Name: standard operating procedure for lyssavirus surveillance of the bat population in taiwan
Uploaded: 2019-08-27T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Standard Operating Procedure for Lyssavirus Surveillance of the Bat Population in Taiwan at JoVE.com

We danken tien-Cheng Li, Yi-Tang Lin, Chia-Jung Tsai en ya-LAN Li voor hun hulp tijdens deze studie. Deze studie werd gesteund door Grant No. 107AS-8.7.1-BQ-B2 (1) van het Bureau voor dier-en Plantenziekte inspectie en quarantaine, Raad van landbouw, uitvoerende yuan, Taiwan.

1. veiligheidsmaatregelen bij het hanteren van lyssavirussen
<ol><li>Zorg ervoor dat alle laboratoriummedewerkers die de BBT-specimens hanteren, pre-exposure-rabiës profylaxe krijgen17. Bewaak de niveaus van antilichamen tegen rabiës van de werknemers vooraf en bekijk ze elke 6 maanden17opnieuw. Follow-up rabiësvaccinatie is vereist voor degenen wier antilichaam niveaus lager zijn dan 0,5 IE/mL17.</li>
	<li>Afhankelijk van de bioveiligheidsvoors...

<ol>
	<li>Kuzmin, I. V., Rupprecht, C. E., Nagarajan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+facts+about+lyssavirus.">Basic facts about lyssavirus.</a> Current laboratory techniques in rabies diagnosis, research, and prevention, volume 1. , 3-21 (2014).</li><li>Ar&#233;chiga Ceballos, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+lyssavirus+in+bat,+Spain.">Novel lyssavirus in bat, Spain.</a> Emerging Infectious Diseases. 19 (5), 793-795 (2013).</li><li>Gunawardena, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+in+Indian+Flying+Foxes,+Sri+Lanka.">Lyssavirus in Indian Flying Foxes, Sri Lanka.</a> Emerging Infectious Diseases. 22 (8), 1456-1459 (2016).</li><li>Hu, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+in+Japanese+Pipistrelle,+Taiwan.">Lyssavirus in Japanese Pipistrelle, Taiwan.</a> Emerging Infectious Diseases. 24 (4), 782-785 (2018).</li><li>Nokireki, T., Tammiranta, N., Kokkonen, U. -. M., Kantala, T., Gadd, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tentative+novel+lyssavirus+in+a+bat+in+Finland.">Tentative novel lyssavirus in a bat in Finland.</a> Transboundary Emerging Diseases. 65 (3), 593-596 (2018).</li><li>Banyard, A. C., Evans, J. S., Luo, T. R., Fooks, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssaviruses+and+bats:+emergence+and+zoonotic+threat.">Lyssaviruses and bats: emergence and zoonotic threat.</a> Viruses. 6 (8), 2974-2990 (2014).</li><li>Pal, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+virus+infection+of+a+flying+fox+bat,+Pteropus+policephalus+in+Chandigarh,+Northern+India.">Rabies virus infection of a flying fox bat, Pteropus policephalus in Chandigarh, Northern India.</a> Tropical and Geographical Medicine. 32 (3), 265-267 (1980).</li><li>Smith, P. C., Lawhaswasdi, K., Vick, W. E., Stanton, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+rabies+virus+from+fruit+bats+in+Thailand.">Isolation of rabies virus from fruit bats in Thailand.</a> Nature. 216 (5113), 384 (1967).</li><li>Tang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pivotal+role+of+dogs+in+rabies+transmission,+China.">Pivotal role of dogs in rabies transmission, China.</a> Emerging Infectious Diseases. 11 (12), 1970-1972 (2005).</li><li>Kuzmin, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bat+lyssaviruses+(Aravan+and+Khujand)+from+Central+Asia:+phylogenetic+relationships+according+to+N,+P+and+G+gene+sequences.">Bat lyssaviruses (Aravan and Khujand) from Central Asia: phylogenetic relationships according to N, P and G gene sequences.</a> Virus Research. 97 (2), 65-79 (2003).</li><li>Arguin, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serologic+evidence+of+Lyssavirus+infections+among+bats,+the+Philippines.">Serologic evidence of Lyssavirus infections among bats, the Philippines.</a> Emerging Infectious Diseases. 8 (3), 258-262 (2002).</li><li>Lumlertdacha, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survey+for+bat+lyssaviruses,+Thailand.">Survey for bat lyssaviruses, Thailand.</a> Emerging Infectious Diseases. 11 (2), 232-236 (2005).</li><li>Kuzmin, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+surveillance+in+bats,+Bangladesh.">Lyssavirus surveillance in bats, Bangladesh.</a> Emerging Infectious Diseases. 12 (3), 486-488 (2006).</li><li>Reynes, J. -. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serologic+evidence+of+lyssavirus+infection+in+bats,+Cambodia.">Serologic evidence of lyssavirus infection in bats, Cambodia.</a> Emerging Infectious Diseases. 10 (12), 2231-2234 (2004).</li><li>Nguyen, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bat+lyssaviruses,+northern+Vietnam.">Bat lyssaviruses, northern Vietnam.</a> Emerging Infectious Diseases. 20 (1), 161-163 (2014).