Name: ex vivo perfusion of the rodent placenta
Uploaded: 2019-05-30T14:00:00
Duration: 6 min 54 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Perfusion of the Rodent Placenta at JoVE.com

Эта работа была поддержана Национальным институтом экологических наук (R00-ES024783), Ратгерский центр по экологическим воздействиям и болезням (P30-ES005022), и Рутгерский совместный выпускник программы по токсикологии (T32-ES007148). Мы также хотели бы поблагодарить доктора Майкла Годкена, Марианну Полюнас и Педро Лоуро за их техническую экспертизу и д-ра Адама гудвилла за его помощь в проектировании нашей схематичный схемы перфузии (рис. 5).

<ol>
	<li>Troen, P., Gordon, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfusion+studies+of+the+human+placenta.+I.+Effect+of+estradiol+and+human+chorionic+gonadotropin+on+citric+acid+metabolism.">Perfusion studies of the human placenta. I. Effect of estradiol and human chorionic gonadotropin on citric acid metabolism.</a> Journal of Clinical Investigation. 37, 1516-1523 (1958).</li><li>Alexander, D. P., Huggett, A. S., Nixon, D. A., Widdas, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+placental+transfer+of+sugars+in+the+sheep:+the+influence+of+concentration+gradient+upon+the+rates+of+hexose+formation+as+shown+in+umbilical+perfusion+of+the+placenta.">The placental transfer of sugars in the sheep: the influence of concentration gradient upon the rates of hexose formation as shown in umbilical perfusion of the placenta.</a> Journal of Physiology. 129, 367-383 (1955).</li><li>Alexander, D. P., Andrews, R. D., Huggett, A. S., Nixon, D. A., Widdas, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+placental+transfer+of+sugars+in+the+sheep:+studies+with+radioactive+sugar.">The placental transfer of sugars in the sheep: studies with radioactive sugar.</a> Journal of Physiology. 129, 352-366 (1955).</li><li>Dancis, J., Money, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfer+of+sodium+and+iodo-antipyrine+across+guinea+pig+placenta+with+an+in+situ+perfusion+technique.">Transfer of sodium and iodo-antipyrine across guinea pig placenta with an in situ perfusion technique.</a> American Journal of Obstetrics and Gynecology. 80, 215-220 (1960).</li><li>London, W. T., Money, W. L., Rawson, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+Transport+of+I-131-Labeled+Thyroxine+and+Triiodothyronine+in+the+Guinea+Pig.">Placental Transport of I-131-Labeled Thyroxine and Triiodothyronine in the Guinea Pig.</a> Endocrinology. 73, 205-209 (1963).</li><li>Stulc, J., Stulcova, B., Svihovec, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transport+of+calcium+across+the+dually+perfused+placenta+of+the+rat.">Transport of calcium across the dually perfused placenta of the rat.</a> Journal of Physiology. 420, 295-311 (1990).</li><li>Goeden, N., Bonnin, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+perfusion+of+mid-to-late-gestation+mouse+placenta+for+maternal-fetal+interaction+studies+during+pregnancy.">Ex vivo perfusion of mid-to-late-gestation mouse placenta for maternal-fetal interaction studies during pregnancy.</a> Nature Protocols. 8, 66-74 (2013).</li><li>Bond, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artificial+perfusion+of+the+fetal+circulation+of+the+in+situ+mouse+placenta:+methodology+and+validation.">Artificial perfusion of the fetal circulation of the in situ mouse placenta: methodology and validation.</a> Placenta. 27, (2006).</li><li>Illsley, N. P., Fox, H., Van der Veen, F., Chawner, L., Penfold, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+placental+ultrastructure+after+in+vitro+dual+perfusion.">Human placental ultrastructure after in vitro dual perfusion.</a> Placenta. 6, 23-32 (1985).</li><li>Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M., Muller, J. M., Barker, J. H., Anderson, G. L., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolated,+Perfused+Microvessels.">Isolated, Perfused Microvessels.</a> Clinically Applied Microcirculation Research. , 435-456 (1995).</li><li>Butcher, J. T., Goodwill, A. G., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ex+vivo+isolated+skeletal+microvessel+preparation+for+investigation+of+vascular+reactivity.">The ex vivo isolated skeletal microvessel preparation for investigation of vascular reactivity.</a> Journal of Visualized Experiments. (62), 3674 (2012).</li></ol>

Авторам нечего раскрывать.

