Name: ion exchange chromatography (iex) coupled to multi-angle light scattering (mals) for protein separation and characterization
Uploaded: 2019-04-05T15:00:00
Duration: 10 min 41 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ion Exchange Chromatography IEX Coupled to Multi-angle Light Scattering MALS for Protein Separation and Characterization at JoVE.com

يشكر المؤلفون الدكتور صافي Danieli (مركز وولفسون "تطبيق علم الأحياء الهيكلية"، الجامعة العبرية) للمشورة والتعاون. كما يشكر المؤلفون Danyel للتكنولوجيا الحيوية المحدودة (رحوفوت، إسرائيل) لتقديم المساعدة، وإنشاء نظام فبلك مالس التحليلية المستخدمة في هذه الدراسة.

<ol>
	<li>Lebendiker, M., Danieli, T., de Marco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Trip+Adviser+guide+to+the+protein+science+world:+a+proposal+to+improve+the+awareness+concerning+the+quality+of+recombinant+proteins.">The Trip Adviser guide to the protein science world: a proposal to improve the awareness concerning the quality of recombinant proteins.</a> BMC Research Notes. 7, 585 (2014).</li><li>Raynal, B., Lenormand, P., Baron, B., Hoos, S., England, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+assessment+and+optimization+of+purified+protein+samples:+why+and+how.">Quality assessment and optimization of purified protein samples: why and how.</a> Microbial Cell Factories. 13, 180 (2014).</li><li>Oliveira, C., Domingues, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+to+reach+high-quality+purified+recombinant+proteins.">Guidelines to reach high-quality purified recombinant proteins.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 102 (1), 81-92 (2018).</li><li>Manta, B., Obal, G., Ricciardi, A., Pritsch, O., Denicola, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tools+to+evaluate+the+conformation+of+protein+products.">Tools to evaluate the conformation of protein products.</a> Biotechnology Journal. 6 (6), 731-741 (2011).</li><li>Minton, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+applications+of+light+scattering+measurement+in+the+biological+and+biopharmaceutical+sciences.">Recent applications of light scattering measurement in the biological and biopharmaceutical sciences.</a> Analytical Biochemistry. 501, 4-22 (2016).</li><li>Sahin, E., Roberts, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size-Exclusion+Chromatography+with+Multi-angle+Light+Scattering+for+Elucidating+Protein+Aggregation+Mechanisms.">Size-Exclusion Chromatography with Multi-angle Light Scattering for Elucidating Protein Aggregation Mechanisms.</a> Methods in Molecular Biology. 899, 403-423 (2012).</li><li>Ogawa, T., Hirokawa, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+analyses+of+protein+dynamics+in+solution.">Multiple analyses of protein dynamics in solution.</a> Biophysical Reviews. 10 (2), 299-306 (2018).</li><li>Rebolj, K., Pahovnik, D., &#381;agar, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+Protein+Conjugate+Using+an+Asymmetrical-Flow+Field-Flow+Fractionation+and+a+Size-Exclusion+Chromatography+with+Multi-Detection+System.">Characterization of a Protein Conjugate Using an Asymmetrical-Flow Field-Flow Fractionation and a Size-Exclusion Chromatography with Multi-Detection System.</a> Analytical Chemistry. 84 (17), 7374-7383 (2012).</li><li>Liu, H., Gaza-Bulseco, G., Faldu, D., Chumsae, C., Sun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+of+Monoclonal+Antibodies.">Heterogeneity of Monoclonal Antibodies.</a> Journal of Pharmaceutical Sciences. 97 (7), 2426-2447 (2008).</li><li>Hintersteiner, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Charge+heterogeneity:+Basic+antibody+charge+variants+with+increased+binding+to+Fc+receptors.">Charge heterogeneity: Basic antibody charge variants with increased binding to Fc receptors.</a> mAbs. 8 (8), 1548-1560 (2016).</li><li>Wei, B., Berning, K., Quan, C., Zhang, Y. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycation+of+antibodies:+Modification,+methods+and+potential+effects+on+biological+functions.">Glycation of antibodies: Modification, methods and potential effects on biological functions.</a> mAbs. 9 (4), 586-594 (2017).</li><li>Amartely, H., Avraham, O., Friedler, A., Livnah, O., Lebendiker, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coupling+Multi+Angle+Light+Scattering+to+Ion+Exchange+chromatography+(IEX-MALS)+for+protein+characterization.">Coupling Multi Angle Light Scattering to Ion Exchange chromatography (IEX-MALS) for protein characterization.</a> Scientific Reports. 8 (1), 6907 (2018).