Name: live imaging and analysis of muscle contractions in drosophila embryo
Uploaded: 2019-07-09T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo at JoVE.com

Prosjektet ble støttet delvis av National Institutes of Health Grants RO1 NS099409, NS075534 og CONACYT 2012-037 (S) til VP.

1. forberedelse
<ol><li>Forbered en flue bur ved å gjøre ca 50 hull i en 100 mL kapasitet Tri-hjørne plast beger med en varm 25 G nål (se tabell over materialer).</li>
	<li>Forbered 60 mm x 15 mm Petri retter med eple juice-agar (3% agar og 30% eple juice).</li>
	<li>Forbered fersk gjær lime ved å blande tørr gjær granulat og vann. Spre gjær lime på Eple agar platene for å øke egglegging.</li>
	<li>Dop om 50-60 fluer (bruk omtrent like mange menn og kvinner) på CO2 og sette dem ...

<ol>
	<li>Pereanu, W., Spindler, S., Im, E., Buu, N., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+emergence+of+patterned+movement+during+late+embryogenesis+of+Drosophila.">The emergence of patterned movement during late embryogenesis of Drosophila.</a> Developmental Neurobiology. 67, 1669-1685 (2007).</li><li>Suster, M. L., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+assembly+of+a+central+pattern+generator+without+sensory+input.">Embryonic assembly of a central pattern generator without sensory input.</a> Nature. 416, 174-178 (2002).</li><li>Crisp, S., Evers, J. F., Fiala, A., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+motor+coordination+in+Drosophila+embryos.">The development of motor coordination in Drosophila embryos.</a> Development. 135, 3707-3717 (2008).</li><li>Song, W., Onishi, M., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+multidendritic+sensory+neurons+are+necessary+for+rhythmic+locomotion+behavior+in+Drosophila+larvae.">Peripheral multidendritic sensory neurons are necessary for rhythmic locomotion behavior in Drosophila larvae.</a> Proceedings of National Academy of Science of the United States of America. 104, 5199-5204 (2007).</li><li>Hughes, C. L., Thomas, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensory+feedback+circuit+coordinates+muscle+activity+in+Drosophila.">A sensory feedback circuit coordinates muscle activity in Drosophila.</a> Molecular and Cellular Neuroscience. 35, 383-396 (2007).</li><li>Gorczyca, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Ppk26,+a+DEG/ENaC+channel+functioning+with+Ppk1+in+a+mutually+dependent+manner+to+guide+locomotion+behavior+in+Drosophila.">Identification of Ppk26, a DEG/ENaC channel functioning with Ppk1 in a mutually dependent manner to guide locomotion behavior in Drosophila.</a> Cell Reports. 9, 1446-1458 (2014).</li><li>Baker, R., Nakamura, N., Chandel, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+O-Mannosyltransferases+affect+sensory+axon+wiring+and+dynamic+chirality+of+body+posture+in+the+Drosophila+embryo.">Protein O-Mannosyltransferases affect sensory axon wiring and dynamic chirality of body posture in the Drosophila embryo.</a> Journal of Neuroscience. 38 (7), 1850-1865 (2018).</li><li>Nakamura, N., Lyalin, D., Panin, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+O-mannosylation+in+animal+development+and+physiology:+From+human+Disorders+to+Drosophila+phenotypes.">Protein O-mannosylation in animal development and physiology: From human Disorders to Drosophila phenotypes.</a> Seminars in Cell &amp; Developmental Biology. 21, 622-630 (2010).</li><li>Lyalin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+twisted+gene+encodes+Drosophila+protein+O-mannosyltransferase+2+and+genetically+interacts+with+the+rotated+abdomen+gene+encoding+Drosophila+protein+O-mannosyltransferase+1.">The twisted gene encodes Drosophila protein O-mannosyltransferase 2 and genetically interacts with the rotated abdomen gene encoding Drosophila protein O-mannosyltransferase 1.</a> Genetics. 172, 343-353 (2006).</li><li>Beltr&#225;n-Valero de Bernabe, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+the+O-Mannosyltransferase+gene+POMT1+give+rise+to+the+severe+neuronal+migration+disorder+Walker-Warburg+Syndrome.">Mutations in the O-Mannosyltransferase gene POMT1 give rise to the severe neuronal migration disorder Walker-Warburg Syndrome.</a> American Journal of Human Genetics. 71, 1033-1043 (2002).</li><li>Reeuwijk, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=POMT2+mutations+cause+alpha-dystroglycan+hypoglycosylation+and+Walker-Warburg+syndrome.">POMT2 mutations cause alpha-dystroglycan hypoglycosylation and Walker-Warburg syndrome.</a> Journal of Medical Genetics. 42, 907-912 (2005).</li><li>Jaeken, J., Matthijs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Congenital+disorders+of+glycosylation:+A+rapidly+expanding+disease+family.">Congenital disorders of glycosylation: A rapidly expanding disease family.</a> Annual Reviews of Genomics and Human Genetics. 8, 261-278 (2007).</li><li>Leyten, Q. H., Gabreels, F. J., Renier, W. O., ter Laak, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Congenital+muscular+dystrophy:+a+review+of+the+literature.">Congenital muscular dystrophy: a review of the literature.</a> Clinical and Neurological Neurosurgery. 98 (4), 267-280 (1996).</li><li>Roberts, D. B., Hames, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila:+A+Practical+Approach.+2nd+ed.">Drosophila: A Practical Approach. 2nd ed.</a> The Practical Approach Series. , 389 (1998).</li><li>Heckscher, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Even-Skipped++interneurons+are+core+components+of+a+sensorimotor+circuit+that+maintains+left-right+symmetric+muscle+contraction+amplitude.">Even-Skipped+ interneurons are core components of a sensorimotor circuit that maintains left-right symmetric muscle contraction amplitude.</a> Neuron. 88, 314-329 (2015).</li><li>Penjweini, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+monitoring+of+live+cell+proliferation+in+presence+of+PVP-Hypericin:+a+new+strategy+using+ms+pulses+of+LED+and+the+fluorescent+dye+CFSE.">Long-term monitoring of live cell proliferation in presence of PVP-Hypericin: a new strategy using ms pulses of LED and the fluorescent dye CFSE.</a> J. Microscopy. 245, 100-108 (2011).</li></ol>