</li><li>Liu, Y., Zhang, S., Zhao, J., Zhang, F., Hu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Irkut+virus+from+a+Murina+leucogaster+bat+in+China.">Isolation of Irkut virus from a Murina leucogaster bat in China.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 7 (3), 2097 (2013).</li><li>Kaplan, M. M., Meslin, F. X., Kaplan, M. M., Kiprowski, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+precautions+in+handling+rabies+virus.">Safety precautions in handling rabies virus.</a> Laboratory Techniques in Rabies, 4th Ed. , 3-8 (1996).</li><li>Smith, I., Wang, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bats+and+their+virome:+an+important+source+of+emerging+viruses+capable+of+infecting+humans.">Bats and their virome: an important source of emerging viruses capable of infecting humans.</a> Current Opinion in Virology. 3 (1), 84-91 (2013).</li><li>Corbet, G. B., Hill, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The mammals of the Indomalayan region: a systematic review. , (1992).</li><li>Mayer, F., von Helversen, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryptic+diversity+in+European+bats.">Cryptic diversity in European bats.</a> Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 268 (1478), 1825-1832 (2001).</li><li>Epstein, J. H., Field, H. E., Wang, L. F., Cowled, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthropogenic+epidemics:+the+ecology+of+bat-borne+viruses+and+our+role+in+their+emergence.">Anthropogenic epidemics: the ecology of bat-borne viruses and our role in their emergence.</a> Bats and viruses: a new frontier of emerging infectious diseases. , 249-280 (2016).</li><li>. Protocol for postmortem diagnosis of rabies in animals by direct fluorescent antibody testing Available from: <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf">https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf</a> (2019)</li><li>Hayman, D. T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+universal+real-time+assay+for+the+detection+of+Lyssaviruses.">A universal real-time assay for the detection of Lyssaviruses.</a> Journal of Virological Methods. 177 (1), 87-93 (2011).</li><li>Franka, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+phylogenetic+lineage+of+rabies+virus+associated+with+western+pipistrelle+bats+(Pipistrellus+hesperus).">A new phylogenetic lineage of rabies virus associated with western pipistrelle bats (Pipistrellus hesperus).</a> Journal of General Virology. 87 (8), 2309-2321 (2006).</li><li>Trimarchi, C. V., Smith, J. S., Press, A., Jackson, A. C., Wunner, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+evaluation.">Diagnostic evaluation.</a> Rabies, 1st ed. , 307-349 (2002).</li><li>Moldal, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+detection+of+European+bat+lyssavirus+type+2+(EBLV-2)+in+Norway.">First detection of European bat lyssavirus type 2 (EBLV-2) in Norway.</a> BMC Veterinary Research. 13, 216 (2017).</li><li>Robardet, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+assay+of+fluorescent+antibody+test+results+among+twelve+European+National+Reference+Laboratories+using+various+anti-rabies+conjugates.">Comparative assay of fluorescent antibody test results among twelve European National Reference Laboratories using various anti-rabies conjugates.</a> Journal of Virological Methods. 191 (1), 88-94 (2013).</li><li>Hanlon, C. A., Nadin-Davis, S. A., Jackson, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+diagnosis+of+rabies.">Laboratory diagnosis of rabies.</a> Rabies, 3rd ed. , 409-459 (2013).</li><li>Fischer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+step+forward+in+molecular+diagnostics+of+lyssaviruses--results+of+a+ring+trial+among+European+laboratories.">A step forward in molecular diagnostics of lyssaviruses--results of a ring trial among European laboratories.</a> PLoS ONE. 8 (3), 58372 (2013).</li><li>David, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+virus+detection+by+RT-PCR+in+decomposed+naturally+infected+brains.">Rabies virus detection by RT-PCR in decomposed naturally infected brains.</a> Veterinary Microbiology. 87 (2), 111-118 (2002).</li><li>Robardet, E., Picard-Meyer, E., Andrieu, S., Servat, A., Cliquet, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+interlaboratory+trials+on+rabies+diagnosis:+an+overview+of+results+and+variation+in+reference+diagnosis+techniques+(fluorescent+antibody+test,+rabies+tissue+culture+infection+test,+mouse+inoculation+test)+and+molecular+biology+techniques.">International interlaboratory trials on rabies diagnosis: an overview of results and variation in reference diagnosis techniques (fluorescent antibody test, rabies tissue culture infection test, mouse inoculation test) and molecular biology techniques.</a> Journal of Virological Methods. 177 (1), 15-25 (2011).</li></ol>

