Name: orthotopic rat kidney transplantation: a novel and simplified surgical approach
Uploaded: 2019-05-07T14:00:00
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Questo lavoro è stato finanziato da un generoso dono della tenuta di famiglia Bombeck.

Lewis (RT11) e Dark Agouti (da) (RT1Aa) ratti sono stati acquistati da venditori commerciali (vedere la tabella dei materiali). Questi ceppi completamente non corrispondenti a MHC sono spesso usati per studiare il rigetto acuto dell'alloinnesto renale. Tutti gli animali sono stati alloggiati e mantenuti secondo le linee guida nazionali degli istituti di salute (NIH) in una struttura specifica priva di agenti patogeni presso la Johns Hopkins University. Tutte le procedure sono state ...

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	<li>Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actively+acquired+tolerance+of+foreign+cells.">Actively acquired tolerance of foreign cells.</a> Nature. 172 (4379), 603-606 (1953).</li><li>Murray, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+transplantation+(skin,+kidney,+heart)+and+the+plastic+surgeon.">Organ transplantation (skin, kidney, heart) and the plastic surgeon.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 47 (5), 425-431 (1971).</li><li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+heart+transplantation+in+mice.">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. 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S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoprivileged+status+of+the+liver+is+controlled+by+Toll-like+receptor+3+signaling.">Immunoprivileged status of the liver is controlled by Toll-like receptor 3 signaling.</a> Journal of Clinical Investigation. 116 (9), 2456-2463 (2006).</li><li>Sun, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+host+progenitor+cells+in+rat+liver+transplants.">Recruitment of host progenitor cells in rat liver transplants.</a> Hepatology. 49 (2), 587-597 (2009).</li><li>Orlando, G., Soker, S., Wood, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Operational+tolerance+after+liver+transplantation.">Operational tolerance after liver transplantation.</a> Journal of Hepatolgy. 50 (6), 1247-1257 (2009).</li><li>Lodhi, S. 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J., Crudop, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+transplantation+in+inbred+rats.">Kidney transplantation in inbred rats.</a> American Journal of Surgery. 125 (5), 551-553 (1973).</li><li>D'Silva, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+kidney+transplantation+update+with+special+reference+to+vesical+calculi.">Rat kidney transplantation update with special reference to vesical calculi.</a> Microsurgery. 11 (2), 169-176 (1990).</li><li>Yin, M., Booster, M. H., Bogaard, A. E. J. M., Kootstra, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+technique+to+harvest+two+kidneys+from+one+donor+rat+for+transplantation.">A simple technique to harvest two kidneys from one donor rat for transplantation.</a> Lab Animal. 28 (4), 387-390 (1994).</li><li>Lopez-Neblina, F., Toledo-Pereyra, L. H., Suzuki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrarapid+orthotopic+technique+for+renal+transplantation+in+the+rat.">Ultrarapid orthotopic technique for renal transplantation in the rat.</a> Microsurgery. 15 (4), 274-278 (1994).</li><li>Blom, D., Orloff, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+more+versatile+and+reliable+method+for+renal+transplantation+in+the+rat.">A more versatile and reliable method for renal transplantation in the rat.</a> Microsurgery. 18 (4), 267-269 (1998).</li><li>Engelbrecht, G., Kahn, D., Duminy, F., Hickman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+rapid+technique+for+renal+transplantation+in+the+rat.">New rapid technique for renal transplantation in the rat.</a> Microsurgery. 13 (6), 340-344 (1992).</li><li>Kline, R., Churchill, M., Churchill, P., Bidani, A., Schwartz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+osmolality-low+pH+flush+solutions+improve+renal+transplant+function+in+rats.">High osmolality-low pH flush solutions improve renal transplant function in rats.</a> Urology Research. 19 (2), 81-86 (1991).</li><li>Fray, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+by+which+renin+secretion+from+perfused+rat+kidneys+is+stimulated+by+isoprenaline+and+inhibited+by+high+perfusion+pressure.">Mechanism by which renin secretion from perfused rat kidneys is stimulated by isoprenaline and inhibited by high perfusion pressure.</a> The Journal of Physiology. 308, 1-13 (1980).</li><li>Fry, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+vascular+endothelial+changes+associated+with+increased+blood+velocity+gradients.">Acute vascular endothelial changes associated with increased blood velocity gradients.</a> Circulation Research. 22 (2), 165-197 (1968).</li><li>Pahlavan, P. S., Smallegange, C., Adams, M. A., Schumacher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+transplantation+procedures+in+rats:+assessments,+complications,+and+management.">Kidney transplantation procedures in rats: assessments, complications, and management.</a> Microsurgery. 26 (5), 404-411 (2006).</li><li>Savas, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+transplantation+in+the+rat--a+new+simple,+non-suture+technique.">Renal transplantation in the rat--a new simple, non-suture technique.</a> Urology Research. 13 (2), 91-93 (1985).</li><li>Fabre, J., Lim, S. H., Morris, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+transplantation+in+the+rat:+details+of+a+technique.">Renal transplantation in the rat: details of a technique.</a> The Austalian and New Zealand Journal of Surgery. 41 (1), 69-75 (1971).</li><li>Cameron, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chimeric+Allografts+Induced+by+Short-Term+Treatment+With+Stem+Cell+Mobilizing+Agents+Result+in+Long-Term+Kidney+Transplant+Survival+Without+Immunosuppression:+II,+Study+in+Miniature+Swine.">Chimeric Allografts Induced by Short-Term Treatment With Stem Cell Mobilizing Agents Result in Long-Term Kidney Transplant Survival Without Immunosuppression: II, Study in Miniature Swine.</a> American Journal of Transplantation. 16 (7), 2066-2076 (2016).</li></ol>

