Name: orthotopic rat kidney transplantation: a novel and simplified surgical approach
Uploaded: 2019-05-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Rat Kidney Transplantation: A Novel and Simplified Surgical Approach at JoVE.com

Detta arbete finansierades av en generös gåva från Bombeck Family Estate.

Lewis (RT11) och Dark agouti (DA) (RT1Aa) råttor köptes från kommersiella leverantörer (se tabellen över material). Dessa helt MHC-inkompatibla stammar används ofta för att studera akut renal transplantatavstötning. Alla djur var inhysta och underhållas enligt National Institutes of Health ' s (NIH) rikt linjer i en specifik patogen-fri anläggning vid Johns Hopkins University. Alla förfaranden godkändes av den institutionella djur vårds-och användnings kommittén.
...

<ol>
	<li>Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actively+acquired+tolerance+of+foreign+cells.">Actively acquired tolerance of foreign cells.</a> Nature. 172 (4379), 603-606 (1953).</li><li>Murray, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+transplantation+(skin,+kidney,+heart)+and+the+plastic+surgeon.">Organ transplantation (skin, kidney, heart) and the plastic surgeon.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 47 (5), 425-431 (1971).</li><li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+heart+transplantation+in+mice.">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (6), e238 (2007).</li><li>Ruzza, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+heart+transplantation+in+rats:+improved+anesthetic+and+surgical+technique.">Heterotopic heart transplantation in rats: improved anesthetic and surgical technique.</a> Transplant Proceedings. 42 (9), 3828-3832 (2010).</li><li>Oldani, G., Lacotte, S., Morel, P., Mentha, G., Toso, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+liver+transplantation+in+rats.">Orthotopic liver transplantation in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e4143 (2012).</li><li>Lang, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoprivileged+status+of+the+liver+is+controlled+by+Toll-like+receptor+3+signaling.">Immunoprivileged status of the liver is controlled by Toll-like receptor 3 signaling.</a> Journal of Clinical Investigation. 116 (9), 2456-2463 (2006).</li><li>Sun, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+host+progenitor+cells+in+rat+liver+transplants.">Recruitment of host progenitor cells in rat liver transplants.</a> Hepatology. 49 (2), 587-597 (2009).</li><li>Orlando, G., Soker, S., Wood, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Operational+tolerance+after+liver+transplantation.">Operational tolerance after liver transplantation.</a> Journal of Hepatolgy. 50 (6), 1247-1257 (2009).</li><li>Lodhi, S. A., Lamb, K. E., Meier-Kriesche, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solid+organ+allograft+survival+improvement+in+the+United+States:+the+long-term+does+not+mirror+the+dramatic+short-term+success.">Solid organ allograft survival improvement in the United States: the long-term does not mirror the dramatic short-term success.</a> American Journal of Transplantation. 11 (6), 1226-1235 (2011).</li><li>Engels, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectrum+of+cancer+risk+among+US+solid+organ+transplant+recipients.">Spectrum of cancer risk among US solid organ transplant recipients.</a> Journal of the American Medical Association. 306 (17), 1891-1901 (2011).</li><li>Kasiske, B. L., Snyder, J. J., Gilbertson, D., Matas, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetes+mellitus+after+kidney+transplantation+in+the+United+States.">Diabetes mellitus after kidney transplantation in the United States.</a> American Journal of Transplantation. 3 (2), 178-185 (2003).</li><li>de Mattos, A. M., Olyaei, A. J., Bennett, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephrotoxicity+of+immunosuppressive+drugs:+long-term+consequences+and+challenges+for+the+future.">Nephrotoxicity of immunosuppressive drugs: long-term consequences and challenges for the future.</a> American Journal of Kidney Diseases. 35 (2), 333-346 (2000).</li><li>Hu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chimeric+Allografts+Induced+by+Short-Term+Treatment+With+Stem+Cell-Mobilizing+Agents+Result+in+Long-Term+Kidney+Transplant+Survival+Without+Immunosuppression:+A+Study+in+Rats.">Chimeric Allografts Induced by Short-Term Treatment With Stem Cell-Mobilizing Agents Result in Long-Term Kidney Transplant Survival Without Immunosuppression: A Study in Rats.</a> American Journal of Transplantation. 16 (7), 2055-2065 (2016).</li><li>Shrestha, B., Haylor, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+rat+models+of+chronic+allograft+nephropathy:+a+review.">Experimental rat models of chronic allograft nephropathy: a review.</a> International Journal of Nephrology and Renovascular Disease. 7, 315-322 (2014).</li><li>Fu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+transplantation+of+kidney+allografts+in+sensitized+rats+after+syngeneic+hematopoietic+stem+cell+transplantation+and+fludarabine.">Successful transplantation of kidney allografts in sensitized rats after syngeneic hematopoietic stem cell transplantation and fludarabine.</a> American Journal of Transplantation. 14 (10), 2375-2383 (2014).</li><li>Grau, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+Complex-Type+Deposits+in+the+Fischer-344+to+Lewis+Rat+Model+of+Renal+Transplantation+and+a+Subset+of+Human+Transplant+Glomerulopathy.">Immune Complex-Type Deposits in the Fischer-344 to Lewis Rat Model of Renal Transplantation and a Subset of Human Transplant Glomerulopathy.</a> Transplantation. 100 (5), 1004-1014 (2016).