Name: standard operating procedure for lyssavirus surveillance of the bat population in taiwan
Uploaded: 2019-08-27T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Standard Operating Procedure for Lyssavirus Surveillance of the Bat Population in Taiwan at JoVE.com

Vi takker Tien-Cheng Li, Yi-Tang Lin, Chia-Jung Tsai og ya-LAN Li for deres hjælp i løbet af denne undersøgelse. Denne undersøgelse blev støttet af Grant No. 107AS-8.7.1-BQ-B2 (1) fra bureauet for dyre-og Plantesundhedsinspektion og karantæne, Rådet for landbrug, Executive yuan, Taiwan.

1. sikkerhedsforanstaltninger ved håndtering af Lyssavira
<ol><li>Sikre, at alle laboratoriearbejdere, der håndterer bat-prøver, modtager rabies profylakse på forhånd17. Overvåge de rabies antistofniveauer af arbejderne på forhånd og re-undersøge dem hver 6 måned17. Der kræves opfølgende rabiesvaccination for dem, hvis antistofniveau er lavere end 0,5 IE/mL17.</li>
	<li>Afhængigt af reglerne for Biosikkerhed i det land, hvor laboratori...

<ol>
	<li>Kuzmin, I. V., Rupprecht, C. E., Nagarajan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+facts+about+lyssavirus.">Basic facts about lyssavirus.</a> Current laboratory techniques in rabies diagnosis, research, and prevention, volume 1. , 3-21 (2014).</li><li>Ar&#233;chiga Ceballos, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+lyssavirus+in+bat,+Spain.">Novel lyssavirus in bat, Spain.</a> Emerging Infectious Diseases. 19 (5), 793-795 (2013).</li><li>Gunawardena, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+in+Indian+Flying+Foxes,+Sri+Lanka.">Lyssavirus in Indian Flying Foxes, Sri Lanka.</a> Emerging Infectious Diseases. 22 (8), 1456-1459 (2016).</li><li>Hu, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+in+Japanese+Pipistrelle,+Taiwan.">Lyssavirus in Japanese Pipistrelle, Taiwan.</a> Emerging Infectious Diseases. 24 (4), 782-785 (2018).</li><li>Nokireki, T., Tammiranta, N., Kokkonen, U. -. M., Kantala, T., Gadd, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tentative+novel+lyssavirus+in+a+bat+in+Finland.">Tentative novel lyssavirus in a bat in Finland.</a> Transboundary Emerging Diseases. 65 (3), 593-596 (2018).</li><li>Banyard, A. C., Evans, J. S., Luo, T. R., Fooks, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssaviruses+and+bats:+emergence+and+zoonotic+threat.">Lyssaviruses and bats: emergence and zoonotic threat.</a> Viruses. 6 (8), 2974-2990 (2014).</li><li>Pal, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+virus+infection+of+a+flying+fox+bat,+Pteropus+policephalus+in+Chandigarh,+Northern+India.">Rabies virus infection of a flying fox bat, Pteropus policephalus in Chandigarh, Northern India.</a> Tropical and Geographical Medicine. 32 (3), 265-267 (1980).</li><li>Smith, P. C., Lawhaswasdi, K., Vick, W. E., Stanton, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+rabies+virus+from+fruit+bats+in+Thailand.">Isolation of rabies virus from fruit bats in Thailand.</a> Nature. 216 (5113), 384 (1967).</li><li>Tang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pivotal+role+of+dogs+in+rabies+transmission,+China.">Pivotal role of dogs in rabies transmission, China.</a> Emerging Infectious Diseases. 11 (12), 1970-1972 (2005).</li><li>Kuzmin, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bat+lyssaviruses+(Aravan+and+Khujand)+from+Central+Asia:+phylogenetic+relationships+according+to+N,+P+and+G+gene+sequences.">Bat lyssaviruses (Aravan and Khujand) from Central Asia: phylogenetic relationships according to N, P and G gene sequences.</a> Virus Research. 97 (2), 65-79 (2003).</li><li>Arguin, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serologic+evidence+of+Lyssavirus+infections+among+bats,+the+Philippines.">Serologic evidence of Lyssavirus infections among bats, the Philippines.</a> Emerging Infectious Diseases. 8 (3), 258-262 (2002).</li><li>Lumlertdacha, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survey+for+bat+lyssaviruses,+Thailand.">Survey for bat lyssaviruses, Thailand.</a> Emerging Infectious Diseases. 11 (2), 232-236 (2005).</li><li>Kuzmin, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+surveillance+in+bats,+Bangladesh.">Lyssavirus surveillance in bats, Bangladesh.</a> Emerging Infectious Diseases. 12 (3), 486-488 (2006).</li><li>Reynes, J. -. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serologic+evidence+of+lyssavirus+infection+in+bats,+Cambodia.">Serologic evidence of lyssavirus infection in bats, Cambodia.</a> Emerging Infectious Diseases. 10 (12), 2231-2234 (2004).</li><li>Nguyen, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bat+lyssaviruses,+northern+Vietnam.">Bat lyssaviruses, northern Vietnam.</a> Emerging Infectious Diseases. 20 (1), 161-163 (2014).