Этот метод перфузии позволяет быстро оценить плацентарный барьер и физиологическую функцию сосудистую и трофобластного слоя матки. Каня и перфузию проксимальных до дистальных концов материнской артерии матки имитирует физиологию материнского кровотока через это крупное судно, ответственное за отправку крови к развивающемуся плоду. Эта методика позволяет физиологически оценить изолированную материнскую, плацентарную и пупочную сосуды, и поэтому изменения в физиологии могут быть определены как сосудистая патология; иммунные и нервные иннервирования удаляются в ходе процедуры экс-естественных условиях. Для обеспечения надлежащей оценки, поэтому важно, чтобы Канта эти сосуды тщательно, чтобы не создавать каких-либо слез или проколов в стенках сосуда, и для удаления пузырьков воздуха. Газовые Эмболы могут привести к повреждению эндотелиального слоя сосудов или препятствовать кровеносным сосудам. Поддерживая сосудистую связь между маткой, плацентой и плодом во время рассечения, можно наблюдать оценку жидкости и транместорасположения для плода. При введении ксенобиотика, в данном случае 20 Нм полистирола, кинетика к дистальному концу маточной артерии и через плаценту к фетальному отсеку можно оценить путем анализа стоков в течение времени 180 минут.
В то время как модель двойного перфузии была описана и передача частиц и жидкости от матери к фетального отсека контролируется в этой статье, оценки могут быть также сделаны в обратном порядке от плода к материнскому отсеке. Одним из ограничений метода описано здесь является то, что дистальной матки Вены не каннула или пробы. В будущих исследованиях, особенно тех, которые сфокусированы на передаче плода-матери, важно будет канвать и пробовать дистальной сосуд из матки. Сточные стомы, взятые из этого фиктивного эксперимента, использовались для оценки переноса ксенобиотиков; Тем не менее, широкий спектр оценок, относящихся к эндокринной и молекулярной плацентарных функций или фетального питания может быть выполнена.
Сильные стороны этого протокола намного перевешивают его незначительные ограничения. Препарат поддерживает физиологическую структуру и целостность целого органа для оценки экспериментальных условий. Ex естественных условиях плацентарной перфузии является научным прогрессии от сотовой основе в пробирке для всего животного воздействия правильно определить репродуктивную оценку риска. Это может считаться ценным методом для исследований, оценивающих плацентарные фармакологические наркологические препараты, фармакокинетики, токсикологию, физиологию и материнскую фетальную медицину.

