Name: standard operating procedure for lyssavirus surveillance of the bat population in taiwan
Uploaded: 2019-08-27T13:30:00
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Wir danken Tien-Cheng Li, Yi-Tang Lin, Chia-Jung Tsai und Ya-Lan Li für ihre Unterstützung während dieser Studie. Diese Studie wurde durch das Stipendium Nr. 107AS-8.7.1-BQ-B2 (1) des Bureau of Animal and Plant Health Inspection and Quarantine, Council of Agriculture, Executive Yuan, Taiwan, unterstützt.

1. Sicherheitsvorkehrungen beim Umgang mit Lyssaviren
<ol><li>Stellen Sie sicher, dass alle Laborarbeiter, die mit Fledermausproben umgehen, eine Tollwutprophylaxe vor der Exposition erhalten17. Überwachen Sie die Tollwut-Antikörper-Spiegel der Arbeiter im Voraus und überprüfen Sie sie alle 6 Monate17. Für diejenigen, deren Antikörperspiegel unter 0,5 I.E./ml17liegen, ist eine Tollwut-Nachsorge erforderlich.</li>
	<li>Je nach den Biosicherhei...

<ol>
	<li>Kuzmin, I. V., Rupprecht, C. E., Nagarajan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+facts+about+lyssavirus.">Basic facts about lyssavirus.</a> Current laboratory techniques in rabies diagnosis, research, and prevention, volume 1. , 3-21 (2014).</li><li>Ar&#233;chiga Ceballos, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+lyssavirus+in+bat,+Spain.">Novel lyssavirus in bat, Spain.</a> Emerging Infectious Diseases. 19 (5), 793-795 (2013).</li><li>Gunawardena, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+in+Indian+Flying+Foxes,+Sri+Lanka.">Lyssavirus in Indian Flying Foxes, Sri Lanka.</a> Emerging Infectious Diseases. 22 (8), 1456-1459 (2016).</li><li>Hu, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+in+Japanese+Pipistrelle,+Taiwan.">Lyssavirus in Japanese Pipistrelle, Taiwan.</a> Emerging Infectious Diseases. 24 (4), 782-785 (2018).</li><li>Nokireki, T., Tammiranta, N., Kokkonen, U. -. M., Kantala, T., Gadd, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tentative+novel+lyssavirus+in+a+bat+in+Finland.">Tentative novel lyssavirus in a bat in Finland.</a> Transboundary Emerging Diseases. 65 (3), 593-596 (2018).</li><li>Banyard, A. C., Evans, J. S., Luo, T. R., Fooks, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssaviruses+and+bats:+emergence+and+zoonotic+threat.">Lyssaviruses and bats: emergence and zoonotic threat.</a> Viruses. 6 (8), 2974-2990 (2014).</li><li>Pal, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+virus+infection+of+a+flying+fox+bat,+Pteropus+policephalus+in+Chandigarh,+Northern+India.">Rabies virus infection of a flying fox bat, Pteropus policephalus in Chandigarh, Northern India.</a> Tropical and Geographical Medicine. 32 (3), 265-267 (1980).</li><li>Smith, P. C., Lawhaswasdi, K., Vick, W. E., Stanton, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+rabies+virus+from+fruit+bats+in+Thailand.">Isolation of rabies virus from fruit bats in Thailand.</a> Nature. 216 (5113), 384 (1967).</li><li>Tang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pivotal+role+of+dogs+in+rabies+transmission,+China.">Pivotal role of dogs in rabies transmission, China.</a> Emerging Infectious Diseases. 11 (12), 1970-1972 (2005).</li><li>Kuzmin, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bat+lyssaviruses+(Aravan+and+Khujand)+from+Central+Asia:+phylogenetic+relationships+according+to+N,+P+and+G+gene+sequences.">Bat lyssaviruses (Aravan and Khujand) from Central Asia: phylogenetic relationships according to N, P and G gene sequences.</a> Virus Research. 97 (2), 65-79 (2003).</li><li>Arguin, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serologic+evidence+of+Lyssavirus+infections+among+bats,+the+Philippines.">Serologic evidence of Lyssavirus infections among bats, the Philippines.</a> Emerging Infectious Diseases. 8 (3), 258-262 (2002).</li><li>Lumlertdacha, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survey+for+bat+lyssaviruses,+Thailand.">Survey for bat lyssaviruses, Thailand.</a> Emerging Infectious Diseases. 11 (2), 232-236 (2005).</li><li>Kuzmin, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+surveillance+in+bats,+Bangladesh.">Lyssavirus surveillance in bats, Bangladesh.</a> Emerging Infectious Diseases. 12 (3), 486-488 (2006).</li><li>Reynes, J. -. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serologic+evidence+of+lyssavirus+infection+in+bats,+Cambodia.">Serologic evidence of lyssavirus infection in bats, Cambodia.</a> Emerging Infectious Diseases. 10 (12), 2231-2234 (2004).</li><li>Nguyen, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bat+lyssaviruses,+northern+Vietnam.">Bat lyssaviruses, northern Vietnam.</a> Emerging Infectious Diseases. 20 (1), 161-163 (2014).