</li><li>Goyon, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+size+exclusion+chromatography+columns+packed+with+sub-3&#956;m+particles+for+the+analysis+of+biopharmaceutical+proteins.">Evaluation of size exclusion chromatography columns packed with sub-3&#956;m particles for the analysis of biopharmaceutical proteins.</a> Journal of Chromatography A. 1498, 80-89 (2016).</li><li>Fekete, S., Beck, A., Veuthey, J. -. L., Guillarme, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ion-exchange+chromatography+for+the+characterization+of+biopharmaceuticals.">Ion-exchange chromatography for the characterization of biopharmaceuticals.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 113, 43-55 (2015).</li><li>Gasteiger, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ExPASy:+the+proteomics+server+for+in-depth+protein+knowledge+and+analysis.">ExPASy: the proteomics server for in-depth protein knowledge and analysis.</a> Nucleic Acids Research. 31 (13), 3784-3788 (2003).</li><li>Kopaciewicz, W., Regnier, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mobile+phase+selection+for+the+high-performance+ion-exchange+chromatography+of+proteins.">Mobile phase selection for the high-performance ion-exchange chromatography of proteins.</a> Analytical Biochemistry. 133 (1), 251-259 (1983).</li><li>Lebendiker, M., Danieli, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+prone-to-aggregate+proteins.">Production of prone-to-aggregate proteins.</a> FEBS Letters. 588 (2), 236-246 (2014).</li><li>Lebendiker, M., Maes, M., Friedler, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+screening+methodology+for+purifying+proteins+with+aggregation+problems.">A screening methodology for purifying proteins with aggregation problems.</a> Methods in Molecular Biology. 1258, 261-281 (2015).</li><li>Fu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultraviolet+refractometry+using+field-based+light+scattering+spectroscopy.">Ultraviolet refractometry using field-based light scattering spectroscopy.</a> Optics Express. 17 (21), 18878-18886 (2009).</li><li>Scafati, A. R., Stornaiuolo, M. R., Novaro, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physicochemical+and+Light+Scattering+Studies+on+Ribosome+Particles.">Physicochemical and Light Scattering Studies on Ribosome Particles.</a> Biophysical Journal. 11 (4), 370-384 (1971).</li><li>Berthaud, A., Manzi, J., P&#233;rez, J., Mangenot, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+Detergent+Organization+around+Aquaporin-0+Using+Small-Angle+X-ray+Scattering.">Modeling Detergent Organization around Aquaporin-0 Using Small-Angle X-ray Scattering.</a> Journal of the American Chemical Society. 134 (24), 10080-10088 (2012).</li><li>Umrethia, M., Kett, V. L., Andrews, G. P., Malcolm, R. K., Woolfson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selection+of+an+analytical+method+for+evaluating+bovine+serum+albumin+concentrations+in+pharmaceutical+polymeric+formulations.">Selection of an analytical method for evaluating bovine serum albumin concentrations in pharmaceutical polymeric formulations.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 51 (5), 1175-1179 (2010).</li><li>Hirano, A., Arakawa, T., Kameda, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+arginine+on+multimodal+anion+exchange+chromatography.">Effects of arginine on multimodal anion exchange chromatography.</a> Protein Expression and Purification. 116, 105-112 (2015).</li><li>Avraham, O., Bayer, E. A., Livnah, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crystal+structure+of+afifavidin+reveals+common+features+of+molecular+assemblage+in+the+bacterial+dimeric+avidins.">Crystal structure of afifavidin reveals common features of molecular assemblage in the bacterial dimeric avidins.</a> The FEBS Journal. , (2018).</li><li>Lock, M., Alvira, M. R., Wilson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+Particle+Content+of+Recombinant+Adeno-Associated+Virus+Serotype+8+Vectors+by+Ion-Exchange+Chromatography.">Analysis of Particle Content of Recombinant Adeno-Associated Virus Serotype 8 Vectors by Ion-Exchange Chromatography.</a> Human Gene Therapy Methods. 23 (1), 56-64 (2012).</li><li>Patel, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-angle+light+scattering+as+a+process+analytical+technology+measuring+real-time+molecular+weight+for+downstream+process+control.">Multi-angle light scattering as a process analytical technology measuring real-time molecular weight for downstream process control.</a> mAbs. 10 (7), 945-950 (2018).</li></ol>

