Name: standard operating procedure for lyssavirus surveillance of the bat population in taiwan
Uploaded: 2019-08-27T13:30:00
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이 연구에서 티엔청 리, 이탕 린, 치아정 차이, 야란 리에게 도움을 주신 것에 감사드립니다. 이 연구는 보조금 번호에 의해 지원되었다 107AS-8.7.1-BQ-B2 (1) 동물 및 식물 건강 검사 및 검역국에서, 농업위원회, 집행 위안, 대만.

1. 리사바이러스 취급 시 안전주의사항
<ol><li>박쥐 표본을 취급하는 모든 실험실 노동자가 사전 노출 광견병 예방17을수신한다는 것을 확인합니다. 작업자의 광견병 항체 수준을 사전에 모니터링하고 6 개월마다17개월마다 다시 검사하십시오. 후속 광견병 예방 접종은 항체 수준이 0.5 IU / mL17보다낮은 사람들을 위해 필요합니다.</li>
	<li>실험?...

<ol>
	<li>Kuzmin, I. V., Rupprecht, C. E., Nagarajan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+facts+about+lyssavirus.">Basic facts about lyssavirus.</a> Current laboratory techniques in rabies diagnosis, research, and prevention, volume 1. , 3-21 (2014).</li><li>Ar&#233;chiga Ceballos, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+lyssavirus+in+bat,+Spain.">Novel lyssavirus in bat, Spain.</a> Emerging Infectious Diseases. 19 (5), 793-795 (2013).</li><li>Gunawardena, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+in+Indian+Flying+Foxes,+Sri+Lanka.">Lyssavirus in Indian Flying Foxes, Sri Lanka.</a> Emerging Infectious Diseases. 22 (8), 1456-1459 (2016).</li><li>Hu, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+in+Japanese+Pipistrelle,+Taiwan.">Lyssavirus in Japanese Pipistrelle, Taiwan.</a> Emerging Infectious Diseases. 24 (4), 782-785 (2018).</li><li>Nokireki, T., Tammiranta, N., Kokkonen, U. -. M., Kantala, T., Gadd, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tentative+novel+lyssavirus+in+a+bat+in+Finland.">Tentative novel lyssavirus in a bat in Finland.</a> Transboundary Emerging Diseases. 65 (3), 593-596 (2018).</li><li>Banyard, A. C., Evans, J. S., Luo, T. R., Fooks, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssaviruses+and+bats:+emergence+and+zoonotic+threat.">Lyssaviruses and bats: emergence and zoonotic threat.</a> Viruses. 6 (8), 2974-2990 (2014).</li><li>Pal, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+virus+infection+of+a+flying+fox+bat,+Pteropus+policephalus+in+Chandigarh,+Northern+India.">Rabies virus infection of a flying fox bat, Pteropus policephalus in Chandigarh, Northern India.</a> Tropical and Geographical Medicine. 32 (3), 265-267 (1980).</li><li>Smith, P. C., Lawhaswasdi, K., Vick, W. E., Stanton, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+rabies+virus+from+fruit+bats+in+Thailand.">Isolation of rabies virus from fruit bats in Thailand.</a> Nature. 216 (5113), 384 (1967).</li><li>Tang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pivotal+role+of+dogs+in+rabies+transmission,+China.">Pivotal role of dogs in rabies transmission, China.</a> Emerging Infectious Diseases. 11 (12), 1970-1972 (2005).</li><li>Kuzmin, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bat+lyssaviruses+(Aravan+and+Khujand)+from+Central+Asia:+phylogenetic+relationships+according+to+N,+P+and+G+gene+sequences.">Bat lyssaviruses (Aravan and Khujand) from Central Asia: phylogenetic relationships according to N, P and G gene sequences.</a> Virus Research. 97 (2), 65-79 (2003).</li><li>Arguin, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serologic+evidence+of+Lyssavirus+infections+among+bats,+the+Philippines.">Serologic evidence of Lyssavirus infections among bats, the Philippines.</a> Emerging Infectious Diseases. 8 (3), 258-262 (2002).</li><li>Lumlertdacha, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survey+for+bat+lyssaviruses,+Thailand.">Survey for bat lyssaviruses, Thailand.</a> Emerging Infectious Diseases. 11 (2), 232-236 (2005).</li><li>Kuzmin, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+surveillance+in+bats,+Bangladesh.">Lyssavirus surveillance in bats, Bangladesh.</a> Emerging Infectious Diseases. 12 (3), 486-488 (2006).</li><li>Reynes, J. -. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serologic+evidence+of+lyssavirus+infection+in+bats,+Cambodia.">Serologic evidence of lyssavirus infection in bats, Cambodia.</a> Emerging Infectious Diseases. 10 (12), 2231-2234 (2004).</li><li>Nguyen, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bat+lyssaviruses,+northern+Vietnam.">Bat lyssaviruses, northern Vietnam.</a> Emerging Infectious Diseases. 20 (1), 161-163 (2014).</li><li>Liu, Y., Zhang, S., Zhao, J., Zhang, F., Hu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Irkut+virus+from+a+Murina+leucogaster+bat+in+China.">Isolation of Irkut virus from a Murina leucogaster bat in China.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 7 (3), 2097 (2013).</li><li>Kaplan, M. M., Meslin, F. X., Kaplan, M. M., Kiprowski, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+precautions+in+handling+rabies+virus.">Safety precautions in handling rabies virus.</a> Laboratory Techniques in Rabies, 4th Ed. , 3-8 (1996).</li><li>Smith, I., Wang, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bats+and+their+virome:+an+important+source+of+emerging+viruses+capable+of+infecting+humans.">Bats and their virome: an important source of emerging viruses capable of infecting humans.</a> Current Opinion in Virology. 3 (1), 84-91 (2013).</li><li>Corbet, G. B., Hill, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The mammals of the Indomalayan region: a systematic review. , (1992).</li><li>Mayer, F., von Helversen, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryptic+diversity+in+European+bats.">Cryptic diversity in European bats.</a> Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 268 (1478), 1825-1832 (2001).</li><li>Epstein, J. H., Field, H. E., Wang, L. F., Cowled, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthropogenic+epidemics:+the+ecology+of+bat-borne+viruses+and+our+role+in+their+emergence.">Anthropogenic epidemics: the ecology of bat-borne viruses and our role in their emergence.</a> Bats and viruses: a new frontier of emerging infectious diseases. , 249-280 (2016).</li><li>. Protocol for postmortem diagnosis of rabies in animals by direct fluorescent antibody testing Available from: <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf">https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf</a> (2019)</li><li>Hayman, D. T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+universal+real-time+assay+for+the+detection+of+Lyssaviruses.">A universal real-time assay for the detection of Lyssaviruses.</a> Journal of Virological Methods. 177 (1), 87-93 (2011).</li><li>Franka, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+phylogenetic+lineage+of+rabies+virus+associated+with+western+pipistrelle+bats+(Pipistrellus+hesperus).">A new phylogenetic lineage of rabies virus associated with western pipistrelle bats (Pipistrellus hesperus).</a> Journal of General Virology. 87 (8), 2309-2321 (2006).</li><li>Trimarchi, C. V., Smith, J. S., Press, A., Jackson, A. C., Wunner, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+evaluation.">Diagnostic evaluation.</a> Rabies, 1st ed. , 307-349 (2002).</li><li>Moldal, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+detection+of+European+bat+lyssavirus+type+2+(EBLV-2)+in+Norway.">First detection of European bat lyssavirus type 2 (EBLV-2) in Norway.</a> BMC Veterinary Research. 13, 216 (2017).</li><li>Robardet, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+assay+of+fluorescent+antibody+test+results+among+twelve+European+National+Reference+Laboratories+using+various+anti-rabies+conjugates.">Comparative assay of fluorescent antibody test results among twelve European National Reference Laboratories using various anti-rabies conjugates.</a> Journal of Virological Methods. 191 (1), 88-94 (2013).</li><li>Hanlon, C. A., Nadin-Davis, S. A., Jackson, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+diagnosis+of+rabies.">Laboratory diagnosis of rabies.</a> Rabies, 3rd ed. , 409-459 (2013).</li><li>Fischer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+step+forward+in+molecular+diagnostics+of+lyssaviruses--results+of+a+ring+trial+among+European+laboratories.">A step forward in molecular diagnostics of lyssaviruses--results of a ring trial among European laboratories.</a> PLoS ONE. 8 (3), 58372 (2013).</li><li>David, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+virus+detection+by+RT-PCR+in+decomposed+naturally+infected+brains.">Rabies virus detection by RT-PCR in decomposed naturally infected brains.</a> Veterinary Microbiology. 87 (2), 111-118 (2002).</li><li>Robardet, E., Picard-Meyer, E., Andrieu, S., Servat, A., Cliquet, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+interlaboratory+trials+on+rabies+diagnosis:+an+overview+of+results+and+variation+in+reference+diagnosis+techniques+(fluorescent+antibody+test,+rabies+tissue+culture+infection+test,+mouse+inoculation+test)+and+molecular+biology+techniques.">International interlaboratory trials on rabies diagnosis: an overview of results and variation in reference diagnosis techniques (fluorescent antibody test, rabies tissue culture infection test, mouse inoculation test) and molecular biology techniques.</a> Journal of Virological Methods. 177 (1), 15-25 (2011).</li></ol>