In questo manoscritto, descriviamo in dettaglio il metodo chirurgico per il KT ortotopico nei ratti, comprese tutte le attrezzature necessarie per eseguire questa procedura (Figura 5). Nel 1965, Fisher e Lee pubblicarono il primo rapporto sul KT in ratti, che divenne l'inizio di un emozionante campo investigativo18. Da allora, sono state introdotte molte modifiche per migliorare la riproducibilità di questo modello. Ha servito come un modello animale efficace per stu...

Storicamente, i primi studi di rigetto del trapianto sono stati eseguiti da Brent e Medawar utilizzando trapianti di pelle nei roditori1. Ben presto divenne chiaro che la pelle ha caratteristiche immunologiche distinte, rendendolo un organo altamente immunogenico che è diverso nel rigetto da altri organi solidi vascolarizzati2. Studi di ratto di rigetto di trapianto di organo solido sono abitualmente limitati a cuore, fegato, e trapianti di rene. Anche se ciascuno di questi organi è adatto a studiare il rigetto, ci sono vantaggi e svantaggi per ciascuno di essi. I trapianti cardiaci sono spesso trapiantati nell'addome e anastomosed all'aorta e alla vena cava, con il cuore nativo del ricevente in posizione3. Questo non ricrea le condizioni cliniche umane, anatomiche e fisiologiche. Inoltre, i cuori sono molto sensibili all'ischemia fredda e devono essere riperfuso preferenzialmente entro 1 h al fine di essere in grado di recuperare la loro funzione4. I trapianti di fegato sono generalmente considerati chirurgicamente più impegnativi e sensibili al tempo per eseguire. Dopo aver rimosso il fegato nativo, il fegato donatore deve essere impiantato e riperfuso entro 30 min come i destinatari non possono durare più a lungo senza un fegato funzionante5. L'arteria epatica, la vena del portale e soprattutto la ricostruzione del dotto biliare richiedono abilità chirurgiche raffinate. Oltre alle sfide chirurgiche, il fegato è noto per possedere proprietà tollerogeniche e roditori e gli esseri umani possono diventare operalmente tolleranti6,7,8. Il rene, a differenza degli organi di cui sopra, può essere trapiantato in modo ortotopico, è noto per essere un organo immunogeno con episodi di rigetto coerenti e riproducibili (se non immunosoppressi), e consente tempi prolungati di ischemia fredda di diversi Ore. Questo rende il trapianto di rene di ratto un modello ideale per studiare il rigetto e la tolleranza dell'alloinnesto.
Il trapianto di rene (KT) è la scelta preferita di trattamento per i pazienti con malattia renale allo stadio terminale. Negli ultimi decenni, i risultati di sopravvivenza a breve termine dopo KT sono migliorati drasticamente, ma i risultati di sopravvivenza a lungo termine sono stagnanti9. I regimi immunosoppressori convenzionali restano la terapia standard anti-rigetto. Tuttavia, l'uso cronico di terapie immunosoppressive provoca morbilità e mortalità significative, come nefrotossicità, diabete e neoplasie secondarie10,11,12. Nel lungo termine, il rigetto cronico di anticorpi e cellulari-mediati minaccia la sopravvivenza del trapianto, con limitate opzioni terapeutiche disponibili.
Un obiettivo importante nel trapianto è l'induzione della tolleranza al trapianto al fine di ovviare alla necessità di immunosoppressione cronica. Il modello di ratto KT è uno strumento robusto per indagare il processo di rigetto immunologico e per valutare nuovi approcci all'immunomodulazione e alla tolleranza al trapianto. Il ratto funge anche da modello adatto per lo studio di rigetto acuto e cronico di cellule e anticorpi mediati13,14,15,16,17. Questo modello chirurgico ha dimostrato di essere uno strumento affidabile, riproducibile e conveniente per studiare vari aspetti del rigetto e della tolleranza dell'alloinnesto. Viene spesso utilizzato per testare nuovi protocolli che inducano la tolleranza prima di intraprendere studi costosi e ingombranti su grandi animali. L'esecuzione di KT in ratti richiede un'ampia formazione chirurgica e competenze per raggiungere tassi di sopravvivenza di > 90%. In questo manoscritto e nel video didattico di accompagnamento, forniamo un contorno passo-passo per il KT ortotopico nel ratto, come eseguito con successo per molti anni presso la nostra istituzione.
Prima di iniziare qualsiasi procedura, la selezione del donatore e del destinatario è critica e dipende dalla natura dell'esperimento. Idealmente, i donatori e i riceventi dovrebbero pesare tra 220 – 260 g ed essere tra 8 – 12 settimane di età. Gli animali sotto 220 g hanno arterie di piccolo diametro, vene e ureteri, rendendo l'anastomosi nel ricevente particolarmente impegnativa. Una minore perdita di sangue può causare ipovolemia e portare alla morte in animali più piccoli. Animali più pesanti di 260 g mostrano più grasso intorno ai loro vasi, e l'isolamento della nave richiederà più tempo operativo e aumentare il tempo di ischemia fredda.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1012px;" width="1011">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Buprenorphine HCL</td>
			<td style="width:167px;">Reckitt Benckiser Healthcare UK</td>
			<td style="width:167px;">NDC12496-0757-5</td>
			<td style="width:463px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dissecting forceps, curved</td>
			<td style="width:167px;">Zhenbang, China</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td style="width:463px;">11cm Flat handle&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Heparin sodium injection USP</td>
			<td style="width:167px;">Sagent Pharmaceuticals&#160;</td>
			<td style="width:167px;">NDC25021-400-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro-forceps, straight, smooth</td>
			<td style="width:167px;">Jingzhong, China</td>
			<td style="width:167px;">WA3010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro needle holder</td>
			<td style="width:167px;">Jingzhong, China</td>
			<td style="width:167px;">WA2010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro vessel clamps</td>
			<td style="width:167px;">Jingzhong, China</td>
			<td style="width:167px;">WA40120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro spring sciccor 1</td>
			<td style="width:167px;">ROBOZ</td>
			<td style="width:167px;">RS-5620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro spring sciccor 2</td>
			<td style="width:167px;">F.S.T.</td>
			<td style="width:167px;">91501-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro spring sciccor 3</td>
			<td style="width:167px;">Zhenbang, China</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td style="width:463px;">8.5cm Vannas,curved</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Prograf (Tacrolimus/FK506)</td>
			<td style="width:167px;">Astellas</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Rats</td>
			<td style="width:167px;">Charles River &#38; Taconic Biosciences&#160;</td>
			<td style="width:167px;">LEW/Crl &#38; DA-M&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Shaver</td>
			<td style="width:167px;">Wahl</td>
			<td>79600-2101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Suture 4-0</td>
			<td style="width:167px;">Ethicon</td>
			<td style="width:167px;">J304H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Suture, 4-0&#160;</td>
			<td style="width:167px;">Ethicon</td>
			<td style="width:167px;">683G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Suture, 10-0&#160;</td>
			<td style="width:167px;">Ethicon</td>
			<td style="width:167px;">2820G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Syringes &#38; Needles</td>
			<td style="width:167px;">BD</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Thread, 8-0</td>
			<td style="width:167px;">Ashaway</td>
			<td style="width:167px;">75290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ureteral cuff</td>
			<td style="width:167px;">Microlumen</td>
			<td style="width:167px;">160-1</td>
			<td>Polymide Tubing, Diameter 0.41 mm&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Venous cuff</td>
			<td style="width:167px;">Intramedic BD</td>
			<td style="width:167px;">7441</td>
			<td>PE-200 Non-radiopaque polyethylene tubing ID: 1.4 mm, OD: 1.9 mm</td>
		</tr>
	</tbody>
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orthotopic rat kidney transplantation: a novel and simplified surgical approach