</li><li>Liu, Y., Zhang, S., Zhao, J., Zhang, F., Hu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Irkut+virus+from+a+Murina+leucogaster+bat+in+China.">Isolation of Irkut virus from a Murina leucogaster bat in China.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 7 (3), 2097 (2013).</li><li>Kaplan, M. M., Meslin, F. X., Kaplan, M. M., Kiprowski, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+precautions+in+handling+rabies+virus.">Safety precautions in handling rabies virus.</a> Laboratory Techniques in Rabies, 4th Ed. , 3-8 (1996).</li><li>Smith, I., Wang, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bats+and+their+virome:+an+important+source+of+emerging+viruses+capable+of+infecting+humans.">Bats and their virome: an important source of emerging viruses capable of infecting humans.</a> Current Opinion in Virology. 3 (1), 84-91 (2013).</li><li>Corbet, G. B., Hill, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The mammals of the Indomalayan region: a systematic review. , (1992).</li><li>Mayer, F., von Helversen, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryptic+diversity+in+European+bats.">Cryptic diversity in European bats.</a> Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 268 (1478), 1825-1832 (2001).</li><li>Epstein, J. H., Field, H. E., Wang, L. F., Cowled, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthropogenic+epidemics:+the+ecology+of+bat-borne+viruses+and+our+role+in+their+emergence.">Anthropogenic epidemics: the ecology of bat-borne viruses and our role in their emergence.</a> Bats and viruses: a new frontier of emerging infectious diseases. , 249-280 (2016).</li><li>. Protocol for postmortem diagnosis of rabies in animals by direct fluorescent antibody testing Available from: <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf">https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf</a> (2019)</li><li>Hayman, D. T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+universal+real-time+assay+for+the+detection+of+Lyssaviruses.">A universal real-time assay for the detection of Lyssaviruses.</a> Journal of Virological Methods. 177 (1), 87-93 (2011).</li><li>Franka, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+phylogenetic+lineage+of+rabies+virus+associated+with+western+pipistrelle+bats+(Pipistrellus+hesperus).">A new phylogenetic lineage of rabies virus associated with western pipistrelle bats (Pipistrellus hesperus).</a> Journal of General Virology. 87 (8), 2309-2321 (2006).</li><li>Trimarchi, C. V., Smith, J. S., Press, A., Jackson, A. C., Wunner, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+evaluation.">Diagnostic evaluation.</a> Rabies, 1st ed. , 307-349 (2002).</li><li>Moldal, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+detection+of+European+bat+lyssavirus+type+2+(EBLV-2)+in+Norway.">First detection of European bat lyssavirus type 2 (EBLV-2) in Norway.</a> BMC Veterinary Research. 13, 216 (2017).</li><li>Robardet, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+assay+of+fluorescent+antibody+test+results+among+twelve+European+National+Reference+Laboratories+using+various+anti-rabies+conjugates.">Comparative assay of fluorescent antibody test results among twelve European National Reference Laboratories using various anti-rabies conjugates.</a> Journal of Virological Methods. 191 (1), 88-94 (2013).</li><li>Hanlon, C. A., Nadin-Davis, S. A., Jackson, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+diagnosis+of+rabies.">Laboratory diagnosis of rabies.</a> Rabies, 3rd ed. , 409-459 (2013).</li><li>Fischer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+step+forward+in+molecular+diagnostics+of+lyssaviruses--results+of+a+ring+trial+among+European+laboratories.">A step forward in molecular diagnostics of lyssaviruses--results of a ring trial among European laboratories.</a> PLoS ONE. 8 (3), 58372 (2013).</li><li>David, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+virus+detection+by+RT-PCR+in+decomposed+naturally+infected+brains.">Rabies virus detection by RT-PCR in decomposed naturally infected brains.</a> Veterinary Microbiology. 87 (2), 111-118 (2002).</li><li>Robardet, E., Picard-Meyer, E., Andrieu, S., Servat, A., Cliquet, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+interlaboratory+trials+on+rabies+diagnosis:+an+overview+of+results+and+variation+in+reference+diagnosis+techniques+(fluorescent+antibody+test,+rabies+tissue+culture+infection+test,+mouse+inoculation+test)+and+molecular+biology+techniques.">International interlaboratory trials on rabies diagnosis: an overview of results and variation in reference diagnosis techniques (fluorescent antibody test, rabies tissue culture infection test, mouse inoculation test) and molecular biology techniques.</a> Journal of Virological Methods. 177 (1), 15-25 (2011).</li></ol>

