Name: standard operating procedure for lyssavirus surveillance of the bat population in taiwan
Uploaded: 2019-08-27T13:30:00
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Nous remercions Tien-Cheng Li, Yi-Tang Lin, Chia-Jung Tsai et Ya-Lan Li pour leur aide au cours de cette étude. Cette étude a été appuyée par la subvention no 107AS-8.7.1-BQ-B2 (1) du Bureau of Animal and Plant Health Inspection and Quarantine, Council of Agriculture, Executive Yuan, Taiwan.

1. Précautions de sécurité lors de la manipulation des lyssavirus
<ol><li>Veiller à ce que tous les travailleurs de laboratoire qui manipulent des échantillons de chauves-souris reçoivent une prophylaxie antirabique pré-exposition17. Surveiller les niveaux d'anticorps antirabiques des travailleurs à l'avance et les réexaminer tous les 6 mois17. La vaccination de suivi contre la rage est nécessaire pour ceux dont les niveaux d'anticorps sont inférieurs à 0,5 UI...

<ol>
	<li>Kuzmin, I. V., Rupprecht, C. E., Nagarajan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+facts+about+lyssavirus.">Basic facts about lyssavirus.</a> Current laboratory techniques in rabies diagnosis, research, and prevention, volume 1. , 3-21 (2014).</li><li>Ar&#233;chiga Ceballos, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+lyssavirus+in+bat,+Spain.">Novel lyssavirus in bat, Spain.</a> Emerging Infectious Diseases. 19 (5), 793-795 (2013).</li><li>Gunawardena, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+in+Indian+Flying+Foxes,+Sri+Lanka.">Lyssavirus in Indian Flying Foxes, Sri Lanka.</a> Emerging Infectious Diseases. 22 (8), 1456-1459 (2016).</li><li>Hu, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+in+Japanese+Pipistrelle,+Taiwan.">Lyssavirus in Japanese Pipistrelle, Taiwan.</a> Emerging Infectious Diseases. 24 (4), 782-785 (2018).</li><li>Nokireki, T., Tammiranta, N., Kokkonen, U. -. M., Kantala, T., Gadd, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tentative+novel+lyssavirus+in+a+bat+in+Finland.">Tentative novel lyssavirus in a bat in Finland.</a> Transboundary Emerging Diseases. 65 (3), 593-596 (2018).</li><li>Banyard, A. C., Evans, J. S., Luo, T. R., Fooks, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssaviruses+and+bats:+emergence+and+zoonotic+threat.">Lyssaviruses and bats: emergence and zoonotic threat.</a> Viruses. 6 (8), 2974-2990 (2014).</li><li>Pal, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+virus+infection+of+a+flying+fox+bat,+Pteropus+policephalus+in+Chandigarh,+Northern+India.">Rabies virus infection of a flying fox bat, Pteropus policephalus in Chandigarh, Northern India.</a> Tropical and Geographical Medicine. 32 (3), 265-267 (1980).</li><li>Smith, P. C., Lawhaswasdi, K., Vick, W. E., Stanton, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+rabies+virus+from+fruit+bats+in+Thailand.">Isolation of rabies virus from fruit bats in Thailand.</a> Nature. 216 (5113), 384 (1967).</li><li>Tang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pivotal+role+of+dogs+in+rabies+transmission,+China.">Pivotal role of dogs in rabies transmission, China.</a> Emerging Infectious Diseases. 11 (12), 1970-1972 (2005).</li><li>Kuzmin, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bat+lyssaviruses+(Aravan+and+Khujand)+from+Central+Asia:+phylogenetic+relationships+according+to+N,+P+and+G+gene+sequences.">Bat lyssaviruses (Aravan and Khujand) from Central Asia: phylogenetic relationships according to N, P and G gene sequences.</a> Virus Research. 97 (2), 65-79 (2003).</li><li>Arguin, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serologic+evidence+of+Lyssavirus+infections+among+bats,+the+Philippines.">Serologic evidence of Lyssavirus infections among bats, the Philippines.</a> Emerging Infectious Diseases. 8 (3), 258-262 (2002).</li><li>Lumlertdacha, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survey+for+bat+lyssaviruses,+Thailand.">Survey for bat lyssaviruses, Thailand.</a> Emerging Infectious Diseases. 11 (2), 232-236 (2005).</li><li>Kuzmin, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+surveillance+in+bats,+Bangladesh.">Lyssavirus surveillance in bats, Bangladesh.</a> Emerging Infectious Diseases. 12 (3), 486-488 (2006).</li><li>Reynes, J. -. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serologic+evidence+of+lyssavirus+infection+in+bats,+Cambodia.">Serologic evidence of lyssavirus infection in bats, Cambodia.</a> Emerging Infectious Diseases. 10 (12), 2231-2234 (2004).</li><li>Nguyen, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bat+lyssaviruses,+northern+Vietnam.">Bat lyssaviruses, northern Vietnam.</a> Emerging Infectious Diseases. 20 (1), 161-163 (2014).