Name: live imaging and analysis of muscle contractions in drosophila embryo
Uploaded: 2019-07-09T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo at JoVE.com

O projeto foi apoiado em parte pelos institutos nacionais de subsídios à saúde RO1 NS099409, NS075534, e CONACYT 2012-037 (S) para VP.

1. preparação
<ol><li>Prepare uma gaiola da mosca fazendo aproximadamente 50 furos em um copo plástico do tri-canto da capacidade de 100 mL usando uma agulha quente de 25 G (veja a tabela dos materiais).</li>
	<li>Prepare 60 mm x 15 mm de Petri com suco de maçã-Agar (3% agar e 30% suco de maçã).</li>
	<li>Prepare a pasta fresca do fermento misturando grânulos e água secos do fermento. Espalhe a pasta de levedura sobre as placas de agar maçã para aumentar a postura de ovos.</li>
	<li>Anestesi...

<ol>
	<li>Pereanu, W., Spindler, S., Im, E., Buu, N., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+emergence+of+patterned+movement+during+late+embryogenesis+of+Drosophila.">The emergence of patterned movement during late embryogenesis of Drosophila.</a> Developmental Neurobiology. 67, 1669-1685 (2007).</li><li>Suster, M. L., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+assembly+of+a+central+pattern+generator+without+sensory+input.">Embryonic assembly of a central pattern generator without sensory input.</a> Nature. 416, 174-178 (2002).</li><li>Crisp, S., Evers, J. F., Fiala, A., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+motor+coordination+in+Drosophila+embryos.">The development of motor coordination in Drosophila embryos.</a> Development. 135, 3707-3717 (2008).</li><li>Song, W., Onishi, M., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+multidendritic+sensory+neurons+are+necessary+for+rhythmic+locomotion+behavior+in+Drosophila+larvae.">Peripheral multidendritic sensory neurons are necessary for rhythmic locomotion behavior in Drosophila larvae.</a> Proceedings of National Academy of Science of the United States of America. 104, 5199-5204 (2007).</li><li>Hughes, C. L., Thomas, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensory+feedback+circuit+coordinates+muscle+activity+in+Drosophila.">A sensory feedback circuit coordinates muscle activity in Drosophila.</a> Molecular and Cellular Neuroscience. 35, 383-396 (2007).</li><li>Gorczyca, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Ppk26,+a+DEG/ENaC+channel+functioning+with+Ppk1+in+a+mutually+dependent+manner+to+guide+locomotion+behavior+in+Drosophila.">Identification of Ppk26, a DEG/ENaC channel functioning with Ppk1 in a mutually dependent manner to guide locomotion behavior in Drosophila.</a> Cell Reports. 9, 1446-1458 (2014).</li><li>Baker, R., Nakamura, N., Chandel, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+O-Mannosyltransferases+affect+sensory+axon+wiring+and+dynamic+chirality+of+body+posture+in+the+Drosophila+embryo.">Protein O-Mannosyltransferases affect sensory axon wiring and dynamic chirality of body posture in the Drosophila embryo.</a> Journal of Neuroscience. 38 (7), 1850-1865 (2018).</li><li>Nakamura, N., Lyalin, D., Panin, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+O-mannosylation+in+animal+development+and+physiology:+From+human+Disorders+to+Drosophila+phenotypes.">Protein O-mannosylation in animal development and physiology: From human Disorders to Drosophila phenotypes.</a> Seminars in Cell &amp; Developmental Biology. 21, 622-630 (2010).</li><li>Lyalin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+twisted+gene+encodes+Drosophila+protein+O-mannosyltransferase+2+and+genetically+interacts+with+the+rotated+abdomen+gene+encoding+Drosophila+protein+O-mannosyltransferase+1.">The twisted gene encodes Drosophila protein O-mannosyltransferase 2 and genetically interacts with the rotated abdomen gene encoding Drosophila protein O-mannosyltransferase 1.</a> Genetics. 172, 343-353 (2006).</li><li>Beltr&#225;n-Valero de Bernabe, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+the+O-Mannosyltransferase+gene+POMT1+give+rise+to+the+severe+neuronal+migration+disorder+Walker-Warburg+Syndrome.">Mutations in the O-Mannosyltransferase gene POMT1 give rise to the severe neuronal migration disorder Walker-Warburg Syndrome.</a> American Journal of Human Genetics. 71, 1033-1043 (2002).</li><li>Reeuwijk, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=POMT2+mutations+cause+alpha-dystroglycan+hypoglycosylation+and+Walker-Warburg+syndrome.">POMT2 mutations cause alpha-dystroglycan hypoglycosylation and Walker-Warburg syndrome.</a> Journal of Medical Genetics. 42, 907-912 (2005).</li><li>Jaeken, J., Matthijs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Congenital+disorders+of+glycosylation:+A+rapidly+expanding+disease+family.">Congenital disorders of glycosylation: A rapidly expanding disease family.</a> Annual Reviews of Genomics and Human Genetics. 8, 261-278 (2007).</li><li>Leyten, Q. H., Gabreels, F. J., Renier, W. O., ter Laak, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Congenital+muscular+dystrophy:+a+review+of+the+literature.">Congenital muscular dystrophy: a review of the literature.</a> Clinical and Neurological Neurosurgery. 98 (4), 267-280 (1996).</li><li>Roberts, D. B., Hames, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila:+A+Practical+Approach.+2nd+ed.">Drosophila: A Practical Approach. 2nd ed.</a> The Practical Approach Series. , 389 (1998).</li><li>Heckscher, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Even-Skipped++interneurons+are+core+components+of+a+sensorimotor+circuit+that+maintains+left-right+symmetric+muscle+contraction+amplitude.">Even-Skipped+ interneurons are core components of a sensorimotor circuit that maintains left-right symmetric muscle contraction amplitude.</a> Neuron. 88, 314-329 (2015).</li><li>Penjweini, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+monitoring+of+live+cell+proliferation+in+presence+of+PVP-Hypericin:+a+new+strategy+using+ms+pulses+of+LED+and+the+fluorescent+dye+CFSE.">Long-term monitoring of live cell proliferation in presence of PVP-Hypericin: a new strategy using ms pulses of LED and the fluorescent dye CFSE.</a> J. Microscopy. 245, 100-108 (2011).</li></ol>

