Name: live imaging and analysis of muscle contractions in drosophila embryo
Uploaded: 2019-07-09T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo at JoVE.com

Проект был частично поддержан Национальными институтами здравоохранения гранты RO1 NS099409, NS075534, и CONACYT 2012-037 (S) в Вице-президент.

1. Подготовка
<ol><li>Подготовка летать клетке, сделав около 50 отверстий в 100 мл потенциала трехугловой пластиковый стакан с помощью горячей 25 G иглы (см. Таблица материалов).</li>
	<li>Приготовьте 60 мм х 15 мм петри блюда с яблочным соком-агаром (3% агара и 30% яблочного сока).</li>
	<li>Подготов?...

<ol>
	<li>Pereanu, W., Spindler, S., Im, E., Buu, N., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+emergence+of+patterned+movement+during+late+embryogenesis+of+Drosophila.">The emergence of patterned movement during late embryogenesis of Drosophila.</a> Developmental Neurobiology. 67, 1669-1685 (2007).</li><li>Suster, M. L., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+assembly+of+a+central+pattern+generator+without+sensory+input.">Embryonic assembly of a central pattern generator without sensory input.</a> Nature. 416, 174-178 (2002).</li><li>Crisp, S., Evers, J. F., Fiala, A., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+motor+coordination+in+Drosophila+embryos.">The development of motor coordination in Drosophila embryos.</a> Development. 135, 3707-3717 (2008).</li><li>Song, W., Onishi, M., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+multidendritic+sensory+neurons+are+necessary+for+rhythmic+locomotion+behavior+in+Drosophila+larvae.">Peripheral multidendritic sensory neurons are necessary for rhythmic locomotion behavior in Drosophila larvae.</a> Proceedings of National Academy of Science of the United States of America. 104, 5199-5204 (2007).</li><li>Hughes, C. L., Thomas, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensory+feedback+circuit+coordinates+muscle+activity+in+Drosophila.">A sensory feedback circuit coordinates muscle activity in Drosophila.</a> Molecular and Cellular Neuroscience. 35, 383-396 (2007).</li><li>Gorczyca, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Ppk26,+a+DEG/ENaC+channel+functioning+with+Ppk1+in+a+mutually+dependent+manner+to+guide+locomotion+behavior+in+Drosophila.">Identification of Ppk26, a DEG/ENaC channel functioning with Ppk1 in a mutually dependent manner to guide locomotion behavior in Drosophila.</a> Cell Reports. 9, 1446-1458 (2014).</li><li>Baker, R., Nakamura, N., Chandel, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+O-Mannosyltransferases+affect+sensory+axon+wiring+and+dynamic+chirality+of+body+posture+in+the+Drosophila+embryo.">Protein O-Mannosyltransferases affect sensory axon wiring and dynamic chirality of body posture in the Drosophila embryo.</a> Journal of Neuroscience. 38 (7), 1850-1865 (2018).</li><li>Nakamura, N., Lyalin, D., Panin, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+O-mannosylation+in+animal+development+and+physiology:+From+human+Disorders+to+Drosophila+phenotypes.">Protein O-mannosylation in animal development and physiology: From human Disorders to Drosophila phenotypes.</a> Seminars in Cell &amp; Developmental Biology. 21, 622-630 (2010).</li><li>Lyalin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+twisted+gene+encodes+Drosophila+protein+O-mannosyltransferase+2+and+genetically+interacts+with+the+rotated+abdomen+gene+encoding+Drosophila+protein+O-mannosyltransferase+1.">The twisted gene encodes Drosophila protein O-mannosyltransferase 2 and genetically interacts with the rotated abdomen gene encoding Drosophila protein O-mannosyltransferase 1.</a> Genetics. 172, 343-353 (2006).</li><li>Beltr&#225;n-Valero de Bernabe, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+the+O-Mannosyltransferase+gene+POMT1+give+rise+to+the+severe+neuronal+migration+disorder+Walker-Warburg+Syndrome.">Mutations in the O-Mannosyltransferase gene POMT1 give rise to the severe neuronal migration disorder Walker-Warburg Syndrome.</a> American Journal of Human Genetics. 71, 1033-1043 (2002).</li><li>Reeuwijk, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=POMT2+mutations+cause+alpha-dystroglycan+hypoglycosylation+and+Walker-Warburg+syndrome.">POMT2 mutations cause alpha-dystroglycan hypoglycosylation and Walker-Warburg syndrome.</a> Journal of Medical Genetics. 42, 907-912 (2005).</li><li>Jaeken, J., Matthijs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Congenital+disorders+of+glycosylation:+A+rapidly+expanding+disease+family.">Congenital disorders of glycosylation: A rapidly expanding disease family.</a> Annual Reviews of Genomics and Human Genetics. 8, 261-278 (2007).</li><li>Leyten, Q. H., Gabreels, F. J., Renier, W. O., ter Laak, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Congenital+muscular+dystrophy:+a+review+of+the+literature.">Congenital muscular dystrophy: a review of the literature.</a> Clinical and Neurological Neurosurgery. 98 (4), 267-280 (1996).</li><li>Roberts, D. B., Hames, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila:+A+Practical+Approach.+2nd+ed.">Drosophila: A Practical Approach. 2nd ed.</a> The Practical Approach Series. , 389 (1998).</li><li>Heckscher, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Even-Skipped++interneurons+are+core+components+of+a+sensorimotor+circuit+that+maintains+left-right+symmetric+muscle+contraction+amplitude.">Even-Skipped+ interneurons are core components of a sensorimotor circuit that maintains left-right symmetric muscle contraction amplitude.</a> Neuron. 88, 314-329 (2015).</li><li>Penjweini, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+monitoring+of+live+cell+proliferation+in+presence+of+PVP-Hypericin:+a+new+strategy+using+ms+pulses+of+LED+and+the+fluorescent+dye+CFSE.">Long-term monitoring of live cell proliferation in presence of PVP-Hypericin: a new strategy using ms pulses of LED and the fluorescent dye CFSE.</a> J. Microscopy. 245, 100-108 (2011).</li></ol>