</li><li>Liu, Y., Zhang, S., Zhao, J., Zhang, F., Hu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Irkut+virus+from+a+Murina+leucogaster+bat+in+China.">Isolation of Irkut virus from a Murina leucogaster bat in China.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 7 (3), 2097 (2013).</li><li>Kaplan, M. M., Meslin, F. X., Kaplan, M. M., Kiprowski, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+precautions+in+handling+rabies+virus.">Safety precautions in handling rabies virus.</a> Laboratory Techniques in Rabies, 4th Ed. , 3-8 (1996).</li><li>Smith, I., Wang, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bats+and+their+virome:+an+important+source+of+emerging+viruses+capable+of+infecting+humans.">Bats and their virome: an important source of emerging viruses capable of infecting humans.</a> Current Opinion in Virology. 3 (1), 84-91 (2013).</li><li>Corbet, G. B., Hill, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The mammals of the Indomalayan region: a systematic review. , (1992).</li><li>Mayer, F., von Helversen, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryptic+diversity+in+European+bats.">Cryptic diversity in European bats.</a> Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 268 (1478), 1825-1832 (2001).</li><li>Epstein, J. H., Field, H. E., Wang, L. F., Cowled, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthropogenic+epidemics:+the+ecology+of+bat-borne+viruses+and+our+role+in+their+emergence.">Anthropogenic epidemics: the ecology of bat-borne viruses and our role in their emergence.</a> Bats and viruses: a new frontier of emerging infectious diseases. , 249-280 (2016).</li><li>. Protocol for postmortem diagnosis of rabies in animals by direct fluorescent antibody testing Available from: <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf">https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf</a> (2019)</li><li>Hayman, D. T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+universal+real-time+assay+for+the+detection+of+Lyssaviruses.">A universal real-time assay for the detection of Lyssaviruses.</a> Journal of Virological Methods. 177 (1), 87-93 (2011).</li><li>Franka, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+phylogenetic+lineage+of+rabies+virus+associated+with+western+pipistrelle+bats+(Pipistrellus+hesperus).">A new phylogenetic lineage of rabies virus associated with western pipistrelle bats (Pipistrellus hesperus).</a> Journal of General Virology. 87 (8), 2309-2321 (2006).</li><li>Trimarchi, C. V., Smith, J. S., Press, A., Jackson, A. C., Wunner, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+evaluation.">Diagnostic evaluation.</a> Rabies, 1st ed. , 307-349 (2002).</li><li>Moldal, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+detection+of+European+bat+lyssavirus+type+2+(EBLV-2)+in+Norway.">First detection of European bat lyssavirus type 2 (EBLV-2) in Norway.</a> BMC Veterinary Research. 13, 216 (2017).</li><li>Robardet, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+assay+of+fluorescent+antibody+test+results+among+twelve+European+National+Reference+Laboratories+using+various+anti-rabies+conjugates.">Comparative assay of fluorescent antibody test results among twelve European National Reference Laboratories using various anti-rabies conjugates.</a> Journal of Virological Methods. 191 (1), 88-94 (2013).</li><li>Hanlon, C. A., Nadin-Davis, S. A., Jackson, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+diagnosis+of+rabies.">Laboratory diagnosis of rabies.</a> Rabies, 3rd ed. , 409-459 (2013).</li><li>Fischer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+step+forward+in+molecular+diagnostics+of+lyssaviruses--results+of+a+ring+trial+among+European+laboratories.">A step forward in molecular diagnostics of lyssaviruses--results of a ring trial among European laboratories.</a> PLoS ONE. 8 (3), 58372 (2013).</li><li>David, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+virus+detection+by+RT-PCR+in+decomposed+naturally+infected+brains.">Rabies virus detection by RT-PCR in decomposed naturally infected brains.</a> Veterinary Microbiology. 87 (2), 111-118 (2002).</li><li>Robardet, E., Picard-Meyer, E., Andrieu, S., Servat, A., Cliquet, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+interlaboratory+trials+on+rabies+diagnosis:+an+overview+of+results+and+variation+in+reference+diagnosis+techniques+(fluorescent+antibody+test,+rabies+tissue+culture+infection+test,+mouse+inoculation+test)+and+molecular+biology+techniques.">International interlaboratory trials on rabies diagnosis: an overview of results and variation in reference diagnosis techniques (fluorescent antibody test, rabies tissue culture infection test, mouse inoculation test) and molecular biology techniques.</a> Journal of Virological Methods. 177 (1), 15-25 (2011).</li></ol>

