Name: enhanced rabies surveillance using a direct rapid immunohistochemical test
Uploaded: 2019-04-30T13:30:00
Duration: 8 min 58 s
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हम सभी USDA वन्यजीव सेवा स्टाफ जो वर्तमान में या पहले बढ़ाया रेबीज निगरानी नमूने एकत्र किया है और रेबीज निदान के लिए डीआईआईटी का आयोजन स्वीकार करते हैं. इसी तरह, हम कई cooperators जो हमें बढ़ाया रेबीज निगरानी संग्रह के साथ सहायता स्वीकार करते हैं. हम भी रोग नियंत्रण और रोकथाम और महत्वपूर्ण डीआईआईटी का संचालन करने के लिए और प्रशिक्षण के अवसर प्रदान करने के लिए आवश्यक अभिकर्मकों के उपयोग के लिए Wistar संस्थान के लिए केंद्र धन्यवाद. इसके अलावा, हम रोग नियंत्रण और रोकथाम के लिए केंद्र द्वारा और स्वास्थ्य के न्यूयॉर्क राज्य विभाग के साथ Wadsworth केंद्र द्वारा प्रदान की confirmatory निदान और तकनीकी सहायता की सराहना करते हैं. किसी भी वाणिज्यिक उत्पादों का उपयोग केवल तुलना प्रयोजनों के लिए है और बेचान का गठन नहीं करता है।

<ol>
	<li>Dean, D. J., Abelseth, M. K., Atanasiu, P., Meslin, F. X., Kaplan, M. M., Koprowski, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Laboratory techniques in rabies. 23, (1996).</li><li>Durr, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+diagnosis+for+developing+countries.">Rabies diagnosis for developing countries.</a> PLOS Neglected Tropical Diseases. 2 (3), e206 (2008).</li><li>Rupprecht, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Progress in the development of a direct rapid immunohistochemical test for diagnosing rabies. , (2014).</li><li>Rupprecht, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Additional+Progress+in+the+Development+and+Application+of+a+Direct,+Rapid+Immunohistochemical+Test+for+Rabies+Diagnosis.">Additional Progress in the Development and Application of a Direct, Rapid Immunohistochemical Test for Rabies Diagnosis.</a> Journal of Veterinary Science. 5 (2), (2018).</li><li>Coleman, P. G., Fevre, E. M., Cleaveland, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimating+the+public+health+impact+of+rabies.">Estimating the public health impact of rabies.</a> Emerging Infectious Diseases. 10 (1), 140-142 (2004).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Standard Operating Procedure for the Direct Rapid Immunohistochemistry Test (DRIT) for the detection of rabies virus antigens. , (2016).</li><li>Lembo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+direct,+rapid+immunohistochemical+test+for+rabies+diagnosis.">Evaluation of a direct, rapid immunohistochemical test for rabies diagnosis.</a> Emerging Infectious Diseases. 12 (2), 310-313 (2006).</li><li>Middel, K., Fehlner-Gardiner, C., Pulham, N., Buchanan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incorporating+Direct+Rapid+Immunohistochemical+Testing+into+Large-Scale+Wildlife+Rabies+Surveillance.">Incorporating Direct Rapid Immunohistochemical Testing into Large-Scale Wildlife Rabies Surveillance.</a> Tropical Medicine and Infectious Disease. 2 (3), 21 (2017).</li><li>Coetzer, A., Sabeta, C. T., Markotter, W., Rupprecht, C. E., Nel, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+biotinylated+monoclonal+and+polyclonal+antibodies+in+an+evaluation+of+a+direct+rapid+immunohistochemical+test+for+the+routine+diagnosis+of+rabies+in+southern+Africa.">Comparison of biotinylated monoclonal and polyclonal antibodies in an evaluation of a direct rapid immunohistochemical test for the routine diagnosis of rabies in southern Africa.</a> PLOS Neglected Tropical Diseases. 8 (9), e3189 (2014).</li><li>Kirby, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+Rabies+Surveillance+to+Support+Effective+Oral+Rabies+Vaccination+of+Raccoons+in+the+Eastern+United+States.">Enhanced Rabies Surveillance to Support Effective Oral Rabies Vaccination of Raccoons in the Eastern United States.</a> Tropical Medicine and Infectious Disease. 2 (3), 34 (2017).</li><li>Slate, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+rabies+vaccination+in+north+america:+opportunities,+complexities,+and+challenges.">Oral rabies vaccination in north america: opportunities, complexities, and challenges.</a> PLOS Neglected Tropical Diseases. 3 (12), e549 (2009).</li><li>. Direct Rapid Immunohistochemistry Test (DRIT) protocols Available from: <a target="_blank" href="https://rabiessurveillanceblueprint.org/Direct-Rapid-Immunohistochemistry?lang=fr">https://rabiessurveillanceblueprint.org/Direct-Rapid-Immunohistochemistry?lang=fr</a> (2019)</li><li>Khalid, A., Haque, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Touch Impression Cytology Versus Frozen Section as Intraoperative Consultation Diagnosis. 2, (2004).</li></ol>

लेखकों को खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.