</li><li>Liu, Y., Zhang, S., Zhao, J., Zhang, F., Hu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Irkut+virus+from+a+Murina+leucogaster+bat+in+China.">Isolation of Irkut virus from a Murina leucogaster bat in China.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 7 (3), 2097 (2013).</li><li>Kaplan, M. M., Meslin, F. X., Kaplan, M. M., Kiprowski, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+precautions+in+handling+rabies+virus.">Safety precautions in handling rabies virus.</a> Laboratory Techniques in Rabies, 4th Ed. , 3-8 (1996).</li><li>Smith, I., Wang, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bats+and+their+virome:+an+important+source+of+emerging+viruses+capable+of+infecting+humans.">Bats and their virome: an important source of emerging viruses capable of infecting humans.</a> Current Opinion in Virology. 3 (1), 84-91 (2013).</li><li>Corbet, G. B., Hill, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The mammals of the Indomalayan region: a systematic review. , (1992).</li><li>Mayer, F., von Helversen, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryptic+diversity+in+European+bats.">Cryptic diversity in European bats.</a> Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 268 (1478), 1825-1832 (2001).</li><li>Epstein, J. H., Field, H. E., Wang, L. F., Cowled, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthropogenic+epidemics:+the+ecology+of+bat-borne+viruses+and+our+role+in+their+emergence.">Anthropogenic epidemics: the ecology of bat-borne viruses and our role in their emergence.</a> Bats and viruses: a new frontier of emerging infectious diseases. , 249-280 (2016).</li><li>. Protocol for postmortem diagnosis of rabies in animals by direct fluorescent antibody testing Available from: <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf">https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf</a> (2019)</li><li>Hayman, D. T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+universal+real-time+assay+for+the+detection+of+Lyssaviruses.">A universal real-time assay for the detection of Lyssaviruses.</a> Journal of Virological Methods. 177 (1), 87-93 (2011).</li><li>Franka, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+phylogenetic+lineage+of+rabies+virus+associated+with+western+pipistrelle+bats+(Pipistrellus+hesperus).">A new phylogenetic lineage of rabies virus associated with western pipistrelle bats (Pipistrellus hesperus).</a> Journal of General Virology. 87 (8), 2309-2321 (2006).</li><li>Trimarchi, C. V., Smith, J. S., Press, A., Jackson, A. C., Wunner, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+evaluation.">Diagnostic evaluation.</a> Rabies, 1st ed. , 307-349 (2002).</li><li>Moldal, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+detection+of+European+bat+lyssavirus+type+2+(EBLV-2)+in+Norway.">First detection of European bat lyssavirus type 2 (EBLV-2) in Norway.</a> BMC Veterinary Research. 13, 216 (2017).</li><li>Robardet, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+assay+of+fluorescent+antibody+test+results+among+twelve+European+National+Reference+Laboratories+using+various+anti-rabies+conjugates.">Comparative assay of fluorescent antibody test results among twelve European National Reference Laboratories using various anti-rabies conjugates.</a> Journal of Virological Methods. 191 (1), 88-94 (2013).</li><li>Hanlon, C. A., Nadin-Davis, S. A., Jackson, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+diagnosis+of+rabies.">Laboratory diagnosis of rabies.</a> Rabies, 3rd ed. , 409-459 (2013).</li><li>Fischer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+step+forward+in+molecular+diagnostics+of+lyssaviruses--results+of+a+ring+trial+among+European+laboratories.">A step forward in molecular diagnostics of lyssaviruses--results of a ring trial among European laboratories.</a> PLoS ONE. 8 (3), 58372 (2013).</li><li>David, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+virus+detection+by+RT-PCR+in+decomposed+naturally+infected+brains.">Rabies virus detection by RT-PCR in decomposed naturally infected brains.</a> Veterinary Microbiology. 87 (2), 111-118 (2002).</li><li>Robardet, E., Picard-Meyer, E., Andrieu, S., Servat, A., Cliquet, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+interlaboratory+trials+on+rabies+diagnosis:+an+overview+of+results+and+variation+in+reference+diagnosis+techniques+(fluorescent+antibody+test,+rabies+tissue+culture+infection+test,+mouse+inoculation+test)+and+molecular+biology+techniques.">International interlaboratory trials on rabies diagnosis: an overview of results and variation in reference diagnosis techniques (fluorescent antibody test, rabies tissue culture infection test, mouse inoculation test) and molecular biology techniques.</a> Journal of Virological Methods. 177 (1), 15-25 (2011).</li></ol>

