequences+and+challenges+for+the+future.">Nephrotoxicity of immunosuppressive drugs: long-term consequences and challenges for the future.</a> American Journal of Kidney Diseases. 35 (2), 333-346 (2000).</li><li>Hu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chimeric+Allografts+Induced+by+Short-Term+Treatment+With+Stem+Cell-Mobilizing+Agents+Result+in+Long-Term+Kidney+Transplant+Survival+Without+Immunosuppression:+A+Study+in+Rats.">Chimeric Allografts Induced by Short-Term Treatment With Stem Cell-Mobilizing Agents Result in Long-Term Kidney Transplant Survival Without Immunosuppression: A Study in Rats.</a> American Journal of Transplantation. 16 (7), 2055-2065 (2016).</li><li>Shrestha, B., Haylor, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+rat+models+of+chronic+allograft+nephropathy:+a+review.">Experimental rat models of chronic allograft nephropathy: a review.</a> International Journal of Nephrology and Renovascular Disease. 7, 315-322 (2014).</li><li>Fu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+transplantation+of+kidney+allografts+in+sensitized+rats+after+syngeneic+hematopoietic+stem+cell+transplantation+and+fludarabine.">Successful transplantation of kidney allografts in sensitized rats after syngeneic hematopoietic stem cell transplantation and fludarabine.</a> American Journal of Transplantation. 14 (10), 2375-2383 (2014).</li><li>Grau, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+Complex-Type+Deposits+in+the+Fischer-344+to+Lewis+Rat+Model+of+Renal+Transplantation+and+a+Subset+of+Human+Transplant+Glomerulopathy.">Immune Complex-Type Deposits in the Fischer-344 to Lewis Rat Model of Renal Transplantation and a Subset of Human Transplant Glomerulopathy.</a> Transplantation. 100 (5), 1004-1014 (2016).</li><li>Vogelbacher, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bortezomib+and+sirolimus+inhibit+the+chronic+active+antibody-mediated+rejection+in+experimental+renal+transplantation+in+the+rat.">Bortezomib and sirolimus inhibit the chronic active antibody-mediated rejection in experimental renal transplantation in the rat.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 25 (11), 3764-3773 (2010).</li><li>Fisher, B., Lee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvascular+surgical+techniques+in+research,+with+special+reference+to+renal+transplantation+in+the+rat.">Microvascular surgical techniques in research, with special reference to renal transplantation in the rat.</a> Surgery. 58 (5), 904-914 (1965).</li><li>Mahabir, R. N., Guttmann, R. D., Lindquist, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+transplantation+in+the+inbred+rat.+X.+A+model+of+"weak+histoincompatibility"+by+major+locus+matching.">Renal transplantation in the inbred rat. X. A model of "weak histoincompatibility" by major locus matching.</a> Transplantation. 8 (4), 369-378 (1969).</li><li>Wang, J. J., Hockenheimer, S., Bickerstaff, A. A., Hadley, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+renal+transplantation+procedure.">Murine renal transplantation procedure.</a> Journal of Visualized Experiments. (29), e1150 (2009).</li><li>Bickerstaff, A. A., Wang, J. J., Pelletier, R. P., Orosz, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+renal+allografts:+spontaneous+acceptance+is+associated+with+regulated+T+cell-mediated+immunity.">Murine renal allografts: spontaneous acceptance is associated with regulated T cell-mediated immunity.</a> Journal of Immunology. 167 (9), 4821-4827 (2001).</li><li>Silber, S. J., Crudop, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+transplantation+in+inbred+rats.">Kidney transplantation in inbred rats.</a> American Journal of Surgery. 125 (5), 551-553 (1973).</li><li>D'Silva, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+kidney+transplantation+update+with+special+reference+to+vesical+calculi.">Rat kidney transplantation update with special reference to vesical calculi.</a> Microsurgery. 11 (2), 169-176 (1990).</li><li>Yin, M., Booster, M. H., Bogaard, A. E. J. M., Kootstra, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+technique+to+harvest+two+kidneys+from+one+donor+rat+for+transplantation.">A simple technique to harvest two kidneys from one donor rat for transplantation.</a> Lab Animal. 28 (4), 387-390 (1994).</li><li>Lopez-Neblina, F., Toledo-Pereyra, L. H., Suzuki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrarapid+orthotopic+technique+for+renal+transplantation+in+the+rat.">Ultrarapid orthotopic technique for renal transplantation in the rat.</a> Microsurgery. 15 (4), 274-278 (1994).</li><li>Blom, D., Orloff, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+more+versatile+and+reliable+method+for+renal+transplantation+in+the+rat.">A more versatile and reliable method for renal transplantation in the rat.</a> Microsurgery. 18 (4), 267-269 (1998).</li><li>Engelbrecht, G., Kahn, D., Duminy, F., Hickman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+rapid+technique+for+renal+transplantation+in+the+rat.">New rapid technique for renal transplantation in the rat.</a> Microsurgery. 13 (6), 340-344 (1992).</li><li>Kline, R., Churchill, M., Churchill, P., Bidani, A., Schwartz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+osmolality-low+pH+flush+solutions+improve+renal+transplant+function+in+rats.">High osmolality-low pH flush solutions improve renal transplant function in rats.</a> Urology Research. 19 (2), 81-86 (1991).</li><li>Fray, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+by+which+renin+secretion+from+perfused+rat+kidneys+is+stimulated+by+isoprenaline+and+inhibited+by+high+perfusion+pressure.">Mechanism by which renin secretion from perfused rat kidneys is stimulated by isoprenaline and inhibited by high perfusion pressure.</a> The Journal of Physiology. 308, 1-13 (1980).</li><li>Fry, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+vascular+endothelial+changes+associated+with+increased+blood+velocity+gradients.">Acute vascular endothelial changes associated with increased blood velocity gradients.</a> Circulation Research. 22 (2), 165-197 (1968).</li><li>Pahlavan, P. S., Smallegange, C., Adams, M. A., Schumacher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+transplantation+procedures+in+rats:+assessments,+complications,+and+management.">Kidney transplantation procedures in rats: assessments, complications, and management.</a> Microsurgery. 26 (5), 404-411 (2006).</li><li>Savas, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+transplantation+in+the+rat--a+new+simple,+non-suture+technique.">Renal transplantation in the rat--a new simple, non-suture technique.</a> Urology Research. 13 (2), 91-93 (1985).</li><li>Fabre, J., Lim, S. H., Morris, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+transplantation+in+the+rat:+details+of+a+technique.">Renal transplantation in the rat: details of a technique.</a> The Austalian and New Zealand Journal of Surgery. 41 (1), 69-75 (1971).</li><li>Cameron, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chimeric+Allografts+Induced+by+Short-Term+Treatment+With+Stem+Cell+Mobilizing+Agents+Result+in+Long-Term+Kidney+Transplant+Survival+Without+Immunosuppression:+II,+Study+in+Miniature+Swine.">Chimeric Allografts Induced by Short-Term Treatment With Stem Cell Mobilizing Agents Result in Long-Term Kidney Transplant Survival Without Immunosuppression: II, Study in Miniature Swine.</a> American Journal of Transplantation. 16 (7), 2066-2076 (2016).</li></ol>