डीआईआईटी एक लचीला तरीका है जो विकेन्द्रीकृत प्रयोगशाला क्षेत्रों में इस्तेमाल किया जा सकता है रेबीज वायरस की उपस्थिति का पता लगाने के लिए क्षेत्र आधारित निगरानी के लिए अनुकूल है। हालांकि यह एक ट्रक के tailgate पर के रूप में एक क्षेत्र आधारित सेटिंग में पूरे परीक्षण का संचालन करने के लिए संभव है, यह रासायनिक, उपकरण और आपूर्ति भंडारण के मुद्दों के कारण डीआरआईटी के लिए समर्पित एक छोटे, इनडोर अंतरिक्ष के लिए आदर्श है। इसके अतिरिक्त, सभी लागू संघीय, राज्य, और स्थानीय कानूनों के पालन, और रासायनिक उपयोग और निपटान के लिए नियमों पर विचार किया जाना चाहिए. वर्तमान में, USDA WS 17 राज्यों से नमूनों का परीक्षण करने के लिए 15 डीआईआईटी सुविधाएं हैं। USDA WS DRIT सुविधाओं विश्वविद्यालय और राज्य सार्वजनिक स्वास्थ्य प्रयोगशालाओं के साथ संयोजन के रूप में स्थापित कर रहे हैं, बड़ी सुविधाओं के भीतर नामित कमरे में और संलग्न ट्रेलरों कि retrofitted किया गया है और में मोबाइल परीक्षण इकाइयों के रूप में सेवा करने के लिए परिवर्तित में आपात प्रकोप प्रतिक्रिया की स्थिति जहां तत्काल टर्नअराउंड समय के साथ बढ़ी हुई रेबीज निगरानी परीक्षण महत्वपूर्ण है (चित्र 5)
जबकि परीक्षण चर गुणवत्ता के brainstem सामग्री का उपयोग सफल रहा है, कोई ऊतक अपघटन के साथ ताजा brainstem ऊतक इष्टतम है. अपघटन, शुष्कता, या द्रवीकरण होता है के रूप में, नमूना गुणवत्ता कम हो जाती है और परीक्षण और अधिक nonspecific धुंधला जो परिणाम भ्रमित कर सकते हैं का पता लगा सकते हैं. यह प्रेक्षण डीएफए और डीआईटी2के बीच समान है। Brainstem/CNS जितनी जल्दी हो सके एकत्र किया जाना चाहिए और फिर परीक्षण तक जमे हुए (-20 डिग्री सेल्सियस) संग्रहीत किया जाना चाहिए।
सामान्यतया, सबसे USDA WS सुविधाप्रक्रिया 12 से 24 स्लाइड एक DRIT सत्र के दौरान एक सकारात्मक नियंत्रण और एक नकारात्मक नियंत्रण DFA के माध्यम से पुष्टि की गई है सहित एक बार में। सकारात्मक और नकारात्मक नियंत्रण प्रत्येक DRIT रन के लिए एक संदर्भ बिंदु प्रदान करने के लिए सुनिश्चित करें कि परीक्षण सफल रहा था और पुष्टि करने के लिए अगर व्याख्यात्मक सवाल परीक्षण स्लाइड पर उठता है. यदि एक नमूना एक स्पष्ट सकारात्मक या नकारात्मक परिणाम के लिए निर्धारित नहीं है, यह एक अनिश्चित के रूप में लेबल और DRIT द्वारा दूसरी बार परीक्षण किया है. यदि यह नमूना दो DRIT परीक्षणों के बाद एक स्पष्ट सकारात्मक या नकारात्मक नहीं है, तो इसे डीएफए या संबंधित परीक्षण के लिए एक संदर्भ प्रयोगशाला में भेजा जाता है।
किसी भी नैदानिक परीक्षण के साथ के रूप में, 'समस्या शूटिंग' अप्रत्याशित निष्कर्षों के साथ उपयोगी है. उदाहरण के लिए, यदि कोई DRIT रन असफल होता है (यानी, धनात्मक नियंत्रण +3 या +4 धुंधला तीव्रता और प्रतिजन वितरण प्रदर्शित नहीं करता है), तो सुनिश्चित करें कि सभी रसायनों और अभिकर्मकों की समय सीमा समाप्त नहीं हुई है. हम प्रति सप्ताह एक बार की एक न्यूनतम पर हाइड्रोजन पेरोक्साइड की एक नई खोला बोतल का उपयोग कर पाया है मस्तिष्क के ऊतकों के ऑक्सीकरण के माध्यम से गैर विशिष्ट दाग को रोकने में मदद करने के लिए उपयोगी है. इसके अतिरिक्त, हम एक न्यूनतम पर हर साल कम से कम एक बार एसीटेट बफर की जगह की सिफारिश, लेबल समय सीमा समाप्ति दिनांक की परवाह किए बिना.
कम लागत सहित डीएफए पर डीआईआईटी के फायदे के एक नंबर रहे हैं, एक केंद्रीकृत प्रयोगशाला के बाहर परीक्षण प्रदर्शन करने की क्षमता, एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के बजाय केवल प्रकाश माइक्रोस्कोपी के लिए की जरूरत है, और अपेक्षाकृत सरल प्रशिक्षण प्रक्रिया के लिए लोग प्रशासन और पढ़ने के परीक्षण2,3,4. ये लाभ, संवेदनशीलता और डीआईआईटी की विशिष्टता के साथ मिलकर जो डीएफए2,7,8,9 के बराबर हैं, पहले से ही साबित कर चुके हैं कि परीक्षण व्यापक पैमाने पर एक महत्वपूर्ण उपकरण के रूप में कार्य करता है बढ़ाया रेबीज निगरानी कार्यक्रम8,10 उत्तरी अमेरिका में. इसके अतिरिक्त, डीआईआईटी में विकासशील देशों या सीमित संसाधनों वाले अन्य क्षेत्रों में अधिक त्वरित परीक्षण की अनुमति देने की क्षमता है, विशेष रूप से अनुशंसित परीक्षण के रूप में हाल ही में OIE/डब्ल्यूएचओ मार्गदर्शन के बाद।