Cette procédure d'exploitation standard de laboratoire (SOP) fournit un processus de série pour tester des échantillons de chauve-souris pour la présence d'antigènes de lyssavirus à Taiwan. Les principales étapes comprennent l'emploi de FAT et RT-PCR. La sélection d'échantillons appropriés et l'isolement réussi du virus sont également importants. En outre, un certain dépannage a été effectué pendant la surveillance des lyssavirus chauves-souris. La principale différence était les animaux cibles. Initial...

Les virus du genre Lyssavirus sont des agents pathogènes zoonotiques. Il existe au moins sept espèces de lyssavirus associées à des cas humains1. En plus des 16 espèces de ce genre1,2,3, Taiwan chauve-souris lyssavirus (TWBLV)4 et Kotalahti chauve-souris lyssavirus5 ont été récemment identifiés chez les chauves-souris, mais leurs statuts taxonomiques n'ont pas encore être déterminés.
Les chauves-souris sont les hôtes naturels de la plupart des lyssavirus, à l'exception de Mokola lyssavirus et Ikoma lyssavirus, qui n'ont pas encore été identifiés chez les chauves-souris1,2,3,6. L'information sur les lyssavirus chez les chauves-souris asiatiques est encore limitée. Deux lyssavirus non caractérisés chez les chauves-souris asiatiques (l'un en Inde et l'autre en Thaïlande)7,8 ont été signalés. Un cas de rage humaine associé à une morsure de chauve-souris en Chine a été rapporté en 2002, mais le diagnostic a été fait seulement par observation clinique9. En Asie centrale, aravan lyssavirus a été identifié dans la chauve-souris à oreilles de souris inférieure (Myotis blythi) au Kirghizistan en 1991, et Le lyssavirus de Khujand a été identifié dans la chauve-souris moustachue (Myotis mystacinus) au Tadjikistan en 200110. En Asie du Sud, Gannoruwa bat lyssavirus a été identifié chez le renard volant indien (Pteropus medius) au Sri Lanka en 20153. En Asie du Sud-Est, plusieurs études sérologiques sur les chauves-souris aux Philippines, en Thaïlande, au Bangladesh, au Cambodge et au Vietnam ont montré une séroprévalence variable11,12,13,14, 15. Bien que le lyssavirus d'Irk a été identifié dans la plus grande chauve-souris à nez tubulaire (Murina leucogaster) dans la province de Jilin, Chine en 201216, l'espèce exacte et l'emplacement des lyssavirus dans les populations de chauves-souris d'Asie de l'Est restent inconnus.
Pour évaluer la présence de lyssavirus dans les populations de chauves-souris taïwanaises, un programme de surveillance utilisant à la fois la FAT directe et le RT-PCR a été lancé. Taiwan bat lyssavirus a été identifié dans deux cas de pipistrelle japonaise (Pipistrellus abramus)4 en 2016-2017. Dans le présent article, une procédure d'opération standard de laboratoire est introduite pour la surveillance de lyssavirus de la population de chauves-souris à Taiwan. Le diagramme de flux du diagnostic de lyssavirus de chauve-souris dans notre laboratoire est présenté dans la figure 1.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>2.5% Trypsin (10x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15090046</td>
			<td>Trppsin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 cm2 flask</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>690160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>32201-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose I</td>
			<td>VWR Life Science</td>
			<td>97062-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>NIHON SHIYAKU REAGENT</td>
			<td>NS-32294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMV Reverse Transcriptase</td>
			<td>Promega</td>
			<td>M5101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic(100X)&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240-062</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blade</td>
			<td>Braun</td>
			<td>BA215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>5424R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemilumineance system</td>
			<td>TOP BIO CO.</td>
			<td>MGIS-21-C2-1M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection tube</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>990381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection tube</td>
			<td>SSI</td>
			<td>2341-SO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slide</td>
			<td>Muto Pure chemical Co., LTD.</td>
			<td>24505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA analyzer</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>3700XL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10437028</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Anti-Rabies Monoclonal Globulin</td>
			<td>Fujirebio Diagnostic Inc.</td>
			<td>800-092</td>
			<td>FITC-conjugated anti-rabies antibodies: reagent B</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Four-well Teflon-coating glass slide</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>30-86H-WHITE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel Electrophoresis System</td>