Наш метод обеспечивает количественный способ анализа важных поведения эмбрионов во время развития, таких как перистальтические волны сокращения мышц, включая периодичность волн, амплитуду и рисунок, а также волновое воздействие на подвижность эмбриона и осанку. Это может быть полезн?...

Перистальтический сокращения мышц является ритмическое моторное поведение, аналогичное ходьбе и плаванию у людей1,2,3. Эмбриональные сокращения мышц видели в Дрозофилы поздней стадии эмбрионов представляют собой пример такого поведения. Дрозофила является отличной моделью организма для изучения различных процессов развития, потому что эмбриональное развитие в дрозофиле хорошо характеризуется, относительно короткий, и легко контролировать. Общая цель нашего метода заключается в тщательной записи и анализе волнообразных моделей сокращения и расслабления эмбриональных мышц. Мы использовали простой, неинвазивный подход, который предлагает детальную визуализацию, запись и анализ мышечных сокращений. Этот метод также может быть потенциально использован для изучения других процессов in vivo, таких как эмбриональный прокат, наблюдаемый в эмбрионах на поздних стадиях эмбрионов непосредственно перед вылуплянием. В предыдущих исследованиях, эмбриональные сокращения мышц в основном были проанализированы с точки зрения частоты и направления1,2. Для того, чтобы оценить относительную степень сокращений, как они прогрессируют вдоль оси тела в передней или задней направлении, мы использовали эмбрионы, выражающие GFP специально в мышцах. Этот анализ предоставляет более количественный способ анализа мышечных сокращений и выявить, как осанка тела в эмбрионах поддерживается во время серии перистальтических волн мышечных сокращений.
Перистальтические сокращения мышц контролируются центральным генератором шаблона (CPG) схемами и связи между нейронами периферической нервной системы (PNS), центральной нервной системы (ЦНС), и мышц 4,5. Неспособность производить нормальные перистальтические сокращения мышц может привести к дефектам, таким как неспособность люк2 и ненормальные личиночного движения6 и может свидетельствовать о неврологических аномалий. Live изображения перистальтических волн сокращения мышц и подробный анализ фенотипов сокращения может помочь выявить патогенные механизмы, связанные с генетическими дефектами, влияющими на мышцы и нейронные цепи, участвующие в передвижении. Недавно мы использовали этот подход для исследования механизмов, которые приводят к осаде тела торсионфеи фенотипа protein O-mannosyltransferase (POMT) мутантов7.
Белок O-mannosylation (POM) является особым типом постпереводной модификации, где манноза сахар добавляется в сыворотки или трионин остатки секреторных белков пути8,9. Генетические дефекты в POM вызывают врожденные мышечные дистрофии (CMD) у людей10,11,12. Мы исследовали возбудительные механизмы этих заболеваний с использованием дрозофилы в качестве модели системы. Мы обнаружили, что эмбрионы с мутациями в протеине Drosophila O-mannosyltransferase генов POMT1 и POMT2 (также известной о вращающемся животе (rt) и витой (tw)) показывают смещение ("вращение") сегментов тела, что приводит к аномальной осанке тела7. Интересно, что этот дефект совпал с стадией развития, когда перистальтические сокращения мышц становятся заметными7.