जबकि डीएफए नियमित रेबीज निदान1के लिए सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किया परीक्षण है , खरीद और एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप बनाए रखने की लागत विकासशील देशों के लिए सीमित किया जा सकता है2,3,4 और व्यापक के लिए , बड़े पैमाने पर बढ़ाया रेबीज निगरानी कार्यक्रम3,4. इसके अलावा, डीएफए को निर्धारण के दौरान नमूनों को फ्रिज में रखने और एंटीबॉडी-एंटीजन प्रतिक्रियाओं के दौरान परिवेश तापमान से ऊपर के नमूनों को इनक्यूबेट करने की क्षमता की आवश्यकता होती है, जो उपयुक्त बुनियादी ढांचे के बिना देशों में एक महत्वपूर्ण बाधा हो सकती है। आधुनिक डीएफए परीक्षण से जुड़ी सीमाओं के कारण रेबीज के वैश्विकप्रभाव को लंबे समय से कम आंका जा रहा है।
इस संबंध में, विश्व स्तर पर, विशेष रूप से विकासशील देशों में रेबीज निगरानी में सुधार करने के लिए अतिरिक्त नैदानिक तकनीकों को सत्यापित करने की आवश्यकता है। यहाँ प्रस्तुत डीआरआईटी प्रोटोकॉल डीएफए के लिए एक प्रयोगशाला या क्षेत्र-आधारित परीक्षण विकल्प प्रदान करता है जो प्रकाश माइक्रोस्कोपी का उपयोग करता है और परीक्षण6के दौरान प्रशीतन या प्रयोगशाला ऊष्मायन की आवश्यकता नहीं होती है। DRIT और DFA में समान हैं कि दोनों तकनीकों संभावित पागल जानवरों से एकत्र मस्तिष्क के नमूने के स्पर्श छापों का उपयोग करें. हालांकि, डीआईआईटी का पहला कदम नमूनों के लिए एक ऐतिहासिक फिक्सेटिव के रूप में फॉर्मेलिन का उपयोग करता है, जो रेबीज वायरस को निष्क्रिय करता है। यह डीएफए प्रोटोकॉल3में नमूने को ठीक करने के लिए इस्तेमाल किया एसीटोन पर एक पर्याप्त जैव सुरक्षा सुधार प्रदान करता है, जो न केवल प्रयोगशाला में महत्वपूर्ण है, लेकिन शायद क्षेत्र आधारित या विकेन्द्रीकृत प्रयोगशाला वातावरण में भी अधिक है। आज तक डीआरआईटी डीएफए2,7,8,9 के बराबर संवेदनशीलता और विशिष्टता को दर्शाताहै.
2005 के बाद से, USDA WS कार्यक्रम एक व्यापक वन्यजीव रेबीज प्रबंधन कार्यक्रम10के भाग के रूप में डीआईआईटी का उपयोग कर उत्तरी अमेरिका में बड़े पैमाने पर बढ़ाया रेबीज निगरानी प्रयासों का आयोजन किया गया है। बढ़ी रेबीज निगरानी जोखिम आधारित सार्वजनिक स्वास्थ्य निगरानी के लिए एक पूरक के रूप में प्रयोग किया जाता है और परीक्षण मुख्य रूप से वन्य जीवन मेसो-कार्निवोर प्रजातियों, रैकून(प्रोसिऑन लोटर), धारीदार बदमाश (मेफिटिस मेफिटिस), ग्रे लोमड़ियों सहित ( Urocyon cinereorargenteus, लाल लोमड़ियों (Vulpes vulpes), और coyotes (कैनिस latrans) कि एक मानव या घरेलू पशु जोखिम में शामिल नहीं किया गया है. परीक्षण में इस्तेमाल किया पशु शव बढ़ाया रेबीज निगरानी प्रयासों के माध्यम से USDA WS को प्रस्तुत किया गया और रेबीज वेक्टर प्रजातियों है कि कर रहे हैं शामिल: बीमार या अजीब अभिनय; मृत पाया गया, सड़क मार डाला, या एक उपद्रव; और एक मानव या घरेलू पशु जोखिम के साथ जुड़े नहीं हैं. डीआईआईटी एक रेबीज नैदानिक परीक्षण प्रदान करता है जिसे प्रशिक्षित क्षेत्र जीवविज्ञानियों द्वारा रेबीज निगरानी में सुधार लाने औरसार्वजनिक स्वास्थ्य नैदानिक प्रयोगशालाओं के वित्तीय बोझ और कार्यभार को कम करने के लिए कम या कोई प्रयोगशाला अनुभव के साथ नियोजित किया जा सकता है . USDA WS क्षेत्र के कर्मचारियों के लिए बुनियादी DRIT प्रशिक्षण आम तौर पर लेता है 1.5 से 2 दिन, जो जैव सुरक्षा के मौलिक सिद्धांतों को कवर कक्षा अनुदेश के लगभग 4 एच भी शामिल है, नमूना संग्रह के लिए तरीकों और DRIT प्रक्रियाओं के रूप में के रूप में अच्छी तरह से gt; 8 ज के प्रयोगशाला समय परीक्षण का आयोजन. प्रशिक्षण के अवसर रोग नियंत्रण और रोकथाम (सीडीसी), LYSSA LLC, और Wistar संस्थान के लिए केंद्र के माध्यम से USDA WS और कार्यक्रम cooperators के लिए उपलब्ध किया गया है.
सामरिक प्रबंधन क्षेत्रों के भीतर, USDA WS DRIT का उपयोग कर 94,000 से अधिक वन्य जीवन नमूनों का परीक्षण किया है और अधिक से अधिक 1,850 पागल नमूने है कि संभावना संदिग्ध जानवरों के जोखिम आधारित सार्वजनिक स्वास्थ्य परीक्षण के आधार पर ही निर्भर नहीं चला गया होगा पता चला है. डीआईआईटी के परिणामों द्वारा उपलब्ध कराए गए उन्नत रेबीज निगरानी आंकड़े संयुक्त राज्य अमेरिका10भर में वन्य जीवन के लिए मौखिक रेबीज टीकाकरण कार्यक्रमों के समर्थन में परिदृश्य पर रेबीज का एक अधिक पूर्ण लौकिक और स्थानिक प्रतिनिधित्व प्रदान करने के लिए महत्वपूर्ण हैं, 11| इसी प्रकार, कनाडा में प्रांतीय वन्यजीव एजेंसियों ने डीआईआईटी को उनके जन स्वास्थ्यकार्यक्रमों की सफलता के साथ मिलकर बड़े पैमाने पर वन्यजीव रेबीज निगरानी प्रयासों में शामिल किया है। USDA WS और Canadian DRIT निगरानी दोनों कार्यक्रमों ने राष्ट्रीय संदर्भ प्रयोगशालाओं का उपयोग डीएफए द्वारा रेबीज की पुष्टि करने और वायरल टाइपिंग को उपयुक्त8के रूप में करने के लिए किया है . इसके अलावा, USDA WS क्षेत्र जीवविज्ञानी डीएफए पुष्टि के लिए नकारात्मक नमूनों का 10% भेजने के संदर्भ प्रयोगशालाओं और 2008 के बाद से, दो वार्षिक डीआईआईटी प्रवीणता परीक्षण स्वच्छता के विस्कॉन्सिन राज्य प्रयोगशाला द्वारा प्रदान की में भाग लिया है, मानक के भाग के रूप में गुणवत्ता आश्वासन उपायों.
इस विधि का लक्ष्य रेबीज नैदानिक परीक्षण के लिए एक वैकल्पिक दृष्टिकोण की पेशकश करना है जो विकेन्द्रीकृत प्रयोगशालाओं में किया जा सकता है, क्षेत्र में, या इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए नियमित पहुंच के बिना क्षेत्रों में।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>3-Amino-9-Ethylcarbazole (AEC tablets; 50 count)</td>
			<td>Sigma Aldrich (https://www.sigmaaldrich.com/)</td>
			<td>A6926</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetate Buffer, 0.1M, 5.2 pH, 32oz</td>
			<td>Poly Scientific R&#38;D Corp. (https://www.polyrnd.com/)</td>
			<td>s140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ag Tek MiniScalpel, PN110, Non-sterile #10, 40 per package</td>
			<td>Patterson Veterinary (https://www.pattersonvet.com/)</td>
			<td>PN110</td>
			<td>Supplemental equipment for sample touch impressions; Also available through Clipper Distributing (http://www.clipperdist.net/)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Luer-Lok Disposable Syringe without needle, 10cc</td>
			<td>Fisher Scientific (part of Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)</td>
			<td>14-823-2A</td>
			<td>BD Manufacturer Number 309604</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Binocular Light Microscope with Seidentopf Head or equivalent</td>
			<td>Multiple Vendors</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blue Rectangular UN-rated Disposal Container, 5G</td>
			<td>Berlin Packaging (https://www.berlinpackaging.com/)</td>
			<td>1147T01BLU</td>
			<td>Supplemental equipment for chemical waste storage/disposal (Gill hematoxylin and AEC solution)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Square and Rectangular Cover Glass, 24x60</td>
			<td>Fisher Scientific (part of Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)</td>
			<td>12-553-465</td>
			<td>Corning Manufacturer Number 2975246</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Universal Fit Pipet Tips: Racked, Nonsterile (1-200ul)</td>
			<td>Fisher Scientific (part of Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)</td>
			<td>07-200-300</td>
			<td>Corning Manufacturer Number 4863</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 15mL Conical Centrifuge Tubes, polypropylene</td>
			<td>Fisher Scientific (part of Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)</td>
			<td>14-959-70C</td>
			<td>Corning Manufacturer Number 352097</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 96-Well Assay Plates (Tissue culture plate lids)</td>
			<td>Fisher Scientific (part of Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)</td>