Vår metode gir en kvantitativ måte å analysere viktige embryo atferd under utvikling, for eksempel peristaltisk muskel sammentrekning bølger, inkludert bølge periodisitet, amplitude og mønster, samt bølge effekt på embryo rullende og holdning. Dette kan være nyttig i analyser av ulike mutanter å studere rollen som spesifikke gener i å regulere disse og andre atferd under embryonale utviklingen. Vi har brukt endringer i muskel-spesifikke GFP markør intensitet for å analysere muskel sammentrekning amplitude, f...

Peristaltisk muskel sammentrekning er en rytmisk motor atferd som ligner på gåing og bading i mennesker1,2,3. Embryonale muskelsammentrekninger sett i Drosophila sent stadium embryo representerer et eksempel på en slik oppførsel. Drosophila er en utmerket modell organisme til å studere ulike utviklingsmessige prosesser fordi embryonale utviklingen i Drosophila er godt preget, relativt kort, og lett å overvåke. Det overordnede målet med vår metode er å nøye registrere og analysere bølgelignende mønster av sammentrekning og avslapping av embryonale muskler. Vi brukte en enkel, ikke-invasiv tilnærming som gir en detaljert visualisering, innspilling og analyse av muskelsammentrekninger. Denne metoden kan også være potensielt brukes til å studere andre in vivo prosesser, slik som embryonale rullende sett i sent stadium embryo like før klekking. I tidligere studier, embryonale muskelsammentrekninger var for det meste analysert i form av frekvens og retning1,2. For å anslå den relative omfanget av sammentrekninger som de fremgang langs kroppen aksen i fremre eller bakre retning, har vi brukt embryo uttrykke GFP spesielt i musklene. Denne analysen gir en mer kvantitativ måte å analysere muskelsammentrekninger og å avdekke hvordan kroppens holdning i embryo opprettholdes under serie peristaltisk bølger av muskelsammentrekninger.
Peristaltisk muskelsammentrekninger styres av sentrale mønster generator (CPG) kretser og kommunikasjon mellom neurons av det perifere nervesystemet (PNS), det sentrale nervesystemet (CNS), og musklene4,5. Unnlatelse av å produsere normal peristaltisk muskelsammentrekninger kan føre til defekter som unnlatelse av å klekkes2 og unormal larvestadiet bevegelse6 og kan være en indikasjon på nevrologiske misdannelser. Live Imaging av peristaltisk bølger av muskel sammentrekning og detaljert analyse av sammentrekning fenotyper kan bidra til å avdekke patogene mekanismer knyttet til genetiske defekter som påvirker muskler og nevrale kretser involvert i bevegelse. Vi har nylig brukt denne tilnærmingen til å undersøke mekanismer som resulterer i en kropp holdning vridning fenotype av protein O-mannosyltransferase (POMT) mutanter7.
Protein O-mannosylation (pom) er en spesiell type posttranslational modifikasjon, der en mannose sukker tilsettes til Serine eller threonin rester av sekretoriske Pathway proteiner8,9. Genetiske defekter i POM forårsake medfødt muskel dystrofi (CMD) hos mennesker10,11,12. Vi undersøkte den utløsende mekanismer for disse sykdommene bruker Drosophila som modell system. Vi fant at embryo med mutasjoner i Drosophila protein O-mannosyltransferase gener POMT1 og POMT2 (aka roterte magen (RT) og vridd (tw)) viser en forskyvning ("rotasjon") av kroppens segmenter, noe som resulterer i en unormal kroppsholdning7. Interessant, falt denne feilen med den utviklingsmessige scenen når peristaltisk muskelsammentrekninger blir fremtredende7.