Dieses Laborstandard-Betriebsverfahren (SOP) bietet ein serielles Verfahren zur Prüfung von Fledermausproben auf das Vorhandensein von Lyssavirus-Antigenen in Taiwan. Zu den wichtigsten Schritten gehört der Einsatz von FAT und RT-PCR. Die Auswahl geeigneter Proben und die erfolgreiche Isolierung des Virus sind ebenfalls wichtig. Darüber hinaus wurde einige Fehlerbehebung während der Überwachung von Fledermaus Lyssaviren durchgeführt. Der Hauptunterschied waren die Zieltiere. Ursprünglich (2008-2009) waren die Ziel...

Viren der Gattung Lyssavirus sind zoonotische Krankheitserreger. Es gibt mindestens sieben Lyssavirus-Arten, die mit menschlichen Fällen in Verbindung gebracht werden1. Zusätzlich zu den 16 Arten in dieser Gattung1,2,3, Taiwan Fledermaus Lyssavirus (TWBLV)4 und Kotalahti Fledermaus Lyssavirus5 wurden vor kurzem in Fledermäusen identifiziert, aber ihre taxonomischen Status haben noch nicht bestimmt werden.
Fledermäuse sind die natürlichen Wirte der meisten Lyssaviren, mit Ausnahme von Mokola Lyssavirus und Ikoma Lyssavirus, die noch nicht in irgendwelchen Fledermäusen identifiziert wurden1,2,3,6. Die Informationen über Lyssaviren bei asiatischen Fledermäusen sind immer noch begrenzt. Zwei nicht charakterisierte Lyssaviren bei asiatischen Fledermäusen (eines in Indien und das andere in Thailand)7,8 wurden berichtet. Ein menschlicher Tollwut-Fall im Zusammenhang mit einem Fledermausbiss in China wurde im Jahr 2002 berichtet, aber die Diagnose wurde nur durch klinische Beobachtung9gemacht. In Zentralasien wurde Das Aravan-Lyssavirus 1991 in Der weniger mausohrohrigen Fledermaus (Myotis blythi) in Kirgisistan und das Khujand-Lyssavirus in der Schnurrbartfledermaus (Myotis mystacinus) in Tadschikistan im Jahr 2001 10 identifiziert. In Südasien, Gannoruwa Fledermaus Lyssavirus wurde in der indischen Fliegenfuchs (Pteropus medius) in Sri Lanka im Jahr 2015identifiziert 3. In Südostasien zeigten mehrere serologische Studien an Fledermäusen auf den Philippinen, Thailand, Bangladesch, Kambodscha und Vietnam eine variable Seroprävalenz11,12,13,14, 15. Obwohl Irkut Lyssavirus in der größeren Röhrennasenfledermaus (Murina leucogaster) in der Provinz Jilin, China im Jahr 201216identifiziert wurde, bleiben die genauen Arten und Standorte von Lyssaviren in ostasiatischen Fledermauspopulationen unbekannt.
Um das Vorhandensein von Lyssavirus in taiwanesischen Fledermauspopulationen zu bewerten, wurde ein Überwachungsprogramm mit direkter FAT und RT-PCR initiiert. Taiwan Fledermaus Lyssavirus wurde in zwei Fällen der japanischen Pipistrelle identifiziert (Pipistrellus abramus)4 in 2016–2017. In diesem Artikel wird ein Laborstandard-Betriebsverfahren für die Lyssavirus-Überwachung der Fledermauspopulation in Taiwan eingeführt. Das Flussdiagramm der Fledermauslyssavirus-Diagnose in unserem Labor ist in Abbildung 1dargestellt.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>2.5% Trypsin (10x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15090046</td>
			<td>Trppsin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 cm2 flask</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>690160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>32201-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose I</td>
			<td>VWR Life Science</td>
			<td>97062-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>NIHON SHIYAKU REAGENT</td>
			<td>NS-32294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMV Reverse Transcriptase</td>
			<td>Promega</td>
			<td>M5101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic(100X)&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240-062</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blade</td>
			<td>Braun</td>
			<td>BA215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>5424R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemilumineance system</td>
			<td>TOP BIO CO.</td>
			<td>MGIS-21-C2-1M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection tube</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>990381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection tube</td>
			<td>SSI</td>
			<td>2341-SO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slide</td>
			<td>Muto Pure chemical Co., LTD.</td>
			<td>24505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA analyzer</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>3700XL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10437028</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Anti-Rabies Monoclonal Globulin</td>
			<td>Fujirebio Diagnostic Inc.</td>
			<td>800-092</td>
			<td>FITC-conjugated anti-rabies antibodies: reagent B</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Four-well Teflon-coating glass slide</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>30-86H-WHITE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel Electrophoresis System</td>
			<td>Major Science</td>
			<td>MJ-105-R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS (1x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14175095</td>
			<td>Trppsin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>ASTEC</td>
			<td>SCA-165DS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX71</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine 200 mM (100x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A2916801</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIGHT DIAGNOSTICS Rabies FAT reagent</td>
			<td>EMD Millipore Corporation</td>
			<td>5100</td>
			<td>FITC-conjugated anti-rabies antibodies: reagent A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagNA Pure Compact Instrument</td>
			<td>Roche</td>
			<td>03731146001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagNA Pure Compact NA Isolation Kit 1</td>
			<td>Roche</td>
			<td>03730964001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM (10x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11430030</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM NEAA (100x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140050</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM vitamin solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11120052</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.06329.0500</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>NN*2332R9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Medicago</td>
			<td>09-8912-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer synthesis</td>
			<td>Mission Biotech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNasin ribonuclease inhibitor</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N2111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sequencing service</td>
			<td>Mission Biotech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>AA00008032E00MNT10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate (100 mM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11360070</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Beads</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>69989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile absorbent pad</td>
			<td>3M</td>
			<td>1604T-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>171-0045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq polymerase</td>
			<td>JMR Holdings</td>
			<td>JMR-801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal cycler</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>2720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TissueLyser II</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>85300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tongue depressor</td>
			<td>HONJER CO., LTD.</td>
			<td>122246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezer</td>
			<td>Tennyson medical Instrument developing CO., LTD.</td>
			<td>A0601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tylosin Tartrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T6271-10G</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

