Name: orthotopic rat kidney transplantation: a novel and simplified surgical approach
Uploaded: 2019-05-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Rat Kidney Transplantation: A Novel and Simplified Surgical Approach at JoVE.com

Dette arbeidet ble finansiert av en generøs gave fra Bombeck Family Estate.

Lewis (RT11) og Dark AGOUTI (da) (RT1Aa) rotter ble kjøpt fra kommersielle leverandører (se tabellen over materialer). Disse fullt MHC-feilaktige stammer blir ofte brukt til å studere akutt renal allograft avvisning. Alle dyrene ble plassert og vedlikeholdt i henhold til National Institutes of Health ' s (NIH) retningslinjer i en bestemt patogen-fritt anlegg ved Johns Hopkins University. Alle prosedyrer ble godkjent av den institusjonelle dyr omsorg og bruk komiteen.
<p class...

<ol>
	<li>Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actively+acquired+tolerance+of+foreign+cells.">Actively acquired tolerance of foreign cells.</a> Nature. 172 (4379), 603-606 (1953).</li><li>Murray, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+transplantation+(skin,+kidney,+heart)+and+the+plastic+surgeon.">Organ transplantation (skin, kidney, heart) and the plastic surgeon.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 47 (5), 425-431 (1971).</li><li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+heart+transplantation+in+mice.">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (6), e238 (2007).</li><li>Ruzza, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+heart+transplantation+in+rats:+improved+anesthetic+and+surgical+technique.">Heterotopic heart transplantation in rats: improved anesthetic and surgical technique.</a> Transplant Proceedings. 42 (9), 3828-3832 (2010).</li><li>Oldani, G., Lacotte, S., Morel, P., Mentha, G., Toso, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+liver+transplantation+in+rats.">Orthotopic liver transplantation in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e4143 (2012).</li><li>Lang, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoprivileged+status+of+the+liver+is+controlled+by+Toll-like+receptor+3+signaling.">Immunoprivileged status of the liver is controlled by Toll-like receptor 3 signaling.</a> Journal of Clinical Investigation. 116 (9), 2456-2463 (2006).</li><li>Sun, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+host+progenitor+cells+in+rat+liver+transplants.">Recruitment of host progenitor cells in rat liver transplants.</a> Hepatology. 49 (2), 587-597 (2009).</li><li>Orlando, G., Soker, S., Wood, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Operational+tolerance+after+liver+transplantation.">Operational tolerance after liver transplantation.</a> Journal of Hepatolgy. 50 (6), 1247-1257 (2009).</li><li>Lodhi, S. A., Lamb, K. E., Meier-Kriesche, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solid+organ+allograft+survival+improvement+in+the+United+States:+the+long-term+does+not+mirror+the+dramatic+short-term+success.">Solid organ allograft survival improvement in the United States: the long-term does not mirror the dramatic short-term success.</a> American Journal of Transplantation. 11 (6), 1226-1235 (2011).</li><li>Engels, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectrum+of+cancer+risk+among+US+solid+organ+transplant+recipients.">Spectrum of cancer risk among US solid organ transplant recipients.</a> Journal of the American Medical Association. 306 (17), 1891-1901 (2011).</li><li>Kasiske, B. L., Snyder, J. J., Gilbertson, D., Matas, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetes+mellitus+after+kidney+transplantation+in+the+United+States.">Diabetes mellitus after kidney transplantation in the United States.</a> American Journal of Transplantation. 3 (2), 178-185 (2003).</li><li>de Mattos, A. M., Olyaei, A. J., Bennett, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephrotoxicity+of+immunosuppressive+drugs:+long-term+consequences+and+challenges+for+the+future.">Nephrotoxicity of immunosuppressive drugs: long-term consequences and challenges for the future.</a> American Journal of Kidney Diseases. 35 (2), 333-346 (2000).</li><li>Hu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chimeric+Allografts+Induced+by+Short-Term+Treatment+With+Stem+Cell-Mobilizing+Agents+Result+in+Long-Term+Kidney+Transplant+Survival+Without+Immunosuppression:+A+Study+in+Rats.">Chimeric Allografts Induced by Short-Term Treatment With Stem Cell-Mobilizing Agents Result in Long-Term Kidney Transplant Survival Without Immunosuppression: A Study in Rats.</a> American Journal of Transplantation. 16 (7), 2055-2065 (2016).</li><li>Shrestha, B., Haylor, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+rat+models+of+chronic+allograft+nephropathy:+a+review.">Experimental rat models of chronic allograft nephropathy: a review.</a> International Journal of Nephrology and Renovascular Disease. 7, 315-322 (2014).</li><li>Fu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+transplantation+of+kidney+allografts+in+sensitized+rats+after+syngeneic+hematopoietic+stem+cell+transplantation+and+fludarabine.">Successful transplantation of kidney allografts in sensitized rats after syngeneic hematopoietic stem cell transplantation and fludarabine.</a> American Journal of Transplantation. 14 (10), 2375-2383 (2014).</li><li>Grau, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+Complex-Type+Deposits+in+the+Fischer-344+to+Lewis+Rat+Model+of+Renal+Transplantation+and+a+Subset+of+Human+Transplant+Glomerulopathy.">Immune Complex-Type Deposits in the Fischer-344 to Lewis Rat Model of Renal Transplantation and a Subset of Human Transplant Glomerulopathy.</a> Transplantation. 100 (5), 1004-1014 (2016).