Deze laboratoriumstandaard operating procedure (SOP) biedt een serieel proces voor het testen van BBT-monsters voor de aanwezigheid van Lyssavirus-antigenen in Taiwan. De belangrijkste stappen zijn de tewerkstelling van vet en RT-PCR. Ook de selectie van geschikte monsters en een geslaagde isolatie van het virus zijn belangrijk. Bovendien, sommige problemen is uitgevoerd tijdens de controle van bat lyssavirussen. Het grote verschil was de doeldieren. Aanvankelijk (2008 – 2009), de doeldieren van bat Lyssavirus toezicht...

Virussen binnen het geslacht Lyssavirus zijn zoönotische pathogenen. Er zijn ten minste zeven Lyssavirus soorten in verband met menselijke gevallen1. In aanvulling op de 16 soorten in dit geslacht1,2,3, Taiwan bat Lyssavirus (twblv)4 en kotalahti bat Lyssavirus5 zijn onlangs geïdentificeerd in vleermuizen, maar hun taxonomische statussen nog te worden bepaald.
Vleermuizen zijn de natuurlijke hosts van de meeste lyssavirussen, met uitzondering van mokola Lyssavirus en Ikoma Lyssavirus, die nog niet zijn geïdentificeerd in een vleermuizen1,2,3,6. De informatie over lyssavirussen in Aziatische vleermuizen is nog steeds beperkt. Twee niet-gekenmerkte lyssavirussen in Aziatische vleermuizen (een in India en de andere in Thailand)7,8 zijn gemeld. Een menselijke rabiës geval geassocieerd met een vleermuis beet in China werd gemeld in 2002, maar de diagnose werd alleen gemaakt door klinische observatie9. In Centraal-Azië, Aravan Lyssavirus werd geïdentificeerd in de kleine muizen-eared bat (Myotis blythi) in kirgizië in 1991, en Khujand Lyssavirus werd geïdentificeerd in de klop knuppel (Myotis mystacinus) in Tadzjikistan in 200110. In Zuid-Azië werd Gannoruwa bat Lyssavirus geïdentificeerd in de Indische Flying Fox (Pteropus Medius) in Sri Lanka in 20153. In Zuidoost-Azië vertoonden verschillende serologische studies over vleermuizen in de Filipijnen, Thailand, Bangladesh, Cambodja en Vietnam een variabele seroprevalentie van11,12,13,14, 15. Hoewel Irkolyssavirus werd geïdentificeerd in de grote buis-nosed bat (Murina leucogaster) in de provincie Jilin, China in 201216, blijven de exacte soorten en locaties van lyssavirussen in Oost-Aziatische vleermuis populaties onbekend.
Om de aanwezigheid van Lyssavirus in de Taiwanese vleermuis populaties te beoordelen, werd een surveillanceprogramma met zowel direct FAT als RT-PCR geïnitieerd. Taiwan bat Lyssavirus werd geïdentificeerd in twee gevallen van de Japanse dwergvleermuis (Pipistrellus abramus)4 in 2016 – 2017. In dit artikel wordt een standaardwerk procedure voor laboratoria geïntroduceerd voor het toezicht op de BBT-populatie in Taiwan door Lyssavirus. Het stroomschema van de bat Lyssavirus diagnose in ons laboratorium is weergegeven in Figuur 1.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>2.5% Trypsin (10x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15090046</td>
			<td>Trppsin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 cm2 flask</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>690160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>32201-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose I</td>
			<td>VWR Life Science</td>
			<td>97062-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>NIHON SHIYAKU REAGENT</td>
			<td>NS-32294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMV Reverse Transcriptase</td>
			<td>Promega</td>
			<td>M5101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic(100X)&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240-062</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blade</td>
			<td>Braun</td>
			<td>BA215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>5424R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemilumineance system</td>
			<td>TOP BIO CO.</td>
			<td>MGIS-21-C2-1M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection tube</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>990381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection tube</td>
			<td>SSI</td>
			<td>2341-SO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slide</td>
			<td>Muto Pure chemical Co., LTD.</td>
			<td>24505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA analyzer</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>3700XL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10437028</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Anti-Rabies Monoclonal Globulin</td>
			<td>Fujirebio Diagnostic Inc.</td>
			<td>800-092</td>
			<td>FITC-conjugated anti-rabies antibodies: reagent B</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Four-well Teflon-coating glass slide</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>30-86H-WHITE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel Electrophoresis System</td>
