Name: analysis of cardiac chamber development during mouse embryogenesis using whole mount epifluorescence
Uploaded: 2019-04-17T15:00:00
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Diese Arbeit wurde unterstützt von NIH R03 HL140264 (Y.-J. (N) und Gilead Sciences Research Scholar Program (Y.-J. (N).

Alle tierische Verfahren wurden mit Zustimmung der Vanderbilt University Medical Center institutionelle Animal Care und Use Committee durchgeführt.
1. Maus Embryo Sammlung und Dissektion
<ol><li>Paaren sich 8-10 Wochen alten weibliche MLC-2v-TdTomato+ /- Mäusen mit 8-10 Wochen alten männlichen MLC-2v-TdTomato+ /- Mäusen zu MLC-2v-TdTomato+ / +, MLC-2v-TdTomato+ /- und MLC-2v-TdTomato- / - Embryonen.</li>
	<li>Überprüfen Sie die Dä...

<ol>
	<li>Evans, S. M., Yelon, D., Conlon, F. L., Kirby, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+lineage+development.">Myocardial lineage development.</a> Circulation Research. 107 (12), 1428-1444 (2010).</li><li>Paige, S. L., Plonowska, K., Xu, A., Wu, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+regulation+of+cardiomyocyte+differentiation.">Molecular regulation of cardiomyocyte differentiation.</a> Circulation Research. 116 (2), 341-353 (2015).</li><li>Lee, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myosin+light+chain-2+luciferase+transgenic+mice+reveal+distinct+regulatory+programs+for+cardiac+and+skeletal+muscle-specific+expression+of+a+single+contractile+protein+gene.">Myosin light chain-2 luciferase transgenic mice reveal distinct regulatory programs for cardiac and skeletal muscle-specific expression of a single contractile protein gene.</a> Journal of Biological Chemistry. 267 (22), 15875-15885 (1992).</li><li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+requirement+of+myosin+light+chain+2v+in+embryonic+heart+function.">Selective requirement of myosin light chain 2v in embryonic heart function.</a> Journal of Biological Chemistry. 273 (2), 1252-1256 (1998).</li><li>Ross, R. S., Navankasattusas, S., Harvey, R. P., Chien, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+HF-1a/HF-1b/MEF-2+combinatorial+element+confers+cardiac+ventricular+specificity+and+established+an+anterior-posterior+gradient+of+expression.">An HF-1a/HF-1b/MEF-2 combinatorial element confers cardiac ventricular specificity and established an anterior-posterior gradient of expression.</a> Development. 122 (6), 1799-1809 (1996).</li><li>Christoffels, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chamber+formation+and+morphogenesis+in+the+developing+mammalian+heart.">Chamber formation and morphogenesis in the developing mammalian heart.</a> Dev Biol. 223 (2), 266-278 (2000).</li><li>Wu, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atrial+identity+is+determined+by+a+COUP-TFII+regulatory+network.">Atrial identity is determined by a COUP-TFII regulatory network.</a> Developmental Cell. 25 (4), 417-426 (2013).</li><li>Nelson, D. O., Jin, D. X., Downs, K. M., Kamp, T. J., Lyons, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Irx4+identifies+a+chamber-specific+cell+population+that+contributes+to+ventricular+myocardium+development.">Irx4 identifies a chamber-specific cell population that contributes to ventricular myocardium development.</a> Developmental Dynamics. 243 (3), 381-392 (2014).</li><li>Bao, Z. Z., Bruneau, B. G., Seidman, J. G., Seidman, C. E., Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+chamber-specific+gene+expression+in+the+developing+heart+by+Irx4.">Regulation of chamber-specific gene expression in the developing heart by Irx4.</a> Science. 283 (5405), 1161-1164 (1999).</li><li>Kubalak, S. W., Miller-Hance, W. C., O'Brien, T. X., Dyson, E., Chien, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chamber+specification+of+atrial+myosin+light+chain-2+expression+precedes+septation+during+murine+cardiogenesis.">Chamber specification of atrial myosin light chain-2 expression precedes septation during murine cardiogenesis.</a> Journal of Biological Chemistry. 269 (24), 16961-16970 (1994).</li><li>Bardot, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+TAF10-containing+TFIID+and+SAGA+transcriptional+complexes+are+dispensable+for+early+somitogenesis+in+the+mouse+embryo.">The TAF10-containing TFIID and SAGA transcriptional complexes are dispensable for early somitogenesis in the mouse embryo.</a> Development. 144 (20), 3808-3818 (2017).</li><li>Zhang, Z., Nam, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+MLC-2v-tdTomato+knock-in+reporter+mouse+line.">Generation of MLC-2v-tdTomato knock-in reporter mouse line.</a> Genesis. , (2018).</li><li>Ieda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+reprogramming+of+fibroblasts+into+functional+cardiomyocytes+by+defined+factors.">Direct reprogramming of fibroblasts into functional cardiomyocytes by defined factors.</a> Cell. 142 (3), 375-386 (2010).</li><li>Liang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HCN4+dynamically+marks+the+first+heart+field+and+conduction+system+precursors.">HCN4 dynamically marks the first heart field and conduction system precursors.</a> Circulation Research. 113 (4), 399-407 (2013).</li><li>Nam, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+diverse+cardiac+cell+types+by+reprogramming+fibroblasts+with+cardiac+transcription+factors.">Induction of diverse cardiac cell types by reprogramming fibroblasts with cardiac transcription factors.</a> Development. 141 (22), 4267-4278 (2014).</li><li>Spater, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+HCN4++cardiomyogenic+progenitor+derived+from+the+first+heart+field+and+human+pluripotent+stem+cells.">A HCN4+ cardiomyogenic progenitor derived from the first heart field and human pluripotent stem cells.</a> Nature Cell Biology. 15 (9), 1098-1106 (2013).</li><li>O'Brien, T. X., Lee, K. J., Chien, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Positional+specification+of+ventricular+myosin+light+chain+2+expression+in+the+primitive+murine+heart+tube.">Positional specification of ventricular myosin light chain 2 expression in the primitive murine heart tube.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 90 (11), 5157-5161 (1993).</li></ol>