D.S. هو موظف في شركة تكنولوجيا وايت، المنتجات التي تستخدم في هذا البروتوكول. أ. ت. موظف Danyel للتكنولوجيا الحيوية، موزع صكوك وايت و ÄKTA.

مالس المستوى هو وسيلة قوية لفصل البروتين وتوصيف يسمح تصميم الشامل المولى دقيقة من البروتينات الصرفة كذلك اعتبارا من عينات غير المتجانسة، تميز الأصلي ليغومرات، المجاميع غير الأصلية، التساهمية ونونكوفالينت المجمعات، والبروتينات كونجوجاتيد. يمكن لبرنامج يتألف من تدرج خطي أو سلسلة من الخطوات تركيز الملح تحقيق فصل جيدة للسكان البروتين والسماح بتحليل مناسب لكل ذروة الفردية قبل مالس. التحسين إضافية قبل متفاوتة معلمات مختلفة، مثل التدرج المنحدر (راجع الخطوة 3، 4 من البروتوكول)، ويمكن أن يؤديها إذا كان مطلوباً حل أفضل. مالس المستوى يمكن مقايسة مراقبة جودة بروتين قيمة حيث أنه يوفر مستوى إضافية، حاسمة لتوصيف البروتين، مكملة لأساليب أخرى مثل مالس ثانية.
بينما مالس ثانية تقنية موحدة ومشتركة للتصميم الجماعي المولى البروتين، القرار منخفضة نسبيا من الأعمدة ثانية التحليلية المعيارية قد تحد من دقة القياسات الشامل المولى حققها مالس12. وتشمل بعض الأمثلة على القيود المفروضة على مالس ثانية الحلول التي تحتوي على التوالي ليغومرات، مستويات عالية من التجميع التي لا يفصلون تماما من ذروة مونومر، والسكان غير متجانسة مع الجماهير المولى مماثلة، مثل البروتينات المعدلة.
المستوى طريقة الفصل لوني أكثر تعقيداً تصميم وتنفيذ من ثانية، ولكن يمكن أن تكمل المعلومات المستقاة من تجربة مالس المستوى وأحيانا تكون مفيدة أكثر من تحليل مالس ثانية. مالس المستوى اتسم بنجاح جسم المتغيرات التي تشترك في نفس المولى، الشامل، ليغومرات التي لا يفصل تماما في ثانية والببتيدات القصيرة التي يصعب على تحليل ثانية12،24. أيضا، يمكن حل الجمعيات الجزيئات التي تكون كبيرة جداً تكون مفصولة ثانية، مثل جسيمات فارغة من الفيروسات المرتبطة بالغدة (إف)، والكامل (تحتوي على الحمض النووي الفيروسي) ب المستوى25 قبل التحليل مالس. مقارنة ثانية، المستوى يوفر قدرات أكثر تنوعاً في الفصل14 ، والمرونة في ضبط العديد من المعلمات لزيادة دقة الذروة، مثل درجة الحموضة العازلة، وأنواع الملح وأنواع وطول العمود، وغيرهم. خلافا ثانية، لا يوجد أي حد حجم لحقن العينة في المستوى، ويمكن تحليل أي جزيء مستقلة عن حجمه (انظر الجدول 1 في أمارتيلي et al.12). وهذا ميزة كبيرة من المستوى-مالس، أساسا لعينات بكثافة LS منخفضة، مثل البروتينات الصغيرة جداً أو البروتينات المخفف مع ميل للتجميع عند التركيز. منذ أعمدة المستوى التحليلي أكثر استقرارا وتميل إلى الإفراج عن الجسيمات أقل من ثانية الأعمدة، مالس المستوى يتطلب الموازنة قصيرة جداً من الوقت، واستقرت إشارات LS سريع جداً. وهذا يسمح لتشغيل التجارب الفردية كما هو موضح في هذا البروتوكول، ووقف تشغيل كما هو مطلوب.
خلافا للبورصة، الذي يوفر عادة نتائج جيدة مع واحد فقط تجربة (باستخدام عمود مع نطاق وجود الحق)، والمستوى قد يتطلب عدة تجارب لتحقيق الدقة المثلى بضبط معلمات الأسلوب. في المستوى-مالس التجارب التي تجري مع تدرج ملح، الموصلية المخزن المؤقت، ومن ثم تغيير ري هائلة أثناء التشغيل، مع ما يترتب عليه من تغييرات على إشارة ري. وهذا يتطلب فارغة إضافية تشغيل لكل تجربة مالس المستوى وتحليل مع الطرح خط الأساس (كما هو موضح في الخطوة 5، 2 من البروتوكول) إلا إذا كان تحليل تركيز محدود لكشف الأشعة فوق البنفسجية (التي تتطلب معرفة مسبقة الانقراض معاملات لكل ذروة). التحليل مع الطرح الأساس قوية للتدرجات الخطية، على الرغم من أن زيادة تطوير أسلوب ما زال لازما للطرح خط أساس نجاح برامج التدرجي الملح. وينبغي تعديل قيم dn/dc كل ذروة وفقا الموصلية المخزن المؤقت المحدد في ذروة التيد (العمليات الحسابية يمكن العثور عليها في الأدب12). إذا كان بروتين الوتيد بتركيز كلوريد الصوديوم أقل من 200 ملم (كما هو الحال في المثال جيش صرب البوسنة)، وهذا التعديل لا يكاد يذكر.
المهم كمية كبيرة نسبيا من البروتين المستخدمة في المستوى-مالس (كخطوة مفصلة في 2.3 من البروتوكول) مقارنة مالس ثانية من التغلب على تغيير جذري الإشارة ري بسبب التدرج الملح وتقلبات ري بسبب خلط ناقصة المخازن المؤقتة للتدرج. إذا تم استخدام كشف الأشعة فوق البنفسجية لقياس كتلة، فقط يمكن أن تستخدم كميات أصغر. كمية البروتين لحقن يعتمد على كتلة المولى للبروتين والتجانس والنقاء ومعامل الانقراض الأشعة فوق البنفسجية. ينبغي أن تكون الكتلة اللازمة وحقن أعلى بالنسبة للبروتينات أصغر حجماً وأقل بالنسبة للبروتينات الكبيرة (~ 1 ملغ كاتشين 20 مغ البروتين و ~0.2 لبروتين كاتشين 150). عينات متجانسة تتطلب الحقن بعينه أكثر حيث يتم تقسيم الكمية بين العديد من السكان. وقد تتطلب تحليلية عالية الأداء اللوني السائل ([هبلك]) المواد أقل من نظام فبلك.
في الآونة الأخيرة، أبلغ عن التحليل في خط باستخدام مالس أثناء إجراءات التطهير. مثل هذا تحليل في الوقت الحقيقي فعالة جداً للكشف عن منتجات التجميع التي تحدث أثناء تنقية ويمكن الاستغناء عن أي تحليل المزيد من البروتين بعد تنقية26. المستوى اللوني يستخدم بشكل متكرر كخطوة وسيطة تنقية؛ وهكذا، يمكن أن يكون تركيبة الأعمدة المستوى محضرة مع مالس مفيدة ليس فقط كأسلوب وصف تحليلي ولكن أيضا كإجراء تحليل في الوقت الحقيقي لإجراءات تطهير واسعة النطاق. نوناناليتيكال المستوى الأعمدة هي أيضا مستقرة، مع درجة منخفضة من الإفراج عن الجسيمات، وذلك، يمكن استخدامها مع مالس. تقنيات فصل أخرى، مثل التقارب اللوني أو تبادل مسعور اللوني، كما يمكن أن يقترن مالس عندما تعرض لعينات نقية نسبيا (لتفادي تلوث كاشفات مالس ومنظمة الروتاري الدولية). وهذا يتطلب تكييف وإشارات الأمثل لطريقة الحصول على ليس فقط فصل الذروة جيدة لكن LS نظيفة بما فيه الكفاية أيضا ومنظمة الروتاري الدولية لتحليل مالس ناجحة.