Nosso método fornece uma maneira quantitativa de analisar comportamentos importantes do embrião durante o desenvolvimento, tais como ondas peristáltica da contração do músculo, incluindo a periodicidade da onda, a amplitude e o teste padrão, assim como o efeito da onda no rolamento e na postura do embrião. Isso pode ser útil em análises de diferentes mutantes para estudar o papel de genes específicos na regulação desses e outros comportamentos durante o desenvolvimento embrionário. Foram utilizadas alteraç...

A contração do músculo peristáltico é um comportamento motor rítmico semelhante ao andar e nadar em humanos1,2,3. As contrações musculares embrionárias observadas em embriões de fase tardia da Drosophila representam um exemplo de tal comportamento. A Drosophila é um organismo modelo excelente para estudar vários processos de desenvolvimento, porque a evolução embrionária na Drosophila é bem caracterizada, relativamente curta e fácil de monitorizar. O objetivo geral do nosso método é registrar e analisar cuidadosamente o padrão wavelike de contração e relaxamento dos músculos embrionários. Utilizamos uma abordagem simples, não invasiva, que oferece uma visualização detalhada, gravação e análise de contrações musculares. Este método também pode ser potencialmente utilizado para estudar outros processos in vivo, tais como o rolamento embrionário visto em embriões de estágio tardio, pouco antes da eclosão. Em estudos prévios, as contrações musculares embrionárias foram analisadas principalmente em termos de frequência e direção1,2. A fim de estimar a extensão relativa das contrações à medida que progridem ao longo do eixo do corpo na direção anterior ou posterior, usamos embriões expressando GFP especificamente nos músculos. Esta análise fornece uma forma mais quantitativa de analisar as contrações musculares e revelar como a postura corporal em embriões é mantida durante a série de ondas peristálticas de contrações musculares.
Contrações musculares peristálticas são controladas por circuitos de gerador de padrão central (CPG) e comunicações entre os neurônios do sistema nervoso periférico (PNS), o sistema nervoso central (SNC) e os músculos4,5. A falha produzir contrações peristáltica normais do músculo pode conduzir aos defeitos tais como a falha ao chocar2 e a locomoção larval anormal6 e pode ser indicativa de anomalias neurológicas. A imagem latente viva de ondas peristáltica da contração do músculo e a análise detalhada de fenótipos da contração podem ajudar a descobrir os mecanismos patogénicos associados com os defeitos genéticos que afetam os músculos e os circuitos neural envolvidos na locomoção. Nós usamos recentemente essa aproximação para investigar os mecanismos que resultam em um phenotype da torção da postura do corpo de mutantes de protein O-mannosyltransferase (pomt)7.
A proteína O-mannosilação (POM) é um tipo especial de modificação pós-translacional, onde um açúcar de manose é adicionado aos resíduos de serina ou treonina de proteínas da via secretora8,9. Defeitos genéticos em POM causam distrofias musculares congênitas (CMD) em humanos10,11,12. Nós investigamos os mecanismos causais destas doenças usando a Drosophila como um sistema modelo. Nós encontramos que os embriões com mutações nos genes POMT1 e POMT2 da proteína O-mannosyltransferase de Drosophila (aka girado abdômen (RT) e Twisted (TW)) mostram um deslocamento ("rotação") dos segmentos corporais, o que resulta em uma postura corporal anormal7. Curiosamente, este defeito coincidiu com o estágio de desenvolvimento quando as contrações musculares peristálticas se tornam proeminentes7.