			<td>Major Science</td>
			<td>MJ-105-R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS (1x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14175095</td>
			<td>Trppsin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>ASTEC</td>
			<td>SCA-165DS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX71</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine 200 mM (100x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A2916801</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIGHT DIAGNOSTICS Rabies FAT reagent</td>
			<td>EMD Millipore Corporation</td>
			<td>5100</td>
			<td>FITC-conjugated anti-rabies antibodies: reagent A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagNA Pure Compact Instrument</td>
			<td>Roche</td>
			<td>03731146001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagNA Pure Compact NA Isolation Kit 1</td>
			<td>Roche</td>
			<td>03730964001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM (10x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11430030</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM NEAA (100x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140050</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM vitamin solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11120052</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.06329.0500</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>NN*2332R9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Medicago</td>
			<td>09-8912-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer synthesis</td>
			<td>Mission Biotech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNasin ribonuclease inhibitor</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N2111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sequencing service</td>
			<td>Mission Biotech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>AA00008032E00MNT10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate (100 mM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11360070</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Beads</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>69989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile absorbent pad</td>
			<td>3M</td>
			<td>1604T-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>171-0045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq polymerase</td>
			<td>JMR Holdings</td>
			<td>JMR-801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal cycler</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>2720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TissueLyser II</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>85300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tongue depressor</td>
			<td>HONJER CO., LTD.</td>
			<td>122246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezer</td>
			<td>Tennyson medical Instrument developing CO., LTD.</td>
			<td>A0601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tylosin Tartrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T6271-10G</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

standard operating procedure for lyssavirus surveillance of the bat population in taiwan

Les virus du genre Lyssavirus sont des agents pathogènes zoonotiques, et au moins sept espèces de lyssavirus sont associées à des cas humains. Parce que les chauves-souris sont des réservoirs naturels de la plupart des lyssavirus, un programme de surveillance du lyssavirus des chauves-souris a été menée à Taiwan depuis 2008 pour comprendre l'écologie de ces virus chez les chauves-souris. Dans le le but, des organisations non gouvernementales de conservation des chauves-souris et des centres locaux de lutte contre les maladies animales ont coopéré pour recueillir les chauves-souris mortes ou les chauves-souris qui meurent de faiblesse ou de maladie. Les tissus cérébraux des chauves-souris ont été obtenus par autopsie et soumis à l'essai fluorescent direct d'anticorps (FAT) et à la réaction en chaîne de polymère de transcription inverse (RT-PCR) pour la détection des antigènes de lyssavirus et des acides nucléiques. Pour la FAT, au moins deux conjugués différents de diagnostic de rage sont recommandés. Pour le RT-PCR, deux ensembles d'amorces (JW12/N165-146, N113F/N304R) sont utilisés pour amplifier une séquence partielle du gène nucléoprotéine de lyssavirus. Ce programme de surveillance surveille les lyssavirus et autres agents zoonotiques chez les chauves-souris. Taiwan bat lyssavirus est trouvé dans deux cas de la pipistrelle japonaise (Pipistrellus abramus) en 2016-2017. Ces résultats devraient informer le public, les professionnels de la santé et les scientifiques des risques potentiels de communiquer avec les chauves-souris et d'autres espèces sauvages.