			<td>Major Science</td>
			<td>MJ-105-R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS (1x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14175095</td>
			<td>Trppsin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>ASTEC</td>
			<td>SCA-165DS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX71</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine 200 mM (100x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A2916801</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIGHT DIAGNOSTICS Rabies FAT reagent</td>
			<td>EMD Millipore Corporation</td>
			<td>5100</td>
			<td>FITC-conjugated anti-rabies antibodies: reagent A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagNA Pure Compact Instrument</td>
			<td>Roche</td>
			<td>03731146001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagNA Pure Compact NA Isolation Kit 1</td>
			<td>Roche</td>
			<td>03730964001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM (10x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11430030</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM NEAA (100x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140050</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM vitamin solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11120052</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.06329.0500</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>NN*2332R9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Medicago</td>
			<td>09-8912-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer synthesis</td>
			<td>Mission Biotech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNasin ribonuclease inhibitor</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N2111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sequencing service</td>
			<td>Mission Biotech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>AA00008032E00MNT10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate (100 mM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11360070</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Beads</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>69989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile absorbent pad</td>
			<td>3M</td>
			<td>1604T-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>171-0045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq polymerase</td>
			<td>JMR Holdings</td>
			<td>JMR-801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal cycler</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>2720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TissueLyser II</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>85300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tongue depressor</td>
			<td>HONJER CO., LTD.</td>
			<td>122246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezer</td>
			<td>Tennyson medical Instrument developing CO., LTD.</td>
			<td>A0601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tylosin Tartrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T6271-10G</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

standard operating procedure for lyssavirus surveillance of the bat population in taiwan

Virussen binnen het geslacht Lyssavirus zijn zoönotische pathogenen, en ten minste zeven Lyssavirus soorten worden geassocieerd met menselijke gevallen. Omdat vleermuizen natuurlijke reservoirs zijn van de meeste lyssavirussen, is een Lyssavirus surveillanceprogramma van vleermuizen uitgevoerd in Taiwan sinds 2008 om de ecologie van deze virussen in vleermuizen te begrijpen. In dit programma, niet-gouvernementele bat Conservation organisaties en lokale dierenziekte controlecentra samengewerkt om dode vleermuizen of vleermuizen sterven van zwakte of ziekte te verzamelen. Hersenweefsels van vleermuizen werden verkregen via obductie en onderworpen aan directe fluorescerende antilichaam test (vet) en omgekeerde transcriptie polymerase kettingreactie (RT-PCR) voor detectie van Lyssavirus-antigenen en nucleïnezuren. Voor het vet worden ten minste twee verschillende rabiës diagnose conjugaten aanbevolen. Voor de RT-PCR worden twee verzamelingen van primers (JW12/N165-146, N113F/N304R) gebruikt om een partiële sequentie van het Lyssavirus nucleoproteïne-gen te versterken. Dit surveillanceprogramma bewaakt lyssavirussen en andere zoönoseverwekkers in vleermuizen. Taiwan bat Lyssavirus is te vinden in twee gevallen van de Japanse dwergvleermuis (Pipistrellus abramus) in 2016 – 2017. Deze bevindingen moeten het publiek, gezondheidswerkers en wetenschappers informeren over de potentiële Risico's van contact met vleermuizen en andere dieren in het wild.

