Name: analysis of cardiac chamber development during mouse embryogenesis using whole mount epifluorescence
Uploaded: 2019-04-17T15:00:00
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इस काम को NIH R03 HL140264 (वाई जे द्वारा समर्थित किया गया । N) और गिलाद विज्ञान अनुसंधान विद्वान कार्यक्रम (Y.-J. एन) ।

सभी पशु प्रक्रियाओं Vanderbilt विश्वविद्यालय चिकित्सा केंद्र संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति की मंजूरी के साथ प्रदर्शन किया गया ।
1. माउस भ्रूण संग्रह और विच्छेदन
<ol><li>मेट 8-10 सप्ताह पुरानी महिला...

<ol>
	<li>Evans, S. M., Yelon, D., Conlon, F. L., Kirby, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+lineage+development.">Myocardial lineage development.</a> Circulation Research. 107 (12), 1428-1444 (2010).</li><li>Paige, S. L., Plonowska, K., Xu, A., Wu, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+regulation+of+cardiomyocyte+differentiation.">Molecular regulation of cardiomyocyte differentiation.</a> Circulation Research. 116 (2), 341-353 (2015).</li><li>Lee, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myosin+light+chain-2+luciferase+transgenic+mice+reveal+distinct+regulatory+programs+for+cardiac+and+skeletal+muscle-specific+expression+of+a+single+contractile+protein+gene.">Myosin light chain-2 luciferase transgenic mice reveal distinct regulatory programs for cardiac and skeletal muscle-specific expression of a single contractile protein gene.</a> Journal of Biological Chemistry. 267 (22), 15875-15885 (1992).</li><li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+requirement+of+myosin+light+chain+2v+in+embryonic+heart+function.">Selective requirement of myosin light chain 2v in embryonic heart function.</a> Journal of Biological Chemistry. 273 (2), 1252-1256 (1998).</li><li>Ross, R. S., Navankasattusas, S., Harvey, R. P., Chien, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+HF-1a/HF-1b/MEF-2+combinatorial+element+confers+cardiac+ventricular+specificity+and+established+an+anterior-posterior+gradient+of+expression.">An HF-1a/HF-1b/MEF-2 combinatorial element confers cardiac ventricular specificity and established an anterior-posterior gradient of expression.</a> Development. 122 (6), 1799-1809 (1996).</li><li>Christoffels, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chamber+formation+and+morphogenesis+in+the+developing+mammalian+heart.">Chamber formation and morphogenesis in the developing mammalian heart.</a> Dev Biol. 223 (2), 266-278 (2000).</li><li>Wu, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atrial+identity+is+determined+by+a+COUP-TFII+regulatory+network.">Atrial identity is determined by a COUP-TFII regulatory network.</a> Developmental Cell. 25 (4), 417-426 (2013).</li><li>Nelson, D. O., Jin, D. X., Downs, K. M., Kamp, T. J., Lyons, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Irx4+identifies+a+chamber-specific+cell+population+that+contributes+to+ventricular+myocardium+development.">Irx4 identifies a chamber-specific cell population that contributes to ventricular myocardium development.</a> Developmental Dynamics. 243 (3), 381-392 (2014).</li><li>Bao, Z. Z., Bruneau, B. G., Seidman, J. G., Seidman, C. E., Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+chamber-specific+gene+expression+in+the+developing+heart+by+Irx4.">Regulation of chamber-specific gene expression in the developing heart by Irx4.</a> Science. 283 (5405), 1161-1164 (1999).</li><li>Kubalak, S. W., Miller-Hance, W. C., O'Brien, T. X., Dyson, E., Chien, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chamber+specification+of+atrial+myosin+light+chain-2+expression+precedes+septation+during+murine+cardiogenesis.">Chamber specification of atrial myosin light chain-2 expression precedes septation during murine cardiogenesis.</a> Journal of Biological Chemistry. 269 (24), 16961-16970 (1994).</li><li>Bardot, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+TAF10-containing+TFIID+and+SAGA+transcriptional+complexes+are+dispensable+for+early+somitogenesis+in+the+mouse+embryo.">The TAF10-containing TFIID and SAGA transcriptional complexes are dispensable for early somitogenesis in the mouse embryo.</a> Development. 144 (20), 3808-3818 (2017).</li><li>Zhang, Z., Nam, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+MLC-2v-tdTomato+knock-in+reporter+mouse+line.">Generation of MLC-2v-tdTomato knock-in reporter mouse line.</a> Genesis. , (2018).</li><li>Ieda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+reprogramming+of+fibroblasts+into+functional+cardiomyocytes+by+defined+factors.">Direct reprogramming of fibroblasts into functional cardiomyocytes by defined factors.</a> Cell. 142 (3), 375-386 (2010).</li><li>Liang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HCN4+dynamically+marks+the+first+heart+field+and+conduction+system+precursors.">HCN4 dynamically marks the first heart field and conduction system precursors.</a> Circulation Research. 113 (4), 399-407 (2013).</li><li>Nam, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+diverse+cardiac+cell+types+by+reprogramming+fibroblasts+with+cardiac+transcription+factors.">Induction of diverse cardiac cell types by reprogramming fibroblasts with cardiac transcription factors.</a> Development. 141 (22), 4267-4278 (2014).</li><li>Spater, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+HCN4++cardiomyogenic+progenitor+derived+from+the+first+heart+field+and+human+pluripotent+stem+cells.">A HCN4+ cardiomyogenic progenitor derived from the first heart field and human pluripotent stem cells.</a> Nature Cell Biology. 15 (9), 1098-1106 (2013).</li><li>O'Brien, T. X., Lee, K. J., Chien, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Positional+specification+of+ventricular+myosin+light+chain+2+expression+in+the+primitive+murine+heart+tube.">Positional specification of ventricular myosin light chain 2 expression in the primitive murine heart tube.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 90 (11), 5157-5161 (1993).</li></ol>