Siden unormal kroppsholdning i POM mutant embryo oppstår når muskulaturen og epidermis er allerede dannet og peristaltisk bølger av koordinert muskelsammentrekninger har startet, hypotetisk gjennomsnitt vi at unormal kroppsholdning kan være et resultat av unormal muskel sammentrekninger i stedet for en defekt i muskel eller/og epidermis morfologi7. CMDs kan være assosiert med unormal muskelsammentrekninger og holdning defekter13, og dermed analysen av holdningen fenotype i Drosophila POMT mutanter mai belyse patologiske mekanismer forbundet med muskel dystrofi . For å undersøke forholdet mellom kroppens holdning fenotype av Drosophila POMT mutanter og mulige unormalt i peristaltisk bølger av muskelsammentrekninger, bestemte vi oss for å analysere muskelsammentrekninger i detalj ved hjelp av en live tilnærming til bildebehandling.
Vår analyse av peristaltisk sammentrekning bølger i Drosophila embryo avdekket to distinkte sammentrekning moduser, utpekt som type 1 og type 2 bølger. Type 1 bølger er enkle bølger overføres fra fremre til bakre eller vice versa. Type 2 bølger er bifasisk bølger som starter på den fremre enden, spredd halvveis i bakre retning, øyeblikk stoppe, danner en timelig statisk sammentrekning, og deretter under den andre fasen, er feid av en peristaltisk sammentrekning som sprer forover fra den bakre enden. Wild-type embryo normalt generere en rekke sammentrekninger som består av ca 75% type 1 og 25% type 2 bølger. I kontrast, POMT mutant embryo generere type 1 og type 2 bølger på omtrent like relative frekvenser.
Vår tilnærming kan gi detaljert informasjon for kvantitativ analyse av muskelsammentrekninger og embryo rullende7. Denne tilnærmingen kan også tilpasses for analyser av andre atferd som involverer muskelsammentrekninger, som klekking og krypende.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:771px;" width="771">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Digital camera</td>
			<td style="width:155px;">Hamamatsu CMOS ORCA-Flash 4.0</td>
			<td style="width:119px;">C13440-20CU</td>
			<td style="width:283px;">With different emission filters</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Forceps</td>
			<td style="width:155px;">FST Dumont</td>
			<td style="width:119px;">11254-20</td>
			<td>Tip Dimensions 0.05 mm x 0.01 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">LED</td>
			<td style="width:155px;">X-cite BDX (Excelitas)</td>
			<td style="width:119px;">XLED1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Microscope</td>
			<td style="width:155px;">Carl Ziess Examiner D1</td>
			<td style="width:119px;">491405-0005-000</td>
			<td>Epiflourescence with time lapse</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Needle</td>
			<td style="width:155px;">BD&#160;</td>
			<td align="right" style="width:119px;">305767</td>
			<td>25 G x 1-1/2 in</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Paintbrush</td>
			<td style="width:155px;">Contemporary crafts</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Any paintbrush will work</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Petri dishes</td>
			<td style="width:155px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">25384-164</td>
			<td>60 mm x 15 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Software</td>
			<td style="width:155px;">HCImage Live</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Thread Zap Wax pen</td>
			<td style="width:155px;">Thread Zap II (by BeadSmith)(Amazon)</td>
			<td style="width:119px;">TZ1300</td>
			<td>Burner Tool</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:215px;">Tricorner plastic beaker</td>
			<td style="width:155px;">VWR</td>
			<td>25384-152</td>
			<td>100 mL</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live imaging and analysis of muscle contractions in drosophila embryo