Desde que a postura anormal do corpo em embriões do mutante de POM levanta-se quando a musculatura e a epiderme são formadas já e as ondas peristáltica de contrações coordenadas do músculo começaram, nós supor que a postura anormal do corpo poderia ser um resultado do músculo anormal contrações em vez de um defeito no músculo ou/e na morfologia da epiderme7. CMDs pode ser associado com as contrações musculares anormais e defeitos da postura13, e assim a análise do phenotype da postura em mutantes de Drosophila pomt pode elucidar os mecanismos patológicos associados com as distrofias musculares . A fim investigar a relação entre o phenotype da postura do corpo de mutantes de Drosophila pomt e de anomalias possíveis em ondas peristáltica de contrações do músculo, nós decidimos analisar as contrações do músculo em detalhe usando um vivo abordagem de imagem.
Nossa análise de ondas de contração peristáltica em embriões de Drosophila revelou dois modos distintos de contração, designados como ondas tipo 1 e tipo 2. As ondas do tipo 1 são ondas simples propagando-se de anterior para posterior ou vice-versa. As ondas tipo 2 são ondas bifásicas que iniciam na extremidade anterior, propagam-se a meio caminho na direção posterior, momentaneamente interrompem, formando uma contração estática temporal, e então, durante a segunda fase, são varridos por uma contração peristáltica que se propaga para a frente da extremidade posterior. Embriões de tipo selvagem normalmente geram uma série de contrações que consiste em aproximadamente 75% tipo 1 e 25% tipo 2 ondas. Em contraste, os embriões Pomt Mutant geram ondas tipo 1 e tipo 2 em frequências relativas aproximadamente iguais.
Nossa abordagem pode fornecer informações detalhadas para análise quantitativa das contrações musculares e do embrião circulante7. Essa abordagem também pode ser adaptada para análises de outros comportamentos envolvendo contrações musculares, como eclosão e rastejamento.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:771px;" width="771">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Digital camera</td>
			<td style="width:155px;">Hamamatsu CMOS ORCA-Flash 4.0</td>
			<td style="width:119px;">C13440-20CU</td>
			<td style="width:283px;">With different emission filters</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Forceps</td>
			<td style="width:155px;">FST Dumont</td>
			<td style="width:119px;">11254-20</td>
			<td>Tip Dimensions 0.05 mm x 0.01 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">LED</td>
			<td style="width:155px;">X-cite BDX (Excelitas)</td>
			<td style="width:119px;">XLED1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Microscope</td>
			<td style="width:155px;">Carl Ziess Examiner D1</td>
			<td style="width:119px;">491405-0005-000</td>
			<td>Epiflourescence with time lapse</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Needle</td>
			<td style="width:155px;">BD&#160;</td>
			<td align="right" style="width:119px;">305767</td>
			<td>25 G x 1-1/2 in</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Paintbrush</td>
			<td style="width:155px;">Contemporary crafts</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Any paintbrush will work</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Petri dishes</td>
			<td style="width:155px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">25384-164</td>
			<td>60 mm x 15 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Software</td>
			<td style="width:155px;">HCImage Live</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Thread Zap Wax pen</td>
			<td style="width:155px;">Thread Zap II (by BeadSmith)(Amazon)</td>
			<td style="width:119px;">TZ1300</td>
			<td>Burner Tool</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:215px;">Tricorner plastic beaker</td>
			<td style="width:155px;">VWR</td>
			<td>25384-152</td>
			<td>100 mL</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live imaging and analysis of muscle contractions in drosophila embryo

