Name: live imaging and analysis of muscle contractions in drosophila embryo
Uploaded: 2019-07-09T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo at JoVE.com

Projektet blev delvist støttet af nationale institutter for sundhedstilskud RO1 NS099409, NS075534 og CONACYT 2012-037 (S) til VP.

1. forberedelse
<ol><li>Forbered et flue bur ved at gøre ca. 50 huller i en 100 mL kapacitet Tri-Corner plast bæger ved hjælp af en varm 25 G nål (Se tabel over materialer).</li>
	<li>Forbered 60 mm x 15 mm Petri skåle med æblesaft-agar (3% agar og 30% æblesaft).</li>
	<li>Forbered frisk gær pasta ved at blande tør gær granulat og vand. Spred gær pastaen på æble agarpladerne for at øge æglægningen.</li>
	<li>Bedøvelse omkring 50-60 fluer (brug omtrent lige mange mænd og kvinder) på C...

<ol>
	<li>Pereanu, W., Spindler, S., Im, E., Buu, N., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+emergence+of+patterned+movement+during+late+embryogenesis+of+Drosophila.">The emergence of patterned movement during late embryogenesis of Drosophila.</a> Developmental Neurobiology. 67, 1669-1685 (2007).</li><li>Suster, M. L., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+assembly+of+a+central+pattern+generator+without+sensory+input.">Embryonic assembly of a central pattern generator without sensory input.</a> Nature. 416, 174-178 (2002).</li><li>Crisp, S., Evers, J. F., Fiala, A., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+motor+coordination+in+Drosophila+embryos.">The development of motor coordination in Drosophila embryos.</a> Development. 135, 3707-3717 (2008).</li><li>Song, W., Onishi, M., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+multidendritic+sensory+neurons+are+necessary+for+rhythmic+locomotion+behavior+in+Drosophila+larvae.">Peripheral multidendritic sensory neurons are necessary for rhythmic locomotion behavior in Drosophila larvae.</a> Proceedings of National Academy of Science of the United States of America. 104, 5199-5204 (2007).</li><li>Hughes, C. L., Thomas, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensory+feedback+circuit+coordinates+muscle+activity+in+Drosophila.">A sensory feedback circuit coordinates muscle activity in Drosophila.</a> Molecular and Cellular Neuroscience. 35, 383-396 (2007).</li><li>Gorczyca, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Ppk26,+a+DEG/ENaC+channel+functioning+with+Ppk1+in+a+mutually+dependent+manner+to+guide+locomotion+behavior+in+Drosophila.">Identification of Ppk26, a DEG/ENaC channel functioning with Ppk1 in a mutually dependent manner to guide locomotion behavior in Drosophila.</a> Cell Reports. 9, 1446-1458 (2014).</li><li>Baker, R., Nakamura, N., Chandel, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+O-Mannosyltransferases+affect+sensory+axon+wiring+and+dynamic+chirality+of+body+posture+in+the+Drosophila+embryo.">Protein O-Mannosyltransferases affect sensory axon wiring and dynamic chirality of body posture in the Drosophila embryo.</a> Journal of Neuroscience. 38 (7), 1850-1865 (2018).</li><li>Nakamura, N., Lyalin, D., Panin, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+O-mannosylation+in+animal+development+and+physiology:+From+human+Disorders+to+Drosophila+phenotypes.">Protein O-mannosylation in animal development and physiology: From human Disorders to Drosophila phenotypes.</a> Seminars in Cell &amp; Developmental Biology. 21, 622-630 (2010).</li><li>Lyalin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+twisted+gene+encodes+Drosophila+protein+O-mannosyltransferase+2+and+genetically+interacts+with+the+rotated+abdomen+gene+encoding+Drosophila+protein+O-mannosyltransferase+1.">The twisted gene encodes Drosophila protein O-mannosyltransferase 2 and genetically interacts with the rotated abdomen gene encoding Drosophila protein O-mannosyltransferase 1.</a> Genetics. 172, 343-353 (2006).</li><li>Beltr&#225;n-Valero de Bernabe, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+the+O-Mannosyltransferase+gene+POMT1+give+rise+to+the+severe+neuronal+migration+disorder+Walker-Warburg+Syndrome.">Mutations in the O-Mannosyltransferase gene POMT1 give rise to the severe neuronal migration disorder Walker-Warburg Syndrome.</a> American Journal of Human Genetics. 71, 1033-1043 (2002).</li><li>Reeuwijk, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=POMT2+mutations+cause+alpha-dystroglycan+hypoglycosylation+and+Walker-Warburg+syndrome.">POMT2 mutations cause alpha-dystroglycan hypoglycosylation and Walker-Warburg syndrome.</a> Journal of Medical Genetics. 42, 907-912 (2005).</li><li>Jaeken, J., Matthijs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Congenital+disorders+of+glycosylation:+A+rapidly+expanding+disease+family.">Congenital disorders of glycosylation: A rapidly expanding disease family.</a> Annual Reviews of Genomics and Human Genetics. 8, 261-278 (2007).</li><li>Leyten, Q. H., Gabreels, F. J., Renier, W. O., ter Laak, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Congenital+muscular+dystrophy:+a+review+of+the+literature.">Congenital muscular dystrophy: a review of the literature.</a> Clinical and Neurological Neurosurgery. 98 (4), 267-280 (1996).</li><li>Roberts, D. B., Hames, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila:+A+Practical+Approach.+2nd+ed.">Drosophila: A Practical Approach. 2nd ed.</a> The Practical Approach Series. , 389 (1998).</li><li>Heckscher, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Even-Skipped++interneurons+are+core+components+of+a+sensorimotor+circuit+that+maintains+left-right+symmetric+muscle+contraction+amplitude.">Even-Skipped+ interneurons are core components of a sensorimotor circuit that maintains left-right symmetric muscle contraction amplitude.</a> Neuron. 88, 314-329 (2015).</li><li>Penjweini, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+monitoring+of+live+cell+proliferation+in+presence+of+PVP-Hypericin:+a+new+strategy+using+ms+pulses+of+LED+and+the+fluorescent+dye+CFSE.">Long-term monitoring of live cell proliferation in presence of PVP-Hypericin: a new strategy using ms pulses of LED and the fluorescent dye CFSE.</a> J. Microscopy. 245, 100-108 (2011).</li></ol>