Поддерживая морфологическую структуру и физиологическую отзывчивость, перфузии органов была принята система или тканевой подход на основе анализа метаболических функций. Эти методы перфузии позволяют ex в естественных условиях исследование нетронутыми ответы ткани на различные фармакологические и механические стимулы. Перфузии человеческой плаценты первоначально была описана в 1958 для того чтобы определить гормональные влияния на метаболически деятельности цикла лимонной кислоты; ранее идентифицированных в тканях гогонатами, Троен и Гордон признали необходимость уточнить эндокринную активность с помощью нового физиологического подхода1. В ту же эпоху, одной перфузии (матери к фетальной или фетальной к материнской) стратегии были описаны в больших2,3 и малых4 животных модели для понимания плацентарной передачи сахаров, солей и Антипирин наркотиков. В естественных условиях и ex естественных условиях двойного перфузии (скоординированной материнской и фетальной перфузии) методы были описаны для дальнейшего характеризуют плацентарной передачи с использованием в естественных условиях5 и ex естественных условиях6,7,8 методологии. Технологические достижения в области передачи и сканирования электронной микроскопии позволили исследователям проверить структурную и функциональную целостность тканей человека плаценты после перфузии9.
В то время как перфузии тканей человека плацентарных и индивидуальных семядолей является наиболее актуальным, быстрое развитие фармакологических агентов и загрязнителей окружающей среды требует использования модели перфузии животных для раннего скрининга ксенобиотических передачи через плацентарный барьер. Этот метод плацентарной перфузионного позволяет для оценки переноса через плацентарный барьер используя легко достижимую и физиологически уместный семяец крысы. В добавлении, поток жидкости через плацентарный барьер над периодом времени после выдержки можно оценить путем измерять объем перфусат приходя от пупочной артерии. В силу позволяя плацентарной перфузии из обоих материнских и фетальных циркуляций, этот двойной поток всего органа подход может быть выгодным по сравнению с текущим в пробирке и в естественных условиях подходов. Этот метод позволяет измерять в аппарате ксенобиотик через материнский аспект, который может быть измерен из перфусат, который возникает через плаценту через пуповину, или наоборот. Протокол, представленный здесь, будет описывать передачу 20 Нм полистирола (общего нанопластика, используемого в продуктах питания и медицинских изделий) от материнской артерии матки до отделения плода и связанного с этим снижения потока жидкости через плаценту, чтобы проиллюстрировать Использование этого метода в нескольких физиологических, фармакологических, и токсикологические параметры для оценки плацентарной передачи, метаболизм, и физиологические изменения, влияющие материнской и/или плода потока.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Black braided silk non-absorbable surgical suture non-sterile</td>
			<td>Surgical Specialties Look</td>
			<td>AACO805</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>FST by Dumont Switzerland</td>
			<td>11252-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissors</td>
			<td>FST by Dumont Switzerland</td>
			<td>14060-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass cannula pack</td>
			<td>Living Systems Instrumentation (LSI)</td>
			<td>GCP-75-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge Tubes 2.0mL polypropylene graduated tube with locking lid MIXED</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>02-681-299</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-serrated fine curved micro serrefine clamps</td>
			<td>InterFocus</td>
			<td>18052-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusate pump</td>
			<td>ISMATEC</td>
			<td>ISM795C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressure monitor</td>
			<td>Living Systems Instrumentation (LSI)</td>
			<td>Mode PM-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Self-heating single vessel chamber</td>
			<td>Living Systems Instrumentation (LSI)</td>
			<td>CH-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Servo Pump</td>
			<td>Living Systems Instrumentation (LSI)</td>
			<td>ModelPS-200-P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel blunt needle 23 gauge</td>
			<td>Component Supply Co.</td>
			<td>04651-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel blunt needle 25 gauge</td>
			<td>Component Supply Co.</td>
			<td>07116-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>STERILE Nylon Suture</td>
			<td>AROSurgical Instruments Corporation</td>
			<td>T04A00N07-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stopcock</td>
			<td>Sedation Resource</td>
			<td>6-205-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature Controller</td>
			<td>Living Systems Instrumentation (LSI)</td>
			<td>Model TC-09S</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo perfusion of the rodent placenta

Плацента является ключевым органом во время беременности, которая служит барьером для плода ксенобибиотических воздействия и посредником обмен питательных веществ для отходов. Анализ описан здесь для того чтобы периспользовать изолированную плаценту крысы и оценить транположение матери к плоду ксенобиотиков ex естественных условиях. Кроме того, с помощью этой методологии можно проводить оценку физиологических процессов, таких как поток жидкости для плода и плацентарный метаболизм. Этот метод подходит для оценки кинетики от матери к плоду фармацевтических кандидатов или загрязняющих веществ в окружающей среде. В отличие от нынешних альтернативных подходов, эта методология позволяет оценки изолированных материнских сосудов плода, с системной нервной или иммунной участие удалены, что позволяет любые наблюдаемые изменения в физиологическую функцию, чтобы быть связаны с локальными факторами в изолированной ткани.