</li><li>Vogelbacher, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bortezomib+and+sirolimus+inhibit+the+chronic+active+antibody-mediated+rejection+in+experimental+renal+transplantation+in+the+rat.">Bortezomib and sirolimus inhibit the chronic active antibody-mediated rejection in experimental renal transplantation in the rat.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 25 (11), 3764-3773 (2010).</li><li>Fisher, B., Lee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvascular+surgical+techniques+in+research,+with+special+reference+to+renal+transplantation+in+the+rat.">Microvascular surgical techniques in research, with special reference to renal transplantation in the rat.</a> Surgery. 58 (5), 904-914 (1965).</li><li>Mahabir, R. N., Guttmann, R. D., Lindquist, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+transplantation+in+the+inbred+rat.+X.+A+model+of+"weak+histoincompatibility"+by+major+locus+matching.">Renal transplantation in the inbred rat. X. A model of "weak histoincompatibility" by major locus matching.</a> Transplantation. 8 (4), 369-378 (1969).</li><li>Wang, J. J., Hockenheimer, S., Bickerstaff, A. A., Hadley, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+renal+transplantation+procedure.">Murine renal transplantation procedure.</a> Journal of Visualized Experiments. (29), e1150 (2009).</li><li>Bickerstaff, A. A., Wang, J. J., Pelletier, R. P., Orosz, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+renal+allografts:+spontaneous+acceptance+is+associated+with+regulated+T+cell-mediated+immunity.">Murine renal allografts: spontaneous acceptance is associated with regulated T cell-mediated immunity.</a> Journal of Immunology. 167 (9), 4821-4827 (2001).</li><li>Silber, S. J., Crudop, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+transplantation+in+inbred+rats.">Kidney transplantation in inbred rats.</a> American Journal of Surgery. 125 (5), 551-553 (1973).</li><li>D'Silva, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+kidney+transplantation+update+with+special+reference+to+vesical+calculi.">Rat kidney transplantation update with special reference to vesical calculi.</a> Microsurgery. 11 (2), 169-176 (1990).</li><li>Yin, M., Booster, M. H., Bogaard, A. E. J. M., Kootstra, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+technique+to+harvest+two+kidneys+from+one+donor+rat+for+transplantation.">A simple technique to harvest two kidneys from one donor rat for transplantation.</a> Lab Animal. 28 (4), 387-390 (1994).</li><li>Lopez-Neblina, F., Toledo-Pereyra, L. H., Suzuki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrarapid+orthotopic+technique+for+renal+transplantation+in+the+rat.">Ultrarapid orthotopic technique for renal transplantation in the rat.</a> Microsurgery. 15 (4), 274-278 (1994).</li><li>Blom, D., Orloff, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+more+versatile+and+reliable+method+for+renal+transplantation+in+the+rat.">A more versatile and reliable method for renal transplantation in the rat.</a> Microsurgery. 18 (4), 267-269 (1998).</li><li>Engelbrecht, G., Kahn, D., Duminy, F., Hickman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+rapid+technique+for+renal+transplantation+in+the+rat.">New rapid technique for renal transplantation in the rat.</a> Microsurgery. 13 (6), 340-344 (1992).</li><li>Kline, R., Churchill, M., Churchill, P., Bidani, A., Schwartz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+osmolality-low+pH+flush+solutions+improve+renal+transplant+function+in+rats.">High osmolality-low pH flush solutions improve renal transplant function in rats.</a> Urology Research. 19 (2), 81-86 (1991).</li><li>Fray, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+by+which+renin+secretion+from+perfused+rat+kidneys+is+stimulated+by+isoprenaline+and+inhibited+by+high+perfusion+pressure.">Mechanism by which renin secretion from perfused rat kidneys is stimulated by isoprenaline and inhibited by high perfusion pressure.</a> The Journal of Physiology. 308, 1-13 (1980).</li><li>Fry, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+vascular+endothelial+changes+associated+with+increased+blood+velocity+gradients.">Acute vascular endothelial changes associated with increased blood velocity gradients.</a> Circulation Research. 22 (2), 165-197 (1968).</li><li>Pahlavan, P. S., Smallegange, C., Adams, M. A., Schumacher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+transplantation+procedures+in+rats:+assessments,+complications,+and+management.">Kidney transplantation procedures in rats: assessments, complications, and management.</a> Microsurgery. 26 (5), 404-411 (2006).</li><li>Savas, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+transplantation+in+the+rat--a+new+simple,+non-suture+technique.">Renal transplantation in the rat--a new simple, non-suture technique.</a> Urology Research. 13 (2), 91-93 (1985).</li><li>Fabre, J., Lim, S. H., Morris, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+transplantation+in+the+rat:+details+of+a+technique.">Renal transplantation in the rat: details of a technique.</a> The Austalian and New Zealand Journal of Surgery. 41 (1), 69-75 (1971).</li><li>Cameron, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chimeric+Allografts+Induced+by+Short-Term+Treatment+With+Stem+Cell+Mobilizing+Agents+Result+in+Long-Term+Kidney+Transplant+Survival+Without+Immunosuppression:+II,+Study+in+Miniature+Swine.">Chimeric Allografts Induced by Short-Term Treatment With Stem Cell Mobilizing Agents Result in Long-Term Kidney Transplant Survival Without Immunosuppression: II, Study in Miniature Swine.</a> American Journal of Transplantation. 16 (7), 2066-2076 (2016).</li></ol>

