Name: live imaging and analysis of muscle contractions in drosophila embryo
Uploaded: 2019-07-09T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo at JoVE.com

이 프로젝트는 국립 보건 원RO1 NS099409, NS075534 및 CONACYT 2012-037 (S)에서 부사장에게 부분적으로 지원되었습니다.

1. 준비
<ol><li>뜨거운 25G 바늘을 사용하여 100 mL 용량 트라이 코너 플라스틱 비커에 약 50 개의 구멍을 만들어 플라이 케이지를 준비하십시오 (재료 표참조).</li>
	<li>사과 주스 한천 (3 % 한천 과 30 % 사과 주스)으로 60mm x 15mm 페트리 요리를 준비하십시오.</li>
	<li>마른 효모 과립과 물을 혼합하여 신선한 효모 페이스트를 준비합니다. 효모 페이스트를 사과 한천 접시에 펴서 알 을 낳는다.<...

<ol>
	<li>Pereanu, W., Spindler, S., Im, E., Buu, N., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+emergence+of+patterned+movement+during+late+embryogenesis+of+Drosophila.">The emergence of patterned movement during late embryogenesis of Drosophila.</a> Developmental Neurobiology. 67, 1669-1685 (2007).</li><li>Suster, M. L., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+assembly+of+a+central+pattern+generator+without+sensory+input.">Embryonic assembly of a central pattern generator without sensory input.</a> Nature. 416, 174-178 (2002).</li><li>Crisp, S., Evers, J. F., Fiala, A., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+motor+coordination+in+Drosophila+embryos.">The development of motor coordination in Drosophila embryos.</a> Development. 135, 3707-3717 (2008).</li><li>Song, W., Onishi, M., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+multidendritic+sensory+neurons+are+necessary+for+rhythmic+locomotion+behavior+in+Drosophila+larvae.">Peripheral multidendritic sensory neurons are necessary for rhythmic locomotion behavior in Drosophila larvae.</a> Proceedings of National Academy of Science of the United States of America. 104, 5199-5204 (2007).</li><li>Hughes, C. L., Thomas, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensory+feedback+circuit+coordinates+muscle+activity+in+Drosophila.">A sensory feedback circuit coordinates muscle activity in Drosophila.</a> Molecular and Cellular Neuroscience. 35, 383-396 (2007).</li><li>Gorczyca, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Ppk26,+a+DEG/ENaC+channel+functioning+with+Ppk1+in+a+mutually+dependent+manner+to+guide+locomotion+behavior+in+Drosophila.">Identification of Ppk26, a DEG/ENaC channel functioning with Ppk1 in a mutually dependent manner to guide locomotion behavior in Drosophila.</a> Cell Reports. 9, 1446-1458 (2014).</li><li>Baker, R., Nakamura, N., Chandel, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+O-Mannosyltransferases+affect+sensory+axon+wiring+and+dynamic+chirality+of+body+posture+in+the+Drosophila+embryo.">Protein O-Mannosyltransferases affect sensory axon wiring and dynamic chirality of body posture in the Drosophila embryo.</a> Journal of Neuroscience. 38 (7), 1850-1865 (2018).</li><li>Nakamura, N., Lyalin, D., Panin, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+O-mannosylation+in+animal+development+and+physiology:+From+human+Disorders+to+Drosophila+phenotypes.">Protein O-mannosylation in animal development and physiology: From human Disorders to Drosophila phenotypes.</a> Seminars in Cell &amp; Developmental Biology. 21, 622-630 (2010).</li><li>Lyalin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+twisted+gene+encodes+Drosophila+protein+O-mannosyltransferase+2+and+genetically+interacts+with+the+rotated+abdomen+gene+encoding+Drosophila+protein+O-mannosyltransferase+1.">The twisted gene encodes Drosophila protein O-mannosyltransferase 2 and genetically interacts with the rotated abdomen gene encoding Drosophila protein O-mannosyltransferase 1.</a> Genetics. 172, 343-353 (2006).</li><li>Beltr&#225;n-Valero de Bernabe, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+the+O-Mannosyltransferase+gene+POMT1+give+rise+to+the+severe+neuronal+migration+disorder+Walker-Warburg+Syndrome.">Mutations in the O-Mannosyltransferase gene POMT1 give rise to the severe neuronal migration disorder Walker-Warburg Syndrome.</a> American Journal of Human Genetics. 71, 1033-1043 (2002).</li><li>Reeuwijk, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=POMT2+mutations+cause+alpha-dystroglycan+hypoglycosylation+and+Walker-Warburg+syndrome.">POMT2 mutations cause alpha-dystroglycan hypoglycosylation and Walker-Warburg syndrome.</a> Journal of Medical Genetics. 42, 907-912 (2005).</li><li>Jaeken, J., Matthijs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Congenital+disorders+of+glycosylation:+A+rapidly+expanding+disease+family.">Congenital disorders of glycosylation: A rapidly expanding disease family.</a> Annual Reviews of Genomics and Human Genetics. 8, 261-278 (2007).</li><li>Leyten, Q. H., Gabreels, F. J., Renier, W. O., ter Laak, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Congenital+muscular+dystrophy:+a+review+of+the+literature.">Congenital muscular dystrophy: a review of the literature.</a> Clinical and Neurological Neurosurgery. 98 (4), 267-280 (1996).</li><li>Roberts, D. B., Hames, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila:+A+Practical+Approach.+2nd+ed.">Drosophila: A Practical Approach. 2nd ed.</a> The Practical Approach Series. , 389 (1998).</li><li>Heckscher, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Even-Skipped++interneurons+are+core+components+of+a+sensorimotor+circuit+that+maintains+left-right+symmetric+muscle+contraction+amplitude.">Even-Skipped+ interneurons are core components of a sensorimotor circuit that maintains left-right symmetric muscle contraction amplitude.</a> Neuron. 88, 314-329 (2015).</li><li>Penjweini, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+monitoring+of+live+cell+proliferation+in+presence+of+PVP-Hypericin:+a+new+strategy+using+ms+pulses+of+LED+and+the+fluorescent+dye+CFSE.">Long-term monitoring of live cell proliferation in presence of PVP-Hypericin: a new strategy using ms pulses of LED and the fluorescent dye CFSE.</a> J. Microscopy. 245, 100-108 (2011).</li></ol>