الوصف الكمي لمنتجات البروتين الضروري متزايدة كوسيلة لمراقبة النوعية (QC)، سواء لأغراض تنظيمية في الصناعة الصيدلانية البيولوجية، وضمان موثوقية وسلامة علوم الحياة البحث1 , 2-كما هو موضح في مواقع ويب الخاصة بالبروتين شبكات إنتاج البروتين، وتنقية الشراكة في أوروبا (P4EU) ورابطة للموارد للبحوث الفيزيائية الحيوية في أوروبا والفيزياء الحيوية الجزيئية في أوروبا (أربر-مبايو) (https://p4eu.org/protein-quality-standard-pqs و https://arbre-mobieu.eu/guidelines-on-protein-quality-control، على التوالي)، البروتين ومراقبة الجودة يجب أن يتسم بها ليس فقط نقاء المنتج النهائي، ولكن أيضا حالته oligomeric والتجانس والهوية، تكيف والهيكل وتعديلات بوستترانسلاشونال والأخرى3،خصائص4.
أحد أساليب توصيف QC الأكثر شيوعاً هو مالس ثانية. في هذا الأسلوب، يقترن عمود ثانية تحليلية إلى مالس والكشف عن سبيكتروفوتوميتريك وريفراكتوميتريك وتمكين قياسات دقيقة من البروتين كتلة المولى كل ذروة5. تحدد كتلة المولى من قمم الوتيد مستقلة عن حجم شطف ثانية مالس ويتغلب على عدم دقة تحليلية في الثانية باستخدام معايرة العمود. إضافة وحدة نمطية (DLS) نثر الضوء الديناميكي يضيف قدرة قياس حجم يسمح تصميم هيدرودينامية دائرة نصف قطرها. في البحوث الأكاديمية، مالس ثانية يستخدم عادة لتحديد حالة oligomeric بروتين، المطابقة، ومستوى النقاء، مستوى التجميع، وتعديل البروتينات، مثل جليكوبروتينس أو بروتينات الغشاء solubilized الدهن (تحديد كتلة المولى من البروتين ومترافق المكونات منفردة)6،،من78.
في كثير من الحالات، ليست أنواع جزيئية جيدا-deﬁned البروتين النهائي لعملية تنقية لكن بدلاً من ذلك وتضم بعض التباين. يمكن أن تختلف البروتينات في خليط من هذا القبيل فيما يتعلق بهيكل (على سبيل المثال، مختلف أشكال oligomeric) أو والتشكلات isoforms البروتين. يمكن أيضا أن عدم تجانس البروتين نتيجة للاختلافات الطفيفة الكيميائية الناجمة عن تجهيز يسين ج--المحطة الطرفية أو deamination الهليونين/الجلوتامين، مما أدى إلى اتهام تباين9،10. الاختلافات في التعديلات بوستترانسلاشونال مثل جليكوسيليشن يؤدي أيضا إلى عينات متجانسة مع اختلافات مقابل9. هذه الأنواع المختلفة من عدم التجانس وتنعكس في الخصائص الفيزيائية للبروتين ويمكن أن تؤثر على الاستقرار والنشاط البيولوجي ل البروتين الهدف11.
تتطلب فحوصات مراقبة الجودة يمكن الاعتماد عليها لمثل هذه العينات غير متجانسة تقنية فصل تحليلي فبدرجة عالية. وهناك حالات حيث يمكن الطعن في فصل جيدة لتحقيق مع أعمدة ثانية التحليلية، سبب بهم محدودة القرار وفصل قدرات12، أسفر معيبة مالس ثانية تحليل. الجمع بين تقنية فصل خصوصية عالية مثل المستوى مع مالس يمكن التغلب على الحد مالس ثانية في عينات غير متجانسة وتوفير وسيلة تكميلية لتوصيف البروتين (الجدول 1 في أمارتيلي et al.12). خلافا للبورصة، التي تفصل بين الجزيئات الكبيرة الحجم الهيدروديناميكي13، يفصل المستوى الجزيئات الكبيرة بهذه التهمة السطحية14. تبادل شاردة (عيش) وربط مصفوفات تبادل الأيونات الموجبة (سي) سلبا وايجابا اتهم المتغيرات، على التوالي. مع غرامة فصل بين السكان البروتينات التي تشترك في كتلة قريبة نسبيا أو الشكل، يحدد المستوى-مالس بنجاح كتلة المولى لكل دولة فردية البروتين في عينة خليط12.
وهنا يقدم بروتوكول قياسي لتشغيل تجربة المستوى-مالس لفصل وتحليل أشكال oligomeric جيش صرب البوسنة التي توجد في نفس العينة. اختيار عمود المستوى لبروتين محددة المهم ومناقشته، فضلا عن ظروف الأس الهيدروجيني والتوصيل من المخازن المؤقتة. كما يتم وصف تحليل البيانات التجريبية المستوى مالس خطوة بخطوة. على الرغم من أن الفصل بين جيش صرب البوسنة ليغومرات جيدة وكافية في ثانية-مالس، جيش صرب البوسنة مثال جيد لإظهار قدرات المستوى-مالس وإثبات الاستغلال الأمثل للتجربة. وتجري مناقشة الأمثلة الفقراء العزل حققتها ثانية مالس والفصل السليم والتحليل مكن من المستوى-مالس في دراسة سابقة12.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:749px;" width="749">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">&#196;KTA pure</td>
			<td style="width:136px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:119px;">29-0182-26</td>
			<td style="width:236px;">FPLC&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:259px;">0.02 &#181;m Anotop Whatman Filter 10 mm</td>
			<td style="width:136px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:119px;">6809-1002</td>
			<td>Sample Filter</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:259px;">0.1 &#181;m Anotop Whatman Filter 10 mm</td>
			<td style="width:136px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:119px;">6809-1012</td>
			<td>Sample Filter</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:259px;">0.1 &#181;m Anotop Whatman Filter 25 mm</td>
			<td style="width:136px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:119px;">6809-2012</td>
			<td>Mobile phase filter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">BSA (purity &#62;97%)</td>
			<td style="width:136px;">Sigma&#160;</td>
			<td>A1900</td>
			<td>Bovine serum albumin</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">miniDAWN TREOS&#160;</td>
			<td style="width:136px;">Wyatt Technology</td>
			<td style="width:119px;">WTREOS</td>
			<td>MALS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">mono Q HR 5/50 GL</td>
			<td style="width:136px;">GE Healthcare</td>
			<td>17-5166-01</td>
			<td>Anion exchange analytical column</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Optilab T-rEX</td>
			<td style="width:136px;">Wyatt Technology</td>
			<td style="width:119px;">WTREX</td>
			<td>Refractometer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">0.1 mm PES 1000 mL Stericup</td>
			<td style="width:136px;">Millipore</td>
			<td style="width:119px;">SCVPU11RE</td>
			<td>Mobile phase filter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Sodium chloride</td>
			<td style="width:136px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:119px;">71382</td>
			<td>HPLC grade NaCl</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">TRISMA base</td>
			<td style="width:136px;">Sigma&#160;</td>
			<td>T-1503</td>
			<td>TRIS buffer</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ion exchange chromatography (iex) coupled to multi-angle light scattering (mals) for protein separation and characterization

