Name: live imaging and analysis of muscle contractions in drosophila embryo
Uploaded: 2019-07-09T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo at JoVE.com

Projektet stöddes delvis av National Institutes of Health Grants RO1 NS099409, NS075534, och CONACYT 2012-037 (S) till VP.

1. förberedelser
<ol><li>Förbered en fluga bur genom att göra cirka 50 hål i en 100 mL kapacitet Tri-Corner Plastbägare med en varm 25 G nål (se tabell över material).</li>
	<li>Förbered 60 mm x 15 mm petriskålar med äppeljuice-agar (3% agar och 30% äppeljuice).</li>
	<li>Förbered färsk jästpasta genom att blanda torra jästgranulat och vatten. Sprid jästpasta på äppel agar plattor för att öka äggläggning.</li>
	<li>Anaesthetize om 50-60 flugor (Använd ungefär lika många män oc...

<ol>
	<li>Pereanu, W., Spindler, S., Im, E., Buu, N., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+emergence+of+patterned+movement+during+late+embryogenesis+of+Drosophila.">The emergence of patterned movement during late embryogenesis of Drosophila.</a> Developmental Neurobiology. 67, 1669-1685 (2007).</li><li>Suster, M. L., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+assembly+of+a+central+pattern+generator+without+sensory+input.">Embryonic assembly of a central pattern generator without sensory input.</a> Nature. 416, 174-178 (2002).</li><li>Crisp, S., Evers, J. F., Fiala, A., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+motor+coordination+in+Drosophila+embryos.">The development of motor coordination in Drosophila embryos.</a> Development. 135, 3707-3717 (2008).</li><li>Song, W., Onishi, M., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+multidendritic+sensory+neurons+are+necessary+for+rhythmic+locomotion+behavior+in+Drosophila+larvae.">Peripheral multidendritic sensory neurons are necessary for rhythmic locomotion behavior in Drosophila larvae.</a> Proceedings of National Academy of Science of the United States of America. 104, 5199-5204 (2007).</li><li>Hughes, C. L., Thomas, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensory+feedback+circuit+coordinates+muscle+activity+in+Drosophila.">A sensory feedback circuit coordinates muscle activity in Drosophila.</a> Molecular and Cellular Neuroscience. 35, 383-396 (2007).</li><li>Gorczyca, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Ppk26,+a+DEG/ENaC+channel+functioning+with+Ppk1+in+a+mutually+dependent+manner+to+guide+locomotion+behavior+in+Drosophila.">Identification of Ppk26, a DEG/ENaC channel functioning with Ppk1 in a mutually dependent manner to guide locomotion behavior in Drosophila.</a> Cell Reports. 9, 1446-1458 (2014).</li><li>Baker, R., Nakamura, N., Chandel, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+O-Mannosyltransferases+affect+sensory+axon+wiring+and+dynamic+chirality+of+body+posture+in+the+Drosophila+embryo.">Protein O-Mannosyltransferases affect sensory axon wiring and dynamic chirality of body posture in the Drosophila embryo.</a> Journal of Neuroscience. 38 (7), 1850-1865 (2018).</li><li>Nakamura, N., Lyalin, D., Panin, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+O-mannosylation+in+animal+development+and+physiology:+From+human+Disorders+to+Drosophila+phenotypes.">Protein O-mannosylation in animal development and physiology: From human Disorders to Drosophila phenotypes.</a> Seminars in Cell &amp; Developmental Biology. 21, 622-630 (2010).</li><li>Lyalin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+twisted+gene+encodes+Drosophila+protein+O-mannosyltransferase+2+and+genetically+interacts+with+the+rotated+abdomen+gene+encoding+Drosophila+protein+O-mannosyltransferase+1.">The twisted gene encodes Drosophila protein O-mannosyltransferase 2 and genetically interacts with the rotated abdomen gene encoding Drosophila protein O-mannosyltransferase 1.</a> Genetics. 172, 343-353 (2006).</li><li>Beltr&#225;n-Valero de Bernabe, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+the+O-Mannosyltransferase+gene+POMT1+give+rise+to+the+severe+neuronal+migration+disorder+Walker-Warburg+Syndrome.">Mutations in the O-Mannosyltransferase gene POMT1 give rise to the severe neuronal migration disorder Walker-Warburg Syndrome.</a> American Journal of Human Genetics. 71, 1033-1043 (2002).</li><li>Reeuwijk, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=POMT2+mutations+cause+alpha-dystroglycan+hypoglycosylation+and+Walker-Warburg+syndrome.">POMT2 mutations cause alpha-dystroglycan hypoglycosylation and Walker-Warburg syndrome.</a> Journal of Medical Genetics. 42, 907-912 (2005).</li><li>Jaeken, J., Matthijs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Congenital+disorders+of+glycosylation:+A+rapidly+expanding+disease+family.">Congenital disorders of glycosylation: A rapidly expanding disease family.</a> Annual Reviews of Genomics and Human Genetics. 8, 261-278 (2007).</li><li>Leyten, Q. H., Gabreels, F. J., Renier, W. O., ter Laak, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Congenital+muscular+dystrophy:+a+review+of+the+literature.">Congenital muscular dystrophy: a review of the literature.</a> Clinical and Neurological Neurosurgery. 98 (4), 267-280 (1996).</li><li>Roberts, D. B., Hames, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila:+A+Practical+Approach.+2nd+ed.">Drosophila: A Practical Approach. 2nd ed.</a> The Practical Approach Series. , 389 (1998).</li><li>Heckscher, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Even-Skipped++interneurons+are+core+components+of+a+sensorimotor+circuit+that+maintains+left-right+symmetric+muscle+contraction+amplitude.">Even-Skipped+ interneurons are core components of a sensorimotor circuit that maintains left-right symmetric muscle contraction amplitude.</a> Neuron. 88, 314-329 (2015).</li><li>Penjweini, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+monitoring+of+live+cell+proliferation+in+presence+of+PVP-Hypericin:+a+new+strategy+using+ms+pulses+of+LED+and+the+fluorescent+dye+CFSE.">Long-term monitoring of live cell proliferation in presence of PVP-Hypericin: a new strategy using ms pulses of LED and the fluorescent dye CFSE.</a> J. Microscopy. 245, 100-108 (2011).</li></ol>