우리의 방법은 파도 주기성, 진폭 및 패턴을 포함하여 연동 근육 수축 파뿐만 아니라 배아 압연 및 자세에 대한 파 효과와 같은 발달 중에 중요한 배아 행동을 분석하는 정량적 방법을 제공합니다. 이것은 배아 발달 도중 이들과 그밖 행동을 통제에 있는 특정 유전자의 역할을 공부하기 위하여 다른 돌연변이의 분석에서 유용할 수 있습니다. 우리는 근육 수축 진폭, 빈도 및 배아의 수축 파 전파 방...

연동 근육 수축은 인간 1,2,3에서걷기와 수영과 유사한 리듬 운동 동작입니다. Drosophila 후기 단계 배아에서 보인 배아 근육 수축은 그러한 행동의 예를 나타낸다. 초파리는 다양한 발달 과정을 연구하는 우수한 모델 유기체로, 초파리에서배아발달이 잘 특성화되어 있고, 상대적으로 짧고, 모니터링하기 쉽다. 우리의 방법의 전반적인 목표는 신중하게 기록하고 배아 근육의 수축과 이완의 물결 모양의 패턴을 분석하는 것입니다. 우리는 근육 수축의 상세한 시각화, 기록 및 분석을 제공하는 간단한 비침습적 접근법을 사용했습니다. 이 방법은 또한 잠재적으로 부화 직전에 말기 배아에서 보인 배아 압연과 같은 생체 내 다른 과정을 연구하는 데 사용될 수 있다. 이전 연구에서, 배아 근육 수축은 주로 주파수 및방향 의 관점에서 분석되었다 1,2. 전방 또는 후방 방향으로 신체 축을 따라 진행하면서 수축의 상대적 정도를 추정하기 위해, 우리는 근육에서 GFP를 구체적으로 발현하는 배아를 사용했습니다. 이 분석은 근육 수축을 분석하고 근육 수축의 연동 파의 일련의 동안 배아의 신체 자세가 어떻게 유지되는지를 밝히는 보다 정량적인 방법을 제공합니다.
연동 근육 수축은 중앙 패턴 발생기 (CPG) 회로 및 말초 신경계 (PNS), 중추 신경계 (CNS) 및 근육4,5의뉴런 간의 통신에 의해 제어됩니다. 정상적인 연동 근육 수축을 생성하지 못하면 부화 실패2 및 비정상적인 애벌레 운동 6과 같은 결함이 발생할 수 있으며 신경 학적 이상을 나타낼 수 있습니다. 근육 수축의 연동 파의 살아있는 화상 진찰 및 수축 표현형의 상세한 분석은 운동에 관련되었던 근육 및 신경 회로에 영향을 미치는 유전 적 결함과 관련되었던 병원성 기계장치를 밝히는 것을 도울 수 있습니다. 우리는 최근에 p로테인 O-m annosyltransferase (POMT) 돌연변이체의 신체 자세비틀림 표현형을 초래하는 메커니즘을 조사하기 위해 이러한 접근법을 사용했다.
단백질 O-만노실화(POM)는 분비 통로 단백질의 세린 또는 쓰레오닌 잔류물8,9에만노스 슈가를 첨가하는 특별한 유형의 번역 후 변형이다. POM에 있는 유전 적 결함은 인간에 있는 선천성 근육 dys트로피 (CMD)를 일으키는 원인이 됩니다10,11,12. 우리는 모형 시스템으로 Drosophila를 사용하여 이 질병의 원인 기계장치를 조사했습니다. 우리는 Drosophila 단백질 O-mannosyltransferase 유전자 POMT1 및 POMT2 (일명 회전 복부 (rt)와 꼬인 (tw)에 있는 돌연변이를 가진 배아가 보여준다는 것을 것을을 발견했습니다 신체 세그먼트의 변위("회전")로 인해 비정상적인 신체자세가7. 흥미롭게도, 이 결함은 연동 근육 수축이 눈에 띄는 될 때 개발 단계와 일치7.
POM 돌연변이 배아의 비정상적인 신체 자세는 근육과 표피가 이미 형성되고 조정된 근육 수축의 연동파가 시작될 때 발생하기 때문에 비정상적인 신체 자세가 비정상적인 근육의 결과일 수 있다고 가정했습니다. 근육 또는 표피 형태에 결함이 아닌 수축7. CMDs는 이상한 근육 수축 및 자세 결점13와연관될 수 있고, 따라서 Drosophila POMT 돌연변이체에 있는 자세 표현형의 분석은 근이영양증과 관련되었던 병리학적인 기계장치를 해명할 수 있습니다 . Drosophila POMT 돌연변이체의 신체 자세 표현형과 근육 수축의 연동 파에서 가능한 이상 사이의 관계를 조사하기 위해, 우리는 살아있는 을 사용하여 근육 수축을 자세히 분석하기로 결정했습니다. 이미징 접근 방식.
Drosophila 태아에 있는 연동 수축 파의 우리의 분석은 타입-1과 타입-2 파파로 지정된 2개의 명백한 수축 모드를, 밝혔습니다. 타입 1 파도는 전방에서 후방으로 전파되는 단순한 파도이거나 그 반대의 경우도 마찬가지입니다. 유형 2 파도는 전방 끝에서 시작, 후방 방향으로 중간 전파, 순간적으로 정지, 시간 정적 수축을 형성하고, 두 번째 단계 동안, 전파 연동 수축에 의해 휩쓸된다 이파성 파도입니다 뒤쪽 끝에서 앞으로. 야생 형 배아는 일반적으로 대략 75% 타입-1 및 25% 타입 2 파파로 이루어져 있는 수축의 시리즈를 생성합니다. 대조적으로, POMT 돌연변이 배아는 대략 동등한 상대 주파수에서 타입-1 및 타입-2 파형을 생성합니다.