यहाँ वर्णित विधि वेंट्रिकुलर चैंबर के विकास की जांच करने के लिए अपेक्षाकृत सरल है, परिश्रम-गहन प्रयोगों के बिना निलय या हृदय-विशिष्ट संरचनात्मक जीन या प्रोटीन लेबल करने के लिए. इस प्रकार, इस विधि तकनीक?...

हृदय विकास के दौरान चैंबर गठन एक जटिल कई आकृति विज्ञान विशिष्ट भ्रूणीय चरणों1,2के माध्यम से संक्रमण प्रक्रिया है । हृदय प्रजनक जनसंख्या कोशिकाओं के वर्धमान आकार एक रैखिक हृदय ट्यूब रूपों और फिर दीर्घीकरण से होकर गुजरता है और विकासशील दिल के सर्पिल आकार बनाने के लिए पाशन । इसकी सेप्टन प्रक्रिया के बाद विकासशील हृदय चतुर्भासी हृदय में परिवर्तित हो जाता है । इनमें से किसी भी प्रक्रिया के बाधित होने से विकासात्मक हृदय दोष का परिणाम होता है । इस प्रकार, यह हृदय विकास के दौरान चैंबर गठन अंतर्निहित आणविक तंत्र को समझने के लिए महत्वपूर्ण है. दिल के विकास पर कई पिछले अध्ययनों के बावजूद, इस जटिल प्रक्रिया के बारे में हमारी समझ सीमित रहता है ।
स्वस्थानी संकरण, immunohistoरसायनरसायन, और बीटा-galactosidase धुंधला LacZ रिपोर्टर चूहों का उपयोग कर किया गया है व्यापक रूप से हृदय विशिष्ट या चैंबर विशिष्ट संरचनात्मक जीन लेबल द्वारा माउस दिल के विकास के दौरान चैंबर गठन का अध्ययन करने के लिए प्रयोग किया जाता है या प्रोटीन (जैसे, एनपीपीए, तख्तापलट-tfii, Irx4, एमएलसी -2 ए और एमएलसी-2v)3,4,5,6,7,8,9,10। हालांकि, इन प्रयोगों माउस भ्रूण का उपयोग महत्वपूर्ण समय और विशेषज्ञता की आवश्यकता होती है, क्योंकि कई विभिन्न प्रयोगात्मक कदम क्रमिक रूप से किया जा करने के लिए11. यहां, हम एक साधारण पूरे माउंट epiफ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी विधि का वर्णन करने के लिए विकासशील निलय एमएलसी से विच्छेदित-2v-tdtomato रिपोर्टर दस्तक12चूहों में की कल्पना करने के लिए । इस विधि का लाभ पहले प्रयुक्त पद्धतियों की तुलना में जटिल प्रयोगात्मक चरणों से बचने के लिए है जो अक्सर प्रयोगात्मक रूपांतरों बना सकते हैं । इस प्रोटोकॉल का मुख्य उद्देश्य कैसे माउस भ्रूण और दिल के विकास के टुकड़े टुकड़े करने के लिए और थकाऊ ऊतक-रसायन प्रयोगों के बिना माउस कार्डिएक चैंबर विकास के प्रत्येक चरण की जांच करने के लिए है । यह विधि आसानी से हृदय के विकास का आकलन करने के लिए लागू किया जा सकता है विभिन्न अन्य ट्रांसजेनिक माउस लाइनों जल्दी कार्डियक मार्कर लेबलिंग (जैसे, Mesp1Cre: Rosa26EYFP13, Isl1Cre: Rosa26EYFP13, Hcn4H2BGFP14, Hcn4Cre: रोजा मीट्रिक टन /mG14, Nkx2-5Cre: रोजा मीट्रिक/मिलीग्राम14, Hcn4-egfp15, Isl1Cre: रोजा मीट्रिक टन/