التبادل الأيوني اللوني مع تشتت الضوء زاوية المتعددة (المستوى-مالس) وسيلة قوية لفصل البروتين وتحديد خصائصها. الجمع بين تقنية فصل خصوصية عالية المستوى مع التحليل الشامل المولى دقيقة حققها مالس يسمح توصيف عينات البروتين غير متجانسة، بما في ذلك مخاليط من أشكال أوليجوميريك أو البروتين بالسكان، حتى مع جداً الجماهير المولى مماثلة. ولذلك، مالس المستوى يوفر مستوى إضافي من توصيف البروتين ويكمل اللوني استبعاد حجم قياسي مع تقنية تشتت الضوء زاوية المتعددة (SEC-مالس).
هنا يمكننا وصف بروتوكول التجربة المستوى أساسي-مالس وإثبات هذا الأسلوب في ألبومين المصل البقري (BSA). المستوى يفصل بين جيش صرب البوسنة بأشكاله أوليجوميريك، مما يتيح إجراء تحليل شامل مولى حسب مالس لكل شكل من أشكال الفردية. كما قدم الأمثل لتجربة مالس المستوى وبرهنت على جيش صرب البوسنة، تحقيق الانفصال ممتازة بين جيش صرب البوسنة مونومرات وليغومرات أكبر. مالس المستوى هو تقنية قيمة لتقييم نوعية البروتين نظراً لأنه يوفر الفصل غرامة والعزم الجماعي المولى متعددة الأنواع البروتين الموجودة في عينة.

جيش صرب البوسنة هو بروتين شائعة التي تستخدم في الفصل اللوني لمعايرة نظام تجريبي22 ، وهي مناسبة جداً لممارسة المستوى-مالس، فضلا عن مالس ثانية. هو أحادي أساسا مع كتلة مونومر نظرية من 66.7 كاتشين وعادة ما يتضمن عدد صغير من dimers واعلي ليغومرات23.
وقد تم تحليل جيش صرب البوسنة على المستوى-مالس استخدام عمود شاردة تبادل التحليل (انظر الجدول للمواد). خطي واسعة متدرجة تتكون من 30 فصل السيرة الذاتية من 75 مم إلى 350 مم كلوريد الصوديوم مونومرات جيش صرب البوسنة من ليغومرات أعلى. المصب مالس تحليل أسفرت عن كتلة مولى مونومر محسوبة من 66.8 ± 0.7 كاتشين وكتلة مولى ديمر محسوبة من 130 ± 5 كاتشين (الشكل 1أ).
استناداً إلى الموصلية المخزن المؤقت في قمم التيد، تم تغيير التدرج إلى برنامج آخر: خطوة طويلة من عيار 175 ملم كلوريد الصوديوم يتبعه تدرج خطي من عيار 175 ملم إلى 500 ملم كلوريد الصوديوم. التدرج الجديد تحسنت كثيرا بالقرار والفصل ممتازة بين جيش صرب البوسنة مونومر (مع كتلة مولى محسوب من 66.1 ± 0.7 كاتشين) والأنواع oligomeric أعلى (مع كتلة متوسط محسوب من 132 ± 2 كاتشين) (الشكل 1ب). بغية التركيز أيضا على الأنواع أوليجوميريك عالية وحساب الجماهير المولى لكل نموذج oligomeric الفردية لجيش صرب البوسنة، تم تطبيق برنامج متدرج من 200 و 250 ملم كلوريد الصوديوم. أسفرت هذه التجربة فصل ممتازة بين جيش صرب البوسنة مونومر (مع كتلة محسوب من 62.4 ± 0.4 كاتشين)، ديمر (مع كتلة محسوب من 130 ± 10 كاتشين)، وتريمير (مع كتلة محسوب من 170 ± 10 كاتشين) (الشكل 1ج). جميع المستوى مالس التجارب تظهر أن جيش صرب البوسنة الوتيس غالباً ما مركب بدرجة نقاء 80%، باﻻتفاق مع نتائج مالس ثانية حيث الوتي مونومرات جيش صرب البوسنة بدرجة نقاء 85%12.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59408/59408fig1.jpg"> الشكل 1 : التحسين من المستوى-مالس التجربة لجيش صرب البوسنة- (أ) المستوى-مالس التجربة من جيش صرب البوسنة مع برنامج تدرج من 75 – 350 مم كلوريد الصوديوم. (ب) المستوى-مالس التجربة من جيش صرب البوسنة مع برنامج خطوة كلوريد الصوديوم 175 ملم يليه برنامج تدرج خطي من 175-500 ملم كلوريد الصوديوم. (ج) المستوى-مالس التجربة من جيش صرب البوسنة مع برنامج خطوة من 200 و 250 ملم كلوريد الصوديوم. عرض تشروماتوجرامس الأشعة فوق البنفسجية في ضوء نانومتر (الأزرق)، 280 التشتت في زاوية 90 درجة (أحمر)، والانكسار (الوردي) والمنحنيات الموصلية (رمادي) جنبا إلى جنب مع كتلة المولى من ذروة كل حساب بواسطة مالس (أسود). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59408/59408fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>

Watch this Scientific Journal Video about Ion Exchange Chromatography IEX Coupled to Multi-angle Light Scattering MALS for Protein Separation and Characterization at JoVE.com

Ion Exchange Chromatography IEX Coupled to Multi-angle Light Scattering MALS for Protein Separation and Characterization

ويصف هذا البروتوكول استخدام كروماتوغرافيا التبادل الأيوني عالية الدقة مع تشتت الضوء زاوية المتعددة من أجل تحديد كتلة مولى دقيق من البروتينات والبروتين المجمعات الببتيدات في عينة غير متجانسة. هذا الأسلوب قيمة لتقييم الجودة، وكذلك فيما يتعلق بتوصيف ليغومرات الأصلية، ومتغيرات التهمة، وعينات مختلطة من البروتين.