standard operating procedure for lyssavirus surveillance of the bat population in taiwan

Viren innerhalb der Gattung Lyssavirus sind zoonotische Krankheitserreger, und mindestens sieben Lyssavirus-Arten sind mit menschlichen Fällen in Verbindung gebracht. Da Fledermäuse sind natürliche Reservoirs der meisten Lyssaviren, ein Lyssavirus-Überwachungsprogramm von Fledermäusen wurde in Taiwan seit 2008 durchgeführt, um die Ökologie dieser Viren bei Fledermäusen zu verstehen. In diesem Programm, nicht-staatliche Fledermaus-Schutz-Organisationen und lokale Tierseuchen-Kontrollzentren kooperierten, um tote Fledermäuse oder Fledermäuse sterben an Schwäche oder Krankheit zu sammeln. Gehirngewebe von Fledermäusen wurden durch Nekropsie erhalten und einem direkten fluoreszierenden Antikörpertest (FAT) und Reverse-Transkriptionspolymerase-Kettenreaktion (RT-PCR) zum Nachweis von Lyssavirus-Antigenen und Nukleinsäuren unterzogen. Für die FAT werden mindestens zwei verschiedene Tollwut-Diagnosekonjugate empfohlen. Für die RT-PCR werden zwei Primersätze (JW12/N165-146, N113F/N304R) verwendet, um eine Teilsequenz des Lyssavirus-Nukleoprotein-Gens zu verstärken. Dieses Überwachungsprogramm überwacht Lyssaviren und andere Zoonoseerreger bei Fledermäusen. Taiwan Fledermaus Lyssavirus ist in zwei Fällen der japanischen Pipistrelle gefunden (Pipistrellus abramus) in 2016–2017. Diese Ergebnisse sollten die Öffentlichkeit, Gesundheitsfachleute und Wissenschaftler über die potenziellen Risiken der Kontaktaufnahme mit Fledermäusen und anderen Wildtieren informieren.