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:647px;" width="647">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:279px;">dissecting microscope</td>
			<td style="width:83px;">Leica</td>
			<td style="width:119px;">MZ125</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:279px;">DNA ladder (100 bp)</td>
			<td style="width:83px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">G2101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:279px;">epifluorescence dissecting microscope</td>
			<td style="width:83px;">Leica</td>
			<td style="width:119px;">M165 FC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:279px;">GoTaq Green master Mix</td>
			<td style="width:83px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">M712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:279px;">PCR machine (master cycler)</td>
			<td style="width:83px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;">6336000023</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of cardiac chamber development during mouse embryogenesis using whole mount epifluorescence

इस प्रोटोकॉल के लक्ष्य को माउस भ्रूण और दिल के विकास के दौरान भ्रूणीय माउस वेंट्रिकुलर कक्षों के दृश्य के विच्छेदन के लिए एक विधि का वर्णन है वेंट्रिकुलर विशिष्ट प्रतिदीप्त रिपोर्टर दस्तक-चूहों में (एमएलसी-2v-Tdटमाटर चूहों) का उपयोग कर । दिल के विकास के एक रैखिक दिल ट्यूब गठन शामिल है, दिल लूपिंग ट्यूब, और चार चैंबर septation. ये जटिल प्रक्रम सभी कशेरुकी प्राणियों में अत्यधिक संरक्षित होते हैं । माउस भ्रूणीय दिल व्यापक रूप से दिल विकास के अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया गया है । हालांकि, उनके अत्यंत छोटे आकार के कारण, विदारक माउस भ्रूणीय दिल तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण है । इसके अलावा, कार्डिएक चैंबर गठन के दृश्य अक्सर स्वस्थानी संकरण में की जरूरत है, बीटा-galactosidase धुंधला LacZ रिपोर्टर चूहों का उपयोग कर, या विच्छेदन भ्रूणीय दिलों की immunostaining. यहां, हम वर्णन कैसे माउस भ्रूणीय दिल काटना करने के लिए और सीधे MLC-2v-tdTomato पूरे माउंट epiफ्लोरोसेंट microscopy का उपयोग चूहों के वेंट्रिकुलर चैंबर गठन कल्पना । इस विधि के साथ, यह सीधे दिल ट्यूब गठन और पाशन, और माउस भ्रूण के आगे प्रयोगात्मक हेरफेर के बिना चार चैंबर गठन की जांच करने के लिए संभव है । हालांकि एमएलसी-2v-tdTomato रिपोर्टर दस्तक में माउस लाइन एक उदाहरण के रूप में इस प्रोटोकॉल में प्रयोग किया जाता है, इस प्रोटोकॉल अंय दिल विशिष्ट फ्लोरोसेंट रिपोर्टर ट्रांसजेनिक माउस लाइनों के लिए लागू किया जा सकता है ।

हृदय विकास के दौरान MLC-2v को वेंट्रिकुलर चैंबर स्पेसिफिकेशन17के लिए सबसे जल्द मार्कर माना जाता है । के रूप में चित्रा 1में चित्रित, हम बाहर एमएलसी-2v-tdtomato रिपोर्टर दस्तक से चू?...