Vores metode giver en kvantitativ måde at analysere vigtige embryo adfærd under udvikling, såsom peristaltiske muskel sammentrækning bølger, herunder bølge hyppighed, amplitude og mønster, samt bølgeeffekt på embryo rullende og kropsholdning. Dette kan være nyttigt i analyser af forskellige mutanter til at studere rollen af specifikke gener i reguleringen af disse og andre adfærd under fosterudviklingen. Vi har brugt ændringer i muskel-specifikke GFP markør intensitet til at analysere muskel sammentrækning ...

Peristaltisk muskelsammentrækning er en rytmisk motorisk adfærd svarende til at gå og svømme i mennesker1,2,3. Embryonale muskelsammentrækninger set i Drosophila sene stadier embryoner repræsenterer et eksempel på en sådan adfærd. Drosophila er en fremragende model organisme til at studere forskellige udviklingsmæssige processer, fordi embryonale udvikling i Drosophila er velkarakteriseret, relativt kort, og let at overvåge. Det overordnede mål med vores metode er omhyggeligt at registrere og analysere det bølgende mønster af sammentrækning og afslapning af embryonale muskler. Vi brugte en enkel, ikke-invasiv tilgang, der tilbyder en detaljeret visualisering, registrering og analyse af muskelsammentrækninger. Denne metode kan også potentielt anvendes til at studere andre in vivo processer, såsom embryonale rullende ses i sene stadier embryoner lige før klækning. I tidligere undersøgelser, embryonale muskelsammentrækninger blev for det meste analyseret med hensyn til hyppighed og retning1,2. For at estimere det relative omfang af sammentrækninger, når de skrider frem langs krops aksen i den forreste eller bageste retning, har vi brugt embryoner, der udtrykker GFP specifikt i musklerne. Denne analyse giver en mere kvantitativ måde at analysere muskelsammentrækninger og at afsløre, hvordan kropsholdning i embryoner opretholdes i løbet af rækken af peristaltiske bølger af muskelsammentrækninger.
Peristaltiske muskelsammentrækninger styres af central Pattern generator (CPG) kredsløb og kommunikation mellem neuroner i det perifere nervesystem (PNS), centralnervesystemet (CNS), og muskler4,5. Manglende fremstilling af normale peristaltiske muskelsammentrækninger kan føre til defekter såsom manglende luge2 og unormal larve bevægelse6 og kan være tegn på neurologiske abnormiteter. Levende billeddannelse af peristaltiske bølger af muskelsammentrækning og detaljeret analyse af sammentrækning fænotyper kan hjælpe afdække patogene mekanismer forbundet med genetiske defekter påvirker muskler og neurale kredsløb involveret i bevægelse. Vi har for nylig brugt denne tilgang til at undersøge mekanismer, der resulterer i en kropsholdning torsion fænotype protein O-mirrisyltransferase (pomt) mutanter7.
Protein O-mannosylation (POM) er en særlig type post translationel modifikation, hvor der tilsættes mannose sukker til Serin eller Threonin rester af sekretoriske pathway proteiner8,9. Genetiske defekter i POM forårsage medfødte muskuløse dystrofier (cmd) i mennesker10,11,12. Vi undersøgte de kausative mekanismer af disse sygdomme ved hjælp af Drosophila som et model system. Vi fandt, at embryoner med mutationer i Drosophila protein O-mannosyltransferase gener POMT1 og POMT2 (alias roteret mave (rt) og snoet (tw)) viser en forskydning ("rotation") af krops segmenter, hvilket resulterer i en unormal kropsholdning7. Interessant, denne defekt faldt sammen med den udviklingsmæssige fase, når peristaltiske muskelsammentrækninger bliver fremtrædende7.