Van 2014 tot mei 2017 werden 332 BBT-karkassen uit 13 soorten verzameld voor surveillance. Twee geteste positieve. In de eerste bat geval, de hersen impressie getest negatief met behulp van het vet met een van de commerciële FITC-geconjugeerde anti-rabiës antilichamen (Figuur 2), terwijl de RT-PCRs met gebruikmaking van elk van de twee primer sets (JW12/N165-146, N113F/N304R) leverde positieve resultaten (Figuur 3). Een 428 BP-sequentie van ampliconlengte voor...

Watch this Scientific Journal Video about Standard Operating Procedure for Lyssavirus Surveillance of the Bat Population in Taiwan at JoVE.com

Standard Operating Procedure for Lyssavirus Surveillance of the Bat Population in Taiwan

Dit protocol introduceert een standaard laboratoriumprocedure voor diagnostische tests van Lyssavirus antigenen in vleermuizen in Taiwan.

Standaard werkings procedure voor Lyssavirus surveillance van de BBT-populatie in Taiwan

Viruses within the genus Lyssavirus are zoonotic pathogens, and at least seven lyssavirus species are associated with human cases. Because bats are ...

Lyssavirus is een dierentuin-no-tic pathogenen. Om de aanwezigheid van Lyssavirus in Taiwanese vleermuispopulaties te beoordelen, hebben we een bewakingsprogramma gestart. En het identificeerde met succes vier Lyssavirussen van 2016 tot 2018.Dit protocol is een stapsgewijze inleiding tot vi-al Lyssavirus surveillance in Taiwan. We hopen dat het nuttig zal zijn om onderzoek te doen naar mensen die geïnteresseerd zijn in vi-al Lyssavirus surveillance. Het is belangrijk om het juiste tac-vat symbool aan te sluiten.Een dode of stervende vleermuis is geschikter dan een levende vleermuis voor Lyssavirus surveillance. Afhankelijk van de bioveiligheidsvoorschriften van het land waar het laboratorium zich bevindt; de volgende procedures uitvoeren in een geschikt laboratorium op bioveiligheidsniveau. En zorg ervoor dat de onderzoekers momenteel gekwalificeerd zijn en dragen de juiste persoonlijke beschermingsmiddelen.Laat een vleermuisecoloog bij het verzamelen van zwakke of zieke vleermuizen of karkassen de vleermuissoorten identificeren aan de morfologische kenmerken van het monster. Dien bij elk vleermuismonster een informatieblad in bij het laboratorium, met inbegrip van de verzamelplaats, de soorten, de klinische symptomen en andere relevante gegevens. Voordat u met de necroscopie begint, onderzoekt u alle externe openingen en fotografeert u de externe vleermuizen, met name het hoofd, de oren en de vleugels voor soortendifferentiatie.Om een oraal wattenstaafje monster te verzamelen plaats de vleermuis in ventrale recumbency op een steriele dissectie bord en bevestig het hoofd met pincet. Gebruik een scalpel om de huid langs de middellijn van het kuitgebied te snijden;en trek de huid aan de zijkanten, om een incisie in de schedel langs de middellijn van het kalfsgebied te maken. Open de schedel met een pincet om het hersenweefsel bloot te stellen en gebruik de pincet om het hersenweefsel voorzichtig te scheiden van het verbonden zenuwweefsel.Snijd de dwarsdoorsnede van de hersenen, met inbegrip van de hersenstam en cerebellum, en licht aanraken van de gesneden oppervlak van het hersenweefsel met glazen dia's om uitstrijkje indrukken te maken. Druk op de dia op lensweefsel om het overtollige weefsel te verwijderen en bevestig de uitstrijkjeafdruk dia's in min 20 graden Celsius aceton gedurende 30 minuten. Bevestig dan een klein stukje vers hersenweefsel, in formaline, voor histopathologisch onderzoek.En plaats de rest van het weefsel in emi-em 10 voor nucleïnezuur extractie. Vervolgens insnijden van de huid van het spruitstuk naar de anus langs de middellijn van het lichaam, en gebruik maken van de pincet op te heffen en te scheiden van de huid en onderstrepen spierweefsels;om de verzameling van de speekselklieren, gelegen in de buurt van het mandibulaire bot mogelijk te maken. Licht