Name: live imaging and analysis of muscle contractions in drosophila embryo
Uploaded: 2019-07-09T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo at JoVE.com

El proyecto fue apoyado en parte por los Institutos Nacionales de Subvenciones de Salud RO1 NS099409, NS075534 y CONACYT 2012-037(S) para vicepresidente.

1. Preparación
<ol><li>Prepare una jaula de mosca haciendo aproximadamente 50 agujeros en un vaso de precipitados de plástico triesquina de 100 ml de capacidad utilizando una aguja caliente de 25 G (ver Tabla de materiales).</li>
	<li>Preparar platos Petri de 60 mm x 15 mm con jugo de manzana-agar (3% agar y 30% jugo de manzana).</li>
	<li>Preparar la pasta de levadura fresca mezclando gránulos de levadura seca y agua. Esparce la pasta de levadura sobre las placas de agar de manzana para aumentar la...

<ol>
	<li>Pereanu, W., Spindler, S., Im, E., Buu, N., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+emergence+of+patterned+movement+during+late+embryogenesis+of+Drosophila.">The emergence of patterned movement during late embryogenesis of Drosophila.</a> Developmental Neurobiology. 67, 1669-1685 (2007).</li><li>Suster, M. L., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+assembly+of+a+central+pattern+generator+without+sensory+input.">Embryonic assembly of a central pattern generator without sensory input.</a> Nature. 416, 174-178 (2002).</li><li>Crisp, S., Evers, J. F., Fiala, A., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+motor+coordination+in+Drosophila+embryos.">The development of motor coordination in Drosophila embryos.</a> Development. 135, 3707-3717 (2008).</li><li>Song, W., Onishi, M., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+multidendritic+sensory+neurons+are+necessary+for+rhythmic+locomotion+behavior+in+Drosophila+larvae.">Peripheral multidendritic sensory neurons are necessary for rhythmic locomotion behavior in Drosophila larvae.</a> Proceedings of National Academy of Science of the United States of America. 104, 5199-5204 (2007).</li><li>Hughes, C. L., Thomas, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensory+feedback+circuit+coordinates+muscle+activity+in+Drosophila.">A sensory feedback circuit coordinates muscle activity in Drosophila.</a> Molecular and Cellular Neuroscience. 35, 383-396 (2007).</li><li>Gorczyca, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Ppk26,+a+DEG/ENaC+channel+functioning+with+Ppk1+in+a+mutually+dependent+manner+to+guide+locomotion+behavior+in+Drosophila.">Identification of Ppk26, a DEG/ENaC channel functioning with Ppk1 in a mutually dependent manner to guide locomotion behavior in Drosophila.</a> Cell Reports. 9, 1446-1458 (2014).</li><li>Baker, R., Nakamura, N., Chandel, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+O-Mannosyltransferases+affect+sensory+axon+wiring+and+dynamic+chirality+of+body+posture+in+the+Drosophila+embryo.">Protein O-Mannosyltransferases affect sensory axon wiring and dynamic chirality of body posture in the Drosophila embryo.</a> Journal of Neuroscience. 38 (7), 1850-1865 (2018).</li><li>Nakamura, N., Lyalin, D., Panin, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+O-mannosylation+in+animal+development+and+physiology:+From+human+Disorders+to+Drosophila+phenotypes.">Protein O-mannosylation in animal development and physiology: From human Disorders to Drosophila phenotypes.</a> Seminars in Cell &amp; Developmental Biology. 21, 622-630 (2010).</li><li>Lyalin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+twisted+gene+encodes+Drosophila+protein+O-mannosyltransferase+2+and+genetically+interacts+with+the+rotated+abdomen+gene+encoding+Drosophila+protein+O-mannosyltransferase+1.">The twisted gene encodes Drosophila protein O-mannosyltransferase 2 and genetically interacts with the rotated abdomen gene encoding Drosophila protein O-mannosyltransferase 1.</a> Genetics. 172, 343-353 (2006).</li><li>Beltr&#225;n-Valero de Bernabe, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+the+O-Mannosyltransferase+gene+POMT1+give+rise+to+the+severe+neuronal+migration+disorder+Walker-Warburg+Syndrome.">Mutations in the O-Mannosyltransferase gene POMT1 give rise to the severe neuronal migration disorder Walker-Warburg Syndrome.</a> American Journal of Human Genetics. 71, 1033-1043 (2002).</li><li>Reeuwijk, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=POMT2+mutations+cause+alpha-dystroglycan+hypoglycosylation+and+Walker-Warburg+syndrome.">POMT2 mutations cause alpha-dystroglycan hypoglycosylation and Walker-Warburg syndrome.</a> Journal of Medical Genetics. 42, 907-912 (2005).</li><li>Jaeken, J., Matthijs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Congenital+disorders+of+glycosylation:+A+rapidly+expanding+disease+family.">Congenital disorders of glycosylation: A rapidly expanding disease family.</a> Annual Reviews of Genomics and Human Genetics. 8, 261-278 (2007).</li><li>Leyten, Q. H., Gabreels, F. J., Renier, W. O., ter Laak, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Congenital+muscular+dystrophy:+a+review+of+the+literature.">Congenital muscular dystrophy: a review of the literature.</a> Clinical and Neurological Neurosurgery. 98 (4), 267-280 (1996).</li><li>Roberts, D. B., Hames, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila:+A+Practical+Approach.+2nd+ed.">Drosophila: A Practical Approach. 2nd ed.</a> The Practical Approach Series. , 389 (1998).</li><li>Heckscher, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Even-Skipped++interneurons+are+core+components+of+a+sensorimotor+circuit+that+maintains+left-right+symmetric+muscle+contraction+amplitude.">Even-Skipped+ interneurons are core components of a sensorimotor circuit that maintains left-right symmetric muscle contraction amplitude.</a> Neuron. 88, 314-329 (2015).</li><li>Penjweini, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+monitoring+of+live+cell+proliferation+in+presence+of+PVP-Hypericin:+a+new+strategy+using+ms+pulses+of+LED+and+the+fluorescent+dye+CFSE.">Long-term monitoring of live cell proliferation in presence of PVP-Hypericin: a new strategy using ms pulses of LED and the fluorescent dye CFSE.</a> J. Microscopy. 245, 100-108 (2011).</li></ol>