Il trapianto di rene offre un aumento dei tassi di sopravvivenza e una migliore qualità della vita per i pazienti con malattia renale allo stadio terminale, rispetto a qualsiasi tipo di terapia sostitutiva renale. Nel corso degli ultimi decenni, il modello di trapianto di rene di ratto è stato utilizzato per studiare i fenomeni immunologici di rigetto e tolleranza. Questo modello è diventato uno strumento indispensabile per testare nuovi farmaci e regimi immunomodulatori prima di procedere con costosi studi preclinici su animali di grandi dimensioni.
Questo protocollo fornisce una panoramica dettagliata su come eseguire in modo affidabile il trapianto di rene ortotopico nei ratti. Questo protocollo comprende tre passaggi distintivi che aumentano la probabilità di successo: perfusione del rene donatore da vampate attraverso la vena portale e l'uso di un sistema di polsino per anastomose le vene renali e ureteri, diminuendo così freddo e caldo tempi di ischemia. Utilizzando questa tecnica, abbiamo raggiunto tassi di sopravvivenza oltre i 6 mesi con la normale creatinina sierica negli animali con trapianti renali singenici o tollerante. A seconda dello scopo dello studio, questo modello può essere modificato da trattamenti pre-o post-trapianto per studiare il rigetto acuto, cronico, cellulare o mediato dagli anticorpi. Si tratta di un modello animale riproducibile, affidabile e conveniente per studiare diversi aspetti del trapianto di rene.

Abbiamo eseguito trapianti di rene singenici (n = 5) e allogenico (n = 5). Gli animali con un trapianto syngeneico hanno raggiunto la sopravvivenza a lungo termine senza alcun trattamento immunosoppressivo. Gli animali che hanno ricevuto un trapianto allogenico senza immunosoppressione hanno respinto il loro innesto e hanno ceduto all'insufficienza renale con una sopravvivenza mediana di 8 giorni (Figura 4a). La creatinina sierica media è aumentata modesta...

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Orthotopic Rat Kidney Transplantation: A Novel and Simplified Surgical Approach

Lo scopo di questo manoscritto e protocollo è quello di spiegare e dimostrare in dettaglio la procedura chirurgica del trapianto di rene ortotopico nei ratti. Questo metodo è semplificato per ottenere la corretta perfusione del rene donatore e abbreviare il tempo di riperfusione utilizzando la tecnica di anastomosi del polsino venoso e ureterale.

Trapianto di rene ortotopico ratto: un nuovo approccio chirurgico semplificato

Kidney transplantation offers increased survival rates and improved quality of life for patients with end-stage renal disease, as compared to any type of ...