Denne laboratorie standard driftsprocedure (SOP) giver en seriel proces til afprøvning af bat prøver for tilstedeværelsen af lyssavirus antigener i Taiwan. De vigtigste trin omfatter ansættelse af FAT og RT-PCR. Udvælgelsen af egnede prøver og en vellykket isolering af virussen er også vigtig. Desuden blev nogle fejlfinding udført under overvågningen af bat Lyssavira. Den største forskel var måldyrene. Oprindeligt (2008 – 2009), måldyrene af bat lyssavirus overvågning var levende flagermus, som blev fanget...

Vira inden for slægten lyssavirus er zoonotiske patogener. Der er mindst syv lyssavirus arter i forbindelse med humane tilfælde1. Ud over de 16 arter i denne slægt1,2,3, Taiwan bat lyssavirus (twblv)4 og kotalahti bat lyssavirus5 er for nylig blevet identificeret i flagermus, men deres taksonomiske statusser har endnu ikke bestemmes.
Flagermus er de naturlige værter for de fleste Lyssavira, med undtagelse af mokola lyssavirus og ikoma lyssavirus, som endnu ikke er blevet identificeret i nogen flagermus1,2,3,6. Oplysningerne om Lyssavira i asiatiske flagermus er stadig begrænset. To ukarakteriserede Lyssavira i asiatiske flagermus (en i Indien og den anden i Thailand)7,8 er blevet rapporteret. En human rabiestilfælde forbundet med en flagermus bid i Kina blev rapporteret i 2002, men diagnosen blev kun foretaget af kliniske observation9. I Central Asien blev Aravan lyssavirus identificeret i den mindre mus-eared bat (Myotis blythi) i Kirgisistan i 1991, og Khujand lyssavirus blev identificeret i den fipskægget bat (Myotis mystacinus) i Tadsjikistan i 200110. I Sydasien blev Gannoruwa bat lyssavirus identificeret i den indiske flyvende ræv (Pteropus medius) i Sri Lanka i 20153. I Sydøstasien, flere serologiske undersøgelser af flagermus i Filippinerne, Thailand, Bangladesh, Cambodja, og Vietnam viste variabel seroprevalens11,12,13,14, 15. Selv om Irkut lyssavirus blev identificeret i den større tube-nosed bat (Murina leucogaster) i Jilin provinsen, kina i 201216, de nøjagtige arter og placeringer af Lyssavira i østasiatiske bat populationer forbliver ukendte.
For at vurdere tilstedeværelsen af lyssavirus i taiwanske bat-populationer blev der indledt et overvågningsprogram med både Direct FAT og RT-PCR. Taiwan bat lyssavirus blev identificeret i to tilfælde af den japanske Pipistrelle (Pipistrellus abramus)4 i 2016 – 2017. I denne artikel indføres der en laboratorie standardprocedure for lyssavirusovervågning af bat-populationen i Taiwan. Flow chart af bat lyssavirus diagnose i vores laboratorium er præsenteret i figur 1.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>2.5% Trypsin (10x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15090046</td>
			<td>Trppsin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 cm2 flask</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>690160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>32201-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose I</td>
			<td>VWR Life Science</td>
			<td>97062-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>NIHON SHIYAKU REAGENT</td>
			<td>NS-32294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMV Reverse Transcriptase</td>
			<td>Promega</td>
			<td>M5101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic(100X)&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240-062</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blade</td>
			<td>Braun</td>
			<td>BA215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>5424R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemilumineance system</td>
			<td>TOP BIO CO.</td>
			<td>MGIS-21-C2-1M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection tube</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>990381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection tube</td>
			<td>SSI</td>
			<td>2341-SO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slide</td>
			<td>Muto Pure chemical Co., LTD.</td>
			<td>24505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA analyzer</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>3700XL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10437028</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Anti-Rabies Monoclonal Globulin</td>
			<td>Fujirebio Diagnostic Inc.</td>
			<td>800-092</td>
			<td>FITC-conjugated anti-rabies antibodies: reagent B</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Four-well Teflon-coating glass slide</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>30-86H-WHITE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel Electrophoresis System</td>
			<td>Major Science</td>
			<td>MJ-105-R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS (1x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14175095</td>
			<td>Trppsin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>ASTEC</td>
			<td>SCA-165DS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX71</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine 200 mM (100x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A2916801</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIGHT DIAGNOSTICS Rabies FAT reagent</td>
			<td>EMD Millipore Corporation</td>
			<td>5100</td>
			<td>FITC-conjugated anti-rabies antibodies: reagent A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagNA Pure Compact Instrument</td>
			<td>Roche</td>
			<td>03731146001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagNA Pure Compact NA Isolation Kit 1</td>
			<td>Roche</td>
			<td>03730964001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM (10x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11430030</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM NEAA (100x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140050</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM vitamin solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11120052</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.06329.0500</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>NN*2332R9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Medicago</td>
			<td>09-8912-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer synthesis</td>
			<td>Mission Biotech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNasin ribonuclease inhibitor</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N2111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sequencing service</td>
			<td>Mission Biotech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>AA00008032E00MNT10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate (100 mM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11360070</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Beads</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>69989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile absorbent pad</td>
			<td>3M</td>
			<td>1604T-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>171-0045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq polymerase</td>
			<td>JMR Holdings</td>
			<td>JMR-801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal cycler</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>2720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TissueLyser II</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>85300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tongue depressor</td>
			<td>HONJER CO., LTD.</td>
			<td>122246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezer</td>
			<td>Tennyson medical Instrument developing CO., LTD.</td>
			<td>A0601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tylosin Tartrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T6271-10G</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

standard operating procedure for lyssavirus surveillance of the bat population in taiwan