</li><li>Vogelbacher, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bortezomib+and+sirolimus+inhibit+the+chronic+active+antibody-mediated+rejection+in+experimental+renal+transplantation+in+the+rat.">Bortezomib and sirolimus inhibit the chronic active antibody-mediated rejection in experimental renal transplantation in the rat.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 25 (11), 3764-3773 (2010).</li><li>Fisher, B., Lee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvascular+surgical+techniques+in+research,+with+special+reference+to+renal+transplantation+in+the+rat.">Microvascular surgical techniques in research, with special reference to renal transplantation in the rat.</a> Surgery. 58 (5), 904-914 (1965).</li><li>Mahabir, R. N., Guttmann, R. D., Lindquist, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+transplantation+in+the+inbred+rat.+X.+A+model+of+"weak+histoincompatibility"+by+major+locus+matching.">Renal transplantation in the inbred rat. X. A model of "weak histoincompatibility" by major locus matching.</a> Transplantation. 8 (4), 369-378 (1969).</li><li>Wang, J. J., Hockenheimer, S., Bickerstaff, A. A., Hadley, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+renal+transplantation+procedure.">Murine renal transplantation procedure.</a> Journal of Visualized Experiments. (29), e1150 (2009).</li><li>Bickerstaff, A. A., Wang, J. J., Pelletier, R. P., Orosz, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+renal+allografts:+spontaneous+acceptance+is+associated+with+regulated+T+cell-mediated+immunity.">Murine renal allografts: spontaneous acceptance is associated with regulated T cell-mediated immunity.</a> Journal of Immunology. 167 (9), 4821-4827 (2001).</li><li>Silber, S. J., Crudop, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+transplantation+in+inbred+rats.">Kidney transplantation in inbred rats.</a> American Journal of Surgery. 125 (5), 551-553 (1973).</li><li>D'Silva, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+kidney+transplantation+update+with+special+reference+to+vesical+calculi.">Rat kidney transplantation update with special reference to vesical calculi.</a> Microsurgery. 11 (2), 169-176 (1990).</li><li>Yin, M., Booster, M. H., Bogaard, A. E. J. M., Kootstra, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+technique+to+harvest+two+kidneys+from+one+donor+rat+for+transplantation.">A simple technique to harvest two kidneys from one donor rat for transplantation.</a> Lab Animal. 28 (4), 387-390 (1994).</li><li>Lopez-Neblina, F., Toledo-Pereyra, L. H., Suzuki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrarapid+orthotopic+technique+for+renal+transplantation+in+the+rat.">Ultrarapid orthotopic technique for renal transplantation in the rat.</a> Microsurgery. 15 (4), 274-278 (1994).</li><li>Blom, D., Orloff, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+more+versatile+and+reliable+method+for+renal+transplantation+in+the+rat.">A more versatile and reliable method for renal transplantation in the rat.</a> Microsurgery. 18 (4), 267-269 (1998).</li><li>Engelbrecht, G., Kahn, D., Duminy, F., Hickman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+rapid+technique+for+renal+transplantation+in+the+rat.">New rapid technique for renal transplantation in the rat.</a> Microsurgery. 13 (6), 340-344 (1992).</li><li>Kline, R., Churchill, M., Churchill, P., Bidani, A., Schwartz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+osmolality-low+pH+flush+solutions+improve+renal+transplant+function+in+rats.">High osmolality-low pH flush solutions improve renal transplant function in rats.</a> Urology Research. 19 (2), 81-86 (1991).</li><li>Fray, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+by+which+renin+secretion+from+perfused+rat+kidneys+is+stimulated+by+isoprenaline+and+inhibited+by+high+perfusion+pressure.">Mechanism by which renin secretion from perfused rat kidneys is stimulated by isoprenaline and inhibited by high perfusion pressure.</a> The Journal of Physiology. 308, 1-13 (1980).</li><li>Fry, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+vascular+endothelial+changes+associated+with+increased+blood+velocity+gradients.">Acute vascular endothelial changes associated with increased blood velocity gradients.</a> Circulation Research. 22 (2), 165-197 (1968).</li><li>Pahlavan, P. S., Smallegange, C., Adams, M. A., Schumacher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+transplantation+procedures+in+rats:+assessments,+complications,+and+management.">Kidney transplantation procedures in rats: assessments, complications, and management.</a> Microsurgery. 26 (5), 404-411 (2006).</li><li>Savas, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+transplantation+in+the+rat--a+new+simple,+non-suture+technique.">Renal transplantation in the rat--a new simple, non-suture technique.</a> Urology Research. 13 (2), 91-93 (1985).</li><li>Fabre, J., Lim, S. H., Morris, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+transplantation+in+the+rat:+details+of+a+technique.">Renal transplantation in the rat: details of a technique.</a> The Austalian and New Zealand Journal of Surgery. 41 (1), 69-75 (1971).</li><li>Cameron, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chimeric+Allografts+Induced+by+Short-Term+Treatment+With+Stem+Cell+Mobilizing+Agents+Result+in+Long-Term+Kidney+Transplant+Survival+Without+Immunosuppression:+II,+Study+in+Miniature+Swine.">Chimeric Allografts Induced by Short-Term Treatment With Stem Cell Mobilizing Agents Result in Long-Term Kidney Transplant Survival Without Immunosuppression: II, Study in Miniature Swine.</a> American Journal of Transplantation. 16 (7), 2066-2076 (2016).</li></ol>

