Name: orthotopic rat kidney transplantation: a novel and simplified surgical approach
Uploaded: 2019-05-07T14:00:00
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Este trabajo fue financiado por un generoso regalo de Bombeck Family Estate.

Lewis (RT11) y Dark Agouti (da) (RT1Aa) las ratas fueron compradas a vendedores comerciales (ver la tabla de materiales). Estas cepas totalmente no coincidentes de MHC se utilizan a menudo para estudiar el rechazo agudo de aloinjerto renal. Todos los animales fueron alojados y mantenidos de acuerdo con las pautas de los institutos nacionales de salud (NIH) en una instalación específica libre de patógenos en la Universidad Johns Hopkins. Todos los procedimientos fueron aprobados p...

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	<li>Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actively+acquired+tolerance+of+foreign+cells.">Actively acquired tolerance of foreign cells.</a> Nature. 172 (4379), 603-606 (1953).</li><li>Murray, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+transplantation+(skin,+kidney,+heart)+and+the+plastic+surgeon.">Organ transplantation (skin, kidney, heart) and the plastic surgeon.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 47 (5), 425-431 (1971).</li><li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+heart+transplantation+in+mice.">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (6), e238 (2007).</li><li>Ruzza, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+heart+transplantation+in+rats:+improved+anesthetic+and+surgical+technique.">Heterotopic heart transplantation in rats: improved anesthetic and surgical technique.</a> Transplant Proceedings. 42 (9), 3828-3832 (2010).</li><li>Oldani, G., Lacotte, S., Morel, P., Mentha, G., Toso, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+liver+transplantation+in+rats.">Orthotopic liver transplantation in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e4143 (2012).</li><li>Lang, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoprivileged+status+of+the+liver+is+controlled+by+Toll-like+receptor+3+signaling.">Immunoprivileged status of the liver is controlled by Toll-like receptor 3 signaling.</a> Journal of Clinical Investigation. 116 (9), 2456-2463 (2006).</li><li>Sun, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+host+progenitor+cells+in+rat+liver+transplants.">Recruitment of host progenitor cells in rat liver transplants.</a> Hepatology. 49 (2), 587-597 (2009).</li><li>Orlando, G., Soker, S., Wood, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Operational+tolerance+after+liver+transplantation.">Operational tolerance after liver transplantation.</a> Journal of Hepatolgy. 50 (6), 1247-1257 (2009).</li><li>Lodhi, S. A., Lamb, K. E., Meier-Kriesche, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solid+organ+allograft+survival+improvement+in+the+United+States:+the+long-term+does+not+mirror+the+dramatic+short-term+success.">Solid organ allograft survival improvement in the United States: the long-term does not mirror the dramatic short-term success.</a> American Journal of Transplantation. 11 (6), 1226-1235 (2011).</li><li>Engels, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectrum+of+cancer+risk+among+US+solid+organ+transplant+recipients.">Spectrum of cancer risk among US solid organ transplant recipients.</a> Journal of the American Medical Association. 306 (17), 1891-1901 (2011).</li><li>Kasiske, B. L., Snyder, J. J., Gilbertson, D., Matas, A. 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M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephrotoxicity+of+immunosuppressive+drugs:+long-term+consequences+and+challenges+for+the+future.">Nephrotoxicity of immunosuppressive drugs: long-term consequences and challenges for the future.</a> American Journal of Kidney Diseases. 35 (2), 333-346 (2000).</li><li>Hu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chimeric+Allografts+Induced+by+Short-Term+Treatment+With+Stem+Cell-Mobilizing+Agents+Result+in+Long-Term+Kidney+Transplant+Survival+Without+Immunosuppression:+A+Study+in+Rats.">Chimeric Allografts Induced by Short-Term Treatment With Stem Cell-Mobilizing Agents Result in Long-Term Kidney Transplant Survival Without Immunosuppression: A Study in Rats.</a> American Journal of Transplantation. 16 (7), 2055-2065 (2016).</li><li>Shrestha, B., Haylor, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+rat+models+of+chronic+allograft+nephropathy:+a+review.">Experimental rat models of chronic allograft nephropathy: a review.</a> International Journal of Nephrology and Renovascular Disease. 7, 315-322 (2014).</li><li>Fu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+transplantation+of+kidney+allografts+in+sensitized+rats+after+syngeneic+hematopoietic+stem+cell+transplantation+and+fludarabine.">Successful transplantation of kidney allografts in sensitized rats after syngeneic hematopoietic stem cell transplantation and fludarabine.</a> American Journal of Transplantation. 14 (10), 2375-2383 (2014).</li><li>Grau, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+Complex-Type+Deposits+in+the+Fischer-344+to+Lewis+Rat+Model+of+Renal+Transplantation+and+a+Subset+of+Human+Transplant+Glomerulopathy.">Immune Complex-Type Deposits in the Fischer-344 to Lewis Rat Model of Renal Transplantation and a Subset of Human Transplant Glomerulopathy.</a> Transplantation. 100 (5), 1004-1014 (2016).