Vira inden for slægten lyssavirus er zoonotiske patogener, og mindst syv lyssavirus arter er forbundet med menneskelige tilfælde. Fordi flagermus er naturlige reservoirer af de fleste Lyssavira, en lyssavirus overvågning program af flagermus er blevet gennemført i Taiwan siden 2008 at forstå økologi af disse vira i flagermus. I dette program, ikke-statslige bat Conservation organisationer og lokale dyresygdomme kontrolcentre samarbejdede for at indsamle døde flagermus eller flagermus dør af svaghed eller sygdom. Hjernevæv af flagermus blev opnået gennem nekropsy og udsat for direkte fluorescerende antistof test (fedt) og reverse transskription polymerase kædereaktion (RT-PCR) til påvisning af lyssavirus antigener og nukleinsyrer. For fedt, anbefales mindst to forskellige rabies diagnose konjugater. Til RT-PCR anvendes to sæt primere (JW12/N165-146, N113F/N304R) til at forstærke en partiel sekvens af lyssavirus nucleoprotein-genet. Dette overvågningsprogram overvåger Lyssavira og andre zoonotiske agenser i flagermus. Taiwan bat lyssavirus findes i to tilfælde af den japanske Pipistrelle (Pipistrellus abramus) i 2016 – 2017. Disse resultater bør informere offentligheden, sundhedspersonale og videnskabsfolk om de potentielle risici ved at kontakte flagermus og andre dyreliv.

Fra 2014 til maj 2017 blev der indsamlet 332 bat-slagtekroppe fra 13 arter til overvågning. To testede positive. I det første bat-tilfælde blev hjerne indtrykket testet negativt ved brug af FEDTET med et af de kommercielle FITC-konjugeret anti-rabies antistoffer (figur 2), mens rt-pcr'erne, som anvender hvert af de to primer-sæt (JW12/N165-146, N113F/N304R), gav positive resultater (figur 3). En 428 BP sekvens af amplikonen (forstærket med N113F/N304R og in...

Watch this Scientific Journal Video about Standard Operating Procedure for Lyssavirus Surveillance of the Bat Population in Taiwan at JoVE.com

Standard Operating Procedure for Lyssavirus Surveillance of the Bat Population in Taiwan

Denne protokol indfører en standard laboratorieprocedure for diagnostisk testning af lyssavirus-antigener i flagermus i Taiwan.

Standard Operations procedure for lyssavirus overvågning af bat-populationen i Taiwan

Viruses within the genus Lyssavirus are zoonotic pathogens, and at least seven lyssavirus species are associated with human cases. Because bats are ...