Da unormal kropsholdning i POM-mutant embryoner opstår, når muskulatur og epidermis allerede er dannet, og peristaltiske bølger af koordinerede muskelsammentrækninger er begyndt, har vi en hypotese om, at unormal kropsholdning kan være et resultat af unormal muskel sammentrækninger snarere end en defekt i muskler eller/og epidermis morfologi7. Cmd'er kan forbindes med unormale muskelsammentrækninger og kropsholdning defekter13, og dermed analysen af kropsholdning fænotype i Drosophila pomt mutanter kan belyse patologiske mekanismer forbundet med muskuløse dystrofier . For at undersøge forholdet mellem kropsholdning fænotype af Drosophila pomt mutanter og mulige abnormaliteter i peristaltiske bølger af muskelsammentrækninger, vi besluttede at analysere muskelsammentrækninger i detaljer ved hjælp af en levende Imaging tilgang.
Vores analyse af peristaltiske sammentrækning bølger i Drosophila embryoner afslørede to særskilte sammentrækning modes, udpeget som type 1 og type 2 bølger. Type 1 bølger er simple bølger formerings fra forreste til posterior eller omvendt. Type 2 bølger er bifasisk bølger, der indleder ved den forreste ende, udbrede halvvejs i den bageste retning, momentant standse, danner en tidsmæssig statisk sammentrækning, og derefter, i den anden fase, er fejet af en Peristaltisk sammentrækning, som udbreder fremad fra den bageste ende. Vildtype embryoner genererer normalt en serie af sammentrækninger, der består af ca. 75% type 1 og 25% type 2 bølger. I modsætning hertil genererer Pomt -mutant embryoner type 1 og type 2 bølger ved omtrent lige relative frekvenser.
Vores tilgang kan give detaljerede oplysninger til kvantitativ analyse af muskelsammentrækninger og embryo rullende7. Denne fremgangsmåde kan også tilpasses til analyser af andre adfærd, der involverer muskelsammentrækninger, såsom udklækning og kravle.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:771px;" width="771">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Digital camera</td>
			<td style="width:155px;">Hamamatsu CMOS ORCA-Flash 4.0</td>
			<td style="width:119px;">C13440-20CU</td>
			<td style="width:283px;">With different emission filters</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Forceps</td>
			<td style="width:155px;">FST Dumont</td>
			<td style="width:119px;">11254-20</td>
			<td>Tip Dimensions 0.05 mm x 0.01 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">LED</td>
			<td style="width:155px;">X-cite BDX (Excelitas)</td>
			<td style="width:119px;">XLED1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Microscope</td>
			<td style="width:155px;">Carl Ziess Examiner D1</td>
			<td style="width:119px;">491405-0005-000</td>
			<td>Epiflourescence with time lapse</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Needle</td>
			<td style="width:155px;">BD&#160;</td>
			<td align="right" style="width:119px;">305767</td>
			<td>25 G x 1-1/2 in</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Paintbrush</td>
			<td style="width:155px;">Contemporary crafts</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Any paintbrush will work</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Petri dishes</td>
			<td style="width:155px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">25384-164</td>
			<td>60 mm x 15 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Software</td>
			<td style="width:155px;">HCImage Live</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Thread Zap Wax pen</td>
			<td style="width:155px;">Thread Zap II (by BeadSmith)(Amazon)</td>
			<td style="width:119px;">TZ1300</td>
			<td>Burner Tool</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:215px;">Tricorner plastic beaker</td>
			<td style="width:155px;">VWR</td>
			<td>25384-152</td>
			<td>100 mL</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live imaging and analysis of muscle contractions in drosophila embryo