			<td>08-772-5</td>
			<td>Corning Manufacturer Number 353910</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisher Brand 25mm Syringe Filter, Nylon, 0.45um, Sterile</td>
			<td>Fisher Scientific (part of Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)</td>
			<td>09-719D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisher Chemical Gill Method Hematoxylin Stain (Gill-2), 4L</td>
			<td>Fisher Scientific (part of Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)</td>
			<td>CS401-1D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Sharps-A-Gator Point-of-Use Sharps Containers, 5qt</td>
			<td>Fisher Scientific (part of Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)</td>
			<td>14-827-122</td>
			<td>Supplemental equipment for proper BSL-2 Laboratory Set-Up</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoro-Gel with Tris Buffer (Gel/Mount Media), 20mL</td>
			<td>VWR, part of Avantor (https://vwr.com)</td>
			<td>102092-122</td>
			<td>Fluoro-Gel Substitute for BioMeda&#8482; Gel-Mount, Electron Microscopy Sciences</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin, Buffered, 10%, 4L</td>
			<td>Fisher Scientific (part of Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)</td>
			<td>SF100-4</td>
			<td>Available each or in case of 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman P200 Pipet, 50-200uL</td>
			<td>Daigger Scientific (https://www.daigger.com)</td>
			<td>EF9930E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hy-Clone Phosphate Buffered Saline, 1X Solution, 1L (PBS)</td>
			<td>Fisher Scientific (part of Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)</td>
			<td>SH30256LS</td>
			<td>Alternative dry powder product can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen Peroxide, 3%</td>
			<td>Multiple Vendors</td>
			<td></td>
			<td>Any commercially available source, such as pharmacy or store brands, etc.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lens Microscope Objective 20X and 40X</td>
			<td>Multiple Vendors</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lysol IC Quarternary Disinfecting Cleaner, 1G</td>
			<td>Daigger Scientific (https://www.daigger.com)</td>
			<td>EF8481</td>
			<td>Supplemental materials for proper BSL-2 Laboratory disinfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Miltex brand Disposable Scalpel Size 22 (alternative size to MiniScalpel)</td>
			<td>AMD Next (www.amdnext.com)</td>
			<td>999112314</td>
			<td>Supplemental equipment for sample touch impressions; Alternative size to Ag Tek MiniScalpel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N,N-Dimethylformamide, Amber Glass Packaging, 500mL</td>
			<td>Fisher Scientific (part of Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)</td>
			<td>D119-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peroxidase Labeled Streptavidin, 50mL</td>
			<td>SeraCare (https://www.seracare.com/)</td>
			<td>5550-0001</td>
			<td>KPL Immunoassay and Kits Reference Number 71-00-38</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline Powder (alternative to Fisher liquid PBS)</td>
			<td>Sigma Aldrich (https://www.sigmaaldrich.com/)</td>
			<td>P3813</td>
			<td>Must be prepared in 1L distilled water; Available in quantities of 1, 10 and 50 packs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary antibody: Polyclonal anti-nucleoprotein or cocktail of anti-lyssavirus biotinylated antibodies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Store at 4 degrees C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PYREX Disposable Serological Pipets, Glass, Sterile, Plugged, Corning, 1.0mL</td>
			<td>VWR, part of Avantor (https://vwr.com)</td>
			<td>7078D-1</td>
			<td>VWR Manufacturer Number 89091-220</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PYREX Disposable Serological Pipets, Glass, Sterile, Plugged, Corning, 10.0mL</td>
			<td>VWR, part of Avantor (https://vwr.com)</td>
			<td>7078D-10</td>
			<td>VWR Manufacturer Number 89091-106</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PYREX Disposable Serological Pipets, Glass, Sterile, Plugged, Corning, 5.0mL</td>
			<td>VWR, part of Avantor (https://vwr.com)</td>
			<td>7078D-5</td>
			<td>VWR Manufacturer Number 89091-484</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Richard-Allan Scientific Gills Hematoxylin Stain No. 2, 1PT (alternative to above)</td>
			<td>Fisher Scientific (part of Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)</td>
			<td>22-050-201</td>
			<td>Thermo Scientific Manufacturer Number 72504</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide Holders, 24-place</td>
			<td>VWR, part of Avantor (https://vwr.com)</td>
			<td>25608-868</td>
			<td>Sakura&#174;Finetek Supplier Number 4465; Available through multiple vendors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Specimen Tin Boxes, 1/2oz</td>
			<td>VWR, part of Avantor (https://vwr.com)</td>
			<td>101412-452</td>
			<td>Supplemental equipment for storage of brain tissue samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taylor 2-Event Digital Timer/Clock</td>
			<td>Multiple Vendors</td>
			<td></td>
			<td>Supplemental equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Slide Staining Kit</td>
			<td>VWR, part of Avantor (https://vwr.com)</td>
			<td>25608-902</td>
			<td>Sakura&#174;Finetek Supplier Number 4551; Available through multiple vendors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TWEEN 80, Polyethylene glycol, 500mL</td>
			<td>Sigma Aldrich (https://www.sigmaaldrich.com/)</td>
			<td>P1754</td>
			<td>Also available in 25mL, 1L and 1G volumes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR FLIP Pipette Filler (0.05-100mL)</td>
			<td>VWR, part of Avantor (https://vwr.com)</td>
			<td>53497-055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Soft Nitrile Examination Gloves, L (100 per box)</td>
			<td>VWR, part of Avantor (https://vwr.com)</td>
			<td>89038-272</td>
			<td>Supplemental equipment for proper PPE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water, Deionized (20L)</td>
			<td>VWR, part of Avantor (https://vwr.com)</td>
			<td>10806-022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wheaton Clear Glass Sample Vials, 8mL</td>
			<td>Fisher Scientific (part of Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)</td>
			<td>06-408C</td>
			<td>DWK Life Sciences Manufacturer Number 224884</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>White Coated, Double Well Pattern Microscope Slides, 14mm</td>
			<td>Tekdon Incorporated (https://www.tekdon.com/coated-microscope-slides.html)</td>
			<td>2-140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>White Rectangular UN-rate Disposal Container, 5G</td>
			<td>Berlin Packaging (https://www.berlinpackaging.com/)</td>
			<td>1147T01WHT</td>
			<td>Supplemental equipment for chemical waste storage/disposal (Formalin)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