</li><li>Vogelbacher, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bortezomib+and+sirolimus+inhibit+the+chronic+active+antibody-mediated+rejection+in+experimental+renal+transplantation+in+the+rat.">Bortezomib and sirolimus inhibit the chronic active antibody-mediated rejection in experimental renal transplantation in the rat.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 25 (11), 3764-3773 (2010).</li><li>Fisher, B., Lee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvascular+surgical+techniques+in+research,+with+special+reference+to+renal+transplantation+in+the+rat.">Microvascular surgical techniques in research, with special reference to renal transplantation in the rat.</a> Surgery. 58 (5), 904-914 (1965).</li><li>Mahabir, R. N., Guttmann, R. D., Lindquist, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+transplantation+in+the+inbred+rat.+X.+A+model+of+"weak+histoincompatibility"+by+major+locus+matching.">Renal transplantation in the inbred rat. X. A model of "weak histoincompatibility" by major locus matching.</a> Transplantation. 8 (4), 369-378 (1969).</li><li>Wang, J. J., Hockenheimer, S., Bickerstaff, A. A., Hadley, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+renal+transplantation+procedure.">Murine renal transplantation procedure.</a> Journal of Visualized Experiments. (29), e1150 (2009).</li><li>Bickerstaff, A. A., Wang, J. J., Pelletier, R. P., Orosz, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+renal+allografts:+spontaneous+acceptance+is+associated+with+regulated+T+cell-mediated+immunity.">Murine renal allografts: spontaneous acceptance is associated with regulated T cell-mediated immunity.</a> Journal of Immunology. 167 (9), 4821-4827 (2001).</li><li>Silber, S. J., Crudop, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+transplantation+in+inbred+rats.">Kidney transplantation in inbred rats.</a> American Journal of Surgery. 125 (5), 551-553 (1973).</li><li>D'Silva, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+kidney+transplantation+update+with+special+reference+to+vesical+calculi.">Rat kidney transplantation update with special reference to vesical calculi.</a> Microsurgery. 11 (2), 169-176 (1990).</li><li>Yin, M., Booster, M. H., Bogaard, A. E. J. M., Kootstra, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+technique+to+harvest+two+kidneys+from+one+donor+rat+for+transplantation.">A simple technique to harvest two kidneys from one donor rat for transplantation.</a> Lab Animal. 28 (4), 387-390 (1994).</li><li>Lopez-Neblina, F., Toledo-Pereyra, L. H., Suzuki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrarapid+orthotopic+technique+for+renal+transplantation+in+the+rat.">Ultrarapid orthotopic technique for renal transplantation in the rat.</a> Microsurgery. 15 (4), 274-278 (1994).</li><li>Blom, D., Orloff, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+more+versatile+and+reliable+method+for+renal+transplantation+in+the+rat.">A more versatile and reliable method for renal transplantation in the rat.</a> Microsurgery. 18 (4), 267-269 (1998).</li><li>Engelbrecht, G., Kahn, D., Duminy, F., Hickman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+rapid+technique+for+renal+transplantation+in+the+rat.">New rapid technique for renal transplantation in the rat.</a> Microsurgery. 13 (6), 340-344 (1992).</li><li>Kline, R., Churchill, M., Churchill, P., Bidani, A., Schwartz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+osmolality-low+pH+flush+solutions+improve+renal+transplant+function+in+rats.">High osmolality-low pH flush solutions improve renal transplant function in rats.</a> Urology Research. 19 (2), 81-86 (1991).</li><li>Fray, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+by+which+renin+secretion+from+perfused+rat+kidneys+is+stimulated+by+isoprenaline+and+inhibited+by+high+perfusion+pressure.">Mechanism by which renin secretion from perfused rat kidneys is stimulated by isoprenaline and inhibited by high perfusion pressure.</a> The Journal of Physiology. 308, 1-13 (1980).</li><li>Fry, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+vascular+endothelial+changes+associated+with+increased+blood+velocity+gradients.">Acute vascular endothelial changes associated with increased blood velocity gradients.</a> Circulation Research. 22 (2), 165-197 (1968).</li><li>Pahlavan, P. S., Smallegange, C., Adams, M. A., Schumacher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+transplantation+procedures+in+rats:+assessments,+complications,+and+management.">Kidney transplantation procedures in rats: assessments, complications, and management.</a> Microsurgery. 26 (5), 404-411 (2006).</li><li>Savas, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+transplantation+in+the+rat--a+new+simple,+non-suture+technique.">Renal transplantation in the rat--a new simple, non-suture technique.</a> Urology Research. 13 (2), 91-93 (1985).</li><li>Fabre, J., Lim, S. H., Morris, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+transplantation+in+the+rat:+details+of+a+technique.">Renal transplantation in the rat: details of a technique.</a> The Austalian and New Zealand Journal of Surgery. 41 (1), 69-75 (1971).</li><li>Cameron, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chimeric+Allografts+Induced+by+Short-Term+Treatment+With+Stem+Cell+Mobilizing+Agents+Result+in+Long-Term+Kidney+Transplant+Survival+Without+Immunosuppression:+II,+Study+in+Miniature+Swine.">Chimeric Allografts Induced by Short-Term Treatment With Stem Cell Mobilizing Agents Result in Long-Term Kidney Transplant Survival Without Immunosuppression: II, Study in Miniature Swine.</a> American Journal of Transplantation. 16 (7), 2066-2076 (2016).</li></ol>