التبادل الأيوني اللوني (المستوى) بالإضافة إلى تشتت الضوء زاوية المتعددة (مالس) لفصل البروتين وتوصيف

Ion-exchange chromatography with multi-angle light scattering (IEX-MALS) is a powerful method for protein separation and characterization. The combination ...

يقدم هذا البروتوكول تبادل الأيونات MALs، وهو أسلوب جديد لمراقبة جودة البروتين وتوصيف، ومراقبة الجودة التي هي ضرورية لاتساق وسلامة النتائج في بحوث علوم الحياة وتطوير المنتجات الصيدلانية. يحدد نظام الـ ION-Exchange MALS نقاء البروتين، وحالة القلة، والتجانس، والهوية، والتشكل، والهيكل، وتعديلات ما بعد الترجمة، وغيرها من الخصائص. القياسات غير مدمرة ويتم إجراؤها في محلول في ظل ظروف عازلة شبه فسيولوجية.هذه الطريقة تحدد بدقة الكتلة الولية من البروتينات أو الببتيدات ، وحالة القلة ، ودرجة الاقتران ، على سبيل المثال ، بروتين الجليكوبروتين. ويمكن أيضا أن تطبق على البروتينات الغشائية. IEX يفصل الجزيئات الصغيرة من قبل تهمة سطحها.تبادل أنيون، AIEX، وتبادل الموجبة، CIEX، المصفوفة ربط المتغيرات سالبة و مشحونة بشكل إيجابي، على التوالي. مع فصل دقيق بين مجموعات البروتين التي تشترك في كتلة قريبة نسبيا أو شكل، IEX-MALS يحدد بنجاح الكتلة الضروس لكل حالة من حالات البروتين الفردية في عينة خليط. للبدء، استخدم فلتر 0.1 ميكرومتر لتصفية جميع الكواشف، بما في ذلك مخازن الغسيل والفرز.تصفية أول 50 إلى 100 ملليلتر من العازلة في زجاجة نفايات من أجل القضاء على الجسيمات من المرشحات الجافة. في زجاجة نظيفة ومعقمة التي تم غسلها جيدا بالماء المصفى وتوج لمنع الغبار من الدخول، تصفية ما تبقى من العازلة. مع درجة السّمو-ثمانية تريس العازلة و50 ملليمولار صوديوم كلوريد كلوريد, تمييع A BSA عينة إلى ستة ملليغرام لكل ملليلتر لذلك سوف تسمح درجة الH وقوة الأيونية ملزمة إلى عمود تبادل أيون.استخدام حقنة لحقن ما لا يقل عن 0.3 إلى 0.5 ملليغرام من BSA في عمود مليلتر واحد لتحقيق تحليل جيد من قبل شركة مالس. لبدء تجربة الصرف الأيوني، افتح جديد، تجربة من أسلوب في برنامج "نظام مكافحة المخالفات"، وحدد الأسلوب عبر إنترنت من مجلد أساليب نظام التشتت الضوئي. إذا كانت الوحدة النمطية DLS متوفرة والبيانات DLS الحصول عليها، حدد الأسلوب عبر الإنترنت من المجلد الفرعي "مبعثر الضوء" QELS.لتعيين المعلمات، ضمن المقطع تكوين، أولاً تعيين معدل تدفق تشغيل في المقطع مضخة عام إلى معدل التدفق المستخدمة في FPLC كـ 1.5 ملليلتر في الدقيقة. تحت قسم المذيبات، أدخل أو تحقق من معلمات العازلة. تحت قسم حاقن، أدخل اسم البروتين كـ BSA، وزيادة مؤشر الانكسار 0.185 ملليلتر في الغرام، ومعامل انقراض الأشعة فوق البنفسجية في الطول الموجي من 280 نانومتر ك 0.66 لتر لكل غرام لكل سنتيمتر.في علامة التبويب عينة، أدخل تركيز عينة البروتين كما ستة ملليغرام لكل ملليلتر، ومن ثم إدراج حجم العينة للحقن كما 170 ميكرولترات كذلك. ضمن المقطع إجراءات، في علامة التبويب مجموعة أساسية، حدد خانة الاختيار Trigger على الإدخال التلقائي، وقم بتعيين مدة التشغيل إلى 70 ملليلتر بحيث يتم متابعة جمع البيانات لمدة خمس دقائق على الأقل بعد أن يصل التدرج إلى قيمته النهائية. ثم، في برنامج FPLC إنشاء تجربة جديدة في التبويب محرر الأسلوب.بالنسبة للتجربة الأولية، قم بإنشاء تدرج خطي من الملح أو للدرجة الـ PH، بينما للأسلوب الأمثل قم بإنشاء تدرج أكثر تحديدًا أو برنامجًا متدرجًا وفقًا للمخطوطة. قم بتضمين إشارة نبض في الطريقة التي من شأنها أن تؤدي إلى جمع البيانات في برنامج إدارة خدمات السوفت. ثم، افتح صمام المضخة، واغسلها بـ 0.5-0.5 من هيدروكسيد الصوديوم المولر لإزالة الشوائب المقيدة بقوة، متبوعة بغسل عازلة تحييد.ثم، وغسل العمود مع تريس العازلة رقم 8، صمام A مع العازلة الغسيل، وصمام B مع عازلة elution. استخدام العازلة مع انخفاض تركيز الملح كغسل النهائي لشطف العمود، لتمكين ربط البروتين إلى مصفوفة العمود. قبل حقن العينة، بعد الغسيل، وفي نهاية elution، يجب أن يكون استقر خط الأساس تناثر الضوء لضمان انخفاض مستوى الضجيج وتخفيف نقي تماما.باستخدام حقنة، ضع عينة البروتين في الحلقة. بدء التجربة أولاً في برنامج "نظام إدارة مكافحة المخالفات" عن طريق النقر على زر تشغيل ثم في برنامج FPLC. وسيتم جمع البيانات بعد تلقي إشارة النبض من جهاز FPLC عبر كاشف نظام مكافحة المخالفات.