Nuestro método proporciona una manera cuantitativa de analizar comportamientos importantes de embriones durante el desarrollo, como ondas de contracción muscular peristáltica, incluyendo periodicidad de onda, amplitud y patrón, así como el efecto de onda sobre la rotación y la postura de embriones. Esto puede ser útil en análisis de diferentes mutantes para estudiar el papel de genes específicos en la regulación de estos y otros comportamientos durante el desarrollo embrionario. Hemos utilizado cambios en la in...

La contracción muscular peristáltica es un comportamiento motor rítmico similar a caminar y nadar en humanos1,2,3. Las contracciones musculares embrionarias que se ven en los embriones de etapa tardía de Drosophila representan un ejemplo de tal comportamiento. La drosofilia es un excelente organismo modelo para estudiar varios procesos de desarrollo porque el desarrollo embrionario en Drosophila está bien caracterizado, relativamente corto y fácil de monitorear. El objetivo general de nuestro método es registrar y analizar cuidadosamente el patrón ondulación de contracción y relajación de los músculos embrionarios. Utilizamos un enfoque simple y no invasivo que ofrece una visualización detallada, registro y análisis de las contracciones musculares. Este método también se puede utilizar potencialmente para estudiar otros procesos in vivo, como la rodadura embrionaria que se ve en embriones de etapa tardía justo antes de la eclosión. En estudios anteriores, las contracciones musculares embrionariasse analizaron principalmente en términos de frecuencia y dirección 1,2. Con el fin de estimar el alcance relativo de las contracciones a medida que avanzan a lo largo del eje del cuerpo en la dirección anterior o posterior, hemos utilizado embriones que expresan GFP específicamente en los músculos. Este análisis proporciona una forma más cuantitativa de analizar las contracciones musculares y revelar cómo se mantiene la postura corporal en embriones durante una serie de ondas peristálticas de contracciones musculares.
Las contracciones musculares peristálticas son controladas por circuitos de generador de patrones centrales (CPG) y comunicaciones entre las neuronas del sistema nervioso periférico (PNS), el sistema nervioso central (SNC) y los músculos4,5. No producir contracciones musculares peristálticas normales puede conducir a defectos tales como falla en la eclosión2 y locomoción larval anormal6 y puede ser indicativo de anomalías neurológicas. Las imágenes en vivo de ondas peristálticas de contracción muscular y análisis detallados de fenotipos de contracción pueden ayudar a descubrir mecanismos patógenos asociados con defectos genéticos que afectan a los músculos y circuitos neuronales involucrados en la locomoción. Recientemente usamos ese enfoque para investigar mecanismos que resultan en un fenotipo de torsión de postura corporal de protein O-mannosyltransferase (POMT) mutantes7.
La proteína O-mannosilación (POM) es un tipo especial de modificación posttranslacional, donde se añade un azúcar de manona a los residuos de serina o trionina de las proteínas secretas de la vía8,9. Los defectos genéticos en el POM causan distrofias musculares congénitas (CMD) en humanos10,11,12. Investigamos los mecanismos causales de estas enfermedades utilizando Drosophila como sistema modelo. Encontramos que los embriones con mutaciones en los genes de la proteína Drosophila O-mannosiltransferasa POMT1 y POMT2 (también k.a. abdomen rotado (rt) y retorcidos (tw)) muestran un desplazamiento ("rotación") de los segmentos corporales, lo que resulta en una postura corporal anormal7. Curiosamente, este defecto coincidió con la etapa de desarrollo cuando las contracciones musculares peristálticas se vuelven prominentes7.