enhanced rabies surveillance using a direct rapid immunohistochemical test

प्रयोगशाला आधारित निगरानी रेबीज की रोकथाम, नियंत्रण और प्रबंधन के प्रयासों का अभिन्न अंग है। जबकि डीएफए रेबीज निदान के लिए सोने का मानक है, विशेष रूप से विकासशील देशों में रेबीज निगरानी में सुधार करने के लिए अतिरिक्त नैदानिक तकनीकों को मान्य करने की आवश्यकता है। यहाँ, हम एक विकल्प के रूप में DRIT के लिए एक मानक प्रोटोकॉल प्रस्तुत, प्रयोगशाला या क्षेत्र आधारित परीक्षण विकल्प है कि डीएफए की तुलना में प्रकाश माइक्रोस्कोपी का उपयोग करता है. संदिग्ध जानवरों से एकत्र मस्तिष्क ऊतक के टच छापों 10% बफर formalin में तय कर रहे हैं. DRIT संक्रमित ऊतक के भीतर वायरल inclusions का पता लगाने के लिए रेबीज वायरस-विशिष्ट मोनोक्लोनल या पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी (बायोटिन के लिए संयोजित), एक स्ट्रेप्विडिन-peroxidase एंजाइम, और एक क्रोमोजेन रिपोर्टर (जैसे एसिटाइल 3-एमिनो-9-एथिलकारबाज़ोल) का उपयोग करता है। लगभग 1 ज में, एक मस्तिष्क ऊतक नमूना परीक्षण किया जा सकता है और DRIT द्वारा व्याख्या की. संदिग्ध पशु दिमाग उत्तरी अमेरिका, एशिया, अफ्रीका, और यूरोप में प्रजातियों की एक किस्म से परीक्षण का मूल्यांकन उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता डीआईआईटी द्वारा सचित्र है 100% DFA की तुलना में परिणामों के साथ आ रहा है. 2005 के बाद से, संयुक्त राज्य अमेरिका के कृषि वन्यजीव सेवा विभाग (USDA WS) कार्यक्रम रणनीतिक रेबीज प्रबंधन क्षेत्रों में वन्य जीवन से एकत्र परीक्षण करने के लिए डीआईआईटी का उपयोग कर बड़े पैमाने पर बढ़ाया रेबीज निगरानी प्रयासों का आयोजन किया गया है . DRIT रेबीज निदान के लिए एक शक्तिशाली, किफायती उपकरण है कि laboratorians और क्षेत्र जीवविज्ञानियों द्वारा इस्तेमाल किया जा सकता वर्तमान रेबीज निगरानी, रोकथाम और नियंत्रण कार्यक्रमों में सुधार के लिए विश्व स्तर पर प्रदान करता है.

डीआईआईटी के सकारात्मक परिणाम नीले कोशिका निकायों के कोशिकाद्रव्य के भीतर आकार और आकार (चित्र 3) में भिन्न हो सकते हैं कि लाल intracytoplasmic वायरल inclusions दिखा. शामिल किए जाने बहुत उज्ज्वल मार्जिन और एक कम गहन दाग केंद्रीय क्षेत्र के साथ चिकनी दिखाई देते हैं. तीव्रता और प्रतिजन वितरण दर्ज कर रहे हैं जब inclusions का पता चला रहे हैं. तीव्रता को +4 से +1 तक वर्गीकृत किया गया है. सकारात्मक नियंत्रण स्लाइड में एक तीव्र, स्पष्ट मैजंटा प्रतिभा होनी चाहिए जिसे +4 तीव्रता के रूप में जाना जाता है। रंग का एक मामूली नुकसान हो सकता है, खासकर जब नमूना हैंडलिंग इष्टतम नहीं किया गया है (यानी, नमूना ऊतक थोड़ा विघटित है) और इन के रूप में वर्गीकृत किया जाना चाहिए +3. उल्लेखनीय रूप से सुस्त दाग को +2 से +1 के रूप में वर्गीकृत किया जाता है, रेबीज वायरस संक्रमण के लिए नैदानिक नहीं माना जाता है और इसे अनिश्चित के रूप में लेबल किया जाता है।
इसके अतिरिक्त, प्रतिजन वितरण से वर्गीकृत किया जाता है +4 करने के लिए +1 के साथ +4 का प्रतिनिधित्व प्रतिजन वितरण आकार और आकार में अलग बड़े और छोटे inclusions की एक बहुतायत के शामिल है, और हर क्षेत्र में मौजूद (या लगभग हर क्षेत्र) सीएनएस ऊतक के भीतर देखने के स्पर्श प्रभाव. सकारात्मक नियंत्रण आम तौर पर एक +4 प्रतिजन वितरण है. +3 का एक प्रतिजन वितरण सौंपा जाएगा जब वहाँ सबसे अधिक लेकिन देखने के क्षेत्रों के सभी नहीं में आकार की एक किस्म में शामिल कर रहे हैं. यदि समावेशन माइक्रोस्कोप फ़ील्ड के 10%-50% में पाए जाते हैं, तो एक +2 प्रतिजन वितरण असाइन किया जाता है। जब माइक्रोस्कोप फ़ील्ड के 10% में समावेशन पाए जाते हैं, तो एक +1 प्रतिजन वितरण असाइन किया जाता है.
रेबीज वायरस के साथ अधिकांश सीएनएस ऊतक वर्तमान विशिष्ट वायरल inclusions के रूप में वर्गीकृत प्रदर्शन +3 या +4 तीव्रता और प्रतिजन वितरण. यदि परिणाम एक +2 या +1 तीव्रता या +2 या +1 प्रतिजन वितरण इंगित करते हैं, तो नमूना को "अनिश्चित" घोषित किया जाता है और दोहराने का परीक्षण वारंट किया जाता है. एक ही नमूना एक दोहराने अनिश्चित परीक्षण परिणाम है, तो नमूना DFA या संबंधित confirmatory परीक्षण के लिए एक संदर्भ प्रयोगशाला के लिए भेजा जाना चाहिए।
सीएनएस ऊतक युक्त स्लाइड 200X या अधिक की आवर्धन पर स्कैन किया गया है और कोई विशिष्ट वायरस inclusions का पता चला रहे हैं के बाद डीआईआईटी वायरस प्रतिजनों का उपयोग कर एक परीक्षण नमूना रेबीज वायरस प्रतिजनों के लिए नकारात्मक माना जाता है (चित्र 4) . नकारात्मक नमूने कम या कोई nonspecific धुंधला के साथ नीले सेल निकायों प्रदर्शन.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59416/59416fig1.jpg"> चित्रा 1: परीक्षण के लिए अभिकर्मकों के साथ 10 स्लाइड धुंधला व्यंजन का सेटअप। व्यंजन प्रोटोकॉल का पालन करने के लिए आवश्यक क्रम में अभिकर्मक नाम के साथ लेबल कर रहे हैं। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59416/59416fig1large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59416/59416fig2.jpg"> चित्र 2: सरल आर्द्रता कक्ष एक गीला कागज तौलिया और सेल संस्कृति प्लेटों के साथ बनाया.  एक गीला कागज तौलिया और सेल संस्कृति प्लेटों का उपयोग कर एक सरल आर्द्रता कक्ष क्षेत्र आधारित आवेदन के लिए अनुमति देता है.  <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59416/59416fig2large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59416/59416fig3.jpg"> चित्र 3: रेबीज सकारात्मक वायरल inclusions के प्रतिनिधि स्लाइड +4 तीव्रता और +4 प्रतिजन वितरण के साथ. (ए और बी) 200x आवर्धन में सकारात्मक रेबीज वायरल inclusions दिखा. (सी और डी) 400x आवर्धन पर सकारात्मक रेबीज वायरल inclusions दिखा. स्केल बार्स ] 5 m. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59416/59416fig3large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59416/59416fig4.jpg"> चित्र 4: कोई रेबीज वायरल शामिल किए जाने के साथ नकारात्मक नमूनों के प्रतिनिधि स्लाइड| (ए और बी) 200x आवर्धन में रेबीज वायरल inclusions के लिए नकारात्मक नमूने दिखाते हैं. (सी और डी) 400x आवर्धन पर रेबीज वायरल inclusions के लिए नकारात्मक नमूने दिखाते हैं. स्केल बार्स ] 5 m. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59416/59416fig4large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59416/59416fig5.jpg"> चित्र 5: यूएसडीए डब्ल्यूएस द्वारा उपयोग की जाने वाली डीआईआईटी परीक्षण सुविधाओं के प्रतिनिधि फोटो। (क) परिवहन के लिए एक संलग्न ट्रेलर में मोबाइल परीक्षण सुविधा। (बी) डीआरआईटी परीक्षण के लिए पुनर्निर्माण वाहन। (सी) विश्वविद्यालय प्रयोगशाला के साथ संयोजन के रूप में डीआईआईटी परीक्षण सुविधा. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59416/59416fig5large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>