En este manuscrito, describimos el método quirúrgico para el ortotópico KT en ratas en detalle, incluyendo todo el equipo necesario para llevar a cabo este procedimiento (figura 5). En 1965, Fisher y Lee publicaron el primer informe sobre KT en ratas, que se convirtió en el inicio de un emocionante campo de investigación18. Desde entonces, se han introducido muchas modificaciones para mejorar la reproducibilidad de este modelo. Ha servido como un modelo animal ef...

Históricamente, los primeros estudios de rechazo de trasplantes fueron realizados por Brent y Medawar usando trasplantes de piel en roedores1. Pronto se hizo evidente que la piel tiene rasgos inmunológicos distintos, por lo que es un órgano altamente inmunogénico que es diferente en el rechazo de otros órganos sólidos vascularizados2. Los estudios de rata sobre el rechazo del trasplante de órganos sólidos se limitan habitualmente a los trasplantes de corazón, hígado y riñón. Aunque cada uno de estos órganos es adecuado para estudiar el rechazo, hay ventajas y desventajas para cada uno de ellos. Los trasplantes de corazón a menudo se trasplantan en el abdomen y se anastomizadas a la aorta y la vena cava, con el corazón nativo del receptor en el lugar3. Esto no recrea las condiciones clínicas, anatómicas y fisiológicas humanas. Además, los corazones son muy sensibles a la isquemia fría y tienen que ser reperfusionados preferentemente dentro de 1 h con el fin de poder recuperar su función4. Los trasplantes de hígado se consideran generalmente para ser quirúrgicamente más desafiantes y sensibles al tiempo para realizar. Después de extirpar el hígado nativo, el hígado del donante tiene que ser implantado y reperfusionado dentro de 30 minutos, ya que los receptores no pueden durar más tiempo sin un funcionamiento del hígado5. La arteria hepática, la vena porta, y especialmente la reconstrucción del conducto biliar requiere habilidades quirúrgicas refinadas. Además de los desafíos quirúrgicos, el hígado es conocido por poseer propiedades tolerogénicas y los roedores y los seres humanos pueden llegar a ser operativamente tolerantes6,7,8. El riñón, a diferencia de los órganos antes mencionados, puede ser trasplantado de forma ortotópica, se sabe que es un órgano inmunogénico con episodios de rechazo consistentes y reproducibles (si no inmunosuprimidos), y permite la isquemia prolongada en frío de varios Horas. Esto hace que el trasplante de riñón de rata sea un modelo ideal para estudiar el rechazo de aloinjertos y la tolerancia.
El trasplante de riñón (KT) es la elección preferida de tratamiento para pacientes con enfermedad renal terminal. En las últimas décadas, los resultados de supervivencia a corto plazo después de KT han mejorado drásticamente, pero los resultados de supervivencia a largo plazo están estancado9. Los regímenes inmunosupresores convencionales siguen siendo la terapia antirechazo estándar. Sin embargo, el uso crónico de terapias inmunosupresoras provoca una morbilidad y mortalidad significativas, como nefrotoxicidad, diabetes y tumores malignos secundarios10,11,12. A largo plazo, el rechazo crónico de anticuerpos y mediado por celulares amenaza la supervivencia del injerto, con opciones terapéuticas limitadas disponibles.
Un objetivo importante en el trasplante es la inducción de la tolerancia al trasplante con el fin de obviar la necesidad de inmunosupresión crónica. El modelo KT de rata es una herramienta robusta para investigar el proceso de rechazo inmunológico y evaluar nuevos enfoques para la inmunomodulación y la tolerancia al trasplante. La rata también sirve como un modelo adecuado para estudiar el rechazo agudo y crónico mediado por células y anticuerpos13,14,15,16,17. Este modelo quirúrgico ha demostrado ser una herramienta fiable, reproducible y rentable para estudiar diversos aspectos del rechazo y la tolerancia a los aloinjertos. A menudo se utiliza para probar nuevos protocolos inductores de tolerancia antes de emprender estudios costosos y engorrosos de animales grandes. La realización de KT en ratas requiere una amplia formación quirúrgica y experiencia para alcanzar tasas de supervivencia de > 90%. En este manuscrito y en el video instructivo que acompaña, proporcionamos un esquema paso a paso para el ortotópico KT en la rata, como se realizó con éxito durante muchos años en nuestra institución.