I detta manuskript beskriver vi den kirurgiska metoden för ortotopisk KT hos råttor i detalj, inklusive all nödvändig utrustning som behövs för att utföra denna procedur (figur 5). I 1965, Fisher och Lee publicerade den första rapporten om KT i råttor, som blev början på en spännande undersökande fält18. Sedan dess har många ändringar införts för att förbättra reproducerbarheten för denna modell. Det har fungerat som en effektiv djur modell för a...

Historiskt sett utfördes de första transplantations avstötnings studierna av Brent och Medawar med hjälp av hud transplantationer på gnagare1. Det blev snart klart att huden har distinkta immunologiska egenskaper, vilket gör det till ett mycket immunogent organ som är annorlunda i avstötning från andra vaskulariserad solida organ2. Råtta studier av fast organ transplantation avslag är vanligt vis begränsad till hjärta, lever, och njure transplantationer. Även om var och en av dessa organ är lämplig för att studera avslag, det finns fördelar och nack delar med var och en av dem. Hjärt transplantationer transplanteras ofta in i buken och anastomoseras till aorta och Vena Cava, med mottagarens infödda hjärta på plats3. Detta återskapar inte humana kliniska, anatomiska och fysiologiska tillstånd. Dessutom, hjärtan är mycket känsliga för kall ischemi och måste reperfused företrädes vis inom 1 h för att kunna återvinna sin funktion4. Lever transplantationer anses i allmänhet vara kirurgiskt mer utmanande och tids känsliga att utföra. Efter avlägsnande av den infödda levern, donator levern måste implanteras och reperfused inom 30 min som mottagarna inte kan pågå längre utan en fungerande lever5. Den hepatiska artären, Portal ven, och särskilt Gall kanalen rekonstruktion kräver raffinerade kirurgiska färdigheter. Förutom de kirurgiska utmaningarna är levern känd för att inneha tolerogena egenskaper och gnagare och människor kan bli operationellt toleranta6,7,8. Njuren, till skillnad från de ovan nämnda organen, kan transplanteras i en ortotopisk mode, är känt för att vara ett immunogent organ med konsekventa, reproducerbara avstötnings episoder (om inte immunsupprimerade), och möjliggör långvarig kall ischemi tider av flera Timmar. Detta gör rått njure transplantation en idealisk modell för att studera transplantatavstötning avstötning och tolerans.
Njur transplantation (KT) är det föredragna valet av behandling för patienter med njur sjukdom i slutstadiet. Under de senaste decennierna, kortsiktiga överlevnad resultat efter KT har förbättrats dramatiskt, men långsiktiga överlevnad resultat är stagnerande9. Konventionella immunsuppressiva regimer förblir standard anti-avvisande behandling. Emellertid, kronisk användning av immunosuppressiva terapier orsakar betydande sjuklighet och dödlighet, såsom nefrotoxicitet, diabetes, och sekundära maligniteter10,11,12. På lång sikt, kronisk anti kropp-och cellulär-medierad avstötning hotar transplantat överlevnad, med begränsade terapeutiska alternativ tillgängliga.
Ett viktigt mål vid transplantation är induktion av transplantations tolerans för att undanröja behovet av kronisk immunsuppression. Den råtta kt modell är en robust redskap till undersöka den immunologisk avstötning förlopp och till bedöma ny närma sig till immun modulering och transplantations tolerans. Råttan fungerar också som en lämplig modell för att studera akuta och kroniska cell-och antikroppsmedierade avstötning13,14,15,16,17. Denna kirurgiska modell har visat sig vara ett tillförlitligt, reproducerbart och kostnads effektivt verktyg för att studera olika aspekter av transplantatavstötning och tolerans. Det används ofta för att testa nya tolerans-inducerande protokoll innan företaget dyra och besvärliga stora djur studier. Att utföra KT i råttor kräver omfattande kirurgisk träning och expertis för att nå överlevnads grad på > 90%. I detta manuskript och i medföljande instruktions video, ger vi en steg-för-steg disposition för ortotopisk KT i råtta, som framgångs rikt utförs i många år på vår institution.
Innan ett förfarande inleds är givar-och mottagar urvalet kritiskt och beror på försöks verksamhetens art. Helst bör donatorer och mottagare väga mellan 220 – 260 g och vara mellan 8 – 12 veckors ålder. Djur under 220 g har små-diameter artärer, vener, och ureters, vilket gör anastomosen i mottagaren särskilt utmanande. Mindre blod förlust kan orsaka hypovolemi och leda till döden hos mindre djur. Djur tyngre än 260 g Visa mer fett runt sina fartyg, och fartygets isolering kommer att kräva mer operativ tid och öka den kalla ischemi tiden.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1012px;" width="1011">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Buprenorphine HCL</td>
			<td style="width:167px;">Reckitt Benckiser Healthcare UK</td>
			<td style="width:167px;">NDC12496-0757-5</td>
			<td style="width:463px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dissecting forceps, curved</td>
			<td style="width:167px;">Zhenbang, China</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td style="width:463px;">11cm Flat handle&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Heparin sodium injection USP</td>
			<td style="width:167px;">Sagent Pharmaceuticals&#160;</td>
			<td style="width:167px;">NDC25021-400-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro-forceps, straight, smooth</td>
			<td style="width:167px;">Jingzhong, China</td>
			<td style="width:167px;">WA3010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro needle holder</td>
			<td style="width:167px;">Jingzhong, China</td>
			<td style="width:167px;">WA2010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro vessel clamps</td>
			<td style="width:167px;">Jingzhong, China</td>
			<td style="width:167px;">WA40120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro spring sciccor 1</td>
			<td style="width:167px;">ROBOZ</td>
			<td style="width:167px;">RS-5620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro spring sciccor 2</td>
			<td style="width:167px;">F.S.T.</td>
			<td style="width:167px;">91501-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro spring sciccor 3</td>
			<td style="width:167px;">Zhenbang, China</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td style="width:463px;">8.5cm Vannas,curved</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Prograf (Tacrolimus/FK506)</td>
			<td style="width:167px;">Astellas</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Rats</td>
			<td style="width:167px;">Charles River &#38; Taconic Biosciences&#160;</td>
			<td style="width:167px;">LEW/Crl &#38; DA-M&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Shaver</td>
			<td style="width:167px;">Wahl</td>
			<td>79600-2101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Suture 4-0</td>
			<td style="width:167px;">Ethicon</td>
			<td style="width:167px;">J304H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Suture, 4-0&#160;</td>
			<td style="width:167px;">Ethicon</td>
			<td style="width:167px;">683G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Suture, 10-0&#160;</td>
			<td style="width:167px;">Ethicon</td>
			<td style="width:167px;">2820G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Syringes &#38; Needles</td>
			<td style="width:167px;">BD</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Thread, 8-0</td>
			<td style="width:167px;">Ashaway</td>
			<td style="width:167px;">75290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ureteral cuff</td>
			<td style="width:167px;">Microlumen</td>
			<td style="width:167px;">160-1</td>
			<td>Polymide Tubing, Diameter 0.41 mm&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Venous cuff</td>
			<td style="width:167px;">Intramedic BD</td>
			<td style="width:167px;">7441</td>
			<td>PE-200 Non-radiopaque polyethylene tubing ID: 1.4 mm, OD: 1.9 mm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