Dado que la postura corporal anormal en embriones mutantes POM surge cuando la musculatura y la epidermis ya están formadas y las ondas peristálticas de contracciones musculares coordinadas han comenzado, hipotetizado que la postura corporal anormal podría ser el resultado de un músculo anormal contracciones en lugar de un defecto en el músculo o /y epidermis morfología7. Las CMD pueden estar asociadas con contracciones musculares anormales y defectos de postura13,y por lo tanto el análisis del fenotipo de postura en mutantes Drosophila POMT puede aclarar los mecanismos patológicos asociados con distrofias musculares . Con el fin de investigar la relación entre el fenotipo de la postura corporal de los mutantes Drosophila POMT y las posibles anomalías en las ondas peristálticas de las contracciones musculares, decidimos analizar las contracciones musculares en detalle utilizando un enfoque de imágenes.
Nuestro análisis de ondas de contracción peristáltica en embriones droofílicos reveló dos modos de contracción distintos, designados como ondas de tipo 1 y tipo 2. Las ondas de tipo 1 son ondas simples que se propagan de anterior a posterior o viceversa. Las ondas de tipo 2 son ondas bifásicas que se inician en el extremo anterior, se propagan a mitad de camino en la dirección posterior, se detienen momentáneamente, forman una contracción estática temporal, y luego, durante la segunda fase, son barridas por una contracción peristáltica que se propaga hacia adelante desde el extremo posterior. Los embriones de tipo salvaje normalmente generan una serie de contracciones que consiste en aproximadamente 75% tipo 1 y 25% ondas tipo 2. Por el contrario, los embriones mutantes POMT generan ondas de tipo 1 y tipo 2 a frecuencias relativas aproximadamente iguales.
Nuestro enfoque puede proporcionar información detallada para el análisis cuantitativo de las contracciones musculares y la rodadura de embriones7. Este enfoque también podría adaptarse para analizar otros comportamientos relacionados con las contracciones musculares, como el eclosión y el rastreo.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:771px;" width="771">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Digital camera</td>
			<td style="width:155px;">Hamamatsu CMOS ORCA-Flash 4.0</td>
			<td style="width:119px;">C13440-20CU</td>
			<td style="width:283px;">With different emission filters</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Forceps</td>
			<td style="width:155px;">FST Dumont</td>
			<td style="width:119px;">11254-20</td>
			<td>Tip Dimensions 0.05 mm x 0.01 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">LED</td>
			<td style="width:155px;">X-cite BDX (Excelitas)</td>
			<td style="width:119px;">XLED1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Microscope</td>
			<td style="width:155px;">Carl Ziess Examiner D1</td>
			<td style="width:119px;">491405-0005-000</td>
			<td>Epiflourescence with time lapse</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Needle</td>
			<td style="width:155px;">BD&#160;</td>
			<td align="right" style="width:119px;">305767</td>
			<td>25 G x 1-1/2 in</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Paintbrush</td>
			<td style="width:155px;">Contemporary crafts</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Any paintbrush will work</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Petri dishes</td>
			<td style="width:155px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">25384-164</td>
			<td>60 mm x 15 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Software</td>
			<td style="width:155px;">HCImage Live</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Thread Zap Wax pen</td>
			<td style="width:155px;">Thread Zap II (by BeadSmith)(Amazon)</td>
			<td style="width:119px;">TZ1300</td>
			<td>Burner Tool</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:215px;">Tricorner plastic beaker</td>
			<td style="width:155px;">VWR</td>
			<td>25384-152</td>
			<td>100 mL</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live imaging and analysis of muscle contractions in drosophila embryo