Koordinert muskelsammentrekninger er en form for rytmisk atferd sett tidlig under utviklingen i Drosophila embryo. Neuronal sensorisk feedback kretser er pålagt å kontrollere denne oppførselen. Unnlatelse av å produsere rytmisk mønster av sammentrekninger kan være tegn på nevrologiske misdannelser. Vi har tidligere funnet at defekter i protein O-mannosylation, en posttranslational protein modifikasjon, påvirker axon morfologi av sensoriske neurons og resultere i unormal koordinert muskelsammentrekninger i embryo. Her presenterer vi en relativt enkel metode for innspilling og analyse av mønsteret av peristaltisk muskelsammentrekninger ved Live Imaging av sent stadium embryo opp til det punktet av klekking, som vi brukte til å karakterisere muskel sammentrekning fenotype av protein O-mannosyltransferase mutanter. Data innhentet fra disse opptakene kan brukes til å analysere muskel sammentrekning bølger, inkludert frekvens, retning av forplantning og relativ amplitude av muskelsammentrekninger på ulike kroppens segmenter. Vi har også undersøkt kroppens holdning og utnyttet en fluorescerende markør uttrykt spesielt i musklene for å nøyaktig bestemme plasseringen av embryo midtlinjen. En lignende tilnærming kan også utnyttes til å studere ulike andre atferd under utvikling, for eksempel embryo rullende og klekking.

Normale peristaltisk muskelsammentrekninger vises i en WT (Wild-type, Canton-S) embryo i film 1. Den gjennomsnittlige hyppigheten av peristaltisk bølger av muskelsammentrekninger i vår analyse var 47 sammentrekninger per time, og den gjennomsnittlige amplituden var 60% over Baseline for WT embryo. Det er vist embryo for et WT embryo i film 2, med den hvite pilen som markerer startposisjonen til et luftrør og en svart pil som viser posisjonen til en rygg vedheng. Rygg vedheng...

Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo at JoVE.com

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live Imaging og analyse av muskelsammentrekninger i Drosophila embryo

Her presenterer vi en metode for å spille inn embryonale muskelsammentrekninger i Drosophila embryo i en ikke-invasiv og detalj-orientert måte.

Coordinated muscle contractions are a form of rhythmic behavior seen early during development in Drosophila embryos. Neuronal sensory feedback circuits ...