На рисунке 5 показаны экспериментально-принципиальные эксперименты с использованием синего красителя Эвана, позволяющие нам протестировать систему и визуализировать соответствующую функцию жидкости и плацентарного барьера и предотвратить перенос в фетальный отсек. Синий краситель Эвана достиг и перцил ткань плаценты внутри этой системы (Рисунок 5A). При дальнейшем расследовании, ясно, что синий краситель Эвана не входят фетальной Вены пуповины (рис.5B), который, как ожидается, как синий краситель Эван связан с альбумином.
На рисунке 6 показаны данные для макета эксперимента, описанного в этом протоколе. Пробы сточных вод из дистального конца маточной артерии и пупочной вены плода измерялись на каждом 10-минутном отрезке для оценки течения жидкости в течение долгого времени после приема препарата Болус в материнскую артерию (рис. 6). Снижена передача жидкости в фетальный отсек в течение 10 минут после того, как было выявлено вливание полистирола. Для количественной оценки переноса полистирола в фетальный отсек во время времени, когда это происходит, 25 мкл из перво-используемой жидкости с каждой точки времени был помещен в 96 хорошо пластины в дубликат для измерения флуоресценции образца. Флуоресценция определялась спектроскопическим чтением на 546/575 Нм (ex/EM) с использованием флуоресцентного считывателя микроплит. Перенос полистирола в фетальный отсек произошел в течение 10 минут и достиг пика на 20 минут и продолжался в течение 90 минут (Рисунок 6B).
Для гистопатологии и морфологических оценок были сохранены подмножество пертоиспользованных плацентарных тканей. Ткани были формалин-фиксированными и гематоксиллин и Эоин окрашенных и рассмотрены Советом сертифицированных ветеринарных патологоанатом. Эти эксперты не выявили структурных отклонений в плаценте пер, используемый только в технической поддержке, или ПСВ с Болус дозы Родин-помечены полистирола.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59412/59412fig1.jpg"> Рисунок 1: модифицированная однокамерная камера. A) Обзор модифицированной камеры. (B) крупным планом изображения тупой наконечник иглы закреплены в камере сосуда. Красная стрелка указывает на термисторный клип, который был изменен, чтобы удерживать иглы в месте для пуповинной канниляции. C) представительное изображение четырёх канюль, подготовленных для канюляции тканей. Красные стрелки указывают на каждую из четырех канюль. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59412/59412fig1large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенном варианте этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59412/59412fig2.jpg"> Рисунок 2: более близкий взгляд плацентарной перфузии камеры. (A) это представляет собой трубку придает давлению преобразователь и каннула проксимальной материнской артерии матки, или "приток". Давление устанавливается на постоянную 80 мм рт. ст., как это определено в литературе. (B) это представляет собой камеру сливной порт от суперфузата, окружающих плацентарную ткань во время перфузии. (C) это представляет собой камерный приток суперпурата для купания плаценты с нагретой ПСВ во время перфузии. (D) это представляет собой дистальной порт материнской матки, где могут быть собраны сточные линии от перфузии матки. (E) это представляет температурный порт, где камера сосуда может быть прикреплена к термометру и нагреватель для поддержания последовательной температуры во время эксперимента. (F) это представляет собой канты пупочной артерии. Пупочная артерия под давлением до 50 мм гектограмм, чтобы обеспечить контоносный поток на уровне плаценты. (G) это представляет собой пупочную коллекцию сточных вод Вены. Жидкость, которая течет в сторону фетального отсека во время перфузии, будет собрана здесь. (H) это центр системы перфузии, где плацента каннула и поддерживается на протяжении всей перфузии. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59412/59412fig2large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенном варианте этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59412/59412fig3.jpg"> Рисунок 3: вид плацентарной перфузии. ( А и б) система контроля давления, используемая для мониторинга и поддержания 80 мм рт. (C) это представляет собой терморегуляцию перфузии камеры. D) Микроскоп. E) перфузии камеры. (F) силы тяжести ФРС пуповины перфузии установлен на 50 мм рт. G) перисталетический насос, используемый для заполнения и слива плацентарной суперпуты. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59412/59412fig3large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенном варианте этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59412/59412fig4.jpg"> Рисунок 4: схема плацентарной перфузии. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59412/59412fig4large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенном варианте этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59412/59412fig5.jpg"> Рисунок 5: представительная образы доказательства-оф-принципа экспериментов с использованием синего красителя Эвана. ( А и б) подтверждение принципа, что синий Эван будет перьиспользовать сосудистую ткань матки, мышцы матки и плаценту, но не будет пересекать плацентарный барьер из-за связывания альбумина. Зеленая стрелка указывает на синий венозный дренаж от плаценты обратно к материнскому кровообращению. Красная стрелка указывает, что пупочная Вена стоков к фетального отсека. Обратите внимание на отсутствие синего красителя. (C) представительный образ сбора сточных вод из пупочной вены. Красная стрелка указывает на формирование капли до сбора. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59412/59412fig5large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенном варианте этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59412/59412fig6.jpg"> Рисунок 6: данные, полученные из макета эксперимента. Флуоресцентных измерений Родин-помечены полистирола наноматериалы, нормализованных к базовой флуоресценции, через сбор (а) матки артерии и (б) фетальные пупочные Вены стоков. Среднее нормализовалось до базовой флуоресценции ± стандартной ошибки (SE). *: p < 0,05 и T: p < 0,1 с помощью анализа дисперсия (Анова). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59412/59412fig6large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенном варианте этой фигуры.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Perfusion of the Rodent Placenta at JoVE.com