As contrações musculares coordenadas são uma forma de comportamento rítmico observado precocemente durante o desenvolvimento em embriões de Drosophila . Os circuitos de feedback sensorial neuronal são necessários para controlar esse comportamento. A falha produzir o teste padrão rítmico das contrações pode ser indicativa de anomalias neurológicas. Nós encontramos previamente que os defeitos na proteína O-mannosylation, uma modificação posttranslational da proteína, afetam a morfologia do axônio de neurônios sensoriais e resultam em contrações coordenadas anormais do músculo nos embriões. Aqui, nós apresentamos um método relativamente simples para gravar e analisar o teste padrão de contrações peristáltica do músculo pela imagem latente viva de embriões do estágio atrasado até o ponto da eclosão, que nós usamos para caracterizar o phenotype da contração do músculo da proteína Mutants O-mannosyltransferase. Os dados obtidos a partir dessas gravações podem ser utilizados para analisar as ondas de contração muscular, incluindo frequência, direção de propagação e amplitude relativa de contrações musculares em diferentes segmentos corporais. Nós igualmente examinamos a postura do corpo e tomado a vantagem de um marcador fluorescente expressado especificamente nos músculos para determinar exatamente a posição do midline do embrião. Uma aproximação similar pode igualmente ser utilizada para estudar vários outros comportamentos durante o desenvolvimento, tal como o rolamento e a eclosão do embrião.

Contrações musculares peristálticas normais são mostradas em um embrião de WT (Wild-Type, Canton-S) no filme 1. A frequência média de ondas peristálticas de contrações musculares em nossa análise foi de 47 contrações por hora e a amplitude média foi de 60% acima da linha de base para embriões de WT. O rolamento do embrião é mostrado para um embrião do peso no filme 2, com a seta branca que marca a posição inicial de uma traquéia e uma seta preta que descrev...

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Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Imagens ao vivo e análise de contrações musculares no embrião de Drosophila

Aqui, nós apresentamos um método para registrar contrações embrionárias do músculo em embriões da Drosophila em uma maneira não invasora e detalhe-orientada.

Coordinated muscle contractions are a form of rhythmic behavior seen early during development in Drosophila embryos. Neuronal sensory feedback circuits ...