Die hier beschriebene Methode ist relativ einfach, ventrikuläre Kammer Entwicklung zu untersuchen, ohne arbeitsintensive experimentieren um ventrikuläre oder Herz-Kreislauf-spezifische strukturelle Gene oder Proteine zu beschriften. Diese Methode minimiert so, technische Variabilitäten, die oft in Immunostained Herzen Abschnitten gefunden wurden.
Es gibt zwei wichtige Schritte zum erfolgreich durchführen dieses Verfahrens einschließlich genaue Schätzung der embryonalen Alter von Mäusen ...

Kammer-Formation während Herz-Entwicklung ist ein komplexer Prozess, der Übergang durch mehrere morphologisch unterschiedliche embryonalen Phase1,2. Die sichelförmige Form von kardialen Progenitorzellen Bevölkerung bildet eine lineare Herz Rohr und dann erfährt, Dehnung und Schleife um die Spirale form des entwickelnden Herzen. Nach seiner Septation Prozess wandelt sich entwickelnden Herzen in vier Kammern Herzen. Unterbrechung der Prozesse führt zu Entwicklungsstörungen Herzfehler. Daher ist es wichtig zu verstehen, die molekularen Mechanismen Kammer Bildung bei der Entwicklung von Herzen. Trotz zahlreichen früheren Studien über Herz-Entwicklung bleibt unser Verständnis dieses komplexen Prozesses begrenzt.
In-situ Hybridisierung, Immunohistochemistry und Beta-Galaktosidase Färbung mit LacZ Reporter Mäusen wurden weithin verwendet, um die Kammer Bildung während der Maus Herz Entwicklung untersuchen durch Kennzeichnung bestimmten Herz- oder Kammer bestimmte STRUKTURGENE oder Proteine (z. B. Nppa, Putsch-TFII, Irx4, MLC-2a und MLC-2v)3,4,5,6,7,8,9,10. Diese Experimente mit Mausembryonen erfordern jedoch viel Zeit und Know-how, weil mehrere verschiedene experimentelle Schritte werden nacheinander11durchgeführt. Hier beschreiben wir eine einfache ganze Berg Epifluorescent Mikroskopie Methode um entwickelnden Embryonen von MLC-2v-TdTomato Reporter Knock-in Mäusen12seziert Ventrikel zu visualisieren. Der Vorteil dieser Methode im Vergleich zur bisher verwendeten Methoden ist es, komplexe experimentelle Schritte zu vermeiden, die oft experimentelle Variationen erstellen kann. Der Hauptzweck dieses Protokolls soll beschreiben, wie Mausembryonen und entwickelnden Herzen zu sezieren und zu jedem Entwicklungsschritt Maus kardiale Kammer ohne mühsame histochemische Experimente zu prüfen. Diese Methode kann leicht verwendet werden, um Herz-Entwicklung mit verschiedenen anderen transgene Mauslinien frühen kardialen Marker beschriften zu bewerten (z. B. Mesp1Cre: Rosa26EYFP13, Isl1Cre: Rosa26EYFP13, Hcn4H2BGFP14, Hcn4Cre: Rosa mT /mG14, Nkx2-5Cre: Rosa mT/mG14, Hcn4-eGFP15, Isl1Cre: Rosa mT/mG14, Nkx2.5Cre: Rosa26tdTomato15und TgMef2c-AHF-GFP16 Mäuse).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:647px;" width="647">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:279px;">dissecting microscope</td>
			<td style="width:83px;">Leica</td>
			<td style="width:119px;">MZ125</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:279px;">DNA ladder (100 bp)</td>
			<td style="width:83px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">G2101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:279px;">epifluorescence dissecting microscope</td>
			<td style="width:83px;">Leica</td>
			<td style="width:119px;">M165 FC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:279px;">GoTaq Green master Mix</td>
			<td style="width:83px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">M712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:279px;">PCR machine (master cycler)</td>
			<td style="width:83px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;">6336000023</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of cardiac chamber development during mouse embryogenesis using whole mount epifluorescence

Das Ziel dieses Protokolls ist es, eine Methode für die Zerlegung von Mäuseembryonen und Visualisierung der embryonalen Maus ventrikuläre Kammern während Herz-Entwicklung mit ventrikulären bestimmte fluoreszierende Reporter Knock-in Mäusen (MLC-2v-TdTomato Mäuse) zu beschreiben. Herz-Entwicklung beinhaltet eine lineare Herz Rohr Formation, das Herz Rohr Schleifen und vier Kammer Septation. Diese komplexen Prozesse sind hoch bei allen Wirbeltieren konserviert. Das embryonale Herz Maus hat seit Herz Studien weit verbreitet. Allerdings ist aufgrund ihrer sehr geringen Größe sezieren embryonalen Mäuseherzen technisch anspruchsvoll. Darüber hinaus braucht Visualisierung der kardialen Kammer Bildung oft in-situ Hybridisierung, Beta-Galaktosidase Färbung mit LacZ Reporter Mäuse oder Immunostaining geschnittenen embryonale Herz. Hier beschreiben wir wie sie sezieren embryonalen Mäuseherzen und ventrikuläre Kammer Bildung von MLC-2v-TdTomato Mäuse mit ganzen Berg Epifluorescent Mikroskopie direkt zu visualisieren. Mit dieser Methode ist es möglich, direkt Herz Rohr Bildung und looping und vier-Kammer-Bildung ohne weitere experimentelle Manipulation von Mäuseembryonen untersuchen. Obwohl die MLC-2v-TdTomato Reporter Knock-in Maus Zeile in diesem Protokoll als Beispiel verwendet wird, kann dieses Protokoll auf andere Herz-spezifischen fluoreszierenden Reporter transgene Mauslinien angewendet werden.