Antes de iniciar cualquier procedimiento, la selección de donantes y receptores es fundamental y depende de la naturaleza del experimento. Idealmente, los donantes y los beneficiarios deben pesar entre 220 – 260 g y tener entre 8 – 12 semanas de edad. Los animales de menos de 220 g tienen arterias, venas y uréteres de diámetro pequeño, lo que hace que la anastomosis en el recipiente sea particularmente desafiante. La pérdida de sangre leve puede causar hipovolemia y provocar la muerte en animales más pequeños. Los animales más pesados que 260 g muestran más grasa alrededor de sus vasos, y el aislamiento del recipiente requerirá más tiempo operativo y aumentar el tiempo de isquemia fría.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1012px;" width="1011">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Buprenorphine HCL</td>
			<td style="width:167px;">Reckitt Benckiser Healthcare UK</td>
			<td style="width:167px;">NDC12496-0757-5</td>
			<td style="width:463px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dissecting forceps, curved</td>
			<td style="width:167px;">Zhenbang, China</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td style="width:463px;">11cm Flat handle&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Heparin sodium injection USP</td>
			<td style="width:167px;">Sagent Pharmaceuticals&#160;</td>
			<td style="width:167px;">NDC25021-400-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro-forceps, straight, smooth</td>
			<td style="width:167px;">Jingzhong, China</td>
			<td style="width:167px;">WA3010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro needle holder</td>
			<td style="width:167px;">Jingzhong, China</td>
			<td style="width:167px;">WA2010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro vessel clamps</td>
			<td style="width:167px;">Jingzhong, China</td>
			<td style="width:167px;">WA40120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro spring sciccor 1</td>
			<td style="width:167px;">ROBOZ</td>
			<td style="width:167px;">RS-5620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro spring sciccor 2</td>
			<td style="width:167px;">F.S.T.</td>
			<td style="width:167px;">91501-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro spring sciccor 3</td>
			<td style="width:167px;">Zhenbang, China</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td style="width:463px;">8.5cm Vannas,curved</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Prograf (Tacrolimus/FK506)</td>
			<td style="width:167px;">Astellas</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Rats</td>
			<td style="width:167px;">Charles River &#38; Taconic Biosciences&#160;</td>
			<td style="width:167px;">LEW/Crl &#38; DA-M&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Shaver</td>
			<td style="width:167px;">Wahl</td>
			<td>79600-2101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Suture 4-0</td>
			<td style="width:167px;">Ethicon</td>
			<td style="width:167px;">J304H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Suture, 4-0&#160;</td>
			<td style="width:167px;">Ethicon</td>
			<td style="width:167px;">683G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Suture, 10-0&#160;</td>
			<td style="width:167px;">Ethicon</td>
			<td style="width:167px;">2820G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Syringes &#38; Needles</td>
			<td style="width:167px;">BD</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Thread, 8-0</td>
			<td style="width:167px;">Ashaway</td>
			<td style="width:167px;">75290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ureteral cuff</td>
			<td style="width:167px;">Microlumen</td>
			<td style="width:167px;">160-1</td>
			<td>Polymide Tubing, Diameter 0.41 mm&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Venous cuff</td>
			<td style="width:167px;">Intramedic BD</td>
			<td style="width:167px;">7441</td>
			<td>PE-200 Non-radiopaque polyethylene tubing ID: 1.4 mm, OD: 1.9 mm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