Este método aborda como analisar processos de desenvolvimento, como contrações musculares e rolamentos que ocorrem no embrião Drosophila. Algumas vantagens dessa técnica são que ela é não invasiva e bastante detalhada, mas é relativamente simples de realizar. Nosso método pode ser desenvolvido ainda mais para triagem baseada em análise de alto conteúdo para isolar e analisar novas mutações que afetam contrações musculares embrionárias e outros processos de desenvolvimento.Ao visualizar contrações musculares, é importante cronometrar adequadamente as coletas de embriões porque as contrações começam apenas em um estágio específico de desenvolvimento. A demonstração visual passo a passo pode ajudar muito na análise quantitativa dos processos de desenvolvimento. Para imagens ao vivo de embriões de Drosophila montados, coloque os embriões no estágio de um microscópio de epifluorescência com uma função timelapse e uma câmera digital com filtros de emissão adequados e selecione uma lente objetiva de imersão de água de 10X.Em seguida, o vídeo ao vivo grava os embriões usando o software de gravação de microscópio apropriado por cerca de uma a duas horas com uma taxa de aquisição de quatro quadros por segundo. No final do experimento, exporte o vídeo gravado diretamente para ImageJ. Selecione imagem e cultura para desenhar uma caixa em torno de cada embrião individual para cortar as gravações de vídeo para o tamanho de cada embrião.Clique em Imagem, Transforme e Gire para girar as imagens cortadas para alcançar uma posição vertical do embrião midline em relação à tela. Para definir medições de distância para micrômetros, clique em Analisar e Definir escala, em seguida, digite o fator de conversão de proporção pixel para micn conhecido para a configuração do microscópio. Todas as medições subsequentes serão então relatadas em micrômetros.Para analisar o embrião rolando, primeiro marque a posição de uma ou ambas traqueias de um embrião no primeiro quadro do vídeo no meio do caminho entre as extremidades posterior e anterior e clique em Analisar, Ferramentas e Região de Interesse Manager. Desenhe um aproximadamente sete micrômetros por caixa de sete micrômetros ao redor da traqueia e clique na tecla T no teclado para gravar esta posição como uma coordenada XY. Marque a posição da mesma área da traqueia após contrações peristálticas de interesse e desenhe uma linha conectando os centros de cada caixa clicando M no teclado para medir a distância da posição de pré-contração à posição pós-contração.Para analisar contrações musculares embrionárias usando embriões expressando marcadores musculares fluorescentes, use o registro da leitura fluorescente para desenhar uma região de interesse centrada em torno dos músculos fluorescentes de um determinado segmento corporal de interesse. Selecione a guia Adicionar T no Gerenciador de Região de Interesse para registrar a posição da região de interesse. Clique em Gerente de Região de Interesse e Medida para registrar a intensidade fluorescente média de cada região de interesse selecionada para cada quadro do vídeo.Mova a caixa para os centros de outros segmentos de interesse do corpo e clique em Adicionar T para registrar suas posições para obter regiões de interesse de tamanho idêntico em todos os segmentos corporais a serem analisados. Na Região de Controle gerente, detém a chave Controle enquanto seleciona todas as regiões de interesse registradas como coordenadas XY. Clique em Mais e Multi-Medida para medir a intensidade fluorescente média de cada região de interesse para todos os quadros do vídeo.Isso relatará cada medição em uma tabela com cada região de interesse como uma coluna da tabela e cada quadro como uma linha. Em seguida, transfira a tabela para um programa de planilha para análise posterior. Plote um gráfico com o número do quadro no eixo x e a intensidade média de fluorescência no eixo y e converta o número do quadro em tempo usando a taxa de quatro quadros por segundo.As contrações musculares aumentam a intensidade do GFP à medida que trazem mais GFP para as proximidades da área focal à medida que mais músculos são puxados durante essas contrações. Para determinar a amplitude da contração muscular, estime a intensidade de GFP de base como a intensidade média das regiões entre os picos. Em seguida, avalie o aumento da intensidade de fluorescência do GFP em relação a esta linha de base.Em seguida, divida cada região de valor de intensidade de juros pela intensidade da linha de base para normalizar a intensidade do GFP para a linha de base. Compare as intensidades normalizadas de GFP nos segmentos posterior, medial e anterior durante a onda de contração muscular para examinar as mudanças na extensão da contração muscular à medida que a onda se propaga e determinar a direção da onda. Para comparar as contrações musculares nos lados esquerdo e direito do embrião, analise as intensidades máximas para os mesmos segmentos em ambos os lados do embrião.Use a amplitude de contração e o tempo dos picos para revelar as diferenças, se houver, e a extensão e o tempo das ondas de contração muscular peristáltica. Aqui são mostradas contrações musculares peristálticas normais em um embrião de Drosophila tipo selvagem. Neste vídeo de rolamento em um embrião tipo selvagem, note que o apêndice dorsal não se move enquanto a traqueia indica que o embrião rolou dentro de sua concha.Nesta análise representativa, os picos de contração muscular durante o período de tempo de 165 a 178 segundos representam uma única onda para a frente. Para este embrião, não houve diferença na amplitude e o tempo das contrações musculares foi medido nos lados direito e esquerdo do embrião. Uma contração peristáltica é designada como uma onda de frente tipo um se seu perfil tiver um pico que surge na região posterior primeiro seguido por picos nas regiões média e anterior.Uma onda de tipo um para trás é um pico que surge primeiro em segmentos anteriores e, em seguida, se propaga em direção a regiões posteriores. As ondas tipo dois começam em uma extremidade do embrião e seguem em direção às regiões médias antes de retornar à sua origem como uma onda de varredura reiniciada na extremidade oposta. Os embriões mutantes de postura corporal demonstram uma frequência relativa anormal do tipo um à geração de ondas tipo dois que resulta em uma anormalidade de postura corporal designada como o fenótipo de torção corporal ou rotação.Para usar a fluorescência como leitura para os parâmetros de contração muscular, é essencial usar embriões com um repórter no tecido muscular. Este método pode ser utilizado para o registro simultâneo das contrações musculares de muitos embriões e para a avaliação das respostas a diversos estímulos, drogas ou alterações ambientais.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

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