I dette manuskriptet beskriver vi den kirurgiske metoden for orthotopic KT i rotter i detalj, inkludert alt nødvendig utstyr som trengs for å utføre denne prosedyren (figur 5). I 1965 publiserte Fisher og Lee den første rapporten om KT-rotter, som ble starten på et spennende undersøkende felt18. Siden da har det blitt innført mange endringer for å forbedre reproduserbarheten til denne modellen. Det har fungert som en effektiv dyremodell for å studere iskemi-r...

Historisk ble den første transplantasjon avvisning studier utført av brent og Medawar bruker hud transplantasjon i gnagere1. Det ble snart klart at huden har distinkte immunologiske funksjoner, noe som gjør det til et svært immunogenic organ som er forskjellig i avvisning fra andre vascularized solide organer2. Rat studier av solid organ transplantasjon avvisning er fast begrenset til hjerte, lever og nyre transplantasjon. Selv om hver av disse organene er egnet til å studere avvisning, det er fordeler og ulemper til hver av dem. Hjertet transplantasjon er ofte transplantert inn i magen og endetarms til aorta og vena cava, med mottakerens eget hjerte på plass3. Dette betyr ikke gjenskape menneskelige kliniske, anatomiske og fysiologiske forhold. I tillegg hjerter er svært følsomme for kaldt iskemi og må reperfused fortrinnsvis innen 1 time for å kunne gjenopprette sin funksjon4. Leveren transplantasjon er generelt ansett for å være kirurgisk mer utfordrende og tid-følsom å utføre. Etter å ha fjernet den innfødte leveren, donor leveren må implantert og reperfused innen 30 min som mottakerne ikke kan vare lenger uten en fungerende lever5. Hepatic arterien, Portal vene, og spesielt galle duct gjenoppbygging krever raffinert kirurgiske ferdigheter. I tillegg til kirurgiske utfordringer, leveren er kjent for å ha tolerogenic egenskaper og gnagere og mennesker kan bli operativt tolerant6,7,8. Nyrene, i motsetning til de nevnte organene, kan være transplantert i en orthotopic mote, er kjent for å være en immunogenic organ med konsistent, reproduserbar avvisning episoder (hvis ikke aper), og gir mulighet for langvarig kalde iskemi tider av flere Timer. Dette gjør rotte nyrene transplantasjon en ideell modell for å studere allograft avvisning og toleranse.
Nyre transplantasjon (KT) er det foretrukne valget av behandling for pasienter med end-Stage nyresykdom. I løpet av de siste ti årene, kortsiktige overlevelse utfall etter KT har bedret seg dramatisk, men langsiktige overlevelse utfall er stillestående9. Konvensjonelle immunsuppressiv regimer forblir standard anti-avvisning terapi. Men kronisk bruk av immunsuppressiv terapier forårsaker betydelig sykelighet og dødelighet, slik som nefrotoksisitet, diabetes, og sekundær ondartet10,11,12. På lang sikt, kronisk antistoff-og cellulær-mediert avvisning truer pode overlevelse, med begrensede terapeutiske alternativer tilgjengelig.
Et viktig mål i transplantasjon er induksjon av transplantasjon toleranse for å obviate behovet for kroniske immunsuppresjon. The Rat KT-modellen er et robust verktøy for å undersøke immunologiske avvisning prosessen og for å evaluere nye tilnærminger til immunomodulation og transplantasjon toleranse. Rotta fungerer også som en passende modell for å studere akutt og kronisk celle-og antistoff-mediert avvisning13, 14,15,16,17. Denne kirurgiske modellen har vist seg å være en pålitelig, reproduserbar og kostnadseffektiv verktøy for å studere ulike aspekter ved allograft avvisning og toleranse. Det er ofte brukt til å teste romanen toleranse-inducing protokoller før foretaket dyre og tungvint store dyr studier. Utføre KT i rotter krever omfattende kirurgisk trening og ekspertise for å nå overlevelse på > 90%. I dette manuskriptet og i den med følgende instruksjonsvideoen, gir vi en trinnvis oversikt for orthotopic KT i rotte, som vellykket utført i mange år på vår institusjon.