orthotopic rat kidney transplantation: a novel and simplified surgical approach

El trasplante de riñón ofrece mayores tasas de supervivencia y una mejor calidad de vida para los pacientes con enfermedad renal terminal, en comparación con cualquier tipo de terapia de reemplazo renal. En las últimas décadas, el modelo de trasplante de riñón de rata se ha utilizado para estudiar los fenómenos inmunológicos de rechazo y tolerancia. Este modelo se ha convertido en una herramienta indispensable para probar nuevos fármacos inmunomoduladores y regímenes antes de proceder con costosos estudios preclínicos de animales grandes.
Este protocolo proporciona una descripción detallada de cómo realizar de forma fiable el trasplante de riñón ortotópico en ratas. Este protocolo incluye tres pasos distintivos que aumentan la probabilidad de éxito: la perfusión del riñón del donante mediante el lavado a través de la vena porta y el uso de un sistema de manguito para anastomozar las venas renales y los uréteres, disminuyendo así el frío y el calor tiempos de isquemia. Usando esta técnica, hemos logrado tasas de supervivencia más allá de 6 meses con creatinina sérica normal en animales con trasplantes de riñón singénicos o tolerantes. Según el objetivo del estudio, este modelo puede modificarse mediante tratamientos previos o posteriores al trasplante para estudiar el rechazo agudo, crónico, celular o mediado por anticuerpos. Es un modelo animal reproducible, fiable y rentable para estudiar diferentes aspectos del trasplante de riñón.