Von 2014 bis Mai 2017 wurden 332 Fledermauskadaver von 13 Arten zur Überwachung gesammelt. Zwei positiv getestet. Im ersten Fledermausfall wurde der Hirnabdruck mit einem der kommerziellen FITC-konjugierten Antitollwut-Antikörper negativ getestet (Abbildung 2), während die RT-PCRs mit jedem der beiden Primer-Sets (JW12/N165-146, N113F/N304R) positive Ergebnisse (Abbildung 3). Es wurde eine 428 bp-Sequenz von Amplicon (verstärkt mit N113F/N304R und enthält d...

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Standard Operating Procedure for Lyssavirus Surveillance of the Bat Population in Taiwan

Dieses Protokoll führt ein Standard-Labor-Betriebsverfahren für diagnostische Tests von Lyssavirus-Antigenen bei Fledermäusen in Taiwan.

Standard-Betriebsverfahren für Lyssavirus-Überwachung der Fledermauspopulation in Taiwan

Viruses within the genus Lyssavirus are zoonotic pathogens, and at least seven lyssavirus species are associated with human cases. Because bats are ...

Lyssavirus ist ein Zoo-no-tic Pathogene. Um das Vorhandensein von Lyssavirus in taiwanesischen Fledermauspopulationen zu bewerten, haben wir ein Überwachungsprogramm initiiert. Und es identifizierte erfolgreich vier Lyssaviren von 2016 bis 2018.Dieses Protokoll ist eine schrittweise Einführung in die Überwachung des Lyssavirus in Taiwan. Wir hoffen, dass es für Forscher nützlich sein wird, die an der Überwachung des Lyssavirus interessiert sind. Es ist wichtig, das richtige Tac-Keg-Symbol zu verbinden.Eine tote oder sterbende Fledermaus ist besser geeignet als eine lebende Fledermaus für Lyssavirus Überwachung. Je nach den Biosicherheitsvorschriften des Landes, in dem sich das Labor befindet, führen Sie die folgenden Verfahren in einem geeigneten Labor auf Biosicherheitsebene durch. Und dafür sorgen, dass die Forscher derzeit qualifiziert sind und die richtige persönliche Schutzausrüstung tragen.Nach der Sammlung von schwachen oder kranken Fledermäusen oder Kadaver, haben ein FledermausÖkologe die Fledermausart durch die morphologischen Eigenschaften des Exemplars identifizieren. Übermitteln Sie dem Labor ein Informationsblatt, das den Sammelplatz, die Arten, die klinischen Zeichen und andere relevante Daten zu jeder Fledermausprobe enthält. Vor Beginn der Nekroskopie, untersuchen Sie alle äußeren Öffnungen und fotografieren die Fledermäuse äußere Merkmale, vor allem den Kopf, Ohren und Flügel für die Artendifferenzierung.Um eine orale Tupferprobe zu sammeln, legen Sie die Fledermaus in ventraler Rekumbency auf eine sterile Dissektionsplatte und fixieren Sie den Kopf mit einer Pinzette. Verwenden Sie ein Skalpell, um die Haut entlang der Mittellinie des Wadenbereichs zu schneiden; und ziehen Sie die Haut zu den Seitenseiten, um einen Schnitt im Schädel entlang der Mittellinie des Wadenbereichs zu machen. Öffnen Sie den Schädel mit einer Pinzette, um das Hirngewebe freizulegen, und verwenden Sie die Pinzette, um das Hirngewebe sanft vom verbundenen Nervengewebe zu trennen.Schneiden Sie den Querschnitt des Gehirns, einschließlich des Hirnstamms und des Kleinhirns, und berühren Sie die geschnittene Oberfläche des Hirngewebes leicht mit Glasdias, um Abstrichabdrücke zu machen. Drücken Sie das Dia auf Linsengewebe, um das überschüssige Gewebe zu entfernen und den Abstrich abdruckgleitet in minus 20 Grad Celsius Aceton für 30 Minuten. Dann fixieren Sie ein kleines Stück frisches Hirngewebe, in Formalin, für histopathologische Untersuchung.Und legen Sie den Rest des Gewebes in emi-em 10 für die Nukleinsäureextraktion. Als nächstes die Haut von der Mannigfaltigkeit zum Anus entlang der Mittellinie des Körpers zu schneiden, und verwenden Sie die Pinzette, um die Haut zu heben und zu trennen und Muskelgewebe zu unterstreichen;um die Sammlung der Speicheldrüsen zu ermöglichen, die sich in der Nähe des Unterkieferknochens befinden. Heben Sie das Brustbein mit der Pinzette leicht an, verwenden Sie das Skalpell, um das Brustbein und