Før du starter en prosedyre, er donor-og mottaker valg kritisk og avhenger av typen eksperiment. Ideelt sett bør donorer og mottakere veie mellom 220 – 260 g og være mellom 8 – 12 ukers alder. Dyr under 220 g har liten diameter arterier, årer, og urinlederne, noe som gjør anastomose i mottakeren spesielt utfordrende. Mindre blodtap kan forårsake hypovolemi og føre til død i mindre dyr. Dyr tyngre enn 260 g vise mer fett rundt sine fartøy, og fartøyet isolasjon vil kreve mer operative tid og øke kulden iskemi tid.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1012px;" width="1011">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Buprenorphine HCL</td>
			<td style="width:167px;">Reckitt Benckiser Healthcare UK</td>
			<td style="width:167px;">NDC12496-0757-5</td>
			<td style="width:463px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dissecting forceps, curved</td>
			<td style="width:167px;">Zhenbang, China</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td style="width:463px;">11cm Flat handle&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Heparin sodium injection USP</td>
			<td style="width:167px;">Sagent Pharmaceuticals&#160;</td>
			<td style="width:167px;">NDC25021-400-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro-forceps, straight, smooth</td>
			<td style="width:167px;">Jingzhong, China</td>
			<td style="width:167px;">WA3010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro needle holder</td>
			<td style="width:167px;">Jingzhong, China</td>
			<td style="width:167px;">WA2010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro vessel clamps</td>
			<td style="width:167px;">Jingzhong, China</td>
			<td style="width:167px;">WA40120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro spring sciccor 1</td>
			<td style="width:167px;">ROBOZ</td>
			<td style="width:167px;">RS-5620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro spring sciccor 2</td>
			<td style="width:167px;">F.S.T.</td>
			<td style="width:167px;">91501-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro spring sciccor 3</td>
			<td style="width:167px;">Zhenbang, China</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td style="width:463px;">8.5cm Vannas,curved</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Prograf (Tacrolimus/FK506)</td>
			<td style="width:167px;">Astellas</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Rats</td>
			<td style="width:167px;">Charles River &#38; Taconic Biosciences&#160;</td>
			<td style="width:167px;">LEW/Crl &#38; DA-M&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Shaver</td>
			<td style="width:167px;">Wahl</td>
			<td>79600-2101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Suture 4-0</td>
			<td style="width:167px;">Ethicon</td>
			<td style="width:167px;">J304H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Suture, 4-0&#160;</td>
			<td style="width:167px;">Ethicon</td>
			<td style="width:167px;">683G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Suture, 10-0&#160;</td>
			<td style="width:167px;">Ethicon</td>
			<td style="width:167px;">2820G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Syringes &#38; Needles</td>
			<td style="width:167px;">BD</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Thread, 8-0</td>
			<td style="width:167px;">Ashaway</td>
			<td style="width:167px;">75290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ureteral cuff</td>
			<td style="width:167px;">Microlumen</td>
			<td style="width:167px;">160-1</td>
			<td>Polymide Tubing, Diameter 0.41 mm&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Venous cuff</td>
			<td style="width:167px;">Intramedic BD</td>
			<td style="width:167px;">7441</td>
			<td>PE-200 Non-radiopaque polyethylene tubing ID: 1.4 mm, OD: 1.9 mm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