우리의 접근은 근육 수축 및 배아 압연7의 정량분석을 위한 상세한 정보를 제공할 수 있습니다. 이 접근은 또한 해치와 크롤링과 같은 근육 수축을 관련시키는 그밖 행동의 분석을 위해 적응될 수 있었습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:771px;" width="771">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Digital camera</td>
			<td style="width:155px;">Hamamatsu CMOS ORCA-Flash 4.0</td>
			<td style="width:119px;">C13440-20CU</td>
			<td style="width:283px;">With different emission filters</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Forceps</td>
			<td style="width:155px;">FST Dumont</td>
			<td style="width:119px;">11254-20</td>
			<td>Tip Dimensions 0.05 mm x 0.01 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">LED</td>
			<td style="width:155px;">X-cite BDX (Excelitas)</td>
			<td style="width:119px;">XLED1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Microscope</td>
			<td style="width:155px;">Carl Ziess Examiner D1</td>
			<td style="width:119px;">491405-0005-000</td>
			<td>Epiflourescence with time lapse</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Needle</td>
			<td style="width:155px;">BD&#160;</td>
			<td align="right" style="width:119px;">305767</td>
			<td>25 G x 1-1/2 in</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Paintbrush</td>
			<td style="width:155px;">Contemporary crafts</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Any paintbrush will work</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Petri dishes</td>
			<td style="width:155px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">25384-164</td>
			<td>60 mm x 15 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Software</td>
			<td style="width:155px;">HCImage Live</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Thread Zap Wax pen</td>
			<td style="width:155px;">Thread Zap II (by BeadSmith)(Amazon)</td>
			<td style="width:119px;">TZ1300</td>
			<td>Burner Tool</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:215px;">Tricorner plastic beaker</td>
			<td style="width:155px;">VWR</td>
			<td>25384-152</td>
			<td>100 mL</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live imaging and analysis of muscle contractions in drosophila embryo