Ex Vivo Perfusion of the Rodent Placenta

Здесь представлен протокол экс естественных материнских сосудистой перфузии сосудов, позволяющий администрацию тестовой статьи в материнские сосуды и оценить плацентарный перенос ксенобибиотических частиц или фармакологического вещества в дополнение к изменениям в Физиология плаценты.

Ex естественных условиях перфузии плаценты грызунов

The placenta is a key organ during pregnancy that serves as a barrier to fetal xenobiotic exposure and mediates the exchange of nutrients for waste. An ...

Успешное применение этих методов позволит продать кинетическую оценку фармакологических испытаний или прохождение ксенобиотических загрязняющих веществ через морфологически нетронутую плаценту. Метод перфузии плаценты грызунов позволяет получить более высокую пропускную способность фармакологических или токсикологических исследований, так как несколько соединений могут быть оценены с помощью ткани одной плотины. Демонстрацией техники будет Джанин Д'Эррико, старший аспирант из моей лаборатории.Перед началом процедуры аккуратно заполните все камеры, иглы, стеклянные микропипеты, трубки и резервуары с разогретой физиологической солью раствором или PSS, тщательно удаляя любые пузырьки воздуха с тонкой наконечником передачи пипетки по мере необходимости. Включите все три способа stopcocks в выключенном положении, чтобы обеспечить жидкость в пипетки. Поместите один галстук на каждый из двух стеклянных микропипетов, подготовленных для маточной канюлиции, и на две тупые иглы, предназначенные для пупочной канюли.Затем закретуть связи, чтобы предотвратить потерю во время движения камеры. После подтверждения отсутствия реакции на щепотку носа в анестезированной гестационный день 20 самки беременной крысы, поднимите один рог матки из живота и распространение рога вдоль, внешние животному. Используйте плетеные шелковые швы, чтобы связать маточной артерии на вагинальных и яичников концы рога, в том числе яичников внутри шва с рога матки.Используя хирургические ножницы, сделать разрезы на проксимальной стороне яичников галстук и дистальной стороне вагинального галстука. Перенесите рог матки в рассеченное блюдо, облицованное силиконовой резиной и наполненное холодной PSS. С яичников стороны влево и вагинальной стороне справа, осторожно нажмите рассечение булавку через маточные рога в силиконовой резины для стабилизации матки.Выберите материнскую плаценту плода единицы центральной к рога. Используя тонкие типсы и ножницы, удалите амниотической мембраны с поверхности плода плаценты, заботясь, чтобы избежать пуповины. Разгадать и ligate пуповины, чтобы отделить плода щенка.После выявления пупочной артерии и вены, осторожно отделить и ligate пупочной сосудов. Затем вырезать пуповинной вены небольшой короче, чем пуповинной артерии для удобства идентификации. И ligate маточной артерии и вены с хирургическими ножницами.