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Analysis of Cardiac Chamber Development During Mouse Embryogenesis Using Whole Mount Epifluorescence

हम प्रोटोकॉल प्रस्तुत माउस दिल विकास की जांच करने के लिए माउस भ्रूण पर पूरे माउंट epiफ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी का उपयोग वेंट्रिकुलर विशिष्ट MLC-2v से विच्छेदित-tdtomato रिपोर्टर दस्तक चूहों में । इस विधि हमें सीधे श्रम-गहन ऊतक-रसायन तरीकों के बिना माउस दिल के विकास के दौरान वेंट्रिकुलर गठन के प्रत्येक चरण कल्पना करने के लिए अनुमति देता है ।

पूरे माउंट Epifluorescence का उपयोग कर माउस Embryogenesis के दौरान कार्डिएक चैंबर विकास का विश्लेषण

The goal of this protocol is to describe a method for the dissection of mouse embryos and visualization of embryonic mouse ventricular chambers during ...

इस विधि का उपयोग करके हम माउस भ्रूण के आगे प्रयोगात्मक जोड़तोड़ के बिना सीधे दिल ट्यूब गठन, लूपिंग और पूर्ण कक्ष गठन की परीक्षा कर सकते हैं। हालांकि, हम एक उदाहरण के रूप में एमएलसी-2v-tdTomato चूहों का उपयोग करते हैं, इस सरल विधि का व्यापक रूप से अन्य फ्लोरोसेंट रिपोर्टर माउस लाइनों के साथ उपयोग किया जा सकता है। इस प्रोटोकॉल का मुख्य लाभ यह है कि यह बहुत सरल है और किसी भी जटिल तकनीक या उपकरण की आवश्यकता नहीं है।यह नियमित प्रयोगशाला सेटिंग में किया जा सकता है। पुरुष चूहों के साथ महिला संभोग के बाद, दोनों एमएलसी-2v-tdTomato 8 से 10 सप्ताह पुराना है, हर सुबह योनि प्लग के लिए बांधों की जांच करें । गर्भवती बांधों को बिछाएं, कोइटम के बाद अलग-अलग दिनों में इच्छामृत्यु दें, रीढ़ की स्थिति में और पेट को 70% इथेनॉल के साथ स्प्रे करें।त्वचा और पेट की दीवार दोनों के चीरा द्वारा पेट की गुहा को खोलने के लिए तेज सर्जिकल कैंची और संदंश का प्रयोग करें। पेट की गुहा के पृष्ठीय भाग में द्विपक्षीय गर्भाशय सींग का पता लगाने के बाद, तेज सर्जिकल कैंची का उपयोग करके पूरे गर्भाशय को अलग करें और दोनों पक्षों पर अंडाशय के ऊपर सावधानी से कटौती करने के लिए संदंश करें। पूरे विच्छेदित गर्भाशय को बर्फ ठंडे पीबीएस के साथ 10 सेंटीमीटर पेट्री डिश में रखें।तेज सर्जिकल कैंची और संदंश का उपयोग करना, ध्यान से गर्भाशय सींग के साथ प्रत्येक एमनियोटिक थैली अलग। बर्फ ठंड PBS से भरा एक 35 मिलीमीटर संस्कृति प्लेट में प्रत्येक भ्रूण हस्तांतरण करने के लिए चिमटी का प्रयोग करें। तेज सर्जिकल कैंची और संदंश का उपयोग करना, एक एमनियोटिक थैली खोलें और गर्भनाल को काटकर प्रत्येक भ्रूण का पर्दाफाश करें और फिर भ्रूण को नुकसान पहुंचाए बिना जितना संभव हो अतिरिक्त भ्रूण ऊतकों को ट्रिम करें।फाइबर ऑप्टिक माइक्रोस्कोप रोशनी के साथ एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत, भ्रूण के सिर को काट दें और इसे 1.5 मिलीलीटर ट्यूब में स्थानांतरित करें जिसमें बाद में जीनोटाइपिंग के लिए बफर ए के 100 माइक्रोलीटर के साथ एपिफ्लोरेटेंट इमेजिंग के परिणामों के साथ सहसंबंधित है। बारीक संदंश का उपयोग करके, भ्रूण की छाती खोलें। तेज सर्जिकल कैंची और संदंश के साथ, दिल को फेफड़ों और वैक्यूलेचर से दूर निकाल दें।