Vår metod ger ett kvantitativt sätt att analysera viktiga embryobeteenden under utveckling, såsom peristaltiska muskelkontraktion vågor, inklusive vågperiodicitet, amplitud och mönster, samt våg effekt på embryots rullande och kroppshållning. Detta kan vara användbart i analyser av olika mutanter för att studera betydelsen av specifika gener i regleringen av dessa och andra beteenden under embryonal utveckling. Vi har använt förändringar i muskelspecifika GFP markör intensitet för att analysera muskelkont...

Peristaltisk muskelkontraktion är en rytmisk motorisk beteende som liknar promenader och simning i människor1,2,3. Embryonala muskelsammandragningar ses i Drosophila sena stadiet embryon utgör ett exempel på ett sådant beteende. Drosophila är en utmärkt modellorganism för att studera olika utvecklingsprocesser eftersom embryonal utveckling i Drosophila är väl karaktäriserad, relativt kort, och lätt att övervaka. Det övergripande målet med vår metod är att noggrant registrera och analysera vågliknande mönster av kontraktion och avslappning av embryonala muskler. Vi använde en enkel, icke-invasiv metod som erbjuder en detaljerad visualisering, registrering och analys av muskelsammandragningar. Denna metod kan också potentiellt användas för att studera andra in vivo-processer, såsom embryonal rullande ses i sena stadiet embryon strax före kläckningen. I tidigare studier, embryonala muskelsammandragningar analyserades mestadels i termer av frekvens och riktning1,2. För att uppskatta den relativa omfattningen av sammandragningar som de framsteg längs kroppen axeln i främre eller bakre riktning, vi har använt embryon som uttrycker GFP specifikt i muskler. Denna analys ger ett mer kvantitativt sätt att analysera muskelsammandragningar och att avslöja hur kroppshållning i embryon upprätthålls under serie av peristaltiska vågor av muskelsammandragningar.
Peristaltiska muskelsammandragningar styrs av centrala mönster Generator (CPG) kretsar och kommunikation mellan nervceller i det perifera nervsystemet (PNS), det centralanervsystemet (CNS), och muskler4,5. Underlåtenhet att producera normala peristaltiska muskelsammandragningar kan leda till defekter såsom underlåtenhet att kläcka2 och onormal larv förflyttning6 och kan tyda på neurologiska avvikelser. Levande avbildning av peristaltiska vågor av muskelkontraktion och detaljerad analys av kontraktion fenotyper kan hjälpa avslöja patogena mekanismer i samband med genetiska defekter som påverkar muskler och neurala kretsar inblandade i förflyttning. Vi använde nyligen denna metod för att undersöka mekanismer som resulterar i en kroppshållning vridning fenotyp av pprotein O-mannosyltransferase (pomt) mutanter7.
Protein O-mannosylation (POM) är en speciell typ av posttranslationell modifiering, där ett mannos-socker tillsätts till serin-eller treoninrester av sekretoriska väg proteiner8,9. Genetiska defekter i POM orsaka medfödda muskeldystrophies (CMD) hos människor10,11,12. Vi undersökte de orsakande mekanismerna hos dessa sjukdomar med hjälp av Drosophila som modellsystem. Vi fann att embryon med mutationer i Drosophila protein O-mannosyltransferase gener POMT1 och POMT2 (alias roterad buk (RT) och twisted (TW)) visar en förskjutning ("rotation") av kropps segment, vilket resulterar i en onormal kroppshållning7. Intressant, detta fel sammanföll med utvecklingsstadiet när peristaltiska muskelsammandragningar blir framträdande7.