orthotopic rat kidney transplantation: a novel and simplified surgical approach

Nyre transplantasjon gir økt overlevelse og bedre livskvalitet for pasienter med end-stadium nyresykdom, sammenlignet med alle typer nyre erstatning terapi. I løpet av de siste ti årene har rotte nyre transplantasjon modellen blitt brukt til å studere immunologiske fenomener av avvisning og toleranse. Denne modellen har blitt et uunnværlig verktøy for å teste nye immunmodulerende legemidler og regimer før du fortsetter med dyre prekliniske store dyrestudier.
Denne protokollen gir en detaljert oversikt over hvordan du pålitelig utføre orthotopic nyre transplantasjon hos rotter. Denne protokollen inneholder tre karakteristiske skritt som øker sannsynligheten for å lykkes: å gjennomføre donor nyre ved å skylle gjennom portalen vene og bruk av et mansjett-system for å anastomose nyre årer og urinlederne, og dermed redusere kulde og varme iskemi ganger. Ved hjelp av denne teknikken, har vi oppnådd overlevelse utover 6 måneder med normal serum kreatinin i dyr med syngeneic eller tolerant nyre transplantasjon. Avhengig av formålet med studien, kan denne modellen endres ved pre-eller posttransplant behandlinger for å studere akutte, kroniske, cellulære eller antistoff-mediert avvisning. Det er en reproduserbar, pålitelig og kostnadseffektiv dyremodell for å studere ulike aspekter ved nyre transplantasjon.