De 2014 à mai 2017, 332 carcasses de chauves-souris de 13 espèces ont été recueillies pour surveillance. Deux ont été testés positifs. Dans le premier cas de chauve-souris, l'impression cérébrale a donné un résultat négatif à l'aide du FAT avec l'un des anticorps antirabiques conjugués au FITC (figure 2), tandis que les RT-PCR employant chacun des deux ensembles d'amorces (JW12/N165-146, N113F/N304R) ont donné résultats positifs (figure 3). Une s...

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Standard Operating Procedure for Lyssavirus Surveillance of the Bat Population in Taiwan

Ce protocole introduit une procédure d'exploitation de laboratoire standard pour l'essai diagnostique des antigènes de lyssavirus dans les chauves-souris à Taiwan.

Procédure d'exploitation standard pour la surveillance du Lyssavirus de la population de chauves-souris à Taiwan

Viruses within the genus Lyssavirus are zoonotic pathogens, and at least seven lyssavirus species are associated with human cases. Because bats are ...

Le lyssavirus est un agent pathogène zoo-no-tic. Afin d’évaluer la présence de lyssavirus dans les populations taïwanaises de chauves-souris, nous avons lancé un programme de surveillance. Et il a identifié avec succès quatre lyssavirus de 2016 à 2018.Ce protocole est une introduction étape par étape à la surveillance vi-al Lyssavirus à Taiwan. Nous espérons qu’il sera utile aux chercheurs qui s’intéressent à la surveillance du lyssavirus vi-al. Il est important de connecter le symbole tac-keg correct.Une chauve-souris morte ou mourante est plus appropriée qu’une chauve-souris vivante pour la surveillance du lyssavirus. Selon les règlements de biosécurité du pays où se trouve le laboratoire; effectuer les procédures suivantes dans un laboratoire approprié de niveau de biosécurité. Et s’assurer que les chercheurs sont actuellement qualifiés et portent un équipement de protection individuelle approprié.Lors de la collecte de chauves-souris ou de carcasses faibles ou malades, demandez à un écologiste de chauve-souris d’identifier l’espèce de chauve-souris en fonction des caractéristiques morphologiques du spécimen. Soumettez une fiche d’information au laboratoire, y compris le site de collecte, les espèces, les signes cliniques et d’autres données pertinentes avec chaque spécimen de chauve-souris. Avant de commencer la nécroscopie, examinez tous les orifices externes et photographiez les caractéristiques externes des chauves-souris, en particulier la tête, les oreilles et les ailes pour la différenciation des espèces.Pour recueillir un échantillon oral d’écouvillon, placez la chauve-souris dans une couchée ventrale sur un tableau de dissection stérile et fixez la tête avec des pinces à épiler. Utilisez un scalpel pour couper la peau le long de la ligne médiane de la zone du veau; et tirez la peau sur les côtés latéraux, pour faire une incision dans le crâne le long de la ligne médiane de la zone du veau. Ouvrez le crâne avec des pinces à épiler pour exposer le tissu cérébral et utilisez la pince à épiler pour séparer doucement le tissu cérébral du tissu nerveux connecté.Coupez la section transversale du cerveau, y compris le tronc cérébral et le cervelet, et touchez légèrement la surface coupée du tissu cérébral avec des glissières en verre pour faire des impressions de frottis. Appuyez sur la diapositive sur le tissu de la lentille pour enlever l’excès de tissu et de fixer l’impression de frottis glisse en moins 20 degrés Celsius acétone pendant 30 minutes. Puis fixer un petit morceau de tissu cérébral frais, en formaline, pour l’examen histopathologique.Et placer le reste du tissu dans emi-em 10 pour l’extraction de l’acide nucléique. Ensuite, incisez la peau du collecteur à l’anus le long de la ligne médiane du corps, et utilisez les pinces pour soulever et séparer la peau et souligner les tissus musculaires; pour permettre la collecte des glandes salivaires, situées près de l’os mandibulaire. Soulevant légèrement le sternum avec la pince à épiler, utilisez le scalpel pour couper le sternum