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Enhanced Rabies Surveillance Using a Direct Rapid Immunohistochemical Test

एक प्रत्यक्ष रैपिड इम्यूनोहिस्टोकेमिकल टेस्ट का उपयोग कर बढ़ी रेबीज निगरानी

प्रत्यक्ष रैपिड इम्यूनोहिस्टोकेमिकल टेस्ट (डीआईआईटी) रेबीज निदान के लिए प्रत्यक्ष फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी (डीएफए) परीक्षण के लिए मान्यता प्राप्त पशु स्वास्थ्य और विश्व स्वास्थ्य संगठन (ओआईई/डब्ल्यूएचओ) के लिए एक विश्व संगठन प्रदान करता है। यह परीक्षण क्षेत्र आधारित अनुप्रयोगों है कि लगभग में किया जा सकता के लिए अनुमति देता है 1 एच मस्तिष्क छापों पर प्रकाश माइक्रोस्कोपी का उपयोग कर.

Laboratory-based surveillance is integral for rabies prevention, control and management efforts. While the DFA is the gold standard for rabies diagnosis, ...

डीआरआईटी महत्वपूर्ण है क्योंकि यह एक रेबीज नैदानिक परीक्षण प्रदान करता है जिसे क्षेत्र में विकेंद्रीकृत प्रयोगशालाओं में या इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी तक नियमित पहुंच के बिना क्षेत्रों में किया जा सकता है। डीआरआईटी का मुख्य लाभ यह है कि यह केवल सरल प्रकाश माइक्रोस्कोपी का उपयोग करता है और परिणाम लगभग एक घंटे में प्राप्त किए जा सकते हैं। डीआरआईटी रेबीज निदान के लिए एक शक्तिशाली किफायती उपकरण प्रदान करता है जिसका उपयोग प्रयोगशालाओं और क्षेत्र जीव विज्ञानियों द्वारा विश्व स्तर पर रेबीज निगरानी, रोकथाम और नियंत्रण कार्यक्रमों में सुधार करने के लिए किया जा सकता है।उन जानवरों के लिए जो ताजा एकत्र किए जाते हैं या परिवेश के तापमान पर गल गए हैं, पशु को एक सपाट सतह पर गर्भाशय ग्रीवा की रीढ़ के साथ रीढ़ की स्थिति में थोड़ा परीक्षक की ओर घुमाया जाता है। पालपेटे सर्वाइकल स्पाइन के पार्श्व पहलू पर अटलांटो-ऑक्सीपिटल संयुक्त की पहचान करने के लिए। एक स्केलपेल ब्लेड का उपयोग करके, श्वासनली और घेघा सहित मांसपेशियों और नरम ऊतक की सभी परतों के माध्यम से काटने वाले वेंट्रल पहलू पर अटलांटो-ऑक्सीपिटल संयुक्त के स्तर पर एक चीरा बनाएं।गर्भाशय ग्रीवा रीढ़ कशेरुकी के पूर्वकाल पहलू लगभग जब तक जारी रखें। फिर जानवर के सिर को अंत सीमा विस्तार में ले जाएं जब तक कि मस्तिष्क स्टेम दिखाई न दे। नमूने के लिए सभी दृश्यमान ब्रेनस्टेम और केंद्रीय तंत्रिका तंत्र ऊतक को हटाने के लिए स्केलपेल ब्लेड का उपयोग करें।ब्रेनस्टेम नमूनों को एक अटूट कंटेनर में रखें और तदनुसार लेबल करें। सबसे पहले, धुंधला व्यंजन है कि काफी गहरी एक नमूना स्लाइड के पूर्ण विसर्जन के लिए अनुमति देने के लिए कर रहे है सेट । 10% फॉस्फेट बफर फॉर्मेलिन के साथ डिश एक भरें।टीपीबीएस के साथ दो, चार और पांच व्यंजन भरें। 3% हाइड्रोजन पेरोक्साइड के साथ डिश तीन भरें। इसके बाद डिफरेंट या डिफरेंट वॉटर के साथ छह, आठ, नौ और 10 के व्यंजन भरें।गिल के हेमटॉक्सिलिन फॉर्मूलेशन नंबर दो के साथ डिश सात भरें आसुत पानी के साथ 1:1 अनुपात में पतला । एक ग्लास पिपेट का उपयोग करके अमीनो-एथिल-कार्बाजोल स्टॉक समाधान तैयार करने के लिए, एक ग्लास कंटेनर में एन-डाइमेथाइलफार्मेमाइड के पांच मिलीलीटर रखें। कांच के कंटेनर में 3-अमीनो-9-एथिलकारबाजोल की 120 मिलीग्राम टैबलेट जोड़ें और पूरी तरह से भंग होने तक हिलाएं।एईसी वर्किंग कमजोर पड़ने को तैयार करने के लिए, एक 15 मिलीलीटर सेंट्रलाइज ट्यूब में सात मिलीलीटर एसीटेट बफर जोड़ें। अपकेंद्रित्र ट्यूब के लिए एईसी स्टॉक समाधान के 0.5 मिलीलीटर जोड़ने के लिए एक ग्लास पिपेट का उपयोग करें। 3% हाइड्रोजन पेरोक्साइड समाधान के 0.75 मिलीलीटर जोड़ें।समाधान को फ़िल्टर करने के लिए 0.45 माइक्रोमीटर सिरिंज फिल्टर के साथ 10 मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग करें। शुरू करने के लिए, प्रत्येक नमूने के लिए एक अद्वितीय संख्या के साथ ग्लास माइक्रोस्कोप स्लाइड लेबल करने के लिए एक धब्बा प्रूफ वाटरप्रूफ स्थायी स्याही मार्कर का उपयोग करें। कंटेनर से ब्रेनस्टेम को हटाने के लिए स्केलपेल ब्लेड का उपयोग करें और इसे एक पेपर तौलिया पर रखें।एक दूसरे कागज तौलिया का उपयोग करने के लिए धीरे से दूर किसी भी अतिरिक्त तरल पदार्थ, रक्त या फर सिर्फ ब्रेनस्टेम ऊतक प्रकट दाग । यदि आवश्यक हो, तो क्रॉस-सेक्शन प्रकट करने के लिए ब्रेनस्टेम ऊतक को अनुभाग करें। बहुत धीरे से पार्श्व आंदोलन के बिना ब्रेनस्टेम के कई बिंदुओं को माइक्रोस्कोप स्लाइड को छूने के लिए ब्रेनस्टेम के कई क्षेत्रों को स्लाइड में स्थानांतरित करने की अनुमति देने के लिए सुनिश्चित करें कि कोशिकाओं की केवल एक या दो परतों को मस्तिष्क के ऊतकों से स्लाइड में स्थानांतरित कर दिया जाता है।स्लाइड्स में है कमरे के तापमान पर लगभग पांच मिनट के लिए हवा सूखी। फिर 10 मिनट के लिए डिश एक में 10% बफर फॉर्मेलिन में स्लाइड विसर्जित करें। फॉर्मेलिन से स्लाइड्स निकालें और डिश दो में टीपीबीएस सॉल्यूशन में उन्हें कुल्ला करें।