Eftersom onormal kroppshållning i POM muterade embryon uppstår när muskulatur och epidermis redan bildas och peristaltiska vågor av samordnade muskelsammandragningar har börjat, vi hypotesen att onormal kroppshållning kan vara ett resultat av onormal muskel sammandragningar snarare än en defekt i muskler eller/och epidermis morfologi7. CMDs kan associeras med onormala muskelsammandragningar och kroppshållning defekter13, och därmed analysen av hållning fenotyp i Drosophila pomt mutanter kan belysa patologiska mekanismer i samband med muskeldystrofi . För att undersöka sambandet mellan kroppshållning fenotyp av Drosophila pomt mutanter och eventuella avvikelser i peristaltiska vågor av muskelsammandragningar, bestämde vi oss för att analysera muskelsammandragningar i detalj med hjälp av en levande Imaging-metoden.
Vår analys av peristaltiska kontraktion vågor i Drosophila embryon avslöjade två distinkta kontraktion lägen, betecknas som typ 1 och typ 2 vågor. Typ 1 vågor är enkla vågor förökningsmaterial från Anterior till posteriort eller vice versa. Typ 2 vågor är BiPhasic vågor som initierar vid den främre änden, propagera halvvägs i den bakre riktningen, tillfälligt stanna, bildar en temporal statisk kontraktion, och sedan, under den andra fasen, sveps av en peristaltisk kontraktion som propagerar framåt från den bakre änden. Vildtyp embryon genererar normalt en serie av sammandragningar som består av cirka 75% typ 1 och 25% typ 2 vågor. Pomt Mutant embryon genererar däremot typ 1-och typ 2-vågor vid ungefär lika relativa frekvenser.
Vårt tillvägagångssätt kan ge detaljerad information för kvantitativ analys av muskelsammandragningar och embryo rullande7. Detta tillvägagångssätt kan också anpassas för analyser av andra beteenden som involverar muskelsammandragningar, såsom kläckning och genomsökning.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:771px;" width="771">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Digital camera</td>
			<td style="width:155px;">Hamamatsu CMOS ORCA-Flash 4.0</td>
			<td style="width:119px;">C13440-20CU</td>
			<td style="width:283px;">With different emission filters</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Forceps</td>
			<td style="width:155px;">FST Dumont</td>
			<td style="width:119px;">11254-20</td>
			<td>Tip Dimensions 0.05 mm x 0.01 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">LED</td>
			<td style="width:155px;">X-cite BDX (Excelitas)</td>
			<td style="width:119px;">XLED1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Microscope</td>
			<td style="width:155px;">Carl Ziess Examiner D1</td>
			<td style="width:119px;">491405-0005-000</td>
			<td>Epiflourescence with time lapse</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Needle</td>
			<td style="width:155px;">BD&#160;</td>
			<td align="right" style="width:119px;">305767</td>
			<td>25 G x 1-1/2 in</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Paintbrush</td>
			<td style="width:155px;">Contemporary crafts</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Any paintbrush will work</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Petri dishes</td>
			<td style="width:155px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">25384-164</td>
			<td>60 mm x 15 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Software</td>
			<td style="width:155px;">HCImage Live</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Thread Zap Wax pen</td>
			<td style="width:155px;">Thread Zap II (by BeadSmith)(Amazon)</td>
			<td style="width:119px;">TZ1300</td>
			<td>Burner Tool</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:215px;">Tricorner plastic beaker</td>
			<td style="width:155px;">VWR</td>
			<td>25384-152</td>
			<td>100 mL</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live imaging and analysis of muscle contractions in drosophila embryo