Las contracciones musculares coordinadas son una forma de comportamiento rítmico que se ve temprano durante el desarrollo en embriones de Drosophila. Se requieren circuitos neuronales de retroalimentación sensorial para controlar este comportamiento. No producir el patrón rítmico de las contracciones puede ser indicativo de anomalías neurológicas. Anteriormente encontramos que los defectos en la proteína O-mannosilación, una modificación de la proteína posttranslacional, afectan la morfología del axón de las neuronas sensoriales y dan lugar a contracciones musculares coordinadas anormales en embriones. Aquí, presentamos un método relativamente simple para registrar y analizar el patrón de contracciones musculares peristálticas mediante imágenes en vivo de embriones en etapa tardía hasta el punto de eclosión, que utilizamos para caracterizar el fenotipo de contracción muscular de la proteína Mutantes o-mannosyltransferasa. Los datos obtenidos de estas grabaciones se pueden utilizar para analizar las ondas de contracción muscular, incluyendo la frecuencia, dirección de propagación y amplitud relativa de las contracciones musculares en diferentes segmentos del cuerpo. También hemos examinado la postura corporal y aprovechado un marcador fluorescente expresado específicamente en los músculos para determinar con precisión la posición de la línea media del embrión. Un enfoque similar también se puede utilizar para estudiar varios otros comportamientos durante el desarrollo, como laminación de embriones y la eclosión.

Las contracciones musculares peristálticas normales se muestran en un embrión WT (tipo salvaje, Canton-S) en la película 1. La frecuencia media de las ondas peristálticas de las contracciones musculares en nuestro análisis fue de 47 contracciones por hora y la amplitud media fue 60% por encima de la línea de base para los embriones WT. El balanceo de embriones se muestra para un embrión WT en la película 2, con la flecha blanca que marca la posición inicial de una trá...

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Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Imagen en vivo y análisis de contracciones musculares en Drosophila Embryo

Aquí, presentamos un método para registrar contracciones musculares embrionarias en embriones de Drosophila de una manera no invasiva y orientada a los detalles.

Coordinated muscle contractions are a form of rhythmic behavior seen early during development in Drosophila embryos. Neuronal sensory feedback circuits ...