Realizamos trasplantes de riñón singénicos (n = 5) y alogénicos (n = 5). Los animales con un trasplante singénico lograron una supervivencia a largo plazo sin ningún tratamiento inmunosupresor. Los animales que recibieron un trasplante alogénico sin inmunosupresión rechazaron su injerto y sucumbió a la insuficiencia renal con una mediana de supervivencia de 8 días (figura 4a). La creatinina sérica media aumentó modestamente en el grupo singénic...

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Orthotopic Rat Kidney Transplantation: A Novel and Simplified Surgical Approach

El propósito de este manuscrito y el protocolo es explicar y demostrar en detalle el procedimiento quirúrgico de trasplante ortotópico de riñón en ratas. Este método se simplifica para lograr la correcta perfusión del riñón del donante y acortar el tiempo de reperfusión mediante el uso de la técnica de anastomosis del manguito venoso y ureteral.

Trasplante de riñón de rata ortotópica: un enfoque quirúrgico novedoso y simplificado

Kidney transplantation offers increased survival rates and improved quality of life for patients with end-stage renal disease, as compared to any type of ...

Nuestro laboratorio en Johns Hopkins ha estado realizando pequeños trasplantes de riñón e hígado de animales con más de dos décadas de experiencia. Este protocolo específico describe los pasos críticos que son necesarios para realizar con éxito el trasplante ortotópico de riñón en ratas. Para aumentar la probabilidad y reproducibilidad del éxito, nuestro protocolo incluye tres pasos distintivos, perfusión del riñón del donante a través de la vena porta y el uso de un sistema de manguito para anastomose las venas renales y uréteres.Demostrar este procedimiento será el Dr.Le Qi, un estudiante graduado en nuestro laboratorio. Para comenzar este procedimiento, anestesar la rata donante como se describe en el protocolo de texto. Coloque la rata en una posición supina e inmovilice las extremidades con cinta adhesiva estéril.Aplique un lubricante para los ojos y esterilice el campo quirúrgico como se describe en el protocolo de texto. Antes de la primera incisión, asegúrese de que la rata esté adecuadamente anestesiada comprobando la ausencia del reflejo de abstinencia de pellizco del dedo del dedo. Usando tijeras, comienza haciendo una gran incisión longitudinal de la línea media y el músculo desde la sínfisis pubis hasta el xifoide y entra en la cavidad peritoneal.Cubra el intestino con una gasa estéril húmeda y descúbrala hacia el lado lateral derecho del abdomen exponiendo la aorta, la vena cava y el riñón izquierdo. Aplicar un mililitro de solución salina precalentada con una jeringa de un cc para mantener los intestinos y los órganos abdominales húmedos y a una temperatura normal. Aplica una segunda gasa húmeda para cubrir y movilizar el estómago y el bazo craneal al riñón.Luego agrega una pequeña gasa húmeda para cubrir el riñón expuesto. Utilice fórceps diseccionador microquirúrgicos para aislar y movilizar la arteria renal izquierda y la vena del tejido conectivo y entre sí. Ahora aísle la vena renal izquierda cauterizando la vena gonadal izquierda y aísle la arteria renal izquierda cauterizando la arteria suprarrenal.Después de eso, movilizar la aorta y la vena cava superior e inferior al pediculo renal izquierdo diseccionando el tejido conectivo con fórceps diseccionantes. Divida y movilice el uréter del tejido conectivo usando fórceps diseccionados, luego use micro tijeras para hacer una incisión diagonal a una longitud de aproximadamente dos centímetros medida desde la pelvis renal. Inserte un brazalete de poliamida hasta la mitad en el uréter y fije el brazalete colocando un nudo con 8-0 sutura de seda.Movilizar el riñón izquierdo separándolo de la grasa perineférica usando fórceps diseccionantes o micro tijeras. Deje la cápsula adiposa del riñón unida y use ese sitio para manejar el riñón. Ahora administre 200 unidades de heparina utilizando una jeringa con una aguja de calibre 27 a través de la vena del pene.Presione el lugar de la inyección con un hisopo de algodón durante al menos un minuto para evitar el sangrado. Identificar la vena porta y la vena cava inferior. Exponer la vena cava inferior.Prepárese para lavar el riñón inyectando 50 mililitros de solución salina fría mezcladas con 500 unidades de heparina en la vena porta utilizando una aguja de calibre 16. Antes de enjuagar, cortar la vena cava inferior a nivel infrahepático y cortar el caudal de la vena porta en el sitio de inserción de la aguja para permitir que la sangre salga de la circulación. Comience a lavar el riñón infundiendo gradualmente la solución salina.Observe un cambio de color del riñón de rojo oscuro a un color gris uniforme o pálido. Después del enrojecimiento, ligar la arteria renal y la vena proximal a la aorta y vena cava. Coloque