Denne metoden tar for seg hvordan du analyserer utviklingsprosesser som muskelsammentrekninger og rullende som forekommer i Drosophila-embryoet. Noen fordeler med denne teknikken er at den ikke er invasiv og ganske detaljert, men det er relativt enkelt å utføre. Vår metode kan utvikles videre for analysebasert screening med høyt innhold for å isolere og analysere nye mutasjoner som påvirker embryonale muskelsammentrekninger og andre utviklingsprosesser.Når visualisering av muskelsammentrekninger, Det er viktig å riktig tid embryo samlinger fordi sammentrekninger begynner bare på et bestemt utviklingsstadium. Trinnvis visuell demonstrasjon kan i stor grad hjelpe til med den kvantitative analysen av utviklingsprosessene. For levende avbildning av monterte Drosophila embryoer, plasser embryoene på scenen av et epifluorescensmikroskop med timelapsefunksjon og et digitalt kamera med egnede utslippsfiltre og velg en 10X vannnedsenking objektiv linse.Deretter live video ta opp embryoene ved hjelp av riktig mikroskop opptak programvare for omtrent en til to timer med en oppkjøpsrate på fire rammer per sekund. På slutten av eksperimentet eksporterer du den innspilte videoen direkte til ImageJ. Velg bilde og beskjær for å tegne en boks rundt hvert enkelt embryo for å beskjære videoopptakene til størrelsen på hvert embryo.Klikk på Bilde, Transformer og roter for å rotere de beskårne bildene for å oppnå en vertikal posisjon av embryoet midtlinjen i forhold til skjermen. Hvis du vil angi avstandsmålinger til mikrometer, klikker du analyser og angi skala, og deretter angir du den kjente piksel-til-mikron-forholdskonverteringsfaktoren for mikroskopoppsettet. Alle påfølgende målinger vil da bli rapportert i mikrometer.For å analysere embryorulling, merk først posisjonen til en eller begge luftrøret til et embryo i den første rammen av videoen midtveis mellom bakre og fremre ender og klikk Analyser, Verktøy og Region of Interest Manager. Tegn et omtrentlig syv mikrometer med syv mikrometerboks rundt luftrøret, og klikk på T-tasten på tastaturet for å registrere denne posisjonen som en XY-koordinat. Merk plasseringen av det samme området i luftrøret etter peristaltiske sammentrekninger av interesse og tegn en linje som forbinder sentrene for hver boks som klikker M på tastaturet for å måle avstanden fra pre-sammentrekningsposisjonen til stillingen etter sammentrekning.For å analysere embryonale muskelsammentrekninger ved hjelp av embryoer som uttrykker fluorescerende muskelmarkører, bruk registrering av fluorescerende avlesning for å tegne et område av interesse sentrert rundt fluoriserende muskler i et bestemt kroppssegment av interesse. Velg kategorien Legg til T i Interesseområdet for å registrere posisjonen til interesseområdet. Klikk Områdeav interessebehandling og Mål for å registrere den gjennomsnittlige fluorescerende intensiteten for hvert område av interesse valgt for hver ramme av videoen.Flytt boksen til sentrene for andre brødtekstsegmenter av interesse, og klikk Legg til T for å registrere posisjonene sine for å få områder av interesse av samme størrelse i alle brødtekstsegmentene som skal analyseres. Hold nede Kontroll-tasten mens du velger alle interesseområdene som er registrert som XY-koordinater, i Interesseområdebehandling. Klikk Mer og Multi-Measure for å måle den gjennomsnittlige fluorescerende intensiteten for hvert område av interesse for alle rammene i videoen.Dette rapporterer hver måling i en tabell med hvert interesseområde som en kolonne i tabellen og hver ramme som en rad. Deretter overfører du tabellen til et regnearkprogram for videre analyse. Tegn en graf med rammenummeret på x-aksen og gjennomsnittlig fluorescensintensitet på y-aksen, og konverter rammenummeret til tid ved hjelp av de fire rammene per sekund bildefrekvens.Muskelsammentrekningene øker GFP-intensiteten etter hvert som de bringer mer GFP inn i nærheten av fokusområdet etter hvert som flere muskler trekkes inn under disse sammentrekningene. For å bestemme muskelsammentrekningsalituden, estimere den baseline GFP-intensiteten som gjennomsnittlig intensitet for regionene mellom topper. Vurder deretter økningen i GFP-fluorescensintensiteten i forhold til denne baselineen.Del deretter hver region av interesseintensitetsverdi med grunnlinjeintensiteten for å normalisere GFP-intensiteten til grunnlinjen. Sammenlign de normaliserte GFP-intensitetene ved bakre, mediale og fremre segmenter under muskelkonhtrekningsbølgen for å undersøke endringene i omfanget av muskelsammentrekning som bølgen forplanter seg og for å bestemme bølgens retning. For å sammenligne muskelsammentrekningene på venstre og høyre side av embryoet, analyser toppintensitetene for de samme segmentene på begge sider av embryoet.Bruk sammentrekningsalituden og tidspunktet for toppene for å avsløre forskjellene, om noen, og omfanget og tidspunktet for de peristaltiske muskelkongreksjonsbølgene. Her vises normale peristaltiske muskelsammentrekninger i en vill type Drosophila embryo. I denne videoen av å rulle i et vilt embryo, legg merke til at ryggvedhenget ikke beveger seg mens luftrøret indikerer at embryoet har rullet i skallet.I denne representative analysen, muskel sammentrekning topper i løpet av 165 til 178-sekunders tidsperiode representerer en enkelt fremover bølge. For dette embryoet ble ingen forskjell i amplituden og tidspunktet for muskelsammentrekningene målt på høyre og venstre side av embryoet. En peristaltisk sammentrekning er utpekt som en fremover type en bølge hvis profilen har en topp som oppstår på bakre regionen først etterfulgt av topper på midten og fremre regioner.En bakovertype en bølge er en topp som først oppstår på fremre segmenter og deretter forplanter seg mot bakre regioner. Type to bølger starter i den ene enden av embryoet og går videre mot de midterste regionene før de vender tilbake til sin opprinnelse som en feiende bølge re-initiert i motsatt ende. Kroppsholdningmuterte embryoer viser en unormal relativ frekvens av type en til type to bølgegenerasjon som resulterer i en kroppsstillingsavvik utpekt som kroppens torsjon eller rotasjon fenotype.For å bruke fluorescens som en avlesning for muskelsammentrekningsparametrene, er det viktig å bruke embryoer med en reporter i muskelvevet. Denne metoden kan brukes til samtidig registrering av muskelsammentrekninger av mange embryoer og for vurdering av svarene på ulike stimuli, narkotika eller miljøendringer.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-avbildning av<em&gt; Drosophila</em&gt; Pupal Eye