10 मिनट के लिए डिश तीन में निहित हाइड्रोजन पेरोक्साइड समाधान में कुल्ला स्लाइड विसर्जित करें। इसके बाद, हाइड्रोजन पेरोक्साइड से स्लाइड निकालें और डिश फोर में निहित ताजा टीपीबीएस में उन्हें कुल्ला करें। किसी भी अतिरिक्त हाइड्रोजन पेरोक्साइड को हटाने के बाद, स्लाइड को डिश फाइव में निहित ताजा टीपीबीएस में रखें।स्लाइड्स में है डिश फाइव से एक बार में हिलाएं और किसी भी अतिरिक्त बफर को दाग दें और स्लाइड को लैब बेंच पर एक गीले कागज के तौलिये पर रखें । जब सभी स्लाइड स्थानांतरित कर दिया गया है, एक ड्रॉपर या पिपेट का उपयोग करने के लिए प्रत्येक स्लाइड पर पर्याप्त प्राथमिक एंटी रेबीज वायरस एंटीबॉडी ड्रॉप करने के लिए सीएनएस ऊतक को कवर । एक आर्द्रता कक्ष बनाने के लिए अच्छी तरह से प्लेटों या एक और सरल कवर के साथ स्लाइड कवर और 10 मिनट के लिए कक्ष में कमरे के तापमान पर स्लाइड इनक्यूबेट ।इसके बाद, आर्द्रता कक्ष से स्लाइड हटाएं, हिलाएं और किसी भी अतिरिक्त संजूगेट से दाग दें और डिश फाइव में टीपीबीएस में स्लाइड्स को कुल्ला दें। एक समय में एक स्लाइड के साथ काम करना, टीपीबीएस से एक स्लाइड को हटा दें और सीएनएस ऊतक को कवर करने के लिए पर्याप्त स्ट्रेप्टाविडिन पेरोक्सिडेस कॉम्प्लेक्स को छोड़ने के लिए ड्रॉपर या पिपेट का उपयोग करें। एक बार स्लाइड के सभी कवर किया गया है, उन्हें कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए आर्द्रता कक्ष में इनक्यूबेट।फिर आर्द्रता कक्ष से स्लाइड हटाएं, किसी भी अतिरिक्त परिसर को हिलाएं और दाग दें और डिश फाइव में निहित टीपीबीएस में स्लाइड्स को कुल्ला करें। एक समय में एक स्लाइड के साथ काम करना, टीपीबीएस से एक स्लाइड निकालें और सीएनएस ऊतक को कवर करने के लिए पर्याप्त एईसी वर्किंग सॉल्यूशन ड्रॉप करने के लिए एक पिपेट का उपयोग करें। कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए आर्द्रता कक्ष में स्लाइड इनक्यूबेट ।इसके बाद डिश सिक्स में मौजूद आसुत पानी में स्लाइड्स को खंगाल कर उन्हें दो मिनट के लिए डिश सात में गिल के हेमटॉक्सीलिन के काउंटरटाइन में रखें । तुरंत डिश आठ में आसुत पानी में स्लाइड के सभी कुल्ला डुबकी । प्रत्येक धोने के लिए नौ और 10 व्यंजनों में मीठे पानी का उपयोग करके इसे दो बार दोहराएं।एक समय में एक स्लाइड काम करते हुए, पानी से एक स्लाइड निकालें और किसी भी अतिरिक्त पानी को हिलाएं और दाग दें। स्लाइड करने के लिए एक कवरलिप प्रत्यय करने के लिए एक पानी घुलनशील बढ़ते माध्यम का प्रयोग करें। इसके बाद स्लाइड्स देखने के लिए 20X ऑब्जेक्टिव के साथ लाइट माइक्रोस्कोप का इस्तेमाल करें ।डीआरआईटी के सकारात्मक परिणाम लाल इंट्रासाइटोप्लाज्मिक वायरल समावेशन दिखाते हैं जो नीले कोशिका निकायों के साइटोप्लाज्म के भीतर आकार और आकार में भिन्न हो सकते हैं। समावेशन बहुत उज्ज्वल मार्जिन और एक कम गहन रूप से दाग केंद्रीय क्षेत्र के साथ चिकनी दिखाई देते हैं । एंटीजन वितरण को प्लस फोर से प्लस फोर से प्लस फोर का प्रतिनिधित्व करने वाले एंटीजन वितरण को वर्गीकृत किया गया है जिसमें आकार और आकार में भिन्न बड़े और छोटे समावेशन की बहुतायत शामिल है और सीएनएस ऊतक स्पर्श छाप के भीतर देखने के हर क्षेत्र में मौजूद है।प्लस थ्री का वितरण तब सौंपा जाता है जब अधिकांश में विभिन्न आकारों में समावेशन होते हैं लेकिन सभी दृश्य के क्षेत्र नहीं होते हैं। यदि माइक्रोस्कोप क्षेत्रों के 10 से 50% में समावेशन पाए जाते हैं, तो एक प्लस दो एंटीजन वितरण सौंपा जाता है जबकि प्लस एक को सौंपा जाता है जब समावेशन 10% से कम क्षेत्रों में पाए जाते हैं। रेबीज वायरस के साथ अधिकांश सीएनएस ऊतक वर्तमान में विशिष्ट वायरल समावेशन को प्लस थ्री या प्लस फोर तीव्रता और एंटीजन वितरण के रूप में वर्गीकृत किया गया है।यदि परिणाम या तो तीव्रता या एंटीजन वितरण में एक प्लस एक या प्लस टू इंगित करते हैं, तो नमूने को अनिश्चित घोषित किया जाता है और दोहराने वाले परीक्षण की आवश्यकता होती है। डीआरआईटी का उपयोग करने वाले एक परीक्षण नमूने को रेबीज वायरस एंटीजन के लिए नकारात्मक माना जाता है, जिसके बाद सीएनएस ऊतक युक्त स्लाइड को 200X या उससे अधिक के आवर्धन पर स्कैन किया जाता है और कोई विशिष्ट वायरस समावेशन का पता नहीं लगाया जाता है। नकारात्मक नमूने कम या कोई ज्ञात विशिष्ट धुंधला के साथ नीले सेल निकायों का प्रदर्शन करते हैं।रेबीज नैदानिक परीक्षण करने वाले प्रत्येक व्यक्ति को मानक पूर्व-एक्सपोजर रेबीज टीकाकरण प्राप्त करना चाहिए और नियमित सीरोलॉजिकल एंटीबॉडी मूल्यांकन से गुजरना चाहिए। असंरक्षित व्यक्तियों को उन क्षेत्रों में प्रवेश नहीं करना चाहिए जहां इस तरह का कार्य किया जा रहा है । लाइव रेबीज वायरस के साथ काम करते समय बरती जाने वाली सावधानियों के अलावा टेस्ट में इस्तेमाल होने वाले कई रिएजेंट्स खतरनाक होते हैं।प्रत्येक अभिवाक के लिए सुरक्षा डेटा शीट का उल्लेख करें।