Während der Entwicklung von Herz MLC-2v zählt zu den frühesten Marker für ventrikuläre Kammer Spezifikation17. Wie in Abbildung 1dargestellt, wir ganze Maus-Embryonen und embryonalen Herzen von MLC-2v-TdTomato Reporter Knock-in Mäusen seziert und MLC-2v-TdTomato Reporter Ausdruck während der Herzen Entwicklung untersucht. Bei MLC-2v-TdTomato Reporter Knock-in Mäusen, konstitutiven TdTomato Ausdruck im entwickelnden Herzen mitte...

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Analysis of Cardiac Chamber Development During Mouse Embryogenesis Using Whole Mount Epifluorescence

Wir präsentieren Ihnen die Protokolle, um die Maus Herz Entwicklung mit ganzen Berg Epifluorescent Mikroskopie auf Mausembryonen seziert von ventrikulären spezifische MLC-2v-TdTomato Reporter Knock-in Mäusen zu untersuchen. Diese Methode ermöglicht es uns, jede Stufe der ventrikulären Formation während der Maus Herz Entwicklung ohne arbeitsintensive histochemische Methoden direkt zu visualisieren.

Analyse der Entwicklung der kardialen Kammer in der Maus Embryogenese mit ganzen Mount Epifluoreszenz

The goal of this protocol is to describe a method for the dissection of mouse embryos and visualization of embryonic mouse ventricular chambers during ...