PBS के साथ एक ३५ मिलीमीटर संस्कृति प्लेट में विच्छेदित भ्रूण दिल हस्तांतरण करने के लिए चिमटी का प्रयोग करें । एक एपिफ्लोरोसेंट विच्छेदन माइक्रोस्कोप के नीचे माउस भ्रूण दिलों के साथ प्लेट रखें। भ्रूणीय दिलों को स्थिति में रखने के लिए ठीक संदंश का उपयोग करें जैसे कि विकासशील वेंट्रिकल्स परीक्षक का सामना कर रहे हैं।ब्राइट-फील्ड मोड में 0.63x उद्देश्य का उपयोग करके फोकस समायोजित करें। उज्ज्वल क्षेत्र एक्सपोजर लें और कई छवियों को कैप्चर करें। tdTomato अभिव्यक्ति की कल्पना करने के लिए, एक फाइबर ऑप्टिक माइक्रोस्कोप प्रकाशक बंद करें और लाल फ्लोरेसेंस के लिए फिल्टर सेट करें।यदि आवश्यक हो तो छवि का ध्यान केंद्रित करना, चमक और इसके विपरीत समायोजित करना, लाल-फ्लोरोसेंट एक्सपोजर लेना, और कई छवियों को कैप्चर करना। भ्रूण जेनोटीपिंग के लिए, बफर ए में पहले से अलग सिर के नमूनों को 30 मिनट के लिए १०० डिग्री सेल्सियस पर उबाल लें । 11 पर दो मिनट के लिए सेंट्रलाइज, ३६० बार जी ट्रांसफर 20 माइक्रोलीटर सुपरनेट्टर के 20 माइक्रोलीटर बफर बी और मिक्स के 20 माइक्रोलीटर के साथ एक नई १.५ मिलीलीटर ट्यूब में ।डीएनए टेम्पलेट के रूप में मिश्रित सुपरनेटेंट के 4.5 माइक्रोलीटर का उपयोग करें और इसे 10 माइक्रोमोलर-विशिष्ट फॉरवर्ड और रिवर्स प्राइमर में से प्रत्येक के 0.5 माइक्रोलीटर के साथ मिलाएं, 2x-प्रीमिक्स्ड पॉलीमरेज और रिएक्शन बफर के 10 माइक्रोलीटर और फिर 20 माइक्रोलीटर की कुल मात्रा में पानी जोड़ें। पांडुलिपि में वर्णित पीसीआर चलाएं। 1% एगर उठे जेल पर 100 बेस जोड़ी डीएनए सीढ़ी में पूरी प्रतिक्रिया लोड करें और 25 मिनट के लिए 1x TAE बफर में 140 वोल्ट पर चलाएं।एक यूवी ट्रांसिल्यूमिनेटर पर पूरा जेल रखें और डीएनए बैंड की पहचान करने के लिए यूवी लाइट चालू करें। एमएलसी-2वी को हृदय विकास के दौरान वेंट्रिकुलर चैंबर स्पेसिफिकेशन के लिए सबसे शुरुआती मार्कर माना जाता है। MLC-2v-tdTomato रिपोर्टर दस्तक में चूहों में, E8.0 पर रैखिक दिल ट्यूब में tdTomato की अपेक्षाकृत कमजोर अभिव्यक्ति E8.5 पर मजबूत हो जाता है के रूप में भ्रूण के पूरे माउंट epiflourescent इमेजिंग का उपयोग कर दिखाया गया है ।विच्छेदित हृदय के पूरे माउंट एपिफ्लोर्सेंट इमेजिंग का उपयोग करना, माउस हृदय विकास के दौरान वेंट्रिकुलर कक्ष गठन आसानी से निर्धारित किया जा सकता है। E10.5 पर एक पूरे माउस भ्रूण से विच्छेदित दिल में, एमएलसी-2v-tdTomato रिपोर्टर अभिव्यक्ति दिल के वेंट्रिकुलर हिस्से में दिखाया गया था और प्रवाह पथ, बहिर्वाह पथ, या भविष्य अटरिया में नहीं। E12.5 से E13.5 पर, tdTomato रिपोर्टर विशेष रूप से चार-कक्षों वाले दिल के वेंट्रिकल्स में व्यक्त किया जाता है।इसी तरह के वेंट्रिकुलर-विशिष्ट अभिव्यक्ति पैटर्न E16.5 पर विच्छेदित माउस भ्रूण में दिखाया गया था। पूरी इमेजिंग के बाद, भ्रूण के जीनोटाइप पीसीआर जीनोटाइपिंग के लिए प्राइमर के दो सेट का उपयोग करके निर्धारित किया गया था, जो टीडटोमाटो नॉक-इन एलील, विषम, और जंगली प्रकार के भ्रूण को ले जाने वाले होमोज़िगस भ्रूण की पुष्टि करता है। यह विधि प्रदर्शन करने के लिए बहुत सरल और सरल है।महत्वपूर्ण कदम भ्रूण दिलों को विच्छेदन कर रहा है । दिल के विकास के दौरान हृदय शरीर रचना विज्ञान को समझना पूरे भ्रूण से दिल को सफलतापूर्वक अलग करने के लिए आवश्यक है।