Koordinerede muskelsammentrækninger er en form for rytmisk adfærd set tidligt under udviklingen i Drosophila embryoner. Neuronal sensoriske feedback kredsløb er forpligtet til at styre denne adfærd. Manglende fremstilling af det rytmiske mønster af sammentrækninger kan være tegn på neurologiske abnormiteter. Vi har tidligere konstateret, at defekter i protein O-mannosylation, en posttranslationel protein modifikation, påvirke Axon morfologi af sensoriske neuroner og resultere i unormale koordinerede muskelsammentrækninger i embryoner. Her præsenterer vi en forholdsvis enkel metode til at registrere og analysere mønsteret af peristaltiske muskelsammentrækninger ved levende billeddannelse af sene stadie embryoner op til udklæknings punktet, som vi plejede at karakterisere muskel kontrakternes fænotype af protein O-mannosyltransferase-mutanter. Data fra disse optagelser kan bruges til at analysere muskel sammentrækning bølger, herunder hyppighed, retningen af formering og relative amplitude af muskelsammentrækninger på forskellige krops segmenter. Vi har også undersøgt kropsholdning og udnyttet en fluorescerende markør udtrykt specifikt i muskler til præcist at bestemme positionen af embryo-midterlinjen. En lignende tilgang kan også udnyttes til at studere forskellige andre adfærd under udvikling, såsom embryo rullende og klækning.

Normale peristaltiske muskelsammentrækninger er vist i et WT (Wild-type, Canton-S) embryo i film 1. Den gennemsnitlige hyppighed af peristaltiske bølger af muskelsammentrækninger i vores analyse var 47 sammentrækninger pr. time, og den gennemsnitlige amplitude var 60% over baseline for WT-embryoner. Embryo rulningen vises for et WT -embryo i film 2, med den hvide pil, der markerer den oprindelige position af et luftrør, og en sort pil, der skildrer positionen af en dorsale...

Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo at JoVE.com

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Levende billeddannelse og analyse af muskelsammentrækninger i Drosophila embryo

Her præsenterer vi en metode til at registrere embryonale muskelsammentrækninger i Drosophila embryoner i en ikke-invasiv og detaljeorienteret måde.

Coordinated muscle contractions are a form of rhythmic behavior seen early during development in Drosophila embryos. Neuronal sensory feedback circuits ...