Поскольку аномальная осанка тела в poM мутантэмбрионов возникает, когда мускулатура и эпидермис уже сформированы и перистальтические волны скоординированных мышечных сокращений начали, мы предположили, что ненормальная осанка тела может быть результатом аномальной мышцы сокращения, а не дефект в мышцах или / и эпидермис морфологии7. CMDs может быть связано с аномальными сокращениями мышц и дефектами осанки13, и, таким образом, анализ осанки фенотипа у мутантов Drosophila POMT может выяснить патологические механизмы, связанные с мышечной дистрофией . Для того, чтобы исследовать связь между осанкой тела фенотипом мутантов Drosophila POMT и возможными отклонениями в перистальтических волнах мышечных сокращений, мы решили детально проанализировать мышечные сокращения с помощью живого подход к визуализации.
Наш анализ перистальтических волн сокращения эмбрионов Дрозофилы выявил два различных режима сокращения, обозначенных как волны типа 1 и типа 2. Тип 1 волны простые волны, распространяющиеся от передней до задней или наоборот. Тип 2 волны двухфазных волн, которые инициируют на передней части, размножаются на полпути в задней направлении, на мгновение остановить, образуя временное статическое сокращение, а затем, во время второй фазы, прокатилась перистальтического сокращения, которое распространяется вперед от заднего конца. Эмбрионы дикого типа обычно генерируют серию сокращений, которая состоит примерно из 75% волн типа 1 и 25%. В отличие от этого, эмбрионы мутантов POMT генерируют волны типа 1 и типа 2 на примерно равных относительных частотах.
Наш подход может предоставить подробную информацию для количественного анализа мышечных сокращений и эмбриона прокатки7. Этот подход может быть также адаптирован для анализа других моделей поведения, связанных с мышечными сокращениями, таких как вылупление и ползание.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:771px;" width="771">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Digital camera</td>
			<td style="width:155px;">Hamamatsu CMOS ORCA-Flash 4.0</td>
			<td style="width:119px;">C13440-20CU</td>
			<td style="width:283px;">With different emission filters</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Forceps</td>
			<td style="width:155px;">FST Dumont</td>
			<td style="width:119px;">11254-20</td>
			<td>Tip Dimensions 0.05 mm x 0.01 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">LED</td>
			<td style="width:155px;">X-cite BDX (Excelitas)</td>
			<td style="width:119px;">XLED1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Microscope</td>
			<td style="width:155px;">Carl Ziess Examiner D1</td>
			<td style="width:119px;">491405-0005-000</td>
			<td>Epiflourescence with time lapse</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Needle</td>
			<td style="width:155px;">BD&#160;</td>
			<td align="right" style="width:119px;">305767</td>
			<td>25 G x 1-1/2 in</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Paintbrush</td>
			<td style="width:155px;">Contemporary crafts</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Any paintbrush will work</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Petri dishes</td>
			<td style="width:155px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">25384-164</td>
			<td>60 mm x 15 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Software</td>
			<td style="width:155px;">HCImage Live</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Thread Zap Wax pen</td>
			<td style="width:155px;">Thread Zap II (by BeadSmith)(Amazon)</td>
			<td style="width:119px;">TZ1300</td>
			<td>Burner Tool</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:215px;">Tricorner plastic beaker</td>
			<td style="width:155px;">VWR</td>
			<td>25384-152</td>
			<td>100 mL</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live imaging and analysis of muscle contractions in drosophila embryo