orthotopic rat kidney transplantation: a novel and simplified surgical approach

Njur transplantation erbjuder ökad överlevnads grad och förbättrad livskvalitet för patienter med Terminal njur sjukdom, jämfört med någon typ av njur ersättnings behandling. Under de senaste decennierna, råtta njure transplantation modell har använts för att studera immunologiska fenomen avstötning och tolerans. Denna modell har blivit ett oumbärligt verktyg för att testa nya immunmodulerande läkemedel och regimer innan man går vidare med dyra prekliniska, stora djur studier.
Detta protokoll ger en detaljerad översikt över hur man tillförlitligt utföra ortotopisk njur transplantation hos råttor. Detta protokoll innehåller tre distinkta steg som ökar sannolikheten för framgång: per fusion av donatorns njure genom att spola genom portalen ven och användningen av en manschett system för att anastomose njurvener och ureters, vilket minskar kallt och varmt ischemi tider. Med denna teknik har vi uppnått överlevnads tal längre än 6 månader med normal serumkreatinin hos djur med syngena eller toleranta njur transplantationer. Beroende på syftet med studien, denna modell kan modifieras av pre-eller posttransplanterade behandlingar för att studera akut, kronisk, cellulär, eller anti kropp-medierad avslag. Det är en reproducerbar, pålitlig och kostnads effektiv djur modell för att studera olika aspekter av njur transplantation.

Vi utförde syngena (n = 5) och allogena njur transplantationer (n = 5). Djur med syngen transplantation uppnådde långsiktig överlevnad utan någon immunosuppressiv behandling. Djur som fick en allogen transplantation utan immunsuppression förkastade deras transplantat och dukade under till njur svikt med en median överlevnad på 8 dagar (figur 4a). Genomsnittligt serumkreatinin ökade blygsamt i den syngena gruppen medan det ökade med 14 gånger i de...

Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Rat Kidney Transplantation: A Novel and Simplified Surgical Approach at JoVE.com

Orthotopic Rat Kidney Transplantation: A Novel and Simplified Surgical Approach

Syftet med detta manuskript och protokoll är att i detalj förklara och demonstrera det kirurgiska ingreppet av ortotopisk njur transplantation hos råttor. Denna metod är förenklad för att uppnå rätt per fusion av givarens njure och förkorta reperfusion tid med hjälp av venösa och uretär manschetten anastomos teknik.

Ortotopisk råtta njure transplantation: en ny och förenklad kirurgisk metod

Kidney transplantation offers increased survival rates and improved quality of life for patients with end-stage renal disease, as compared to any type of ...