조정된 근육 수축은 Drosophila 태아에 있는 발달 도중 일찌기 보인 리듬 행동의 한 형태입니다. 이 동작을 제어하려면 신경 감각 피드백 회로가 필요합니다. 수축의 리듬 패턴을 생성하지 못하면 신경 학적 이상을 나타낼 수 있습니다. 우리는 이전에 단백질 O-mannosylation에 있는 결점을, 번역 후 단백질 수정, 감각 신경의 축삭 형태에 영향을 미치고 태아에 있는 이상한 조정한 근육 수축 귀착된다는 것을 것을을 발견했습니다. 여기에서, 우리는 단백질의 근육 수축 표현형을 특성화하기 위하여 이용된 부화의 점까지 말기 태아의 살아있는 화상 진찰에 의하여 연동 근육 수축의 패턴을 기록하고 분석하기 위한 상대적으로 간단한 방법을 제시합니다 O-만노실 트랜스퍼라제 돌연변이체. 이 기록에서 얻은 데이터는 주파수, 전파 방향 및 다른 신체 세그먼트에서 근육 수축의 상대적 진폭을 포함하여 근육 수축 파를 분석하는 데 사용할 수 있습니다. 우리는 또한 바디 자세를 검토하고 정확하게 태아 중간선의 위치를 결정하기 위하여 근육에서 구체적으로 표현된 형광 마커의 이용을 취했습니다. 유사한 접근은 또한 배아 압연 및 부화와 같은 발달 도중 각종 그밖 행동을 공부하기 위하여 이용될 수 있습니다.

법제1에서는WT(야생형, 캔톤-S) 배아에 정상적인 연동근 수축이 나타난다. 우리의 분석에 있는 근육 수축의 연동파의 평균 주파수는 시간당 47 수축이고 평균 진폭은 WT 태아를 위한 기준선 위에 60% 이었습니다. 배아 압연은 영화 2에서 WT 배아에 대해 도시되며, 흰색 화살표는 기관의 초기 위치를 표시하고 등쪽 부속기의 위치를 묘사하는 검은 색 화살표를 표시합니?...

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Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

초파리 배아에서 근육 수축의 라이브 이미징 및 분석

여기에서, 우리는 비침습적이고 세부지향적인 방식으로 Drosophila 배아에서 배아 근육 수축을 기록하는 방법을 제시한다.

Coordinated muscle contractions are a form of rhythmic behavior seen early during development in Drosophila embryos. Neuronal sensory feedback circuits ...