Поддерживая правильную ориентацию анатомического кровотока маточных артерий, поместите плацентарный блок в модифицированную изолированную камеру сосуда, наполненную теплой кислородом PSS под рассеченным микроскопом. Используя одну пару тонких типсов в каждой руке, можно привить проксимальные и дистальные концы маточной артерии на стеклянные микропипюты. Плотно защитите артерию с ранее помещенным стерильным нейлоновым швом.Cannulate и обеспечить пуповинной артерии на 23 калибровочных тупой иглой. Затем cannulate и обеспечить пуповинной вены на 25 калибровочных тупой иглы и backfill все стоп-cocks и трубки для предотвращения пузырьков воздуха. Не забудьте проверить все стоп-cocks, канюли, и трубки для пузырьков воздуха, как воздушный болюс в системе приведет к клеточной бедствия и устранить встречный ток потока в плаценте.Соедините все трубки в соответствии с рисунком. Поместите небольшие весовые лодки под дистальную канюляцию материнской маточной артерии и под игольчатую канюляцию пупочной вены плода, чтобы поймать сточные воды, которые появятся в ходе процедуры. Подготовь коллекционую пластину для сточных вод для более длительного анализа.Откройте стопкок, чтобы позволить жидкости течь через трубы к плаценте и включите перистальтический насос, контроль давления и монитор давления. Медленно увеличьте давление до 80 миллиметров ртутного столба, считыв на мониторе давления. Медленно откройте стопкок, чтобы позволить поток жидкости в маточную артерию.Пополнить все резервуары для поддержания объема жидкости на протяжении всего эксперимента. После того, как ткани имеют equilibrated в течение 30 минут, чтобы васкулатура приспособиться к новому потоку жидкости, установить базовый перфузии путем сбора сточных вод в течение 10 минут от обоих весовых лодок. Измерьте объем жидкости, которая появляется через маточную артерию и пуповину.В конце базового периода сбора ввести экспериментальное лечение в маточную артерию. Затем собирайте образцы из дистальной артерии матки и сточных вод пупочных вен плода каждые 10 минут в общей сложности 180 минут после инфузии. Измерьте загрязняющие вещества в образцах жидкости.Перфузия с синим красителем Эванса для проверки системы и визуализации соответствующей функции жидкости и плацентарный барьер для предотвращения переноса загрязняющих веществ в отсек плода показывает, что краситель достиг и проникся плацентарный ткани в этой системе. При более тщательном расследовании становится ясно, что синий краситель Эванса не вошел в пуповиную вену плода, что, как ожидается, так как синий краситель Эванса обязан альбумин. В этом репрезентативном эксперименте была выявлена уменьшенная передача жидкости в отделение плода в течение 10 минут после инфузии полистирола.Передача полистирола в отделение плода достигла пика в 20 минут и продолжалась в течение 90 минут. Самое главное помнить во время канкуляции, чтобы идти медленно. Пипетки и ткани очень деликатны и могут легко стать сломанной или разорванной.Взвешивая effluence, эта методология может быть использована для исследования плацентарской физиологии, а также транслокации материала.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Efficient Gene Transfer in Chick Retinas for Primary Cell Culture Studies: An Ex-ovo Electroporation Approach

Efficient Gene Transfer in Chick Retinas for Primary Cell Culture Studies: An Ex-ovo Electroporation Approach

Эффективное Перенос генов в Чик сетчатки для первичной культуры клеток исследований:<em&gt; Экс-ово</em&gt; Электропорация подход

The cone photoreceptor-enriched cultures derived from embryonic chick retinas have become an indispensable tool for researchers around the world studying ...