Vårt laboratorium vid Johns Hopkins har utfört små djur njure och lever transplantation med över två decennier av erfarenhet. Detta specifika protokoll beskriver kritiska steg som är nödvändiga för att framgångsrikt utföra orthotopic njurtransplantation hos råttor. För att öka sannolikheten och reproducerbarheten av framgång, innehåller vårt protokoll tre särskiljande steg, perfusion av givaren njure genom portalen ven och användning av ett manschettsystem för att anastomose de renal vener och urinörer.Visar detta förfarande kommer att Dr.Le Qi, en doktorand i vårt laboratorium. För att påbörja detta förfarande, bedöva givaren råtta som beskrivs i textprotokollet. Placera råttan i ryggläge och immobilisera lemmarna med steril maskeringstejp.Applicera ett ögonsmörjmedel och sterilisera operationsfältet enligt beskrivningen i textprotokollet. Före det första snittet, se till att råttan är tillräckligt sövd genom att kontrollera frånvaron av tå pinch tillbakadragande reflex. Använda sax, börja med att göra en stor längsgående mittlinjen hud och muskel snitt från symphysis pubis till xiphoid och in i peritoneal hålighet.Täck tarmen med en fuktig steril gasväv och flytta den till höger laterala sidan av buken utsätta aorta, vena cava, och vänster njure. Applicera en milliliter förvärmd saltlösning med en en cc spruta för att hålla tarmarna och bukorganen fuktiga och vid en normal temperatur. Applicera en andra fuktig gasväv för att täcka och mobilisera magen och mjälten hjärnskålen till njuren.Tillsätt sedan en liten fuktig gasväv för att täcka den exponerade njuren. Använd microsurgical dissekera tång för att isolera och mobilisera vänster njurartären och ven från bindväv och varandra. Nu isolera vänster renal anda genom cauterizing vänster gonadal anda och isolera den vänstra njurlymfknutor gatan genom cauterizing adrenal gatan.Efter det, mobilisera aorta och vena cava överlägsen och underlägsen den vänstra njurlymfknutor pedicle genom dissekera bindväv med dissekera tång. Dela och mobilisera urinledaren från bindväven med hjälp av dissekera tång, sedan använda mikro sax för att göra en diagonal snitt vid en längd av cirka två centimeter mätt från njurbäckenet. Sätt in en polyamidmanschett halvvägs in i urinledaren och säkra manschetten genom att placera en knut med 8-0 siden sutur.Mobilisera den vänstra njuren genom att separera den från perinephric fett med hjälp av dissekera tång eller mikro sax. Lämna adipose kapseln i njuren bifogas och använda den platsen för hantering av njuren. Administrera nu 200 enheter heparin med hjälp av en spruta med en 27 gauge nål genom penisvenen.Tryck injektionsstället med en bomullspinne i minst en minut för att förhindra blödning. Identifiera portalvenen och underlägsen vena cava. Avslöja den underlägsna vena cava.Förbered dig på att spola njuren genom att injicera 50 milliliter kall saltlösning blandat med 500 enheter heparin i portalvenen med hjälp av en 16 gauge nål. Innan du spolar, skär den sämre vena cava på infrahepatic nivå och skär portalvenen caudal vid nålen insättningsstället så att blodet att lämna cirkulationen. Börja spola njuren genom att gradvis infundera saltlösningen.Observera en färgförändring av njuren från mörkröd till en enhetlig grå eller blek färg. Efter spolning, ligate den njurmedicinska artären och ven proximala till aorta och vena cava. Placera den spolade njuren i en petriskål som innehåller kall saltlösning på is innan givarens kropp avlägsnas från operationsfältet.När njuren är i kall saltlösning, fixera och immobilisera handtaget på venmanschetten och dra försiktigt njurvenen genom manschetten. Fixera sedan njurvenen över manschetten genom att placera tre knop med hjälp av 8-0 siden sutur. För att påbörja mottagarförfarandet, upprepa stegen från givarförfarandet upp till heparin administration.Placera sedan två