Vi utførte syngeneic (n = 5) og allogene nyre transplantasjon (n = 5). Dyr med en syngeneic transplantasjon oppnådde lang tids overlevelse uten noen immunsuppressiv behandling. Dyr som fikk en allogene transplantasjon uten immunsuppresjon avviste sin pode og bukket under for nyresvikt med en median overlevelse på 8 dager (Figur 4a). Gjennomsnittlig serum kreatinin økt beskjedent i syngeneic gruppen mens den økte med 14-fold i allogene gruppen (0,5 mg/d...

Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Rat Kidney Transplantation: A Novel and Simplified Surgical Approach at JoVE.com

Orthotopic Rat Kidney Transplantation: A Novel and Simplified Surgical Approach

Formålet med dette manuskriptet og protokollen er å forklare og demonstrere i detalj den kirurgiske prosedyren for orthotopic nyre transplantasjon hos rotter. Denne metoden er forenklet for å oppnå riktig mengde donor nyre og forkorte reperfusion tid ved hjelp av venøs og urinleder cuff anastomose teknikk.

Orthotopic Rat nyre transplantasjon: en roman og forenklet kirurgisk tilnærming

Kidney transplantation offers increased survival rates and improved quality of life for patients with end-stage renal disease, as compared to any type of ...

Vårt laboratorium på Johns Hopkins har utført små dyr nyre og levertransplantasjon med over to tiår med erfaring. Denne spesifikke protokollen skisserer kritiske skritt som er nødvendige for å utføre ortotopisk nyretransplantasjon hos rotter. For å øke sannsynligheten og reproduserbarheten av suksess, inkluderer vår protokoll tre karakteristiske trinn, perfusjon av donornyren gjennom portalvenen og bruk av et mansjettsystem for å anastomose nyreårene og urin urinerne.Viser denne prosedyren vil være Dr.Le Qi, en utdannet student i vårt laboratorium. For å starte denne prosedyren, bedøve donorrotten som beskrevet i tekstprotokollen. Plasser rotten i liggende stilling og immobiliser lemmer med steril maskeringstape.Påfør et øyesmøremiddel og steriliser det kirurgiske feltet som beskrevet i tekstprotokollen. Før det første snittet må du kontrollere at rotten er tilstrekkelig bedøvet ved å sjekke fraværet av tåklemmeuttaksrefleksen. Ved hjelp av saks, start med å lage en stor langsgående midline hud og muskel snitt fra symfyse pubis til xiphoid og gå inn i bukhinnen.Dekk tarmen med en fuktig steril gasbind og flytt den til høyre lateral side av magen utsette aorta, vena cava, og venstre nyre. Påfør en milliliter forvarmet saltvann med en en cc sprøyte for å holde tarmene og bukorganene fuktige og ved normal temperatur. Påfør en annen fuktig gasbind for å dekke og mobilisere magen og milten kranial til nyrene.Tilsett deretter en liten fuktig gasbind for å dekke den eksponerte nyren. Bruk mikrokirurgiske dissekerings tang for å isolere og mobilisere venstre nyrearterie og vene fra bindevevet og hverandre. Isoler nå venstre nyrevene ved å cauterizing venstre gonadal vene og isolere venstre nyrearterie ved å cauterizing binyrearterien.Deretter mobiliserer aorta og vena cava overlegen og dårligere enn venstre nyre pedicle ved å dissekere bindevevet med dissekering tang. Del og mobiliser urineren fra bindevevet ved hjelp av dissekerings tang, og bruk deretter mikrosaks for å lage et diagonalt snitt i en lengde på omtrent to centimeter målt fra nyrebekkenet. Sett en polyamidmansjett halvveis inn i urineren og fest mansjetten ved å plassere en knute med 8-0 silke sutur.Mobiliser venstre nyre ved å skille den fra perinephric fett ved hjelp av dissekere tang eller mikro saks. La fettkapselen på nyrene være festet og bruk det stedet til håndtering av nyrene. Administrer nå 200 enheter heparin ved hjelp av en sprøyte med en 27 gauge nål gjennom penisvenen.Trykk injeksjonsstedet med en bomullspinne i minst ett minutt for å forhindre blødning. Identifiser portalvenen og dårligere vena cava. Utsett den dårligere vena cava.Forbered deg på å skylle nyrene ved å injisere 50 milliliter kald saltvann blandet med 500 enheter heparin i portalvenen ved hjelp av en 16 gauge nål. Før spyling, kutt den dårligere vena cava på infrahepatisk nivå og kutt portalvenen caudal på nåleinnsettingsstedet for å la blodet gå ut av sirkulasjonen. Begynn å skylle nyrene ved gradvis å infusere saltløsningen.Vær oppmerksom på en fargeendring av nyrene fra mørk rød til en