In dit manuscript beschrijven we de chirurgische methode voor orthotopic KT in ratten in detail, met inbegrip van alle benodigde apparatuur die nodig is om deze procedure uit te voeren (Figuur 5). In 1965, Fisher en Lee publiceerde het eerste rapport over KT in ratten, die werd het begin van een spannend onderzoek veld18. Sindsdien zijn er veel wijzigingen aangebracht om de reproduceerbaarheid van dit model te verbeteren. Het heeft gediend als een effectief diermodel ...

Historisch, de eerste transplantatie afwijzing studies werden uitgevoerd door Brent en Medawar met behulp van huidtransplantaties in knaagdieren1. Het werd al snel duidelijk dat de huid heeft verschillende immunologische kenmerken, waardoor het een zeer immunogeen orgaan dat anders is in afwijzing van andere vasculaire vaste organen2. Rat studies van Solid orgaantransplantatie afwijzing zijn gewoonlijk beperkt tot hart-, lever-en nier transplantaties. Hoewel elk van deze organen geschikt is om afwijzing te bestuderen, zijn er voordelen en nadelen aan elk van hen. Harttransplantaties worden vaak geplant in de buik en geanastomoseerd aan de aorta en vena cava, met inheemse hart van de ontvanger in plaats3. Dit is niet recreëren menselijke klinische, anatomische en fysiologische omstandigheden. Bovendien, zijn de harten zeer gevoelig voor koude ischemie en moeten bij voorkeur binnen 1 h worden reperfused om hun functie4te kunnen terugkrijgen. Lever transplantaties worden over het algemeen beschouwd als chirurgisch meer uitdagend en tijd-gevoelig te presteren. Na het verwijderen van de inheemse lever, de donorlever moet worden geïmplanteerd en reperfused binnen 30 min als de ontvangers niet langer kan duren zonder een functionerende lever5. De Leverslagader, poortader, en vooral de galwegen reconstructie vereist geraffineerde chirurgische vaardigheden. Naast de chirurgische uitdagingen, is de lever gekend om tolerogenic eigenschappen te bezitten en de knaagdieren en de mensen kunnen operationeel verdraagzaam6,7,8worden. De nier, in tegenstelling tot de bovengenoemde organen, kan worden geplant in een orthotopic mode, is bekend dat een immunogeen orgaan met consistente, reproduceerbare afwijzing episodes (indien niet immuungecompromitteerde), en zorgt voor langdurige koude ischemie tijden van verschillende Uur. Dit maakt de rat nier transplantatie een ideaal model voor het bestuderen van Allograft afwijzing en tolerantie.
Nier transplantatie (KT) is de beste keuze van de behandeling voor patiënten met een eindstadium nierziekte. In de afgelopen decennia, op korte termijn overlevingsresultaten na KT drastisch zijn verbeterd, maar op lange termijn Overleving uitkomsten zijn stagnerende9. Conventionele immunosuppressieve regimes blijven de standaard anti-afwijzing therapie. Nochtans, veroorzaakt het chronische gebruik van immunosuppressieve therapie significante morbiditeit en mortaliteit, zoals nefrotoxiciteit, diabetes, en secundaire maligniteiten10,11,12. Op de lange termijn, chronische antilichaam-en cellulaire-gemedieerde afwijzing bedreigen transplantaat overleving, met beperkte therapeutische opties beschikbaar.
Een belangrijk doel in transplantatie is de inductie van transplantatie tolerantie om de behoefte aan chronische immunosuppressie te ondervangen. De rat KT model is een robuust instrument om de immunologische afwijzing proces te onderzoeken en om nieuwe benaderingen van Immunomodulatie en transplantatie tolerantie te evalueren. De rat dient ook als geschikt model om scherpe en chronische cel-en antilichaam-gemedieerde verwerping13,14,15,16,17te bestuderen. Dit chirurgische model heeft bewezen een betrouwbaar, reproduceerbaar, en kosteneffectieve instrument om verschillende aspecten van Allograft afwijzing en tolerantie studie. Het wordt vaak gebruikt om nieuwe tolerantie-inducerende protocollen te testen voorafgaand aan de onderneming dure en omslachtige studies met grote dieren. Het uitvoeren van KT in ratten vereist uitgebreide chirurgische opleiding en deskundigheid om overlevingspercentages van > 90% te bereiken. In dit manuscript en in de bijbehorende educatieve video, bieden wij een stap-voor-stap schets voor orthotopic KT in de rat, zoals met succes uitgevoerd voor vele jaren bij onze instelling.