이 방법은 Drosophila 태아에서 생기는 근육 수축 및 압연과 같은 발달 과정을 분석하는 방법을 다룹니다. 이 기술의 몇 가지 장점은 비침습적이고 매우 상세한 것입니다, 그러나 수행하는 것은 상대적으로 간단합니다. 우리의 방법은 배아 근육 수축 및 기타 발달 과정에 영향을 미치는 새로운 돌연변이를 격리하고 분석하기 위해 고함량 분석 기반 스크리닝을 위해 더 개발 될 수 있습니다.근육 수축을 시각화할 때, 수축은 특정 발달 단계에서만 시작되기 때문에 배아 수집에 제대로 시간을 두는 것이 중요합니다. 단계별 시각적 데모는 개발 프로세스의 정량적 분석에 크게 도움이 될 수 있습니다. 장착 된 Drosophila 배아의 라이브 이미징을 위해 타임랩스 기능을 갖춘 에피소드 현미경의 단계에 배아를 배치하고 적절한 방출 필터가있는 디지털 카메라를 배치하고 10배 물 침수 객관적렌즈를 선택합니다.그런 다음 라이브 비디오는 초당 4 프레임의 획득 속도와 약 1 ~ 2 시간 동안 적절한 현미경 기록 소프트웨어를 사용하여 배아를 기록합니다. 실험이 끝나면 녹화된 비디오를 ImageJ로 직접 내보냅니다. 각 개별 배아 주위에 상자를 그리는 이미지와 자르기를 선택하여 각 배아의 크기로 비디오 레코딩을 자르게 합니다.이미지를 클릭, 변환 및 회전하여 자른 이미지를 회전하여 화면을 기준으로 배아 중간선의 수직 위치를 달성합니다. 거리 측정값을 마이크로미터로 설정하려면 크기 분석 및 설정 스케일을 클릭한 다음 현미경 설정에 대해 알려진 픽셀 대 미크로미터 비율 변환 계수를 입력합니다. 그런 다음 모든 후속 측정이 마이크로미터로 보고됩니다.배아 압연을 분석하려면 먼저 후방과 전방 끝 사이의 비디오 중간 의 첫 번째 프레임에서 배아의 하나 또는 둘 다 기관의 위치를 표시하고 관심 관리자의 분석, 도구 및 영역을 클릭합니다. 기관 주위의 7 마이크로미터 상자에 약 7 마이크로미터를 그리고 키보드의 T 키를 클릭하여 이 위치를 XY 좌표로 기록합니다. 관심의 연동 수축 후 기관지의 동일한 영역의 위치를 표시하고 키보드에 M을 클릭각 상자의 중심을 연결하는 선을 그려 수축 후 위치로의 거리를 측정한다.형광 근육 마커를 표현하는 배아를 사용하여 배아 근육 수축을 분석하려면 형광 판독기록을 사용하여 특정 신체 세그먼트의 형광 근육을 중심으로 관심 영역을 그립니다. 관심 영역 관리자의 T 추가 탭을 선택하여 관심 지역의 위치를 기록합니다. 관심 영역 관리자 및 측정 영역을 클릭하여 비디오의 각 프레임에 대해 선택한 각 관심 영역의 평균 형광 강도를 기록합니다.상자를 관심 있는 다른 신체 세그먼트의 중심으로 이동하고 T 추가를 클릭하여 분석할 모든 본체 세그먼트에서 동일한 크기의 관심 영역을 얻으려면 위치를 기록합니다. 관심 영역 관리자에서 제어 키를 유지하면서 XY 좌표로 기록된 관심 영역을 모두 선택합니다. 비디오의 모든 프레임에 대한 관심 있는 각 영역의 평균 형광 강도를 측정하려면 더 많은 및 다중 측정값을 클릭합니다.이렇게 하면 각 측정값이 관심 있는 각 영역이 있는 테이블의 열로, 각 프레임은 행으로 보고합니다. 그런 다음 테이블을 스프레드시트 프로그램으로 전송하여 추가 분석을 합니다. x축의 프레임 번호와 y축의 평균 형광 강도로 그래프를 플롯하고 초당 4프레임 프레임을 사용하여 프레임 수를 시간으로 변환합니다.그들은 더 많은 근육이 수축 하는 동안 당겨 얻을 으로 그들은 초점 영역의 부근에 더 많은 GFP를 가지고 으로 근육 수축 GFP 강도 증가. 근육 수축 진폭을 결정하려면, 피크 사이의 영역의 평균 강도로 기준선 GFP 강도를 추정한다. 그런 다음 이 기준선에 비해 GFP 형광 강도의 증가를 평가합니다.그런 다음 관심 강도 값의 모든 영역을 기준 강도로 나누어 GFP 강도를 기준선으로 정규화합니다. 근육 수축 파 중에 후방, 내측 및 전방 세그먼트에서 정규화된 GFP 강도를 비교하여 파도가 전파될 때 근육 수축 정도의 변화를 검사하고 파도의 방향을 결정합니다. 배아의 왼쪽과 오른쪽의 근육 수축을 비교하려면 배아의 양쪽에 동일한 세그먼트에 대한 피크 강도를 분석합니다.수축 진폭과 피크의 타이밍을 사용하여 연동 근육 수축 파의 정도및 타이밍의 차이를 드러냅니다. 여기서 야생형 Drosophila 배아에서 정상적인 연동 근육 수축이 나타난다. 야생 형 배아에서 압연의이 비디오에서, 기관이 배아가 껍질 내에서 압연되었음을 나타내는 동안 등쪽 부속체가 움직이지 않는다는 점에 유의하십시오.본 대표적인 분석에서, 165초에서 178초 기간 동안 근육 수축 피크는 단일 전방 파를 나타낸다. 이 배아의 경우, 진폭과 근육 수축의 시간에 차이가 배아의 오른쪽과 왼쪽에 측정되지 않았다. 연마 수축은 프로파일이 후방 지역에서 먼저 발생하는 피크가 있고 중간 및 전방 영역의 피크가 있는 경우 전방 유형 한 파로 지정됩니다.뒤로 한 파는 먼저 전방 세그먼트에서 발생한 다음 후방 영역으로 전파되는 피크입니다. 2형 파동은 배아의 한쪽 끝에서 시작하여 중간 영역으로 이동한 후 반대쪽 끝에서 다시 시작된 스위핑 웨이브로 기원으로 돌아갑니다. 신체 자세 돌연변이 배아는 신체 비틀림 또는 회전 표현형으로 지정된 신체 자세 이상을 초래하는 2개의 파 생성을 입력하는 1형의 비정상적인 상대적 주파수를 보여 준다.근육 수축 매개 변수에 대한 판독값으로 형광을 사용하려면 근육 조직에서 리포터와 함께 배아를 사용하는 것이 필수적입니다. 이 방법은 많은 배아의 근육 수축의 동시 기록과 다양한 자극, 약물 또는 환경 변화에 대한 반응의 평가를 위해 사용될 수 있다.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