Denne metode omhandler, hvordan man analyserer udviklingsprocesser såsom muskelsammentrækninger og rullende, som forekommer i Drosophila embryo. Nogle fordele ved denne teknik er, at det er noninvasive og ganske detaljeret, men det er relativt simpelt at udføre. Vores metode kan udvikles yderligere til analysebaseret screening med højt indhold for at isolere og analysere nye mutationer, der påvirker embryonale muskelsammentrækninger og andre udviklingsprocesser.Når visualisere muskelsammentrækninger, er det vigtigt at korrekt tid embryo samlinger, fordi sammentrækninger begynder kun på et bestemt udviklingsstadiet. Trinvis visuel demonstration kan i høj grad bidrage til den kvantitative analyse af udviklingsprocesserne. For levende billeddannelse af monterede Drosophila embryoner, placere embryoner på scenen af en epifluorescens mikroskop med en timelapse funktion og et digitalt kamera med passende emissionsfiltre og vælge en 10X vand nedsænkning objektiv.Så live video optage embryoner ved hjælp af passende mikroskop optagelse software for omkring en til to timer med en erhvervelse sats på fire billeder i sekundet. I slutningen af eksperimentet skal du eksportere den optagede video direkte til ImageJ. Vælg billede og beskære for at tegne en boks rundt om hvert enkelt foster for at beskære videooptagelserne til størrelsen af hvert embryon.Klik på Billede, Transformer og Roter for at rotere de beskårne billeder for at opnå en lodret placering af embryons midterlinjen i forhold til skærmen. Hvis du vil indstille afstandsmålinger til mikrometer, skal du klikke på Analysér og Angiv skalering og derefter angive den kendte pixel til mikron ratiokonverteringsfaktor for opsætningen af mikroskopet. Alle efterfølgende målinger vil derefter blive rapporteret i mikrometer.For at analysere embryo rullende, først markere placeringen af en eller begge luftrør af et foster i den første ramme af videoen midtvejs mellem den bageste og forreste ender og klik Analysere, Værktøjer og Region of Interest Manager. Tegn en omtrentlig syv mikrometer med syv mikrometer boks omkring luftrøret og klik på T-tasten på tastaturet for at registrere denne position som en XY koordinat. Marker placeringen af det samme område af luftrøret efter peristaltiske sammentrækninger af interesse og tegne en linje, der forbinder centrene i hver boks klikke M på tastaturet for at måle afstanden fra pre-sammentrækning position til post-sammentrækning position.At analysere embryonale muskelsammentrækninger ved hjælp af embryoner, der udtrykker fluorescerende muskel markører, bruge optagelsen af fluorescerende udlæsning til at tegne en region af interesse centreret omkring fluorescerende muskler i et bestemt organ segment af interesse. Vælg fanen Tilføj T i Region interesseadministrator for at registrere placeringen af det pågældende område. Klik på Region of Interest Manager og Mål for at registrere den gennemsnitlige lysstofrørsintensitet for hver region af interesse, der er valgt for hver ramme i videoen.Flyt feltet til centrene for andre brødtekstsegmenter af interesse, og klik på Tilføj T for at registrere deres positioner for at få områder af samme størrelse i alle de brødtekstsegmenter, der skal analyseres. I Region of Interest Manager skal du holde kontrolnøglen nede, mens du vælger alle de områder af interesse, der er registreret som XY-koordinater. Klik på Mere og Multi-Measure for at måle den gennemsnitlige lysstofrørintensitet for hver region af interesse for alle rammerne i videoen.Dette vil rapportere hver måling i en tabel med hver region af interesse som en kolonne i tabellen og hver ramme som en række. Overfør derefter tabellen til et regnearksprogram til yderligere analyse. Afbilde en graf med rammenummeret på x-aksen og den gennemsnitlige fluorescensintensitet på y-aksen og konvertere rammenummeret til tiden ved hjælp af de fire billeder pr. sekunds billedhastighed.Muskelsammentrækninger øge GFP intensitet, da de bringer mere GFP i nærheden af brændvidde område som flere muskler bliver trukket i løbet af disse sammentrækninger. For at bestemme muskelsammentrækning amplitude, anslå baseline GFP intensitet som den gennemsnitlige intensitet af regionerne mellem toppe. Vurder derefter stigningen i GFP fluorescensintensiteten i forhold til denne baseline.Divider derefter hver region af interesseintensitetsværdi med baselineintensiteten for at normalisere GFP-intensiteten til basislinjen. Sammenlign de normaliserede GFP intensiteter på posterior, mediale og forreste segmenter under muskelsammentrækning bølge at undersøge ændringerne i omfanget af muskelsammentrækning som bølgen formerer sig og til at bestemme retningen af bølgen. For at sammenligne muskelsammentrækninger på venstre og højre side af fosteret, analysere peak intensiteter for de samme segmenter på begge sider af fosteret.Brug sammentrækning amplitude og timingen af toppe til at afsløre forskellene, hvis nogen, og omfanget og timingen af den peristaltiske muskel sammentrækning bølger. Her vises normale peristaltiske muskelsammentrækninger i en vild type Drosophila embryo. I denne video af rullende i en vild type embryo, bemærk, at dorsale vedhæng ikke bevæger sig, mens luftrøret ikke angiver, at fosteret har rullet i sin shell.I denne repræsentative analyse, muskelsammentrækning toppe i løbet af 165 til 178-sekunder periode repræsenterer en enkelt frem bølge. For dette foster blev der ikke målt nogen forskel i amplituden og tidspunktet for muskelsammentrækningerne på højre og venstre side af embryonet. En peristaltisk sammentrækning er udpeget som en fremadrettet type en bølge, hvis dens profil har et højdepunkt, der opstår på den bageste region først efterfulgt af toppe i midten og forreste regioner.En tilbagestående type en bølge er et højdepunkt, der først opstår på forreste segmenter og derefter formerer sig mod posterior regioner. Type to bølger starter i den ene ende af embryonet og fortsæt mod de midterste regioner, før de vender tilbage til deres oprindelse som en fejende bølge re-initieret i den modsatte ende. Body kropsholdning mutant embryoner demonstrere en unormal relativ frekvens af type et til type to bølge generation, der resulterer i en kropsholdning abnormitet udpeget som kroppen torsion eller rotation fænotype.For at bruge fluorescens som en udlæsning for muskelsammentrækning parametre, Er det vigtigt at bruge embryoner med en reporter i muskelvæv. Denne metode kan anvendes til samtidig registrering af muskelsammentrækninger af mange embryoner og til vurdering af svarene på forskellige stimuli, narkotika eller miljømæssige ændringer.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Levende-billeddannelse af<em&gt; Drosophila</em&gt; Puppe Eye