Inherent processes of Drosophila pupal development can shift and distort the eye epithelium in ways that make individual cell behavior difficult to track ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analyse av Sebrafisk Larver Skeletal Muscle Integrity med Evans blå Dye

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Observing Mitotic Division and Dynamics in a Live Zebrafish Embryo

Observerer Mitotisk divisjon og Dynamics i en Live Sebrafisk Embryo

Mitosis is critical for organismal growth and differentiation. The process is highly dynamic and requires ordered events to accomplish proper chromatin ...

Long-term Live Imaging of Drosophila Eye Disc

Long-term Live Imaging of Drosophila Eye Disc

Langsiktig live Imaging av<em&gt; Drosophila</em&gt; Eye Disc

Live imaging provides the ability to continuously track dynamic cellular and developmental processes in real time. Drosophila larval imaginal discs have ...

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Ovule dyrking for Live-celle Imaging av zygoten polarisering og Embryo mønstre Arabidopsis thaliana

In most flowering plants, the zygote and embryo are hidden deep in the mother tissue, and thus it has long been a mystery of how they develop dynamically; ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

I Vivo Avbildning av muskel-sene Morphogenesis i Drosophila Pupae

Muscles together with tendons and the skeleton enable animals including humans to move their body parts. Muscle morphogenesis is highly conserved from ...

Preparation of Drosophila Larval and Pupal Testes for Analysis of Cell Division in Live, Intact Tissue

Preparation of Drosophila Larval and Pupal Testes for Analysis of Cell Division in Live, Intact Tissue

Utarbeidelse av Drosophila Larval og Pupal Testiklene for analyse av celledivisjon i Live, intakt vev

Experimental analysis of cells dividing in living, intact tissues and organs is essential to our understanding of how cell division integrates with ...

Imaging Intranuclear Actin Rods in Live Heat Stressed Drosophila Embryos

Imaging Intranuclear Actin Rods in Live Heat Stressed Drosophila Embryos

Imaging Intranukleære Actin stenger i Live Heat Stresset Drosophila Embryoer

The purpose of this protocol is to visualize intranuclear actin rods that assemble in live Drosophila melanogaster embryos following heat stress. Actin ...

Drosophila Embryo Preparation and Microinjection for Live Cell Microscopy Performed using an Automated High Content Analyzer

Drosophila Embryo Forberedelse og Microinjection for Live Cell Mikroskopi Utført ved hjelp av en automatisert høyinnholdsanalysator

Modern approaches in quantitative live cell imaging have become an essential tool for exploring cell biology, by enabling the use of statistics and ...