Il nostro laboratorio alla Johns Hopkins ha eseguito piccoli trapianti di reni e fegato di animali con oltre due decenni di esperienza. Questo protocollo specifico delinea i passaggi critici necessari per eseguire con successo il trapianto di rene ortotopico nei ratti. Per aumentare la probabilità e la riproducibilità del successo, il nostro protocollo include tre passaggi distintivi, la perfusione del rene donatore attraverso la vena portale e l'uso di un sistema di polsini per anastomosi le vene renali e gli ureteri.A dimostrare questa procedura sarà il Dr.Le Qi, uno studente laureato nel nostro laboratorio. Per iniziare questa procedura, anestetizza il ratto donatore come descritto nel protocollo di testo. Posizionare il topo in posizione supina e immobilizzare gli arti con nastro adesivo sterile.Applicare un lubrificante per gli occhi e sterilizzare il campo chirurgico come descritto nel protocollo di testo. Prima della prima incisione, assicurarsi che il ratto sia adeguatamente anestetizzato controllando l'assenza del riflesso di prelievo del dito del dito. Usando le forbici, inizia facendo una grande incisione longitudinale della pelle e del muscolo dalla sinfisi pubica allo xifoide ed entra nella cavità peritoneale.Coprire l'intestino con una garza sterile umida e spostarlo sul lato laterale destro dell'addome esponendo l'aorta, la vena cava e il rene sinistro. Applicare un millilitro di soluzione salina preriscaldata con una siringa da un cc per mantenere l'intestino e gli organi addominali umidi e a temperatura normale. Applicare una seconda garza umida per coprire e mobilitare lo stomaco e la milza cranici sul rene.Quindi aggiungere una piccola garza umida per coprire il rene esposto. Utilizzare le forcelle di sezionatura microchirurgica per isolare e mobilitare l'arteria renale sinistra e la vena dal tessuto connettivo e l'una dall'altra. Ora isolare la vena renale sinistra cauterizzando la vena gonadale sinistra e isolare l'arteria renale sinistra cauterizzando l'arteria surrenale.Successivamente, mobilitare l'aorta e la vena cava superior e inferiori alla pedicella renale sinistra sezionando il tessuto connettivo con forcelle sezionanti. Dividere e mobilitare l'uretero dal tessuto connettivo utilizzando le forcelle sezionanti, quindi utilizzare micro forbici per fare un'incisione diagonale ad una lunghezza di circa due centimetri misurata dal bacino renale. Inserire un polsino in poliammide a metà dell'uretero e fissare il polsino posizionando un nodo con 8-0 sutura di seta.Mobilitare il rene sinistro separarlo dal grasso perineforico usando forcep sezionanti o micro forbici. Lasciare attaccata la capsula adiposa del rene e utilizzare quel sito per la manipolazione del rene. Ora somministrare 200 unità di eparina usando una siringa con un ago calibro 27 attraverso la vena del pene.Esercitare pressioni sul sito di iniezione con un batuffolo di cotone per almeno un minuto per prevenire il sanguinamento. Identificare la vena porta e la vena cava inferiore. Esponi la vena cava inferiore.Prepararsi a sciacquare il rene iniettando 50 millilitri di soluzione salina fredda mescolati con 500 unità di eparina nella vena del portale utilizzando un ago calibro 16. Prima dello sciacquone, tagliare la vena cava inferiore a livello infraepatico e tagliare la vena porta caudale nel sito di inserimento dell'ago per consentire al sangue di uscire dalla circolazione. Iniziare a sciacquare il rene infondendo gradualmente la soluzione salina.Osserva un cambiamento di colore del rene dal rosso scuro a un colore grigio o pallido uniforme. Dopo lo sciacquone, legare l'arteria renale e la vena prossimale all'aorta e alla vena cava. Posizionare il rene lavato in una piastra di Petri contenente salina fredda sul ghiaccio prima di rimuovere il corpo del donatore dal campo chirurgico.Una volta che il rene è in soluzione salina fredda, fissare e immobilizzare il manico del polsino della vena e tirare delicatamente la vena renale attraverso il polsino. Quindi fissare la vena renale sul polsino posizionando tre nodi usando 8-0 sutura di seta. Per iniziare la procedura ricevente, ripetere i passaggi dalla procedura del donatore fino alla somministrazione di eparina.Quindi posizionare due morsetti a microvessel