Voorafgaand aan het starten van een procedure, donor en ontvanger selectie is kritisch en hangt af van de aard van het experiment. Idealiter, donoren en ontvangers moeten wegen tussen 220-260 g en tussen de 8 tot 12 weken oud. Dieren onder 220 g hebben kleine diameter slagaders, aders en urineleiders, waardoor de anastomosis in de ontvanger bijzonder uitdagend. Minor bloedverlies kan leiden tot hypovolemie en leiden tot de dood in kleinere dieren. Dieren zwaarder dan 260 g display meer vet rond hun schepen, en schip isolatie zal meer operatieve tijd en verhoging van de koude ischemie tijd.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1012px;" width="1011">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Buprenorphine HCL</td>
			<td style="width:167px;">Reckitt Benckiser Healthcare UK</td>
			<td style="width:167px;">NDC12496-0757-5</td>
			<td style="width:463px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dissecting forceps, curved</td>
			<td style="width:167px;">Zhenbang, China</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td style="width:463px;">11cm Flat handle&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Heparin sodium injection USP</td>
			<td style="width:167px;">Sagent Pharmaceuticals&#160;</td>
			<td style="width:167px;">NDC25021-400-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro-forceps, straight, smooth</td>
			<td style="width:167px;">Jingzhong, China</td>
			<td style="width:167px;">WA3010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro needle holder</td>
			<td style="width:167px;">Jingzhong, China</td>
			<td style="width:167px;">WA2010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro vessel clamps</td>
			<td style="width:167px;">Jingzhong, China</td>
			<td style="width:167px;">WA40120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro spring sciccor 1</td>
			<td style="width:167px;">ROBOZ</td>
			<td style="width:167px;">RS-5620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro spring sciccor 2</td>
			<td style="width:167px;">F.S.T.</td>
			<td style="width:167px;">91501-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro spring sciccor 3</td>
			<td style="width:167px;">Zhenbang, China</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td style="width:463px;">8.5cm Vannas,curved</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Prograf (Tacrolimus/FK506)</td>
			<td style="width:167px;">Astellas</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Rats</td>
			<td style="width:167px;">Charles River &#38; Taconic Biosciences&#160;</td>
			<td style="width:167px;">LEW/Crl &#38; DA-M&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Shaver</td>
			<td style="width:167px;">Wahl</td>
			<td>79600-2101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Suture 4-0</td>
			<td style="width:167px;">Ethicon</td>
			<td style="width:167px;">J304H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Suture, 4-0&#160;</td>
			<td style="width:167px;">Ethicon</td>
			<td style="width:167px;">683G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Suture, 10-0&#160;</td>
			<td style="width:167px;">Ethicon</td>
			<td style="width:167px;">2820G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Syringes &#38; Needles</td>
			<td style="width:167px;">BD</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Thread, 8-0</td>
			<td style="width:167px;">Ashaway</td>
			<td style="width:167px;">75290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ureteral cuff</td>
			<td style="width:167px;">Microlumen</td>
			<td style="width:167px;">160-1</td>
			<td>Polymide Tubing, Diameter 0.41 mm&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Venous cuff</td>
			<td style="width:167px;">Intramedic BD</td>
			<td style="width:167px;">7441</td>
			<td>PE-200 Non-radiopaque polyethylene tubing ID: 1.4 mm, OD: 1.9 mm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