إذا تم تنفيذ ION-تبادلات MALS يدوياً مع وضع تدفق مستمر بدلاً من أسلوب مستقل، تطبيق نفس المعلمات تشغيل والإرشادات كما هو موضح سابقاً. بمجرد التحقق من الأسلوب النهائي وتشغيله، نفذ نفس الأسلوب بالضبط باستخدام حقن فارغ عن طريق تحميل المخزن المؤقت بدلاً من العينة. من المهم أن يكون التوقيت بين نبض الحقن التلقائي وتدرج المدى الفارغ مطابقًا لذلك الذي تم تشغيله في العينة.لبدء التحليل، ضمن قسم الإجراءات في برنامج "إدارة مكافحة المخالفات" (MALS) ، استخدم علامة التبويب ديسبيكينغ والمستوى العادي لتسهيل الكروماتوجرامات. إذا كانت يحمل الكثير من الضوضاء، تعيين المستوى إلى الثقيلة. في عرض خط الأساس، حدد خط الأساس لجميع الإشارات، بما في ذلك كاشفات LS و UV و RI.في عرض القمم، حدد القمم للتحليل. تحقق من القيم الصحيحة لقيمة زيادة الـ DN/dc و معامل انقراض الأشعة فوق البنفسجية للبروتين تحت كل ذروة. تحت كتلة المولر ونصف قطرها من ضوء عرض التشتت، وتحليل الكتلة العثة ونصف قطرها باستخدام نموذج زيم ودرجة تناسب الصفر.إذا كان QELS متاحًا، تحت عرض Rh من QUELS، لاحظ قيم Rh وجودة ملاءمة وظيفة الارتباط. وتتغير إشارة الـ (RI) تغيراً كبيراً أثناء تشغيل النظام العام للصرف الطبي في البورصة الأيونية بسبب الزيادة في تركيز الملح. لطرح إشارة خط الأساس من الحقنة الفارغة، افتح تجارب تحويل البروتين والأيونات الفارغة.انقر بزر الماوس الأيمن فوق اسم تجربة البروتين، وحدد تطبيق الأسلوب، واختر مجلد الطرح الأساسي من مربع الحوار الملف. حدد الطريقة عبر الإنترنت للتحليل الشامل الضروس القياسي. ضمن طريقة العرض طرح الأساس، انقر فوق استيراد فارغ لاستيراد إشارات تشغيل فارغ.تحت أدوات، تحقق من جميع أجهزة الكشف عن طرح. لمعايرة نظام تحويل الأيونات مع monomer BSA، تحت الإجراءات وعرض التكوين، محاذاة القمم. ضمن طريقة العرض "التهيئة"، أدخل نانومتر 3.0 كقيمة Rg لتنفيذ التهيئة.ثم، ضمن توسيع النطاق في نفس علامة التبويب تكوين، اختر الذروة واستخدم الزر أداء صالح لمطابقة إشارات الأشعة فوق البنفسجية و LS إلى إشارة RI. يتم عرض الرسم البياني للنتائج في طريقة العرض "ملائمة النتائج". تغيير موازين المحور ومعلمات الرسم البياني الأخرى بالنقر بزر الماوس الأيمن على الرسم البياني، وتحديد تحرير، ثم النقر فوق الزر خيارات متقدمة.للحصول على مزيد من خيارات العرض، حدد علامة التبويب رسم الرسم البياني EASI، وفي أعلى النافذة في القائمة المنسدلة عرض، حدد الكتلة المولية أو Rh Q.All النتائج، بما في ذلك الكتلة العثة، ونصف القطر، ومستوى النقاء، وغيرها متوفرة في طريقة عرض التقرير تحت المقطع النتائج. استخدم الزر "مصمم التقرير" لإضافة المزيد من النتائج أو المعلمات، بالإضافة إلى الأرقام، إلى التقرير. في هذه التجربة، تم تحليل BSA على تحويل الأيونات MALS باستخدام عمود تحليلي لتبادل أنيون.وعرض الكروماتوغرام الأشعة فوق البنفسجية في 280 نانومتر، وتناثر الضوء في زاوية 90 درجة، ومؤشر الانكسار، ومنحنيات الموصلية جنبا إلى جنب مع كتلة المول من كل قمة. فصل تدرج خطي واسع يتكون من 30 مجلد عمود من 75 ملليمولار إلى كلوريد الصوديوم 350 ملليمولار مونومرات BSA من الخافتات والأوليجوم العليا. وأسفر تحليل المصب المالي عن كتلة مولية محسوبة من مونومر 66.8 كيلودالون وكتلة مولية محسوبة من 130 كيلودالون.واستنادا إلى الموصلية العازلة في القمم المائلة، تم تغيير التدرج إلى برنامج مختلف، وهو خطوة طويلة من كلوريد الصوديوم 175 ملليمولار، تليها تدرج خطي من 175 ملليمولار إلى كلوريد الصوديوم 500 ملليمولار. وقد حسن التدرج الجديد إلى حد كبير من الدقة وأسفر عن فصل ممتاز بين الأنواع أحادية اللون والأنواع القلايغُمية الأعلى. تم تطبيق برنامج متدرج من كلوريد الصوديوم 200 ملليمولار و 250 ميليمولار للتركيز أيضا على الأنواع القلوغيمية العالية.وأدى ذلك إلى فصل ممتاز بين مونومر BSA، خافتر، وتقليم. وبعد هذا الإجراء، يمكن تنفيذ أساليب مثل قياس الطيف الكتلي ونشاط SDS-PAGE واختبارات الاستقرار على كل متغير يفصله تبادل أيون لتحديد كل واحد وتمييزه. وجدنا أن نظام الصرف الأيوني يُوسّع قوة تحليل نظام الـ MALS ليشمل العينات التي لا يمكن تحليلها بالكامل من قبل SEC-MALS.الفصل عن طريق الشحن حل الأنواع المتميزة التي coelute في لجنة الأوراق المالية والبورصة.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Ion Exchange Chromatography (IEX) Coupled to Multi-angle Light Scattering (MALS) for Protein Separation and Characterization