die Bauchwand entlang der Mittellinie zu schneiden und die Clavikeln zu schneiden.Verwenden Sie Nadeln, um den linken und rechten Rippenkäfig an der Sezierplatte zu befestigen, um die Brusthöhle zu öffnen. Und erfassen Sie die Brutto-Legionen und den Grad der Post-Mortem-Änderung. Verwenden Sie dann die Pinzette und das Skalpell, um das viszerale Gewebe entsprechend der geplanten Downstream-Analyse zu entfernen.Um am Ende der Fixierung einen direkten fluoreszierenden Antikörpertest durchzuführen, trocknen Sie die Abstrichabformdias und wählen Sie für die Analyse mindestens zwei fluoreszenzkonjugierte Antitollwut-Antikörper aus. Filtern Sie einen Antikörper auf jeden Dia durch ein 0,45 Mikrometer Sieb. Und die Rutschen 30 Minuten bei 37 Grad Celsius in einer feuchten Kammer bebrüten.Am Ende der Inkubation das überschüssige Konjugat abtropfen lassen und die Dias mit PBS waschen. Verwenden Sie dann ein kleines Volumen von 10% Glycerin, um Deckel-Slips auf die Dias zu montieren und die Dias mittels Fluoreszenzmikroskopie abzubilden. Wenn entweder der fluoreszierende Antikörpertest oder die RT-PCR-Analyse positiv angegeben ist, homogenisieren Sie die Gehirnprobe in der 10%-Suspension in emi-en 10 und sedimentieren Sie das Gewebe fleu-rry durch Zentrifugation.200 Mikroliter des Super-nat-en mit dreimal 10 bis 6. Maus-Neuroblastomzellen und einem Milliliter emi-en 10 für eine Stunde bei 37 Grad Celsius und 1% Kohlendioxid impfen. Und übertragen Sie die homogene Zellsuspension des Gehirns auf einen 25 Zentimeter quadratischen Kolben, der sechs Milliliter frischee emi-en 10 enthält. Bei einem Milliliter Hirnhomogenzellsuspension in einen vierwelligen Teflon-beschichteten Glasschlitten mit einem Durchmesser von sechs Millimetern und legen Sie den Schlitten drei bis vier Tage lang bei 37 Grad Celsius und 1% Kohlendioxid.Nach der Fixierung mit 100% Aceton, färben Sie die Dias mit den gleichen zwei fluoreszenz konjugierten Antitollwut-Antikörpern, wie sie für den Fluoreszenz-Antikörpertest verwendet werden. Und visualisieren Sie die Dias durch fluoreszierende Mikroskopie, um die Anzahl der Intracida-plas-mic Einschlüsse zu bestimmen. Nach der Trypsinisierung und Unterkultivierung der geimpften Zellkultur nach Standardprotokollen, kehren Sie die Kältekultur für weitere drei bis vier Tage in den Zellkultur-Inkubator zurück, wobei die Anzahl der infizierten Zellen wiederholt gezählt wird, wie gerade gezeigt, bis eine 100%ige Infektiosität erreicht ist.Von Januar 2014 bis Mai 2017 wurden 332 Fledermauskadaver von 13 Arten zur Überwachung gesammelt. In dieser repräsentativen Analyse von zwei positiven Fledermausfällen wurde der Hirneindruck negativ mit dem fluoreszierenden Antikörpertest mit einem der kommerziellen, fit-sy konjugierten Antitollwut-Antikörper getestet, während die RT-PCR, die jeden der beiden verschiedenen Primer-Sets verwendet, positive Ergebnisse lieferte. Die Unterwerfung der erhaltenen Ampli-con-Sequenz nach Sprengabfragen in der Gen-Bank-Datenbank ergab, dass die Sequenz Lyssaviren ähnelte, deren Identitäten weniger als 79 % der Identitäten der entdeckten Lyssaviren unterstützten.Zwei Lyssaviren wurden anschließend erfolgreich aus den beiden Gehirnen isoliert, wie durch Fluoreszenz-Antikörpertest und Sequenzierung bestätigt. Der schlüsselfertige Schritt zur Bestimmung der Lyssavirus-Positivität sind der Fluoreszenz-Antikörpertest und die RT-CPR-Analyse. Die Verwendung von zwei oder mehr Anti-Tollwut-Antikörpern in den Primer-Sets wird dringend empfohlen.Neben dem Lyssavirus können weitere Zoo-nicht-ical Fledermaus-Erreger mit geschlossenen diagnostischen Methoden überwacht werden. Die Daten können dann verwendet werden, um die Öffentlichkeit über die Vermeidung von Kontakt mit Fledermäusen zu informieren. Je mehr wir in der Lage sind, Fledermaus Lyssavirus zu studieren, desto mehr werden wir in der Lage sein, seine Entwicklung und Auswirkungen auf die öffentliche Gesundheit zu verstehen.