orthotopic rat kidney transplantation: a novel and simplified surgical approach

Nier transplantatie biedt verhoogde overlevingskansen en een betere kwaliteit van leven voor patiënten met een eindstadium nierziekte, in vergelijking met elk type van renale substitutietherapie. In de afgelopen decennia, de rat nier transplantatie model is gebruikt om de immunologische verschijnselen van afwijzing en tolerantie studie. Dit model is uitgegroeid tot een onmisbaar instrument om nieuwe immunomodulerende geneesmiddelen en regimes te testen voorafgaand aan de procedure met dure preklinische grote dierlijke studies.
Dit protocol biedt een gedetailleerd overzicht van hoe op betrouwbare wijze uit te voeren orthotopic nier transplantatie bij ratten. Dit protocol omvat drie onderscheidende stappen die de kans op succes te vergroten: doorbloeding van de donor nier door blozen door de poortader en het gebruik van een manchet systeem om de renale aderen en urineleiders te anastomose, waardoor afnemende koude en warme ischemie keer. Gebruikend deze techniek, hebben wij overlevingstarieven voorbij 6 maanden met normaal serumcreatinine bij dieren met syngeneic of verdraagzaam nier transplantaties bereikt. Afhankelijk van het doel van de studie, kan dit model door pre-of posttransplant behandelingen worden gewijzigd om de scherpe, chronische, cellulaire, of antilichaam-bemiddelde afwijzing te bestuderen. Het is een reproduceerbaar, betrouwbaar en kosteneffectief diermodel om verschillende aspecten van de nier transplantatie te bestuderen.