Lyssavirus er en zoo-no-tic patogener. For at vurdere tilstedeværelsen af lyssavirus i taiwanske flagermuspopulationer indledte vi et overvågningsprogram. Og det lykkedes at identificere fire lyssavirus fra 2016 til 2018.Denne protokol er en trinvis introduktion til vi-al Lyssavirus-overvågning i Taiwan. Vi håber, at det vil være nyttigt at forsker, der er interesseret i vi-al Lyssavirus overvågning. Det er vigtigt at tilslutte det korrekte tac-fustagesymbol.En død eller døende flagermus er mere egnet end en levende flagermus til Lyssavirus overvågning. Afhængigt af biosikkerhedsbestemmelserne i det land, hvor laboratoriet er placeret, udføre følgende procedurer i et egnet biosikkerhedsniveau. Og sikre, at forskerne er i øjeblikket kvalificeret og bære ordentlig personlige værnemidler.Ved indsamling af svage eller syge flagermus eller kroppe, har en flagermus økolog identificere flagermus arter ved prøven morfologiske egenskaber. Indsend et informationsark til laboratoriet, herunder indsamlingsstedet, arterne, kliniske tegn og andre relevante data for hver flagermusprøve. Før du begynder necroscopy, undersøge alle de eksterne åbninger og fotografere flagermus eksterne funktioner, især hoved, ører og vinger til art differentiering.For at indsamle en mundtlig podepind prøve placere flagermus i ventral recumbency på en steril dissektion bord og fastsætte hovedet med pincet. Brug en skalpel til at skære huden langs midterlinjen af kalven området;og trække huden til de laterale sider, at gøre et snit i kraniet langs midterlinjen af kalven området. Åbn kraniet med pincet til at udsætte hjernevævet og bruge pincet til forsigtigt at adskille hjernevævet fra det tilsluttede nervevæv.Skær tværsnittet af hjernen, herunder hjernestammen og lillehjernen, og rør let ved hjernevævets snitoverflade med glasdias for at gøre udtværingsindtryk. Tryk på diaset på linsen væv for at fjerne det overskydende væv og fastsætte smøre indtryk dias i minus 20 grader celsius acetone i 30 minutter. Derefter fastsætte et lille stykke frisk hjernevæv, i formalin, for histopatologisk undersøgelse.Og placere resten af vævet i emi-em 10 for nukleinsyre ekstraktion. Dernæst indsluge huden fra manifolden til anus langs midterlinjen af kroppen, og bruge pincet til at løfte og adskille huden og understrege muskelvæv;at tillade indsamling af spytkirtlerne, der ligger i nærheden af mandibulære knogle. Let løfte brystbenet med pincet, bruge skalpel til at skære brystbenet og bugvæggen langs midterlinjen og skære kraveben.Brug nåle til at fastgøre venstre og højre brystkasse til dissektion bord, for at åbne brysthulen. Og registrere brutto legioner og graden af post mortem forandring. Brug derefter pincet og skalpel til at fjerne de viscerale væv efter behov for den planlagte downstream analyse.For at udføre en direkte fluorescerende antistoftest ved afslutningen af fikseringen skal du tørre smøretrykdiasene og vælge mindst to