jevn grå eller blek farge. Etter spyling, ligate nyrearterien og venen proksimal til aorta og vena cava. Legg den spylte nyren i en petriskål som inneholder kald saltvann på is før du fjerner donorens kropp fra det kirurgiske feltet.Når nyrene er i kald saltvann, fikse og immobilisere håndtaket på venen mansjett og forsiktig trekke nyrevenen gjennom mansjetten. Fest deretter nyrevenen over mansjetten ved å plassere tre knuter ved hjelp av 8-0 silke sutur. Hvis du vil starte mottakerprosedyren, gjentar du trinnene fra donorprosedyren opp til heparinadministrasjon.Plasser deretter to atraumatiske mikrovesselklemmer på venstre nyrearterie og vene proksimal til aorta og vena cava. Ligate mottakeren nyrevene proksimal til innløpet av nyrene. Skyll nyrevenen med heparinisert saltvann for å fjerne alt gjenværende blod ut av fartøyet.Skyv den ligatede nyrevenen over den håndjernerte nyrevenen som tidligere var plassert i donornyren. Fest deretter venen med en 8-0 silke sutur. Hold samme posisjonsorientering når du fester nyrevenen over mansjetten.Ligate nyrearterien proksimal til innløpet av mottakeren nyre. Skyll den med heparinisert saltvann for å fjerne overflødig blod i fartøyet. Nå ligate ureter på nivået av den nedre polen av venstre nyre.Mobiliser nyrene fra perinephric fett og fjern den innfødte nyren. Utfør en ende-til-ende anastomose av nyrearterien med 8-10 avbrutte suturer ved hjelp av en 10-0 nylon sutur. Manøvrer arterien ved hjelp av adventitiallaget.Fjern karklemmene for å re-initiere re-perfusjonen av nyrene. Start med å fjerne klemmen på venen etterfulgt av klemmen på arterien. Bruk en steril bomullspinne til å legge til lett trykk på alle osende områder rundt anastomoseområdet.Noen få minutter bør være tilstrekkelig til å oppnå en patentanastomose. Ta kort hensyn til nyrene for å vurdere for tilstrekkelig perfusjon. Umiddelbart etter re-perfusjon, bør nyrene endre farge og gradvis gjenvinne sin naturlige mørkerøde farge etter noen minutter.Synlig peristaltikk av urineren og urinproduksjonen på stedet observeres noen ganger. Avslutt med å sette den eksponerte spissen på ureteralmansjetten inn i mottakerens ureter og fest mottakerens ureter med en 8-0 silke slips. For å holde donor- og mottakeruretene på plass, bind av endene på hver urinside til hverandre.Eventuelt nephrectomize høyre nyre ved å binde av nyre pedicle med en 3-0 silke sutur. Fjern alle gasbind fra bukhulen og returner alle organene til sin naturlige stilling. Deretter spruter du en milliliter saltvann over tarmene for å holde dem fuktige.Lukk magen ved hjelp av en 4-0 absorberbar sutur på rectus muskelen og en 4-0 silke sutur for å lukke hudlaget på en avbrutt måte. Plasser dyret i et rent bur med tilgang til ad libitum vann og mat og la det være mulig å komme seg på en 37 graders Celsius varmepute. Vær oppmerksom på utvinningen i en til to timer før du returnerer dyret tilbake til dyreanlegget.Dyr med syngeneisk nyretransplantasjon oppnådde langsiktig overlevelse uten immunsuppressiv behandling. Omvendt avviste dyr som fikk allogen nyretransplantasjon uten immunsuppresjon sin pode og bukket under for nyresvikt med en median overlevelse på åtte dager. Gjennomsnittlig serumkreatinin økte beskjedent i syngeneisk gruppe mens den økte med 14 ganger i den allogene gruppen.Ved ekslantering viste det makroskopiske synet på den syngeneiske nyre allografen ingen abnormiteter. Nyrefargen og de indre strukturene forble intakte. I motsetning presenterte nyre allografer av avviste dyr røde hemorragiske flekker med ødeleggelsen av de indre strukturene.Hematoksylin og Eosin flekker av syngeneic grafts vist tynne glomerulære kapillære løkker med normalt antall endotel- og mesangiale celler. Avviste allografer viste ødelagte glomerulære strukturer med tegn på betennelse og tubulitt. CD8 positiv farging ble utført for å bekrefte T-celle mediert avvisning.Mens syngeneiske allografer viste svært få CD8 positive T-celler, viste de avviste allografene et betydelig høyere antall CD8-positive celler i og rundt glomeruli og tubuli som bekrefter T-cellemediert avvisning. Denne modellen gir betydelig innsikt i immunologiske fenomener av avvisning, toleranse og donor-vert interaksjoner banet vei for utvikling av terapeutiske kliniske intervensjoner i solid organtransplantasjon.