We voerden syngeneic (n = 5) en allogene nier transplantaties (n = 5). De dieren met een syngeneic transplantatie bereikten lange termijn Overleving zonder enige immunosuppressieve behandeling. Dieren die een allogene transplantatie kregen zonder immunosuppressie verwierpen hun Graft en bezweken aan nierfalen met een mediane overleving van 8 dagen (Figuur 4a). Gemiddelde serumcreatinine steeg bescheiden in de syngeneic groep, terwijl het steeg met 14-voudig...

Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Rat Kidney Transplantation: A Novel and Simplified Surgical Approach at JoVE.com

Orthotopic Rat Kidney Transplantation: A Novel and Simplified Surgical Approach

Het doel van dit manuscript en protocol is uit te leggen en in detail de chirurgische ingreep van orthotopic nier transplantatie bij ratten te tonen. Deze methode is vereenvoudigd om de juiste doorbloeding van de donor nier te bereiken en de reperfusie tijd te verkorten met behulp van de veneuze en urineleider manchet anastomosis techniek.

Orthotopic rat nier transplantatie: een nieuwe en vereenvoudigde chirurgische aanpak

Kidney transplantation offers increased survival rates and improved quality of life for patients with end-stage renal disease, as compared to any type of ...

Ons laboratorium in Johns Hopkins is het uitvoeren van kleine dierlijke nier-en levertransplantatie met meer dan twee decennia ervaring. Dit specifieke protocol schetst kritieke stappen die nodig zijn voor het succesvol uitvoeren van orthotopische niertransplantatie bij ratten. Om de kans op succes te vergroten, bevat ons protocol drie onderscheidende stappen, perfusie van de donornier door de poortader en het gebruik van een manchetsysteem om de nieraderen en urineleiders te anastomose.Het aantonen van deze procedure zal Dr.Le Qi, een afgestudeerde student in ons laboratorium. Om met deze procedure te beginnen, verdoven de donorrat zoals beschreven in het tekstprotocol. Plaats de rat in een supine positie en immobiliseer de ledematen met steriele plakband.Breng een oogsmeermiddel aan en steriliseer het chirurgische veld zoals beschreven in het tekstprotocol. Voorafgaand aan de eerste incisie, zorg ervoor dat de rat voldoende is verdoofd door het controleren van de afwezigheid van de teen pinch terugtrekking reflex. Met behulp van een schaar, beginnen met het maken van een grote longitudinale middellijn huid en spier incisie van de symphysis pubis aan de xiphoid en voer de buikholte.Bedek de darm met een vochtig steriel gaas en verleg het naar de rechterzijwaartse kant van de buik bloot de aorta, vena cava, en linker nier. Breng een milliliter voorverwarmde zoutoplossing aan met een 1 cc spuit om de darmen en de buikorganen vochtig en bij een normale temperatuur te houden. Breng een tweede vochtig gaas aan om de maag en milt craniale te bedekken en te mobiliseren op de nier.Voeg vervolgens een klein vochtig gaas toe om de blootgestelde nier te bedekken. Gebruik microchirurgische ontleedkrachten om de linker nierslagader en ader te isoleren en te mobiliseren van het bindweefsel en elkaar. Nu isoleren van de linker nierader door cauterizing de linker gonadale ader en isoleren van de linker nierslagader door cauterizing de bijnierslagader.Daarna, mobiliseren de aorta en vena cava superieur en inferieur aan de linker nierpedicula door het ontleden van het bindweefsel met ontleden tangen. Verdeel en mobiliseer de urineleider van het bindweefsel met behulp van ontledende tangen, gebruik vervolgens microschaar om een diagonale incisie te maken met een lengte van ongeveer twee centimeter gemeten van het nierbekken. Steek een polyamide manchet halverwege in de urineleider en zet de manchet vast door een knoop met 8-0 te plaatsen zijden hechting.Mobiliseer de linker nier door het te scheiden van het perinephrische vet met behulp van ontleden tang of micro schaar. Laat de vetcapsule van de nier bevestigd en gebruik die plaats voor het hanteren van de nier. Nu 200 eenheden heparine met behulp van een spuit met een 27-meter naald door de penis ader.Druk de plaats van injectie met een wattenstaafje gedurende ten minste een minuut om bloedingen te voorkomen. Identificeer de poortader en inferieure vena cava. Ontmasker de inferieure vena cava.Bereid je voor om de nier te spoelen door het injecteren van 50 milliliter koude zoutoplossing gemengd met 500 eenheden heparine in de poortader met behulp van een 16-meter naald. Snijd voor het spoelen de inferieure vena cava op infrahepatisch niveau en snijd de poortader caudal op de plaats van het inbrengen van de naald om het bloed in staat te stellen de circulatie te verlaten. Begin met het spoelen van de nier door geleidelijk de zoutoplossing in te brengen.Observeer een kleurverandering van de nier van donkerrood naar een uniforme grijze of bleke