atraumatic microvessel klämmor på vänster njurlymfknutor artär och ven proximala till storaorta och vena cava. Ligate mottagaren renal ven proximala till inloppet av njuren. Spola njurvenen med hepariniserad koksaltlösning för att avlägsna allt återstående blod ur kärlet.Skjut ligated njurlymfknutor anda över manschetten renal anda som tidigare placerats i givaren njure. Säkra sedan venen med en 8-0 siden sutur. Bibehåll samma positionsorientering vid säkring av njurvenen över manschetten.Ligate den renal artär proximala till inloppet av mottagaren njure. Spola den med hepariniserad saltlösning för att avlägsna eventuellt överflödigt blod i kärlet. Nu ligate urinledaren på nivån för den nedre polen av den vänstra njuren.Mobilisera njuren från perinephric fettet och ta bort den infödda njuren. Utför en end-to-end-anastomos av njurartären med 8-10 avbrutna suturer med hjälp av en 10-0 nylon sutur. Manövrera artären genom att använda det adventitiella lagret.Ta bort kärlet klämmor för att åter initiera åter perfusion av njuren. Börja med att ta bort klämman på venen följt av klämman på artären. Använd en steril bomullspinne för att lägga lätt tryck på alla sipprande områden runt anastomos regionen.Några minuter bör vara tillräckligt för att uppnå en patentanastomos. Kort observera njuren för att bedöma för adekvat perfusion. Omedelbart efter re-perfusion, njuren ska ändra färg och gradvis återfå sin naturliga mörkröda färg efter några minuter.Synlig peristaltik av urinledaren och på plats urinproduktionen observeras ibland. Avsluta med att sätta in den exponerade spetsen på ureteralmanden i mottagarens urinledare och säkra mottagarens urinledare med en 8-0 sidenslips. För att hålla givaren och mottagaren ureters i position, binda av ändarna av varje urinledaren sida till varandra.Valfritt, nephrectomize den högra njuren genom att binda bort njurmedicinska pedicle med en 3-0 silke sutur. Ta bort alla gasvävar från bukhålan och återför alla organ till sin naturliga position. Spruta sedan en milliliter saltlösning över tarmarna för att hålla dem fuktiga.Stäng buken genom att använda en 4-0 absorberbar sutur på rectusmuskeln och en 4-0 sidensutur för att stänga hudlagret på ett avbrutet sätt. Placera djuret i en ren bur med tillgång till ad libitum vatten och mat och möjliggöra återhämtning på en 37 grader Celsius värmedyna. Observera återhämtningen i en till två timmar innan djuret återsändas till djuranläggningen.Djur med en syngeneisk njurtransplantation uppnådde långsiktig överlevnad utan någon immunsuppressiv behandling. Omvänt, djur som fick allogen njurtransplantation utan immunsuppression avvisade deras transplantat och dukade under för njursvikt med en median överlevnad på åtta dagar. Medelserum kreatinin ökade blygsamt i den syngeneiska gruppen medan den ökade med 14-faldigt i den allogena gruppen.Vid explantation visade inte den makroskopiska vyn av syngeneic njure allograph några avvikelser. Njuren färg och inre strukturer förblev intakt. Däremot njure allographs av avvisade djur fram röda hemorragisk fläckar med förstörelsen av de inre strukturerna.Hematoxylin och Eosin fläckar av syngeneic ympkvistar visas tunna glomerular kapillär slingor med normala antal endotel och mesangial celler. Avvisade allografer visas förstörda glomerular strukturer med tecken på inflammation och tubulitis. CD8 positiva färgning utfördes för att bekräfta T-cell medierad avslag.Medan syngeneic allographs visade mycket få CD8 positiva T-celler, visade de avvisade allografer ett betydligt högre antal CD8 positiva celler i och runt glomeruli och tubuli bekräftar T-cell medierad avslag. Denna modell ger betydande insikt i de immunologiska fenomen av avstötning, tolerans och givare-värd interaktioner banar väg för utvecklingen av terapeutiska kliniska interventioner i fast organtransplantation.