Koordinerade muskelsammandragningar är en form av rytmisk beteende som setts tidigt under utvecklingen i Drosophila embryon. Neuronala sensoriska återkoppling kretsar krävs för att kontrollera detta beteende. Underlåtenhet att producera det rytmiska mönstret av sammandragningar kan tyda på neurologiska avvikelser. Vi fann tidigare att defekter i protein O-mannosylation, en posttranslationell proteinmodifiering, påverkar axonmorfologin hos sensoriska neuroner och resultera i onormala koordinerade muskelsammandragningar hos embryon. Här presenterar vi en relativt enkel metod för att registrera och analysera mönstret av peristaltiska muskelsammandragningar genom levande avbildning av sena stadier embryon fram till den punkt av kläckning, som vi brukade karakterisera muskelkontraktion fenotyp av protein O-mannosyltransferas mutanter. Data som erhålls från dessa inspelningar kan användas för att analysera muskelkontraktion vågor, inklusive frekvens, spridnings riktning och relativ amplitud av muskelsammandragningar på olika kropps segment. Vi har också undersökt kroppshållning och utnyttjat en fluorescerande markör som uttrycks specifikt i muskler för att exakt bestämma positionen för embryot mittlinjen. Ett liknande tillvägagångssätt kan också utnyttjas för att studera olika andra beteenden under utveckling, såsom embryo rullande och kläckning.

Normala peristaltiska muskelsammandragningar visas i en WT (Wild-Type, Canton-S) embryo i film 1. Den genomsnittliga frekvensen av peristaltiska vågor av muskelsammandragningar i vår analys var 47 sammandragningar per timme och den genomsnittliga amplituden var 60% över baslinjen för WT-embryon. Embryorullande visas för ett WT -embryo i film 2, med den vita pilen som markerar den ursprungliga positionen för ett luftstrupe och en svart pil som visar positionen för en dors...

Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo at JoVE.com

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Levande avbildning och analys av muskelsammandragningar i Drosophila embryo

Här presenterar vi en metod för att registrera embryonala muskelsammandragningar i Drosophila embryon i en icke-invasiv och detalj-orienterad sätt.

Coordinated muscle contractions are a form of rhythmic behavior seen early during development in Drosophila embryos. Neuronal sensory feedback circuits ...