kleur. Na het spoelen, ligate de nierslagader en ader proximale aan de aorta en vena cava. Plaats de gespoelde nier in een petrischaaltje met koude zoutoplossing op ijs voordat u het lichaam van de donor uit het chirurgische veld verwijdert.Zodra de nier is in koude zoutoplossing, fix en immobiliseren het handvat van de ader manchet en trek voorzichtig de nierader door de manchet. Bevestig vervolgens de nierader over de manchet door het plaatsen van drie knopen met behulp van 8-0 zijden hechting. Om de ontvangerprocedure te starten, herhaalt u de stappen van de donorprocedure tot de toediening van heparine.Plaats vervolgens twee atraumatische microschipklemmen op de linker nierslagader en ader proximaal aan de aorta en vena cava. Ligate de ontvanger nierader proximaal aan de inlaat van de nier. Spoel de nierader met gehepariniseerde zoutoplossing om al het resterende bloed uit het vat te verwijderen.Schuif de geligeerde nierader over de geboeide nierader die eerder in de donornier was geplaatst. Zet vervolgens de ader vast met een 8-0 zijden hechting. Houd dezelfde positieoriëntatie bij het vastzetten van de nierader over de manchet.Ligate de nierslagader proximaal aan de inlaat van de ontvanger nier. Spoel het met gehepariniseerde zoutoplossing om overtollig bloed in het vat te verwijderen. Nu ligate de urineleider op het niveau van de onderste pool van de linker nier.Mobiliseer de nier uit het perinephrische vet en verwijder de inheemse nier. Voer een end-to-end anastomose van de nierslagader uit met 8-10 onderbroken hechtingen met behulp van een 10-0 nylon hechting. Manoeuvreer de slagader met behulp van de adventitial laag.Verwijder de vatklemmen om de re-perfusie van de nier opnieuw te starten. Begin met het verwijderen van de klem op de ader, gevolgd door de klem op de slagader. Gebruik een steriel wattenstaafje om lichte druk toe te voegen aan eventuele lekkende gebieden rond de anastomose regio.Een paar minuten moeten voldoende zijn om een octrooianoastomose te bereiken. Observeer kort de nier om te beoordelen op voldoende perfusie. Onmiddellijk na re-perfusie moet de nier van kleur veranderen en geleidelijk aan zijn natuurlijke donkerrode kleur na een paar minuten herwinnen.Zichtbare peristaltiek van de ureter en de urineproductie ter plaatse worden soms waargenomen. Werk af door de blootgestelde punt van de ureterale manchet in de ontvanger ureter te plaatsen en de ontvanger ureter vast te zetten met een 8-0 zijden das. Om de donor en ontvanger ureters in positie te houden, bind de uiteinden van elke urineleider kant aan elkaar.Optioneel, nefreectiseren de rechter nier door het binden van de nier pedicle met een 3-0 zijden hechting. Verwijder alle gaasjes uit de buikholte en breng alle organen terug naar hun natuurlijke positie. Spuit dan een milliliter zout over de darmen om ze vochtig te houden.Sluit de buik met behulp van een 4-0 absorbeerbare hechting op de rectus spier en een 4-0 zijden hechting om de huidlaag te sluiten op een onderbroken manier. Plaats het dier in een schone kooi met toegang tot ad libitum water en voedsel en zorgen voor herstel op een 37 graden Celsius verwarmingskussen. Observeer het herstel gedurende een tot twee uur voordat het dier terugkeert naar de diereninrichting.Dieren met een syngeneic niertransplantatie bereikten een overleving op lange termijn zonder enige immunosuppressieve behandeling. Omgekeerd verwierpen dieren die een allogene niertransplantatie kregen zonder immunosuppressie hun transplantaat en bezweken ze aan nierfalen met een mediane overleving van acht dagen. Gemiddelde serum creatinine steeg bescheiden in de syngenetische groep, terwijl het steeg met 14-voudige in de allogene groep.Bij explantatie liet de macroscopische weergave van de syngeneïsche nieralograaf geen afwijkingen zien. De nierkleur en de interne structuren bleven intact. Daarentegen, nieralografen van afgewezen dieren gepresenteerd rode hemorragische vlekken met de vernietiging van de interne structuren.Hematoxylin en Eosin vlekken van syngeneic grafts getoond dunne glomerulaire capillaire lussen met normale nummers van endotheel en mesangial cellen. Afgewezen allografen vertoonden vernietigde glomerulaire structuren met tekenen van ontsteking en tubulitis. CD8 positieve kleuring werd uitgevoerd om T-cell gemedieerde afwijzing te bevestigen.Terwijl syngeneic allografen zeer weinig CD8 positieve T-cellen toonden, toonden de verworpen allografen een beduidend hoger aantal cd8 positieve cellen in en rond glomeruli en tubuli bevestigend T-cel bemiddelde verwerping. Dit model biedt een significant inzicht in de immunologische verschijnselen van afstotings-, tolerantie- en donor-host interacties die de weg vrijmaken voor de ontwikkeling van therapeutische klinische interventies bij vaste orgaantransplantatie.