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Optimized Ex-ovo Culturing of Chick Embryos to Advanced Stages of Development

Optimized Ex-ovo Culturing of Chick Embryos to Advanced Stages of Development

अनुकूलित<em&gt; पूर्व ओवो</em&gt; विकास के उन्नत चरण के लिए लड़की भ्रूण का संवर्धन

Research in anatomy, embryology, and developmental biology has largely relied on the use of model organisms. In order to study development in live embryos ...

Analysis of Cardiomyocyte Development using Immunofluorescence in Embryonic Mouse Heart

भ्रूण माउस दिल में immunofluorescence का उपयोग cardiomyocyte विकास का विश्लेषण

During heart development, the generation of myocardial-specific structural and functional units including sarcomeres, contractile myofibrils, intercalated ...

Using Ex Vivo Upright Droplet Cultures of Whole Fetal Organs to Study Developmental Processes during Mouse Organogenesis

Using Ex Vivo Upright Droplet Cultures of Whole Fetal Organs to Study Developmental Processes during Mouse Organogenesis

का प्रयोग<em&gt; पूर्व Vivo</em&gt; पूरे भ्रूण अंगों की ईमानदार बूंद संस्कृतियों माउस जीवोत्पत्ति के दौरान विकास की प्रक्रिया का अध्ययन करने के लिए

Investigating organogenesis in utero is a technically challenging process in placental mammals due to inaccessibility of reagents to embryos that develop ...

Organ Culture and Whole Mount Immunofluorescence Staining of Mouse Wolffian Ducts

अंग संस्कृति और माउस Wolffian नलिकाओं का पूरा पर्वत इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला

Tubal morphogenesis is a fundamental requirement for the development of most mammalian organs, including the male reproductive system. The epididymis, an ...

Quantitative Whole-mount Immunofluorescence Analysis of Cardiac Progenitor Populations in Mouse Embryos

मात्रात्मक पूरे-माउंट इम्यूनोफ्लोरेसेंस माउस भ्रूण में कार्डियक जनक आबादी का विश्लेषण

The use of ever-advancing imaging techniques has contributed broadly to our increased understanding of embryonic development. Pre-implantation development ...

Whole Mount Immunofluorescence and Follicle Quantification of Cultured Mouse Ovaries

पूरे माउंट इम्यूनोफ्लोरेसेंस और प्रसंस्कृत माउस अंडाशय के कूप ठहराव

Research in the field of mammalian reproductive biology often involves evaluating the overall health of ovaries and testes. Specifically, in females, ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

Organotypic संस्कृति विधि भ्रूण चिकन ऊतकों के विकास का अध्ययन करने के लिए

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Gastrulating माउस में नोड और Notochordal प्लेट visualizing इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी और पूरे माउंट इम्यूनोफ्लोरेसेंस का उपयोग कर भ्रूण

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

Visualization of the Superior Ocular Sulcus during Danio rerio Embryogenesis

Visualization of the Superior Ocular Sulcus during Danio rerio Embryogenesis

Danio rerio भ्रूणयोजनजनन के दौरान बेहतर नेत्र परिखा का दृश्य

Congenital ocular coloboma is a genetic disorder that is typically observed as a cleft in the inferior aspect of the eye resulting from incomplete choroid ...

Laser Capture Microdissection of Mouse Embryonic Cartilage and Bone for Gene Expression Analysis

लेजर कैप्चर माइक्रोडिसेक्शन माउस भ्रूणीय उपास्थि और जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण के लिए हड्डी

Laser capture microdissection (LCM) is a powerful tool to isolate specific cell types or regions of interest from heterogeneous tissues. The cellular and ...