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Orthotopic Aorta Transplantation: En Rat modell för att studera utvecklingen av kronisk vaskulopati

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model

A Novel kirurgisk metod för intratrakeal administrering av bioaktiva ämnen i fosterställning musmodell

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and ...

Surgical Procedures for a Rat Model of Partial Orthotopic Liver Transplantation with Hepatic Arterial Reconstruction

Kirurgiska ingrepp för en råttmodell av partiella ortotop levertransplantation med nedsatt arteriell rekonstruktion

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats using a whole or partial graft is an indispensable experimental model for transplantation research, such as ...

Cardiopulmonary Bypass in a Mouse Model: A Novel Approach

Hjärt Bypass i en musmodell: en ny metod

As prolonged cardiopulmonary bypass becomes more essential during cardiac interventions, an increasing clinical demand arises for procedure optimization ...

A Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation Using a Novel Magnetic Anastomosis Technique for Suprahepatic Vena Cava Reconstruction

En råtta modell av ortotop levertransplantation med romanen magnetiska anastomos teknik för Suprahepatic Vena Cava återuppbyggnad

The rat model of orthotopic liver transplantation (OLT) is essential for transplant research. It is a very sophisticated animal model and requires a steep ...

A Pre-Clinical Porcine Model of Orthotopic Heart Transplantation

En preklinisk porcin modell av ortotopisk hjärt transplantation

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart ...

Reduced Complications after Arterial Reconnection in a Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation

Minskade komplikationer efter arteriell återanslutning i en råtta modell av orthotopic levertransplantation

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation ...

Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry

Orthotopic Njure Auto-Transplantation i en Svin modell Använda 24 timmar Organ Bevarande och kontinuerlig Telemetri

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for ...

Robot-Assisted Kidney Transplantation

Robotassisterad njurtransplantation

This paper describes robot-assisted kidney transplantation (RAKT) from a living donor. The robot is docked between the parted legs of the patient, placed ...