Este método aborda cómo analizar los procesos de desarrollo como las contracciones musculares y el balanceo que se producen en el embrión de Drosophila. Algunas ventajas de esta técnica son que no es invasiva y bastante detallada, sin embargo, es relativamente fácil de realizar. Nuestro método se puede desarrollar aún más para el cribado basado en análisis de alto contenido para aislar y analizar nuevas mutaciones que afectan las contracciones musculares embrionarias y otros procesos de desarrollo.Al visualizar las contracciones musculares, es importante cronoficializar correctamente las colecciones de embriones porque las contracciones comienzan solo en una etapa específica del desarrollo. La demostración visual paso a paso puede ayudar en gran medida en el análisis cuantitativo de los procesos de desarrollo. Para obtener imágenes en directo de embriones Drosophila montados, coloque los embriones en el escenario de un microscopio de epifluorescencia con una función timelapse y una cámara digital con filtros de emisión adecuados y seleccione una lente objetivo de inmersión de agua 10X.A continuación, grabar vídeo en directo los embriones utilizando el software de grabación de microscopio adecuado durante aproximadamente una o dos horas con una tasa de adquisición de cuatro fotogramas por segundo. Al final del experimento, exporta el vídeo grabado directamente a ImageJ. Seleccione la imagen y el recorte para dibujar una caja alrededor de cada embrión individual para recortar las grabaciones de vídeo al tamaño de cada embrión.Haga clic en Imagen, Transformar y Rotar para rotar las imágenes recortadas para lograr una posición vertical de la línea media del embrión en relación con la pantalla. Para establecer las mediciones de distancia en micrómetros, haga clic en Analizar y establecer escala y, a continuación, introduzca el factor de conversión de relación de píxel a micrón conocido para la configuración del microscopio. Todas las mediciones posteriores se notificarán en micrómetros.Para analizar el laminación de embriones, primero marque la posición de una o ambas tráqueas de un embrión en el primer fotograma del vídeo a mitad de camino entre los extremos posterior y anterior y haga clic en Analizar, Herramientas y Región de Interest Manager. Dibuje una caja aproximada de siete micrómetros por siete micrómetros alrededor de la tráquea y haga clic en la tecla T del teclado para registrar esta posición como una coordenada XY. Marque la posición de la misma zona de la tráquea después de las contracciones peristálticas de interés y dibuje una línea que conecte los centros de cada caja haciendo clic en M en el teclado para medir la distancia desde la posición de pre-contracción hasta la posición post-contracción.Para analizar las contracciones musculares embrionarias utilizando embriones que expresan marcadores musculares fluorescentes, utilice el registro de la lectura fluorescente para dibujar una región de interés centrada alrededor de los músculos fluorescentes de un segmento de interés corporal en particular. Seleccione la pestaña Agregar T en el Administrador de regiones de intereses para registrar la posición de la región de interés. Haga clic en Administrador de región de interés y Medir para registrar la intensidad fluorescente media de cada región de interés seleccionada para cada fotograma del vídeo.Mueva el cuadro a los centros de otros segmentos de cuerpo de interés y haga clic en Agregar T para registrar sus posiciones y obtener regiones de interés de mismo tamaño en todos los segmentos de cuerpo que se analizarán. En el Administrador de regiones de interés, mantenga pulsada la tecla Control mientras selecciona todas las regiones de interés registradas como coordenadas XY. Haga clic en Más y Multi-Medida para medir la intensidad fluorescente media de cada región de interés para todos los fotogramas del vídeo.Esto notificará cada medida en una tabla con cada región de interés como una columna de la tabla y cada fotograma como una fila. A continuación, transfiera la tabla a un programa de hoja de cálculo para su posterior análisis. Trazar un gráfico con el número de fotograma en el eje X y la intensidad media de fluorescencia en el eje Y y convertir el número de fotograma en tiempo utilizando la velocidad de fotogramas de cuatro fotogramas por segundo.Las contracciones musculares aumentan la intensidad de la GFP a medida que traen más GFP a las proximidades del área focal a medida que se introducen más músculos durante estas contracciones. Para determinar la amplitud de la contracción muscular, estime la intensidad de la PFG basal como la intensidad media de las regiones entre picos. A continuación, evalúe el aumento de la intensidad de fluorescencia de la GFP en relación con esta línea de base.A continuación, divida cada región del valor de intensidad de interés por la intensidad de línea base para normalizar la intensidad de la PFN a la línea de base. Compare las intensidades de GFP normalizadas en los segmentos posterior, medial y anterior durante la onda de contracción muscular para examinar los cambios en la extensión de la contracción muscular a medida que la onda se propaga y para determinar la dirección de la onda. Para comparar las contracciones musculares en los lados izquierdo y derecho del embrión, analice las intensidades máximas de los mismos segmentos a ambos lados del embrión.Utilice la amplitud de contracción y la sincronización de los picos para revelar las diferencias, si las hay, y la extensión y el tiempo de las ondas de contracción muscular peristáltica. Aquí se muestran contracciones musculares peristálticas normales en un embrión Drosophila de tipo salvaje. En este video de rodar en un embrión de tipo salvaje, tenga en cuenta que el apéndice dorsal no se mueve mientras que la tráquea lo hace indicando que el embrión ha rodado dentro de su caparazón.En este análisis representativo, los picos de contracción muscular durante el período de tiempo de 165 a 178 segundos representan una sola onda hacia adelante. Para este embrión, no se midió ninguna diferencia en la amplitud y el tiempo de las contracciones musculares en los lados derecho e izquierdo del embrión. Una contracción peristáltica se designa como una onda de tipo uno hacia delante si su perfil tiene un pico que surge en la región posterior primero seguido de picos en las regiones media y anterior.Una onda de tipo hacia atrás es un pico que primero surge en los segmentos anteriores y luego se propaga hacia las regiones posteriores. Las ondas tipo comienzan en un extremo del embrión y proceden hacia las regiones medias antes de regresar a su origen como una onda de barrido reiniciada en el extremo opuesto. Los embriones mutantes de postura corporal demuestran una frecuencia relativa anormal de tipo uno para escribir dos generaciones de ondas que resulta en una anomalía de la postura corporal designada como fenotipo de torsión o rotación del cuerpo.Para utilizar la fluorescencia como lectura para los parámetros de contracción muscular, es esencial utilizar embriones con un reportero en el tejido muscular. Este método se puede utilizar para el registro simultáneo de las contracciones musculares de muchos embriones y para la evaluación de las respuestas a diversos estímulos, fármacos o cambios ambientales.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-proyección de imagen de la<em&gt; Drosophila</em&gt; Pupal Ojo