Denna metod tar upp hur man analyserar utvecklingsprocesser såsom muskelsammandragningar och rullande som förekommer i Drosophila embryot. Några fördelar med denna teknik är att det är noninvasive och ganska detaljerad, ändå är det relativt enkelt att utföra. Vår metod kan utvecklas ytterligare för analysbaserad screening med hög innehåll för att isolera och analysera nya mutationer som påverkar embryonala muskelsammandragningar och andra utvecklingsprocesser.När visualisera muskelsammandragningar, Det är viktigt att korrekt tid embryosamlingar eftersom sammandragningar börjar endast på ett visst utvecklingsstadium. Steg-för-steg visuell demonstration kan kraftigt stöd i den kvantitativa analysen av utvecklingsprocesserna. För levande avbildning av monterade Drosophila embryon, placera embryona på scenen i en epifluorescens mikroskop med en timelapse funktion och en digitalkamera med lämpliga utsläppsfilter och välj en 10X vatten nedsänkning objektiv lins.Sedan live video spela in embryon med hjälp av lämplig mikroskop inspelning programvara för ungefär en till två timmar med en förvärvsfrekvens på fyra bilder per sekund. I slutet av experimentet exporterar du den inspelade videon direkt till ImageJ. Välj bild och beskära för att rita en ruta runt varje enskilt embryo för att beskära videoinspelningarna till storleken på varje embryo.Klicka på Bild, Omforma och rotera för att rotera de beskurna bilderna för att uppnå en vertikal position av embryot mittlinjen i förhållande till skärmen. Om du vill ange avståndsmätningar till mikrometer klickar du på Analysera och ange skala, sedan anger du den kända pixeln till micron ratio-konverteringsfaktorn för din mikroskopinställning. Alla efterföljande mätningar kommer då att rapporteras i mikrometer.För att analysera embryo rullande, först markera positionen för en eller båda luftstrupen av ett embryo i den första bildrutan i videon mitt emellan den bakre och främre ändar och klicka på Analysera, Verktyg och region av intresse manager. Rita en ungefärlig sju mikrometer med sju mikrometer låda runt luftstrupen och klicka på T-tangenten på tangentbordet för att spela in denna position som en XY-koordinat. Markera positionen för samma område i luftstrupen efter peristaltiska sammandragningar av intresse och dra en linje som förbinder centra för varje ruta klicka M på tangentbordet för att mäta avståndet från pre-kontraktion position till post-kontraktion position.För att analysera embryonala muskelsammandragningar med hjälp av embryon som uttrycker fluorescerande muskelmarkörer, använd inspelningen av den fluorescerande avläsningen för att dra en region av intresse centrerad kring fluorescerande musklerna i ett visst kroppssegment av intresse. Välj fliken Lägg till T i region med intressehanteraren om du vill registrera positionen för den region som är av intresse. Klicka på Region av intressehanteraren och Åtgärd om du vill registrera den genomsnittliga fluorescerande intensiteten för varje intresseregion som valts för varje bildruta i videon.Flytta rutan till centra för andra organ segment av intresse och klicka på Lägg till T för att registrera sina positioner för att få regioner av intresse av identisk storlek i alla de organ segment som ska analyseras. I region intressehanteraren håller du kontrollnyckeln medan du väljer alla de intresseområden som registrerats som XY-koordinater. Klicka på Fler och Multi-Åtgärd för att mäta medelvärdet fluorescerande intensitet för varje region av intresse för alla av bildrutor i videon.Detta kommer att rapportera varje mätning i en tabell med varje region av intresse som en kolumn i tabellen och varje ram som en rad. Överför sedan tabellen till ett kalkylprogram för vidare analys. Rita ett diagram med bildrutenumret på x-axeln och medelfluorescensintensiteten på y-axeln och omvandla bildrutenumret till tid med hjälp av bildfrekvensen fyra bildrutor per sekund.Muskelsammandragningarna öka GFP intensiteten som de föra mer GFP i närheten av fokalområdet som fler muskler får dras in under dessa sammandragningar. För att bestämma muskelkontraktion amplituden, uppskatta baslinjen GFP intensitet som den genomsnittliga intensiteten av regionerna mellan topparna. Sedan bedöma ökningen av GFP fluorescens intensitet i förhållande till denna baslinje.Sedan dividera varje region av intresse intensitetsvärde med baslinjen intensitet för att normalisera GFP intensitet till baslinjen. Jämför de normaliserade GFP intensiteter på bakre, mediala och främre segment under muskelkontraktion våg för att undersöka förändringar i omfattningen av muskel kontraktion som vågen propagerar och att bestämma riktningen på vågen. För att jämföra muskelsammandragningarna på vänster och höger sida av embryot, analysera toppintensiteterna för samma segment på båda sidor av embryot.Använd kontraktion amplituden och tidpunkten för topparna för att avslöja skillnaderna, om någon, och omfattningen och tidpunkten för de peristaltiska muskelkontraktionsvågorna. Här normala peristaltiska muskelsammandragningar i en vild typ Drosophila embryo visas. I denna video av rullande i en vild typ embryo, observera att dorsala bihang inte rör sig medan luftstrupen gör som visar att embryot har rullat inom sitt skal.I denna representativa analys, muskelkontraktion toppar under 165 till 178-sekunders tidsperiod representerar en enda framåt våg. För detta embryo mättes ingen skillnad i amplituden och tiden för muskelsammandragningarna på embryots högra och vänstra sida. En peristaltic sammandragning betecknas som en framåt typ en våg om dess profil har en topp som uppstår vid den bakre regionen först följt av toppar i mitten och främre regioner.En bakåt typ en våg är en topp som först uppstår vid främre segment och sedan propagerar mot bakre regioner. Typ två vågor börjar i ena änden av embryot och fortsätter mot de mellersta regionerna innan de återvänder till sitt ursprung som en svepande våg åter initieras i motsatt ände. Body hållning mutanta embryon visar en onormal relativ frekvens av typ ett att skriva två våg generation som resulterar i en kropp hållning onormala tillstånd som kroppen vridning eller rotation fenotyp.För att använda fluorescens som avläsning för muskelkontraktionparametrarna är det viktigt att använda embryon med en reporter i muskelvävnaden. Denna metod kan användas för samtidig registrering av muskelsammandragningarna hos många embryon och för bedömning av svaren på olika stimuli, droger eller miljöförändringar.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-avbildning av<em&gt; Drosophila</em&gt; PUPP Eye