Скоординированные сокращения мышц являются одной из форм ритмического поведения видели рано во время развития в дрозофилы эмбрионов. Нейронные сенсорные цепи обратной связи необходимы для контроля такого поведения. Неспособность произвести ритмическую картину сокращений может свидетельствовать о неврологических аномалиях. Ранее мы обнаружили, что дефекты в белке O-mannosylation, постпереводной модификации белка, влияют на аксон морфологии сенсорных нейронов и привести к ненормальным скоординированных сокращений мышц в эмбрионах. Здесь мы представляем относительно простой метод для записи и анализа структуры перистальтических сокращений мышц путем живой визуализации эмбрионов поздней стадии до точки вылупления, который мы использовали для характеристики фенотипа белка сокращения мышц O-mannosyltransferase мутантов. Данные, полученные из этих записей, могут быть использованы для анализа волн сокращения мышц, включая частоту, направление распространения и относительную амплитуду мышечных сокращений на разных сегментах тела. Мы также изучили осанку тела и воспользовались флуоресцентным маркером, выраженным специально в мышцах, чтобы точно определить положение среднего эмбриона. Аналогичный подход также может быть использован для изучения различных других моделей поведения во время разработки, таких как катание эмбрионов и вылупление.

Нормальные перистальтические сокращения мышц показаны в WT (дикий тип, Кантон-S) эмбриона в фильме 1. Средняя частота перистальтических волн мышечных сокращений в нашем анализе составила 47 сокращений в час, а средняя амплитуда была на 60% выше базового уровня для эмбрион...

Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo at JoVE.com

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live Imaging и анализ мышечных сокращений в дрозофилы эмбриона

Здесь мы представляем метод записи эмбриональных мышечных сокращений в эмбрионах Дрозофилы в неинвазивной и подробно-ориентированной манере.

Coordinated muscle contractions are a form of rhythmic behavior seen early during development in Drosophila embryos. Neuronal sensory feedback circuits ...