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Orthotope Aorta Transplantatie: Een Rat Model voor de ontwikkeling van chronische vasculopathie Study

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model

A Novel chirurgische benadering voor intratracheale toediening van bioactieve stoffen in een Foetale Muis Model

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and ...

Surgical Procedures for a Rat Model of Partial Orthotopic Liver Transplantation with Hepatic Arterial Reconstruction

Chirurgische ingrepen voor een Rat Model van deelspoelen orthotope levertransplantatie met hepatische arteriële reconstructie

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats using a whole or partial graft is an indispensable experimental model for transplantation research, such as ...

Cardiopulmonary Bypass in a Mouse Model: A Novel Approach

Cardiopulmonale Bypass in een muismodel: een nieuwe benadering

As prolonged cardiopulmonary bypass becomes more essential during cardiac interventions, an increasing clinical demand arises for procedure optimization ...

A Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation Using a Novel Magnetic Anastomosis Technique for Suprahepatic Vena Cava Reconstruction

Een Rat Model van Orthotopic met behulp van een roman magnetische Anastomosis techniek voor Suprahepatic Vena Cava wederopbouw levertransplantatie

The rat model of orthotopic liver transplantation (OLT) is essential for transplant research. It is a very sophisticated animal model and requires a steep ...

A Pre-Clinical Porcine Model of Orthotopic Heart Transplantation

Een preklinisch varkens model van Orthotopic harttransplantatie

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart ...

Reduced Complications after Arterial Reconnection in a Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation

Verminderde complicaties na arteriële heraansluiting in een ratmodel van orthotopische levertransplantatie

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation ...

Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry

Orthotopische nier auto-transplantatie in een varkensmodel met behulp van 24 uur orgaanbehoud en continue telemetrie

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for ...

Robot-Assisted Kidney Transplantation

Robot-geassisteerde niertransplantatie

This paper describes robot-assisted kidney transplantation (RAKT) from a living donor. The robot is docked between the parted legs of the patient, placed ...