Mit dieser Methode können wir herzröhrenbildung, Looping und volle Kammerbildung ohne weitere experimentelle Manipulationen des Mausembryons direkt prüfen. Obwohl wir MLC-2v-tdTomato Mäuse als Beispiel verwenden, kann diese einfache Methode häufig mit anderen fluoreszierenden Reporter-Mauslinien verwendet werden. Der Hauptvorteil dieses Protokolls ist, dass es sehr einfach ist und keine komplexen Techniken oder Geräte erfordert.Es kann bei regulärer Laboreinstellung durchgeführt werden. Nach der Paarung Weibchen mit männlichen Mäusen, beide MLC-2v-tdTomato 8 bis 10 Wochen alt, überprüfen Sie die Dämme auf Vaginalstecker jeden Morgen. Legen Sie die schwangeren Muttern, eingeschläfert an verschiedenen Tagen nach dem Koitum, in Supine-Position und sprühen Sie den Bauch mit 70% Ethanol.Verwenden Sie scharfe chirurgische Schere und Zange, um die Bauchhöhle durch Schnitt der Haut und Bauchwand zu öffnen. Nach dem Auffinden bilateraler Gebärmutterhörner im dorsalen Teil der Bauchhöhle, trennen Sie die gesamte Gebärmutter mit scharfen chirurgischen Scheren und Zangen, um vorsichtig über den Eileitern auf beiden Seiten zu schneiden. Legen Sie die gesamte sezierte Gebärmutter in eine 10 Zentimeter lange Petrischale mit eiskaltem PBS.Mit scharfen chirurgischen Scheren und Zangen, trennen Sie sorgfältig jeden Fruchtwassersack entlang des Gebärmutterhorns. Verwenden Sie eine Pinzette, um jeden Embryo in eine 35-Millimeter-Kulturplatte zu übertragen, die mit eiskaltem PBS gefüllt ist. Öffnen Sie mit scharfen chirurgischen Scheren und Zangen einen Fruchtwassersack und entblößen Sie jeden Embryo, indem Sie die Nabelschnur abschneiden und dann zusätzliche embryonale Gewebe so weit wie möglich ausschneiden, ohne die Embryonen zu beschädigen.Unter einem Sezieren mikroskop mit einem Faseroptikmikroskop-Beleuchtung sende den Kopf des Embryos ab und überträgt ihn in ein 1,5-Milliliter-Rohr mit 100 Mikroliter Puffer A für die spätere Genotypisierung, um mit den Ergebnissen der epifluoreszierenden Bildgebung zu korrelieren. Öffnen Sie mit feinen Zangen die Brust des Embryos. Mit scharfen chirurgischen Scheren und Zangen, entfernen Sie das Herz weg von der Lunge und Vaskulatur.Verwenden Sie eine Pinzette, um das sezierte embryonale Herz mit PBS in eine 35-Millimeter-Kulturplatte zu übertragen. Platzieren Sie die Platte mit Maus-Embryonalherzen unter einem epifluoreszierenden Sezierendes Mikroskop. Verwenden Sie feine Zangen, um die embryonalen Herzen so zu positionieren, dass sich entwickelnde Ventrikel dem Prüfer gegenüberstehen.Passen Sie den Fokus mit einem 0,63-fachen Objektiv im Hellfeldmodus an. Nehmen Sie Hellfeldbelichtungen auf und erfassen Sie mehrere Bilder. Um die tdTomato-Expression zu visualisieren, schalten