Inherent processes of Drosophila pupal development can shift and distort the eye epithelium in ways that make individual cell behavior difficult to track ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analyse af zebrafisk Larver Skeletmuskel Integritet med Evans blå farvestof

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Observing Mitotic Division and Dynamics in a Live Zebrafish Embryo

Observation Mitotisk Division og Dynamics i en Live zebrafisk Embryo

Mitosis is critical for organismal growth and differentiation. The process is highly dynamic and requires ordered events to accomplish proper chromatin ...

Long-term Live Imaging of Drosophila Eye Disc

Long-term Live Imaging of Drosophila Eye Disc

Langsigtet Live-Imaging af<em&gt; Drosophila</em&gt; Disc Eye

Live imaging provides the ability to continuously track dynamic cellular and developmental processes in real time. Drosophila larval imaginal discs have ...

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Ovule dyrkning for Live-celle Imaging af Zygote polarisering og Embryo mønstre i Arabidopsis thaliana

In most flowering plants, the zygote and embryo are hidden deep in the mother tissue, and thus it has long been a mystery of how they develop dynamically; ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

In Vivo Billeddannelse af muskel-sene morfogenese i Drosophila pupper

Muscles together with tendons and the skeleton enable animals including humans to move their body parts. Muscle morphogenesis is highly conserved from ...

Preparation of Drosophila Larval and Pupal Testes for Analysis of Cell Division in Live, Intact Tissue

Preparation of Drosophila Larval and Pupal Testes for Analysis of Cell Division in Live, Intact Tissue

Præparat af Drosophila Larve og Pupal Testikler til analyse af celledeling i Levende, Intakt væv

Experimental analysis of cells dividing in living, intact tissues and organs is essential to our understanding of how cell division integrates with ...

Imaging Intranuclear Actin Rods in Live Heat Stressed Drosophila Embryos

Imaging Intranuclear Actin Rods in Live Heat Stressed Drosophila Embryos

Imaging Intranuclear Actin Stænger i Live Heat Stressed Drosophila Embryoner

The purpose of this protocol is to visualize intranuclear actin rods that assemble in live Drosophila melanogaster embryos following heat stress. Actin ...

Drosophila Embryo Preparation and Microinjection for Live Cell Microscopy Performed using an Automated High Content Analyzer

Drosophila Embryo Forberedelse og Microinjection for Levende Cell Mikroskopi Udført ved hjælp af en automatiseret højt indhold Analyzer

Modern approaches in quantitative live cell imaging have become an essential tool for exploring cell biology, by enabling the use of statistics and ...