Этот метод рассматривает, как анализировать процессы развития, такие как мышечные сокращения и прокатки, которые происходят в эмбрионе Дрозофилы. Некоторые преимущества этого метода в том, что он неинвазивный и довольно подробный, но это относительно простой в работе. Наш метод может быть разработан для скрининга на основе анализа высокого содержания для изоляции и анализа новых мутаций, влияющих на сокращение эмбриональных мышц и другие процессы развития.При визуализации мышечных сокращений, важно правильно время сбора эмбрионов, потому что сокращения начинаются только на определенной стадии развития. Пошаговая визуальная демонстрация может в значительной степени помочь в количественном анализе процессов развития. Для живой визуализации установленных эмбрионов дрозофилы поместите эмбрионы на стадию эпифлуоресцентного микроскопа с функцией таймлапса и цифровой камерой с подходящими фильтрами выбросов и выберите объектив для погружения в воду 10X.Затем в прямом эфире записывают эмбрионы с помощью соответствующего программного обеспечения для записи микроскопа в течение примерно одного-двух часов со скоростью приобретения четырех кадров в секунду. В конце эксперимента экспортируйте записанное видео непосредственно в ImageJ. Выберите изображение и урожай, чтобы нарисовать коробку вокруг каждого отдельного эмбриона, чтобы обрезать видеозаписи размером с каждый эмбрион.Нажмите изображение, преобразование и поворот, чтобы повернуть обрезанные изображения для достижения вертикального положения эмбриона средней линии по отношению к экрану. Чтобы установить измерения расстояния до микрометров, нажмите Анализ и Установить шкалу, а затем введите известный пиксель к коэффициенту микрона коэффициент преобразования для установки микроскопа. Все последующие измерения будут затем сообщены в микрометрах.Чтобы проанализировать прокатку эмбриона, сначала отметайте положение одной или обеих трахеи эмбриона в первом кадре видео на полпути между задней и передней концами и нажмите Анализ, Инструменты и регион интереса менеджера. Нарисуйте приблизительно семь микрометров на семь микрометров вокруг трахеи и нажмите клавишу T на клавиатуре, чтобы записать эту позицию в качестве координаты XY. Отметьте положение одной и той же области трахеи после перистальтических сокращений интереса и нарисуйте линию, соединяющую центры каждой коробки, нажав M на клавиатуре, чтобы измерить расстояние от предсуженного положения до пост-сокращения позиции.Для анализа эмбриональных мышечных сокращений с использованием эмбрионов, выражаюющих флуоресцентные мышечные маркеры, используйте запись флуоресцентного считывания, чтобы нарисовать область интереса, сосредоточенную вокруг флуоресцирующих мышц определенного сегмента тела, представляющих интерес. Выберите вкладку Add T в регионе менеджера по интересам для записи позиции региона, представляющих интерес. Нажмите Регион интерес менеджер и мера для записи средней флуоресцентной интенсивности каждого региона интересов выбран для каждого кадра видео.Переместите коробку в центры других сегментов тела, представляющих интерес, и нажмите Add T, чтобы записать свои позиции, чтобы получить области, представляющие интерес одинакового размера во всех сегментах тела, которые будут проанализированы. В регионе менеджера по интересам удерживайте ключ управления при выборе всех областей, представляющих интерес, записанных в качестве координат XY. Нажмите Больше и Multi-Measure для измерения среднего флуоресцентного интенсивности каждого региона, представляющих интерес для всех кадров видео.Это будет сообщать о каждом измерении в таблице с каждой областью, представляющих интерес, как столбец таблицы и каждый кадр в качестве строки. Затем перенесите таблицу в программу электронной таблицы для дальнейшего анализа. Участок график с числом кадров на х-оси и средняя интенсивность флуоресценции на оси и конвертировать число кадров в время, используя четыре кадра в секунду частоты кадров.Мышечные сокращения увеличить интенсивность GFP, поскольку они приносят больше GFP в непосредственной близости от координационного района, как больше мышц получить вытащил во время этих сокращений. Чтобы определить амплитуду сокращения мышц, оцените базовую интенсивность GFP как среднюю интенсивность регионов между пиками. Затем оцените увеличение интенсивности флуоресценции GFP по отношению к этому базовому уровню.Затем разделите каждый регион значения интенсивности интереса на базовую интенсивность для нормализации интенсивности GFP до базового уровня. Сравните нормализованные интенсивности GFP в задних, медиальных и передних сегментах во время волны сокращения мышц, чтобы изучить изменения в степени сокращения мышц по мере распространения волны и определить направление волны. Чтобы сравнить мышечные сокращения на левой и правой сторонах эмбриона, проанализируйте пик интенсивности для тех же сегментов по обе стороны эмбриона.Используйте амплитуду сокращения и сроки пиков, чтобы выявить различия, если таковые имеются, и степень и время перистальтических волн сокращения мышц. Здесь показаны нормальные перистальтические сокращения мышц в эмбрионе дикого типа Дрозофилы. В этом видео прокатки в эмбрионе дикого типа, обратите внимание, что спинной придаток не двигается в то время как трахея делает указание на то, что эмбрион проката в своей оболочке.В этом репрезентативном анализе пики сокращения мышц в период от 165 до 178 секунд представляют собой одну форвардную волну. Для этого эмбриона, никакой разницы в амплитуде и время мышечных сокращений была измерена на правой и левой сторонах эмбриона. Перистральное сокращение обозначено как передняя волна типа 1, если ее профиль имеет пик, который возникает в задней области, за которой сначала следуют пики в средних и передних регионах.Обратная волна типа 1 является пиком, который сначала возникает на передних сегментах, а затем распространяется в сторону задних областей. Волны типа два начинаются на одном конце эмбриона и ими идут к средним регионам, прежде чем вернуться к своему происхождению, так как радикальная волна вновь инициируется на противоположном конце. Тело осанки мутант эмбрионов продемонстрировать ненормальные относительную частоту типа один на тип двух волн поколения, что приводит к аномалии осанки тела назначен в качестве тела ксерсиона или вращения фенотипа.Для использования флуоресценции в качестве считывания параметров сокращения мышц, важно использовать эмбрионы с репортером в мышечной ткани. Этот метод может быть использован для одновременной записи мышечных сокращений многих эмбрионов и для оценки реакции на различные раздражители, препараты или изменения окружающей среды.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-визуализация<em&gt; Drosophila</em&gt; Куколки глаз