tillen van het borstbeen met de pincet, gebruik de scalpel om het borstbeen en de buikwand langs de middellijn te snijden en snijd de sleutelbeen.Gebruik naalden om de linker en rechter ribbenkast aan de dissectieraad te bevestigen, om de borstholte te openen. En noteert de grove legioenen en de mate van post mortem verandering. Gebruik vervolgens de pincet en scalpel om de viscerale weefsels te verwijderen, indien van toepassing voor de geplande downstream-analyse.Om een directe fluorescerende antilichaamtest aan het einde van de fixatie uit te voeren, droogt u de uitstrijkafafafingsplaten uit en selecteert u ten minste twee geconjugeerde anti-rabiësantilichamen voor de analyse. Filter één antilichaam op elke dia door een zeef van 0,45 micrometer. En de glijbanen 30 minuten uitbroeden bij 37 graden celsius in een vochtige kamer.Aan het einde van de incubatie, afvoer van de overtollige conjugaat en was de dia's met PBS. Gebruik vervolgens een klein volume van 10%glycerol om cover-slips op de dia's te monteren en de dia's door fluorescentiemicroscopie te schetsen. Wanneer ofwel de fluorescerende antilichaam test of de RT-PCR analyse wijst op positiviteit, homogeniseren de hersenen specimen in de 10%suspensie in emi-en 10 en sediment de weefsels fleu-rry door centrifugatie.Inenting 200 microliter van de super-nat-en met drie keer 10 tot de 6e muis neuroblastoom cellen en een milliliter emi-en 10 voor een uur bij 37 graden Celsius en 1%kooldioxide. En breng de hersenen homogeen-cel suspensie naar een 25 centimeter kwadraatkolf, met zes milliliter verse emi-en 10. Op een milliliter van de hersenen homogeen-cel suspensie in een vier-goed Teflon-gecoate glazen glijbaan, met een zes millimeter diameter en plaats de dia op 37 graden Celsius en 1% kooldioxide voor drie tot vier dagen.Na fixatie met 100% aceton, vlek de dia's met dezelfde twee fluorescentie geconjugeerde anti-rabiës antilichamen zoals gebruikt voor de fluorescentie antilichaam test. En visualiseer de dia's door fluorescerende microscopie om het aantal intracida-plas-mic insluitsels te bepalen. Na het trypsinizing en sub-culturing van de ingeënte celcultuur volgens standaardprotocollen, de terugkeer van de koude-cultuur naar de celcultuur incubator voor nog eens drie tot vier dagen met herhalen tellen van het aantal geïnfecteerde cellen zoals net aangetoond totdat een 100% infectiviteit is bereikt.Van januari 2014 tot mei 2017 werden 332 vleermuiskarkassen van 13 soorten verzameld voor toezicht. In deze representatieve analyse van twee positieve vleermuisgevallen testte de hersenindruk negatief met behulp van de fluorescerende antilichaamtest met een van de commerciële, fit-sy geconjugatte anti-rabiës antilichamen, terwijl de RT-PCR die elk van de twee verschillende primersets gebruikt, positieve resultaten opleverde. Uit de onderwerping van de verkregen ampli-con sequentie aan het opvragen van de Gen-bank in de database van Gen bleek dat de volgorde vergelijkbaar was met Lyssavirussen met identiteiten van minder dan 79%, ter ondersteuning van de identiteit van de gedetecteerde Lyssavirussen.Twee Lyssavirussen werden vervolgens met succes geïsoleerd uit de twee hersenen, zoals bevestigd door fluorescentie antilichaam test en sequencing. De belangrijkste stap voor het bepalen van Lyssavirus positiviteit zijn de fluorescentie antilichaam test en de RT-CPR analyse. Het gebruik van twee of meer anti-rabiës antilichamen in de primer sets wordt sterk aanbevolen.Naast Lyssavirus kunnen andere ziekteverwekkers van de dierentuin en de niet-ical knuppel worden gecontroleerd gebruikend gesloten kenmerkende methodes. De gegevens kunnen vervolgens worden gebruikt om het publiek te informeren over het vermijden van contact met vleermuizen. Hoe meer we in staat zijn om vleermuis Lyssavirus te bestuderen, hoe meer we in staat zullen zijn om de evolutie en de impact ervan op de volksgezondheid te begrijpen.