Inherent processes of Drosophila pupal development can shift and distort the eye epithelium in ways that make individual cell behavior difficult to track ...

Investigación

Biología del Desarrollo

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Análisis de pez cebra larvas esquelético Integridad del músculo con el colorante azul de Evans

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Observing Mitotic Division and Dynamics in a Live Zebrafish Embryo

La observación de la división mitótica y dinámica en un embrión de pez cebra en vivo

Mitosis is critical for organismal growth and differentiation. The process is highly dynamic and requires ordered events to accomplish proper chromatin ...

Long-term Live Imaging of Drosophila Eye Disc

Long-term Live Imaging of Drosophila Eye Disc

A largo plazo de imágenes en vivo<em&gt; Drosophila</em&gt; Disco de ojos

Live imaging provides the ability to continuously track dynamic cellular and developmental processes in real time. Drosophila larval imaginal discs have ...

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Cultivo de óvulos para la proyección de imagen de cigoto polarización de Live-celular y patrones del embrión en Arabidopsis thaliana

In most flowering plants, the zygote and embryo are hidden deep in the mother tissue, and thus it has long been a mystery of how they develop dynamically; ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

Imágenes en vivo de la fusión secundaria del paladar del ratón

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

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En Vivo Proyección de imagen del músculo-tendón morfogénesis en Drosophila pupa

Muscles together with tendons and the skeleton enable animals including humans to move their body parts. Muscle morphogenesis is highly conserved from ...

Preparation of Drosophila Larval and Pupal Testes for Analysis of Cell Division in Live, Intact Tissue

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Preparación de pruebas de larvas y pupales de Drosophila para el análisis de la división celular en vivo, tejido intacto

Experimental analysis of cells dividing in living, intact tissues and organs is essential to our understanding of how cell division integrates with ...

Imaging Intranuclear Actin Rods in Live Heat Stressed Drosophila Embryos

Imaging Intranuclear Actin Rods in Live Heat Stressed Drosophila Embryos

Imágenes Intranuclear Actin Rods en vivo calor estresado Drosophila Embriones

The purpose of this protocol is to visualize intranuclear actin rods that assemble in live Drosophila melanogaster embryos following heat stress. Actin ...

Drosophila Embryo Preparation and Microinjection for Live Cell Microscopy Performed using an Automated High Content Analyzer

Preparación y Microinyección de embriones de Drosophila para microscopía de células vivas realizada mediante un analizador automatizado de alto contenido

Modern approaches in quantitative live cell imaging have become an essential tool for exploring cell biology, by enabling the use of statistics and ...