Sie einen Lichtwellenleiter aus, und stellen Sie den Filter für rote Fluoreszenz ein.Bei Bedarf die Fokussierung des Bildes nachjustieren, Helligkeit und Kontrast anpassen, rotfluoreszierende Belichtungen aufnehmen und mehrere Bilder aufnehmen. Für embryonale Genotypisierung, kochen zuvor isolierte Kopfproben in Puffer A bei 100 Grad Celsius für 30 Minuten. Zentrifugieren Sie für zwei Minuten bei 11, 360 mal G.Transfer 20 Mikroliter Überstand in eine neue 1,5 Milliliter Tube mit 20 Mikroliter Puffer B und mischen.Verwenden Sie 4,5 Mikroliter des gemischten Überstandes als DNA-Vorlage und kombinieren Sie ihn mit 0,5 Mikrolitern jedes der 10 mikromolarenspezifischen Vorwärts- und umgekehrten Primer, 10 Mikroliter 2x-vorgemischter Polymerase und Reaktionspuffer und fügen Sie dann Wasser zu einem Gesamtvolumen von 20 Mikrolitern hinzu. Führen Sie eine PCR aus, wie im Manuskript beschrieben. Laden Sie die abgeschlossene Reaktion in 100 Base n-Paar DNA-Leiter auf einem 1%Agarose-Gel und laufen Sie bei 140 Volt in 1x TAE Puffer für 25 Minuten.Legen Sie das fertige Gel auf einen UV-Transilluminator und schalten Sie das UV-Licht ein, um die DNA-Bänder zu identifizieren. MLC-2v gilt als der früheste Marker für die ventrikuläre Kammerspezifikation während der Herzentwicklung. Bei MLC-2v-tdTomato-Reporter-Knock-in-Mäusen wird die relativ schwache Expression von tdTomato im linearen Herzröhrchen bei E8.0 bei E8.5 stärker, wie durch eine epifloureszierende Gesamtbildgebung der Embryonen gezeigt wird.Mit hilfe einer vollmontierten epifloureszenten Bildgebung des sezierten Herzens kann die ventrikuläre Kammerbildung während der Herzentwicklung der Maus leicht bestimmt werden. Im sezierten Herzen eines ganzen Mausembryons bei E10.5 wurde der MLC-2v-tdTomato-Reporterausdruck im ventrikulären Teil des Herzens und nicht im Zuflusstrakt, im Abflusstrakt oder in den zukünftigen Vorhöfen gezeigt. Bei E12.5 bis E13.5 wird der tdTomato-Reporter ausschließlich in den Ventrikeln des vierkammerigen Herzens ausgedrückt.Das ähnliche ventrikuläre Expressionsmuster wurde im sezierten Mausembryon bei E16.5 gezeigt. Nach der gesamten Bildgebung wurde der Genotyp der Embryonen mit zwei Primern für die PCR-Genotypisierung bestimmt, die homozygote Embryonen bestätigten, die das tdTomato-Knock-in-Allel, heterozygot und die wilden Embryonen trugen. Diese Methode ist ziemlich einfach und einfach durchzuführen.Der entscheidende Schritt ist die Sezieren von embryonalen Herzen. Das Verständnis der Herzanatomie während der Herzentwicklung ist notwendig, um das Herz erfolgreich vom gesamten Embryo zu isolieren.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Optimized Ex-ovo Culturing of Chick Embryos to Advanced Stages of Development