et la paroi abdominale le long de la ligne médiane et couper les clavicules.Utilisez des aiguilles pour fixer les cages thoraciques gauche et droite à la planche de dissection, pour ouvrir la cavité thoracique. Et enregistrez les légions brutes et le degré de changement post mortem. Ensuite, utilisez la pince à épiler et le scalpel pour enlever les tissus viscérals, le cas échéant, pour l’analyse prévue en aval.Pour effectuer un test d’anticorps fluorescent direct à la fin de la fixation, séchez les glissières d’impression de frottis et sélectionnez au moins deux anticorps antirabiques conjugués à fluorescence pour l’analyse. Filtrer un anticorps sur chaque glissière à travers une passoire de 0,45 micromètre. Et incuber les toboggans pendant 30 minutes à 37 degrés Celsius dans une chambre humide.À la fin de l’incubation, égoutter l’excès conjugué et laver les glissières avec du PBS. Ensuite, utilisez un petit volume de 10% glycérol pour monter des glissements de couverture sur les diapositives et l’image des diapositives par microscopie fluorescence. Lorsque l’essai d’anticorps fluorescents ou l’analyse RT-PCR indique la positivité, homogénéisez le spécimen de cerveau dans la suspension de 10% dans emi-en 10 et sédimentez les tissus fleu-rry par centrifugation.Inoculer 200 microlitres du super-nat-en avec trois fois 10 à la 6ème souris cellules neuroblastome et un millilitre d’emi-en 10 pendant une heure à 37 degrés Celsius et 1% de dioxyde de carbone. Et transférer la suspension de cellules homogènes du cerveau à un flacon carré de 25 centimètres, contenant six millilitres d’emi-en 10 frais. À un millilitre de suspension de cellules homogènes du cerveau dans une glissière en verre enduit de téflon de quatre puits, avec un diamètre de six millimètres et placez la glissière à 37 degrés Celsius et 1 % de dioxyde de carbone pendant trois à quatre jours.Après fixation avec 100% acétone, tacher les diapositives avec les deux mêmes anticorps antirabiques conjugués fluorescence comme utilisé pour le test d’anticorps fluorescence. Et visualisez les diapositives par microscopie fluorescente pour déterminer le nombre d’inclusions intracida-plas-mic. Après avoir trypsinisé et sous-cultivé la culture cellulaire inoculée selon les protocoles standard, retourner la culture du froid à l’incubateur de culture cellulaire pour un autre trois à quatre jours avec le comptage répété du nombre de cellules infectées comme juste démontré jusqu’à ce qu’une infectiosité de 100% est atteint.De janvier 2014 à mai 2017, 332 carcasses de chauves-souris de 13 espèces ont été collectées pour surveillance. Dans cette analyse représentative de deux cas positifs de chauve-souris, l’impression cérébrale a été testée négative à l’aide du test d’anticorps fluorescent avec l’un des anticorps antirabique conjugués commerciaux et en forme, tandis que le RT-PCR utilisant chacun des deux ensembles d’amorces différents a donné des résultats positifs. La subjection de la séquence ampli-con obtenue à la requête par explosion dans la base de données de la banque Gen a révélé que la séquence était similaire aux Lyssavirus dont l’identité était inférieure à 79 % pour soutenir l’identité des Lyssavirus détectés.Deux lyssavirus ont été plus tard avec succès isolés des deux cerveaux comme confirmé par l’essai et le séquençage d’anticorps de fluorescence. L’étape clé pour déterminer la positivité de Lyssavirus sont le test d’anticorps de fluorescence et l’analyse de RT-CPR. L’utilisation de deux anticorps antirabies ou plus dans les ensembles d’amorce est fortement recommandée.En plus du lyssavirus, d’autres agents pathogènes zoo-non-ical de chauve-souris peuvent être surveillés utilisant des méthodes diagnostiques fermées. Les données peuvent ensuite être utilisées pour informer le public d’éviter tout contact avec les chauves-souris. Plus nous serons en mesure d’étudier le lyssavirus des chauves-souris, plus nous serons en mesure de comprendre son évolution et son impact sur la santé publique.

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