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and ...

Surgical Procedures for a Rat Model of Partial Orthotopic Liver Transplantation with Hepatic Arterial Reconstruction

Kirurgiske prosedyrer for en rotte modell av delvis Orthotopic levertransplantasjon med nedsatt arteriell Reconstruction

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats using a whole or partial graft is an indispensable experimental model for transplantation research, such as ...

Cardiopulmonary Bypass in a Mouse Model: A Novel Approach

Hjerte Bypass i en musemodell: en ny tilnærming

As prolonged cardiopulmonary bypass becomes more essential during cardiac interventions, an increasing clinical demand arises for procedure optimization ...

A Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation Using a Novel Magnetic Anastomosis Technique for Suprahepatic Vena Cava Reconstruction

En rotte modell av Orthotopic levertransplantasjon bruker en roman magnetiske anastomose teknikk Suprahepatic Vena Cava gjenoppbygging

The rat model of orthotopic liver transplantation (OLT) is essential for transplant research. It is a very sophisticated animal model and requires a steep ...

A Pre-Clinical Porcine Model of Orthotopic Heart Transplantation

En pre-klinisk svin modell av Orthotopic hjertet transplantasjon

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart ...

Reduced Complications after Arterial Reconnection in a Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation

Reduserte komplikasjoner etter arteriell gjentilkobling i en rottemodell av ortotopisk levertransplantasjon

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation ...

Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry

Ortotopisk nyre auto-transplantasjon i en svin modell ved hjelp av 24 timer organ bevaring og kontinuerlig telemetri

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for ...

Robot-Assisted Kidney Transplantation

Robotassistert nyretransplantasjon

This paper describes robot-assisted kidney transplantation (RAKT) from a living donor. The robot is docked between the parted legs of the patient, placed ...