el riñón enrojecido en un plato de Petri que contenga solución salina fría sobre hielo antes de extraer el cuerpo del donante del campo quirúrgico.Una vez que el riñón está en solución salina fría, fijar e inmovilizar el mango del manguito de la vena y tirar suavemente de la vena renal a través del manguito. A continuación, fije la vena renal sobre el brazalete colocando tres nudos usando 8-0 sutura de seda. Para comenzar el procedimiento de receptor, repita los pasos desde el procedimiento del donante hasta la administración de heparina.A continuación, coloque dos abrazaderas de microcuenta araumática en la arteria renal izquierda y la vena proximal en la aorta y la vena cava. Ligar la vena renal proximal receptora a la entrada del riñón. Enjuague la vena renal con solución salina heparinizada para eliminar toda la sangre restante del vaso.Deslice la vena renal ligada sobre la vena renal esposada previamente colocada en el riñón del donante. A continuación, asegure la vena con un 8-0 sutura de seda. Mantenga la misma orientación posicional al asegurar la vena renal sobre el manguito.Ligar la arteria renal proximal a la entrada del riñón receptor. Láveselo con solución salina heparinizada para eliminar cualquier exceso de sangre en el vaso. Ahora liga el uréter a nivel del polo inferior del riñón izquierdo.Movilizar el riñón de la grasa perineférica y eliminar el riñón nativo. Realizar una anastomosis de extremo a extremo de la arteria renal con 8-10 suturas interrumpidas usando una sutura de nylon 10-0. Maniobra la arteria usando la capa adventitial.Retire las abrazaderas del recipiente para volver a iniciar la reperfusión del riñón. Comience quitando la abrazadera en la vena seguida de la abrazadera en la arteria. Use un hisopo de algodón estéril para agregar presión ligera a las áreas que rezuman alrededor de la región de la anastomosis.Unos minutos deben ser suficientes para lograr una anastomosis de patente. Observe brevemente el riñón para evaluar la perfusión adecuada. Inmediatamente después de la reperfusión, el riñón debe cambiar de color y recuperar gradualmente su color rojo oscuro natural después de unos minutos.A veces se observa peristalsis visible del uréter y la producción de orina in situ. Termine insertando la punta expuesta del manguito ureteral en el uréter receptor y asegure el uréter receptor con un 8-0 corbata de seda. Para mantener el donante y los uréteres receptores en posición, ate los extremos de cada lado del uréter entre sí.Opcionalmente, nefrrectice el riñón derecho atando el pediculo renal con una sutura de seda 3-0. Retire todas las gasas de la cavidad abdominal y devuelva todos los órganos a su posición natural. Luego squirt un mililitro de solución salina sobre los intestinos para mantenerlos húmedos.Cierre el abdomen usando una sutura absorbible 4-0 en el músculo recto y una sutura de seda 4-0 para cerrar la capa de la piel de una manera interrumpida. Coloque al animal en una jaula limpia con acceso al agua y los alimentos ad libitum y permita la recuperación en una almohadilla de calentamiento de 37 grados Celsius. Observar la recuperación durante una o dos horas antes de devolver el animal a la instalación del animal.Los animales con un trasplante de riñón singéneo lograron una supervivencia a largo plazo sin ningún tratamiento inmunosupresor. Por el contrario, los animales que recibieron trasplante renal alogénico sin inmunosupresión rechazaron su injerto y sucumbieron a la insuficiencia renal con una mediana de supervivencia de ocho días. La creatinina sérica media aumentó modestamente en el grupo singéneo, mientras que aumentó 14 veces en el grupo alogénico.Tras la explantación, la visión macroscópica del alaógrafo renal singéneo no mostró ninguna anomalía. El color del riñón y las estructuras internas permanecieron intactos. Por el contrario, los alogramas renales de animales rechazados presentaron parches hemorrágicos rojos con la destrucción de las estructuras internas.Las manchas de hematoxilina y eosina de injertos singéneos mostraron bucles capilares glomerulares delgados con un número normal de células endoteliales y mesangiales. Los alógrafos rechazados mostraban estructuras glomerulares destruidas con signos de inflamación y tubulitis. Se realizó una tinción positiva cd8 para confirmar el rechazo mediado por la célula T.Mientras que los alografías singéneas mostraron muy pocas células T positivas CD8, los aloógrafos rechazados mostraron un número significativamente mayor de células positivas CD8 en y alrededor de los glomérulos y tubuli confirmando el rechazo mediado de la célula T. Este modelo proporciona una visión significativa de los fenómenos inmunológicos de rechazo, tolerancia e interacciones donante-huésped que allanan el camino para el desarrollo de intervenciones clínicas terapéuticas en el trasplante de órganos sólidos.