atraumatici sull'arteria renale sinistra e sulla vena prossimale all'aorta e alla vena cava. Legare la vena renale ricevente prossimale all'ingresso del rene. Lavare la vena renale con soluzione salina eparinizzata per rimuovere tutto il sangue rimanente dal vaso.Far scorrere la vena renale legata sulla vena renale ammanettata precedentemente posizionata nel rene donatore. Quindi fissare la vena con un 8-0 sutura di seta. Mantenere lo stesso orientamento posizionale quando si fissa la vena renale sul polsino.Legare l'arteria renale prossimale all'ingresso del rene ricevente. Sciacquarlo con salina eparinizzata per rimuovere il sangue in eccesso nel vaso. Ora ligate l'uretro a livello del polo inferiore del rene sinistro.Mobilitare il rene dal grasso perinefrico e rimuovere il rene nativo. Eseguire un'anastomosi end-to-end dell'arteria renale con 8-10 suture interrotte utilizzando una sutura in nylon 10-0. Manovra l'arteria usando lo strato accidentale.Rimuovere i morsetti del vaso per riavviare la ri-perfusione del rene. Iniziare rimuovendo il morsetto sulla vena seguito dal morsetto sull'arteria. Utilizzare un batuffolo di cotone sterile per aggiungere pressione leggera a qualsiasi area di trasuda intorno alla regione dell'anastomosi.Pochi minuti dovrebbero essere sufficienti per ottenere un brevetto di anastomosi. Osservare brevemente il rene per valutare per un'adeguata perfusione. Immediatamente dopo la ri-perfusione, il rene dovrebbe cambiare colore e riacquistare gradualmente il suo colore rosso scuro naturale dopo pochi minuti.A volte si osserva una peristalisi visibile dell'uretro e della produzione di urina in loco. Finire inserendo la punta esposta del polsino ureterale nell'uretero ricevente e fissare l'ureter destinatario con un 8-0 cravatta di seta. Al fine di mantenere in posizione gli ureteri donatori e riceventi, legare le estremità di ciascun lato dell'uretero l'una all'altra.Opzionalmente, nefrectomizzare il rene destro legando il pedicolo renale con una sutura di seta 3-0. Rimuovere tutte le garze dalla cavità addominale e riportare tutti gli organi nella loro posizione naturale. Quindi spruzzare un millilitro di soluzione salina sull'intestino per mantenerli umidi.Chiudi l'addome usando una sutura assorbibile 4-0 sul muscolo retto e una sutura di seta 4-0 per chiudere lo strato della pelle in modo interrotto. Mettere l'animale in una gabbia pulita con accesso all'acqua e al cibo ad libitum e consentire il recupero su una pastiglia riscaldante a 37 gradi Celsius. Osservare il recupero per una o due ore prima di riportare l'animale nella struttura animale.Gli animali con un trapianto di rene sigeneico hanno raggiunto la sopravvivenza a lungo termine senza alcun trattamento immunosoppressivo. Al contrario, gli animali che hanno ricevuto un trapianto di rene allogeneico senza immunosoppressione hanno rifiutato il loro innesto e hanno ceduto all'insufficienza renale con una sopravvivenza mediana di otto giorni. La creatinina sierica media è aumentata modestamente nel gruppo sigeneico, mentre è aumentata di 14 volte nel gruppo allogeneico.Al momento dell'espianto, la visione macroscopica dell'allografo renale sigeneico non mostrava anomalie. Il colore renale e le strutture interne rimasero intatti. Al contrario, le allografie renali di animali respinti presentarono macchie emorragiche rosse con la distruzione delle strutture interne.Le macchie di ematossilina ed eosina di innesti sigeneici mostrate sottili anelli capillari glomerulari con un numero normale di cellule endoteliali e mesangiali. Le allografie rifiutate mostravano strutture glomerulari distrutte con segni di infiammazione e tubulite. La colorazione positiva cd8 è stata eseguita per confermare il rifiuto mediato della cella T.Mentre le allografie sigeneiche mostravano pochissime cellule T positive cd8, le allografie rifiutate mostravano un numero significativamente più elevato di cellule positive CD8 all'interno e intorno ai glomeruli e ai tubuli confermando il rifiuto mediato delle cellule T. Questo modello fornisce una visione significativa dei fenomeni immunologici di rifiuto, tolleranza e interazioni donatore-ospite aprendo la strada allo sviluppo di interventi clinici terapeutici nel trapianto di organi solidi.