fluorescenskonjugered anti-rabiesantistoffer til analysen. Filtrer et antistof på hvert dias gennem en 0,45 mikrometer si. Og inkuber diasene i 30 minutter ved 37 grader celsius i et fugtigt kammer.Ved slutningen af inkubationen afløb den overskydende konjugat, og objektglassene vaskes med PBS. Brug derefter et lille volumen på 10% glycerol til at montere cover-slips på dias og billede dias ved fluorescens mikroskopi. Når enten fluorescerende antistoftest eller RT-PCR-analysen indikerer positivitet, homogeniseres hjerneprøven i 10%-suspensionen i emi-en 10 og sedimentere vævs fleu-rry ved centrifugering.Inokuler 200 mikroliter af super-nat-en med tre gange 10 til 6th mus neuroblastoma celler og en milliliter emi-en 10 for en time ved 37 grader celsius og 1% kuldioxid. Og overføre hjernen homogen-celle suspension til en 25 centimeter kvadreret kolbe, der indeholder seks milliliter frisk emi-en 10. På en milliliter af hjernen homogen-celle suspension i en fire-brønd Teflon-belagt glas dias, med en seks millimeter diameter og placere dias på 37 grader celsius og 1% kuldioxid i tre til fire dage.Efter fiksering med 100%acetone, plette dias med de samme to fluorescens konjugeret anti-rabies antistoffer som anvendes til fluorescens antistof test. Og visualisere dias ved fluorescerende mikroskopi til at bestemme antallet af intracida-plas-mic indeslutninger. Efter trypsinizing og sub-culturing den podede cellekultur i henhold til standard protokoller, returnere kold-kultur til cellekultur inkubator i yderligere tre til fire dage med gentagen optælling af antallet af inficerede celler, som netop påvist, indtil en 100% infektivitet er nået.Fra januar 2014 til maj 2017 blev der indsamlet 332 flagermuskroppe fra 13 arter til overvågning. I denne repræsentative analyse af to positive flagermustilfælde testede hjerneindtrykket negativt ved hjælp af fluorescerende antistoftest med et af de kommercielle, fit-sy konjugerede anti-rabiesantistoffer, mens RT-PCR, der anvendte hvert af de to forskellige primersæt, gav positive resultater. Underkastelse af den opnåede ampli-con sekvens til blast forespørgslen i Gen bank database viste, at sekvensen svarede til Lyssavirus med identiteter på mindre end 79%støtte identiteten af de fundne lyssavirus.To lyssavirus blev efterfølgende med held isoleret fra de to hjerner som bekræftet ved fluorescensantistoftest og sekventering. Det vigtigste trin til bestemmelse af lyssaviruspositivitet er fluorescensantistoftesten og RT-CPR-analysen. Det anbefales stærkt at anvende to eller flere anti-rabiesantistoffer i primersættene.Ud over Lyssavirus andre zoo-ikke-ical bat patogener kan overvåges ved hjælp af lukkede diagnostiske metoder. Dataene kan derefter bruges til at informere offentligheden om at undgå kontakt med flagermus. Jo mere vi er i stand til at studere bat Lyssavirus, jo mere vil vi være i stand til at forstå dens udvikling og indvirkning på folkesundheden.