Research

JoVE Journal

Environment

A Small Volume Procedure for Viral Concentration from Water

Een klein volume Procedure voor Virale Concentratie van het Water

Small-scale concentration of viruses (sample volumes 1-10 L, here simulated with spiked 100 ml water samples) is an efficient, cost-effective way to ...

Clean Sampling and Analysis of River and Estuarine Waters for Trace Metal Studies

Clean monsterneming en analyse van de rivier en estuariene Waters voor Trace Metal Studies

Most of the trace metal concentrations in ambient waters obtained a few decades ago have been considered unreliable owing to the lack of contamination ...

An Ultra-clean Multilayer Apparatus for Collecting Size Fractionated Marine Plankton and Suspended Particles

Een Ultra-Clean gelaagde apparaat voor het verzamelen van grootte gefractioneerde mariene Plankton en zwevende deeltjes

The distributions of many trace elements in the ocean are strongly associated with the growth, death, and re-mineralization of marine plankton and those ...

A Novel Method for the Pentosan Analysis Present in Jute Biomass and Its Conversion into Sugar Monomers Using Acidic Ionic Liquid

Een nieuwe methode voor de analyse van de Pentosan aanwezig in Jute biomassa en de omzetting in suiker monomeren met zure Ionische vloeistof

Recently, ionic liquids (ILs) are used for biomass valorization into valuable chemicals because of their remarkable properties such as thermal stability, ...

Optimized Procedure for Determining the Adsorption of Phosphonates onto Granular Ferric Hydroxide using a Miniaturized Phosphorus Determination Method

Geoptimaliseerde Procedure voor de bepaling van de adsorptie van fosfonaten op granulaire Ferric Hydroxide met behulp van een methode fosfor sleutelbepaling verkleind

This paper introduces a procedure to investigate the adsorption of phosphonates onto iron-containing filter materials, particularly granular ferric ...

A Video Surveillance System to Monitor Breeding Colonies of Common Terns (Sterna Hirundo)

A Video Surveillance System to Monitor Breeding Colonies of Common Terns Sterna Hirundo

Een Video surveillancesysteem te controleren met het fokken van kolonies visdieven (Sterna Hirundo)

Many waterbird populations have faced declines over the last century, including the common tern (Sterna hirundo), a waterbird species with a widespread ...

Use of Autometallography to Localize and Semi-Quantify Silver in Cetacean Tissues

Gebruik van Autometallography om te lokaliseren en semi-kwantificeren zilver in walvisachtigen weefsels

Silver nanoparticles (AgNPs) have been extensively used in commercial products, including textiles, cosmetics, and health care items, due to their strong ...

A Telemetric, Gravimetric Platform for Real-Time Physiological Phenotyping of Plant&ndash;Environment Interactions

A Telemetric, Gravimetric Platform for Real-Time Physiological Phenotyping of PlantÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬Å“Environment Interactions

Een telemetrische, gravimetrische platform voor real-time fysiologische fenotypering van plant-milieu interacties

Food security for the growing global population is a major concern. The data provided by genomic tools far exceeds the supply of phenotypic data, creating ...

A Standardized Procedure for Monitoring Harmful Algal Blooms in Chile by Metabarcoding Analysis

Een gestandaardiseerde procedure voor het monitoren van schadelijke algenbloei in Chili door metabarcodinganalyse

Harmful algae blooms (HABs) monitoring has been implemented worldwide, and Chile, a country famous for its fisheries and aquaculture, has intensively used ...

An Application for Pairing with Wearable Devices to Monitor Personal Health Status

Een applicatie voor het koppelen met draagbare apparaten om de persoonlijke gezondheidsstatus te controleren

The current protocol aims to showcase the technology integration, providing a detailed description of adopting the HealthCloud app, developed by the ...