Inherent processes of Drosophila pupal development can shift and distort the eye epithelium in ways that make individual cell behavior difficult to track ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Анализ данио рерио Личинки скелетных мышц целостности с синий краситель Эванса

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Observing Mitotic Division and Dynamics in a Live Zebrafish Embryo

Наблюдение за митотического деления и динамика в живом данио Эмбрион

Mitosis is critical for organismal growth and differentiation. The process is highly dynamic and requires ordered events to accomplish proper chromatin ...

Long-term Live Imaging of Drosophila Eye Disc

Long-term Live Imaging of Drosophila Eye Disc

Долгосрочный Живая съемка<em&gt; Drosophila</em&gt; Диски глаз

Live imaging provides the ability to continuously track dynamic cellular and developmental processes in real time. Drosophila larval imaginal discs have ...

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

В пробирке Выращивания яйцеклетку для Live клеточной Imaging зигота поляризации и кучность эмбриона в проростках Arabidopsis thaliana

In most flowering plants, the zygote and embryo are hidden deep in the mother tissue, and thus it has long been a mystery of how they develop dynamically; ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

Живая визуализация мышей

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

В естественных условиях Imaging мышц сухожилие морфогенеза в куколки дрозофилы

Muscles together with tendons and the skeleton enable animals including humans to move their body parts. Muscle morphogenesis is highly conserved from ...

Preparation of Drosophila Larval and Pupal Testes for Analysis of Cell Division in Live, Intact Tissue

Preparation of Drosophila Larval and Pupal Testes for Analysis of Cell Division in Live, Intact Tissue

Подготовка Drosophila Ларваль и Pupal Тесты для анализа клеточного отдела в прямом эфире, Intact Ткани

Experimental analysis of cells dividing in living, intact tissues and organs is essential to our understanding of how cell division integrates with ...

Imaging Intranuclear Actin Rods in Live Heat Stressed Drosophila Embryos

Imaging Intranuclear Actin Rods in Live Heat Stressed Drosophila Embryos

Изображение Внутриядерных Actin Роды в Live Heat подчеркнул Drosophila эмбрионов

The purpose of this protocol is to visualize intranuclear actin rods that assemble in live Drosophila melanogaster embryos following heat stress. Actin ...

Drosophila Embryo Preparation and Microinjection for Live Cell Microscopy Performed using an Automated High Content Analyzer

Дрозофила Эмбрион Подготовка и микроинъекция для live Cell Микроскопия Выполняется с помощью автоматизированного анализа высокого содержания

Modern approaches in quantitative live cell imaging have become an essential tool for exploring cell biology, by enabling the use of statistics and ...