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

Экс Vivo культуры глотки Арки для изучения Сердце и мышцы предшественников и свою нишу

The pharyngeal mesoderm of developing embryos contributes to broad regions of head and heart musculature. We have developed a novel method to study head ...

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Создание клинически значимых<em&gt; Экс Vivo</em&gt; Мок хирургии катаракты модель для исследования Эпителиальный заживления раны в родной микроокружения

The major impediment to understanding how an epithelial tissue executes wound repair is the limited availability of models in which it is possible to ...

Using Ex Vivo Upright Droplet Cultures of Whole Fetal Organs to Study Developmental Processes during Mouse Organogenesis

Using Ex Vivo Upright Droplet Cultures of Whole Fetal Organs to Study Developmental Processes during Mouse Organogenesis

С помощью<em&gt; Экс Vivo</em&gt; Вертикальный воздушно-капельных Культуры всей фетальных органов по изучению процессов развития во Mouse органогенеза

Investigating organogenesis in utero is a technically challenging process in placental mammals due to inaccessibility of reagents to embryos that develop ...

Ex Vivo Culture of Chick Cerebellar Slices and Spatially Targeted Electroporation of Granule Cell Precursors

Ex Vivo Culture of Chick Cerebellar Slices and Spatially Targeted Electroporation of Granule Cell Precursors

Экс Vivo культуры Чик мозжечка ломтиками и пространственно Целевые Электропорация ЗК прекурсоров

The cerebellar external granule layer (EGL) is the site of the largest transit amplification in the developing brain, and an excellent model for studying ...

Epicardial Outgrowth Culture Assay and Ex Vivo Assessment of Epicardial-derived Cell Migration

Epicardial Outgrowth Culture Assay and Ex Vivo Assessment of Epicardial-derived Cell Migration

Эпикардиального вырост Культура Анализ и<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Оценка эпикардиального производный миграции клеток

A single layer of epicardial cells lines the heart, providing paracrine factors that stimulate cardiomyocyte proliferation and directly contributing ...

Isolation and Expansion of Mesenchymal Stem/Stromal Cells Derived from Human Placenta Tissue

Выделение и расширения мезенхимальных стволовых / стромальные клетки, полученные из плаценты человека ткани

Mesenchymal stem/stromal cells (MSC) are promising candidates for use in cell-based therapies. In most cases, therapeutic response appears to be cell-dose ...

An Ex Vivo Method for Time-Lapse Imaging of Cultured Rat Mesenteric Microvascular Networks

An Ex Vivo Method for Time-Lapse Imaging of Cultured Rat Mesenteric Microvascular Networks

<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Метод ЗАМЕДЛЕННАЯ визуализации культивируемых Rat брыжеечные микрососудистых сетей

Angiogenesis, defined as the growth of new blood vessels from pre-existing vessels, involves endothelial cells, pericytes, smooth muscle cells, immune ...

Isolation and Characterization of Mesenchymal Stromal Cells from Human Umbilical Cord and Fetal Placenta

Выделение и характеристика мезенхимальных стромальных клеток из пуповинной и фетальной плаценты

The human umbilical cord (UC) and placenta are non-invasive, primitive and abundant sources of mesenchymal stromal cells (MSCs) that have increasingly ...

Immuno-fluorescent Labeling of Microtubules and Centrosomal Proteins in Ex Vivo Intestinal Tissue and 3D In Vitro Intestinal Organoids

Immuno-fluorescent Labeling of Microtubules and Centrosomal Proteins in Ex Vivo Intestinal Tissue and 3D In Vitro Intestinal Organoids

Иммуно люминесцентные маркировки микротрубочек и Centrosomal белков в Ex Vivo кишечных тканей и 3D в Vitro кишечных Organoids

The advent of 3D in vitro organoids that mimic the in vivo tissue architecture and morphogenesis has greatly advanced the ability to study key biological ...