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Trasplante ortotópico aórtica: un modelo de rata para estudiar el desarrollo de la enfermedad vascular crónica

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

Investigación

Medicina

A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model

Un nuevo enfoque quirúrgico para la administración intratraqueal de agentes bioactivos en un modelo de ratón fetal

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and ...

Surgical Procedures for a Rat Model of Partial Orthotopic Liver Transplantation with Hepatic Arterial Reconstruction

Procedimientos Quirúrgicos para un modelo de rata de trasplante hepático ortotópico parcial con reconstrucción arterial hepática

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats using a whole or partial graft is an indispensable experimental model for transplantation research, such as ...

Cardiopulmonary Bypass in a Mouse Model: A Novel Approach

Puente cardiopulmonar en un modelo de ratón: un nuevo enfoque

As prolonged cardiopulmonary bypass becomes more essential during cardiac interventions, an increasing clinical demand arises for procedure optimization ...

A Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation Using a Novel Magnetic Anastomosis Technique for Suprahepatic Vena Cava Reconstruction

Un modelo de rata de Orthotopic trasplante del hígado usando una técnica de Anastomosis magnética novela para la reconstrucción de la Vena Cava suprahepática

The rat model of orthotopic liver transplantation (OLT) is essential for transplant research. It is a very sophisticated animal model and requires a steep ...

A Pre-Clinical Porcine Model of Orthotopic Heart Transplantation

Un modelo preclínico porcino de trasplante ortotópico de corazón

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart ...

Reduced Complications after Arterial Reconnection in a Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation

Reducción de las complicaciones después de la reconexión arterial en un modelo de rata de trasplante hepático ortotópico

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation ...

Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry

Autoaplano de riñón ortotópico en un modelo porcino utilizando 24 horas de preservación de órganos y telemetría continua

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for ...

Robot-Assisted Kidney Transplantation

Trasplante de riñón asistido por robot

This paper describes robot-assisted kidney transplantation (RAKT) from a living donor. The robot is docked between the parted legs of the patient, placed ...