Optimized Ex-ovo Culturing of Chick Embryos to Advanced Stages of Development

Optimierte<em&gt; Ex-ovo</em&gt; Züchtung von Hühnerembryonen zu fortgeschrittenen Entwicklungsstadium

Research in anatomy, embryology, and developmental biology has largely relied on the use of model organisms. In order to study development in live embryos ...

Forschung

Entwicklungsbiologie

Analysis of Cardiomyocyte Development using Immunofluorescence in Embryonic Mouse Heart

Analyse Cardiomyocyte Entwicklung mit Immunfluoreszenz in embryonalen Maus Herz

During heart development, the generation of myocardial-specific structural and functional units including sarcomeres, contractile myofibrils, intercalated ...

Using Ex Vivo Upright Droplet Cultures of Whole Fetal Organs to Study Developmental Processes during Mouse Organogenesis

Using Ex Vivo Upright Droplet Cultures of Whole Fetal Organs to Study Developmental Processes during Mouse Organogenesis

Verwendung<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Upright Droplet Kulturen von Whole Fetal Orgeln zu Entwicklungsprozessen während der Maus Organogenese Studieren

Investigating organogenesis in utero is a technically challenging process in placental mammals due to inaccessibility of reagents to embryos that develop ...

Organ Culture and Whole Mount Immunofluorescence Staining of Mouse Wolffian Ducts

Orgel, Kultur und Ganze Berge Immunfluoreszenzanfärbung von Maus Wolffschen Gänge

Tubal morphogenesis is a fundamental requirement for the development of most mammalian organs, including the male reproductive system. The epididymis, an ...

Quantitative Whole-mount Immunofluorescence Analysis of Cardiac Progenitor Populations in Mouse Embryos

Quantitative ganze-Mount Immunfluoreszenz Analyse der kardialen Vorläuferzellen Populationen in Mausembryonen

The use of ever-advancing imaging techniques has contributed broadly to our increased understanding of embryonic development. Pre-implantation development ...

Whole Mount Immunofluorescence and Follicle Quantification of Cultured Mouse Ovaries

Ganze Mount Immunfluoreszenz und Follikel Quantifizierung der kultivierten Maus Eierstöcke

Research in the field of mammalian reproductive biology often involves evaluating the overall health of ovaries and testes. Specifically, in females, ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

Organotypischen Kultur-Methode, die Entwicklung der embryonalen Gewebe zu studieren

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Visualisierung der Knoten und Notochordal Platte In Gastrulating Maus-Embryonen mittels Rasterelektronenmikroskopie und ganze Mount Immunfluoreszenz

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

Visualization of the Superior Ocular Sulcus during Danio rerio Embryogenesis

Visualization of the Superior Ocular Sulcus during Danio rerio Embryogenesis

Visualisierung von der okulären Sulcus Superior in der Embryogenese Danio rerio

Congenital ocular coloboma is a genetic disorder that is typically observed as a cleft in the inferior aspect of the eye resulting from incomplete choroid ...

Laser Capture Microdissection of Mouse Embryonic Cartilage and Bone for Gene Expression Analysis

Laser Capture Mikrodissektion von Maus embryonalen Knorpel und Knochen für Die Genexpressionsanalyse

Laser capture microdissection (LCM) is a powerful tool to isolate specific cell types or regions of interest from heterogeneous tissues. The cellular and ...