Research

JoVE Journal

Environment

A Small Volume Procedure for Viral Concentration from Water

Et lille volumen Procedure for Viral Koncentration fra Water

Small-scale concentration of viruses (sample volumes 1-10 L, here simulated with spiked 100 ml water samples) is an efficient, cost-effective way to ...

Clean Sampling and Analysis of River and Estuarine Waters for Trace Metal Studies

Clean Prøveudtagning og analyse af floden og kystvande for Trace Metal Studies

Most of the trace metal concentrations in ambient waters obtained a few decades ago have been considered unreliable owing to the lack of contamination ...

An Ultra-clean Multilayer Apparatus for Collecting Size Fractionated Marine Plankton and Suspended Particles

En ultra-rene Multilayer apparater til indsamling af størrelse fraktioneret marint Plankton og suspenderede partikler

The distributions of many trace elements in the ocean are strongly associated with the growth, death, and re-mineralization of marine plankton and those ...

A Novel Method for the Pentosan Analysis Present in Jute Biomass and Its Conversion into Sugar Monomers Using Acidic Ionic Liquid

En ny metode til Pentosan analyse findes i Jute biomasse og deres omdannelse til sukker monomerer ved hjælp af sure ionisk væske

Recently, ionic liquids (ILs) are used for biomass valorization into valuable chemicals because of their remarkable properties such as thermal stability, ...

Optimized Procedure for Determining the Adsorption of Phosphonates onto Granular Ferric Hydroxide using a Miniaturized Phosphorus Determination Method

Optimeret Procedure til bestemmelse af Adsorption fosfonater på kornet jern hydroxid ved hjælp af en Miniaturized fosfor bestemmelse metode

This paper introduces a procedure to investigate the adsorption of phosphonates onto iron-containing filter materials, particularly granular ferric ...

A Video Surveillance System to Monitor Breeding Colonies of Common Terns (Sterna Hirundo)

A Video Surveillance System to Monitor Breeding Colonies of Common Terns Sterna Hirundo

En Video Surveillance System til overvågning af ynglende Fjordterner (Sterna Hirundo)-kolonier

Many waterbird populations have faced declines over the last century, including the common tern (Sterna hirundo), a waterbird species with a widespread ...

Use of Autometallography to Localize and Semi-Quantify Silver in Cetacean Tissues

Brug af autometallografi at lokalisere og semi-kvantificere sølv i hvaler væv

Silver nanoparticles (AgNPs) have been extensively used in commercial products, including textiles, cosmetics, and health care items, due to their strong ...

A Telemetric, Gravimetric Platform for Real-Time Physiological Phenotyping of Plant&ndash;Environment Interactions

A Telemetric, Gravimetric Platform for Real-Time Physiological Phenotyping of PlantÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬Å“Environment Interactions

En telemetrisk, gravimetrisk platform for real-time fysiologiske fænotypebestemmelse af plante-miljø interaktioner

Food security for the growing global population is a major concern. The data provided by genomic tools far exceeds the supply of phenotypic data, creating ...

A Standardized Procedure for Monitoring Harmful Algal Blooms in Chile by Metabarcoding Analysis

En standardiseret procedure til overvågning af skadelige algeopblomstringer i Chile ved metabarcodinganalyse

Harmful algae blooms (HABs) monitoring has been implemented worldwide, and Chile, a country famous for its fisheries and aquaculture, has intensively used ...

An Application for Pairing with Wearable Devices to Monitor Personal Health Status

En applikation til parring med bærbare enheder til overvågning af personlig sundhedsstatus

The current protocol aims to showcase the technology integration, providing a detailed description of adopting the HealthCloud app, developed by the ...