Inherent processes of Drosophila pupal development can shift and distort the eye epithelium in ways that make individual cell behavior difficult to track ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analys av Zebrafish Larver skelettmuskulatur Integrity med Evans Blue Dye

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Observing Mitotic Division and Dynamics in a Live Zebrafish Embryo

Observation Mitotisk Division och dynamik i en Live Zebrafisk Embryo

Mitosis is critical for organismal growth and differentiation. The process is highly dynamic and requires ordered events to accomplish proper chromatin ...

Long-term Live Imaging of Drosophila Eye Disc

Long-term Live Imaging of Drosophila Eye Disc

Långsiktig Live avbildning av<em&gt; Drosophila</em&gt; Ögon Disc

Live imaging provides the ability to continuously track dynamic cellular and developmental processes in real time. Drosophila larval imaginal discs have ...

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Fröämnet odling för Live-cell Imaging av zygot polarisering och Embryo mallning i Arabidopsis thaliana.

In most flowering plants, the zygote and embryo are hidden deep in the mother tissue, and thus it has long been a mystery of how they develop dynamically; ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

In Vivo Avbildning av muskel-senan morfogenes i Drosophila puppor

Muscles together with tendons and the skeleton enable animals including humans to move their body parts. Muscle morphogenesis is highly conserved from ...

Preparation of Drosophila Larval and Pupal Testes for Analysis of Cell Division in Live, Intact Tissue

Preparation of Drosophila Larval and Pupal Testes for Analysis of Cell Division in Live, Intact Tissue

Beredning av Drosophila Larval och Pupal Testes för analys av celldelning i levande, intakt vävnad

Experimental analysis of cells dividing in living, intact tissues and organs is essential to our understanding of how cell division integrates with ...

Imaging Intranuclear Actin Rods in Live Heat Stressed Drosophila Embryos

Imaging Intranuclear Actin Rods in Live Heat Stressed Drosophila Embryos

Imaging Intranuclear Actin Rods i levande värme stressade Drosophila embryon

The purpose of this protocol is to visualize intranuclear actin rods that assemble in live Drosophila melanogaster embryos following heat stress. Actin ...

Drosophila Embryo Preparation and Microinjection for Live Cell Microscopy Performed using an Automated High Content Analyzer

Drosophila Embryo Förberedelse och Microinjection för Live Cell Mikroskopi utförs med hjälp av en automatiserad Hög innehåll Analyzer

Modern approaches in quantitative live cell imaging have become an essential tool for exploring cell biology, by enabling the use of statistics and ...