Research

JoVE Journal

Environment

A Small Volume Procedure for Viral Concentration from Water

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Small-scale concentration of viruses (sample volumes 1-10 L, here simulated with spiked 100 ml water samples) is an efficient, cost-effective way to ...

Forschung

Umwelt

Clean Sampling and Analysis of River and Estuarine Waters for Trace Metal Studies

Saubere Probenahme und Analyse von River und Estuarine Waters für Spurenmetallforschung

Most of the trace metal concentrations in ambient waters obtained a few decades ago have been considered unreliable owing to the lack of contamination ...

An Ultra-clean Multilayer Apparatus for Collecting Size Fractionated Marine Plankton and Suspended Particles

Eine Ultra-clean Multilayer Vorrichtung zum Sammeln von Größe fraktioniert Meeresplankton und Schwebeteilchen

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A Novel Method for the Pentosan Analysis Present in Jute Biomass and Its Conversion into Sugar Monomers Using Acidic Ionic Liquid

Eine neue Methode für die Analyse von Pentosan in Jute Biomasse und deren Umwandlung in Zucker Monomere mit sauren ionischen Flüssigkeit

Recently, ionic liquids (ILs) are used for biomass valorization into valuable chemicals because of their remarkable properties such as thermal stability, ...

Optimized Procedure for Determining the Adsorption of Phosphonates onto Granular Ferric Hydroxide using a Miniaturized Phosphorus Determination Method

Optimierte Verfahren zur Bestimmung der Adsorption von Phosphonaten auf Granular Ferric Hydroxid mit einer miniaturisierten Phosphor Entschlossenheit Methode

This paper introduces a procedure to investigate the adsorption of phosphonates onto iron-containing filter materials, particularly granular ferric ...

A Video Surveillance System to Monitor Breeding Colonies of Common Terns (Sterna Hirundo)

A Video Surveillance System to Monitor Breeding Colonies of Common Terns Sterna Hirundo

Ein Video-Überwachungssystem zur Überwachung Brutkolonien der Flussseeschwalben (Sterna Hirundo)

Many waterbird populations have faced declines over the last century, including the common tern (Sterna hirundo), a waterbird species with a widespread ...

Use of Autometallography to Localize and Semi-Quantify Silver in Cetacean Tissues

Verwendung von Autometallography zu lokalisieren und semi-Quantifizierung Silber im Wal Gewebe

Silver nanoparticles (AgNPs) have been extensively used in commercial products, including textiles, cosmetics, and health care items, due to their strong ...

A Telemetric, Gravimetric Platform for Real-Time Physiological Phenotyping of Plant&ndash;Environment Interactions

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Eine telemetrische, gravimetrische Plattform für die physiologische Phänotypisierung von Pflanzen-Umwelt-Interaktionen in Echtzeit

Food security for the growing global population is a major concern. The data provided by genomic tools far exceeds the supply of phenotypic data, creating ...

A Standardized Procedure for Monitoring Harmful Algal Blooms in Chile by Metabarcoding Analysis

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Harmful algae blooms (HABs) monitoring has been implemented worldwide, and Chile, a country famous for its fisheries and aquaculture, has intensively used ...

An Application for Pairing with Wearable Devices to Monitor Personal Health Status

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The current protocol aims to showcase the technology integration, providing a detailed description of adopting the HealthCloud app, developed by the ...