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

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चिपकने वाला टेप आधारित नमूनाकरण और प्रतिदीप्ति का संयोजन बगल में</emरैपिड पता लगाने के लिए> संकरण साल्मोनेला ताजा उपज पर

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Rapid Identification of Gram Negative Bacteria from Blood Culture Broth Using MALDI-TOF Mass Spectrometry

MALDI-TOF मास स्पेक्ट्रोमेट्री का उपयोग रक्त संस्कृति शोरबा से ग्राम नकारात्मक जीवाणुओं की तेजी से पहचान

An important role of the clinical microbiology laboratory is to provide rapid identification of bacteria causing bloodstream infection. Traditional ...

A Rapid Strategy for the Isolation of New Faustoviruses from Environmental Samples Using Vermamoeba vermiformis

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पर्यावरण के नमूनों से नई Faustoviruses के अलगाव का उपयोग के लिए एक तेजी रणनीति<em&gt; Vermamoeba vermiformis</em

The isolation of giant viruses is of great interest in this new era of virology, especially since these giant viruses are related to protists. Giant ...

Using Enhanced Green Fluorescence Protein-expressing Escherichia Coli to Assess Mouse Peritoneal Macrophage Phagocytosis

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माउस का आकलन करने के लिए बढ़ाया ग्रीन प्रतिदीप्ति प्रोटीन-व्यक्त ई कोलाई का उपयोग पेरिटोनियल मैक्रोफेज Phagocytosis

This manuscript describes a simple and reproducible method to perform a phagocytosis assay. The first part of this method involves building a ...

In Vitro ELISA Test to Evaluate Rabies Vaccine Potency

रेबीज वैक्सीन शक्ति का मूल्यांकन करने के लिए विट्रो एलिसा टेस्ट में

The growing global concern for the animal welfare is encouraging manufacturers and the National Control Laboratories (OMCLs) to follow the 3Rs strategy ...

Pan-lyssavirus Real Time RT-PCR for Rabies Diagnosis

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Field Postmortem Rabies Rapid Immunochromatographic Diagnostic Test for Resource-Limited Settings with Further Molecular Applications

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Functional rabies surveillance systems are crucial to provide reliable data and increase the political commitment necessary for disease control. To date, ...

Immunohistochemistry Test for the Lyssavirus Antigen Detection from Formalin-Fixed Tissues

फॉर्मेलिन-फिक्स्ड ऊतकों से Lyssavirus एंटीजन डिटेक्शन के लिए इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री टेस्ट

One of the primary diagnostic modalities for rabies is the detection of viral ribonucleoprotein (RNP) complex (antigen) in the infected tissue samples. ...