의 라이브 영상<em&gt; 초파리</em&gt; 번데기 눈

Inherent processes of Drosophila pupal development can shift and distort the eye epithelium in ways that make individual cell behavior difficult to track ...

연구

발생학

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

에반스 블루 염료와 Zebrafish의 애벌레 골격 근육 무결성 분석

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Observing Mitotic Division and Dynamics in a Live Zebrafish Embryo

라이브 Zebrafish의 배아에서 유사 분열 부문 및 역학을 관찰

Mitosis is critical for organismal growth and differentiation. The process is highly dynamic and requires ordered events to accomplish proper chromatin ...

Long-term Live Imaging of Drosophila Eye Disc

Long-term Live Imaging of Drosophila Eye Disc

장기의 라이브 영상<em&gt; 초파리</em&gt; 아이 디스크

Live imaging provides the ability to continuously track dynamic cellular and developmental processes in real time. Drosophila larval imaginal discs have ...

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

생체 외에서 라이브 셀 이미징의 접합 자 양극 화와 애기 thaliana 패터 닝 태아 난 재배

In most flowering plants, the zygote and embryo are hidden deep in the mother tissue, and thus it has long been a mystery of how they develop dynamically; ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

Mouse Secondary Palate Fusion의 라이브 이미징

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

Vivo에서 근육-힘 줄 Morphogenesis 초파리 번데기에의 이미징

Muscles together with tendons and the skeleton enable animals including humans to move their body parts. Muscle morphogenesis is highly conserved from ...

Preparation of Drosophila Larval and Pupal Testes for Analysis of Cell Division in Live, Intact Tissue

Preparation of Drosophila Larval and Pupal Testes for Analysis of Cell Division in Live, Intact Tissue

살아있는, 그대로 조직에서 세포 분열의 분석을 위한 초파리 애벌레와 Pupal 고환의 준비

Experimental analysis of cells dividing in living, intact tissues and organs is essential to our understanding of how cell division integrates with ...

Imaging Intranuclear Actin Rods in Live Heat Stressed Drosophila Embryos

Imaging Intranuclear Actin Rods in Live Heat Stressed Drosophila Embryos

살아있는 열에 있는 화상 진찰 내 핵 액틴 막대는 Drosophila 배아를 강조했습니다

The purpose of this protocol is to visualize intranuclear actin rods that assemble in live Drosophila melanogaster embryos following heat stress. Actin ...

Drosophila Embryo Preparation and Microinjection for Live Cell Microscopy Performed using an Automated High Content Analyzer

자동 고함량 분석기를 사용하여 수행된 살아있는 세포 현미경 검사법을 위한 Drosophila 배아 준비 및 미세 주입

Modern approaches in quantitative live cell imaging have become an essential tool for exploring cell biology, by enabling the use of statistics and ...