Online Size-exclusion and Ion-exchange Chromatography on a SAXS Beamline

على الانترنت الحجم الاستبعاد والتبادل الأيوني اللوني على SAXS خط الأشعة

Biological small angle X-ray scattering (BioSAXS) is a powerful technique in molecular and structural biology used to determine solution structure, ...

Time-resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen-deuterium Exchange Mass Spectrometry for Studying Protein Structure and Dynamics

وقت حل التأين electrospray الهيدروجين، الديوتيريوم تبادل الطيف الكتلي لدراسة بنية البروتين وديناميكية

Intrinsically disordered proteins (IDPs) have long been a challenge to structural biologists due to their lack of stable secondary structure elements. ...

Measuring G-protein-coupled Receptor Signaling via Radio-labeled GTP Binding

قياس إشارة مستقبلات G- البروتينات عبر الملزمة غتب المسمى راديو

G-Protein-Coupled Receptors (GPCRs) are a large family of transmembrane receptors that play critical roles in normal cellular physiology and constitute a ...

Biochemical and Structural Characterization of the Carbohydrate Transport Substrate-binding-protein SP0092

وصف SP0092 الركيزة-ملزمة-بروتين النقل الكربوهيدرات البيوكيميائية والهيكلية

Development of new antimicrobials and vaccines for Streptococcus pneumoniae (pneumococcus) are necessary to halt the rapid rise in multiple resistant ...

Growing Protein Crystals with Distinct Dimensions Using Automated Crystallization Coupled with In Situ Dynamic Light Scattering

Growing Protein Crystals with Distinct Dimensions Using Automated Crystallization Coupled with In Situ Dynamic Light Scattering

تنامي البلورات البروتينية مع أبعاد متميزة باستخدام الآلي تبلور مقرونا في الموقع الحيوي تشتت الضوء

The automated crystallization device is a patented technique1 especially developed for monitoring protein crystallization experiments with the aim to ...

Protein Digestion, Ultrafiltration, and Size Exclusion Chromatography to Optimize the Isolation of Exosomes from Human Blood Plasma and Serum

هضم البروتين، أولترافيلتراتيون، وحجم الاستبعاد اللوني لتحسين عزل اكسوسوميس من بلازما الدم البشري والمصل

Exosomes, a type of nanovesicle released from all cell types, can be isolated from any bodily fluid. The contents of exosomes, including proteins and ...

Contrast-Matching Detergent in Small-Angle Neutron Scattering Experiments for Membrane Protein Structural Analysis and Ab Initio Modeling

Contrast-Matching Detergent in Small-Angle Neutron Scattering Experiments for Membrane Protein Structural Analysis and Ab Initio Modeling

المنظفات مطابقة التباين في تجارب نثر النيوترون زاوية صغيرة لغشاء بروتين التحليل الهيكلي والنمذجة Ab منذ البداية

The biological small-angle neutron scattering instrument at the High-Flux Isotope Reactor of Oak Ridge National Laboratory is dedicated to the ...

Characterization of Proteins by Size-Exclusion Chromatography Coupled to Multi-Angle Light Scattering (SEC-MALS)

Characterization of Proteins by Size-Exclusion Chromatography Coupled to Multi-Angle Light Scattering SEC-MALS

توصيف البروتينات حسب الحجم والاستبعاد الكروماتوغرافيا المقترنة بتشتت الضوء متعدد الزوايا (SEC-MALS)

Analytical size-exclusion chromatography (SEC), commonly used for the determination of the molecular weight of proteins and protein-protein complexes in ...

Quantitative Analysis of the Cellular Lipidome of Saccharomyces Cerevisiae Using Liquid Chromatography Coupled with Tandem Mass Spectrometry

Quantitative Analysis of the Cellular Lipidome of Saccharomyces Cerevisiae Using Liquid Chromatography Coupled with Tandem Mass Spectrometry

التحليل الكمي للدهون الخلوية من Saccharomyces Cerevisiae باستخدام الكروماتوغرافيا السائلة إلى جانب قياس الطيف الكتلي جنبا إلى جنب

Lipids are structurally diverse amphipathic molecules that are insoluble in water. Lipids are essential contributors to the organization and function of ...

Quantitative Metabolomics of Saccharomyces Cerevisiae Using Liquid Chromatography Coupled with Tandem Mass Spectrometry

Quantitative Metabolomics of Saccharomyces Cerevisiae Using Liquid Chromatography Coupled with Tandem Mass Spectrometry

الأيض الكمي من Saccharomyces Cerevisiae باستخدام الكروماتوغرافيا السائلة إلى جانب قياس الطيف الكتلي الترادفي

Metabolomics is a methodology used for the identification and quantification of many low-molecular-weight intermediates and products of metabolism within ...