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Trapianto ortotopico aortica: un modello di ratto per studiare lo sviluppo di vasculopatia cronica

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

Ricerca

Medicina

A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model

Un nuovo approccio chirurgico per somministrazione endotracheale di agenti bioattivi in ​​un modello murino fetale

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and ...

Surgical Procedures for a Rat Model of Partial Orthotopic Liver Transplantation with Hepatic Arterial Reconstruction

Procedure chirurgiche per un modello di Rat parziale trapianto di fegato con la ricostruzione arteriosa epatica

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats using a whole or partial graft is an indispensable experimental model for transplantation research, such as ...

Cardiopulmonary Bypass in a Mouse Model: A Novel Approach

Esclusione cardiopolmonare in un modello murino: un nuovo approccio

As prolonged cardiopulmonary bypass becomes more essential during cardiac interventions, an increasing clinical demand arises for procedure optimization ...

A Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation Using a Novel Magnetic Anastomosis Technique for Suprahepatic Vena Cava Reconstruction

Un modello del ratto di orthotopic del trapianto del fegato usando una tecnica novella dell'anastomosi magnetico per la ricostruzione della Vena Cava Suprahepatic

The rat model of orthotopic liver transplantation (OLT) is essential for transplant research. It is a very sophisticated animal model and requires a steep ...

A Pre-Clinical Porcine Model of Orthotopic Heart Transplantation

Un modello pre-clinico di trapianto di cuore ortotopico

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart ...

Reduced Complications after Arterial Reconnection in a Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation

Complicazioni ridotte dopo la riconnessione arteriosa in un modello di ratto di trapianto di fegato ortotopico

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation ...

Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry

Auto-trapianto di rene ortotopico in un modello suino utilizzando la conservazione degli organi 24 ore su 24 e la telemetria continua

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for ...

Robot-Assisted Kidney Transplantation

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This paper describes robot-assisted kidney transplantation (RAKT) from a living donor. The robot is docked between the parted legs of the patient, placed ...