이 실험실 표준 작동 절차 (SOP)는 대만에서 lyssavirus 항원의 존재에 대한 박쥐 샘플을 테스트하기위한 직렬 프로세스를 제공합니다. 주요 단계는 FAT 및 RT-PCR의 고용을 포함한다. 적합한 샘플의 선택과 바이러스의 성공적인 격리도 중요합니다. 또한 박쥐 라사바이러스를 모니터링하는 동안 일부 트러블슈팅이 수행되었습니다. 가장 큰 차이점은 대상 동물이었다. 처음에 (2008-2009), 박쥐 lyssavirus 감시?...

속 Lyssavirus 내의 바이러스는 동물성 병원체입니다. 인간 케이스와 관련되었던 적어도 7개의 lyssavirus 종이있습니다1. 이 속의 16 종 이외에1,2,3,대만 박쥐 리사 바이러스 (TWBLV)4 및 코탈라티 박쥐 리사 바이러스5 최근 박쥐에서 확인 되었습니다., 하지만 그들의 분류 학적 상태는 아직 결정됩니다.
박쥐는 모콜라 리사 바이러스와 이코마 리사 바이러스를 제외하고 대부분의 리사 바이러스의 자연 숙주이며, 아직 박쥐1,2,3,6에서확인되지 않았습니다. 아시아 박쥐의 lyssaviruses에 대한 정보는 여전히 제한되어 있습니다. 아시아 박쥐 (인도와 태국에서 다른 하나)에서 두 개의 특성이없는 lyssaviruses7,8이보고되었습니다. 2002년에 중국에서 박쥐물린과 관련된 한 인간의 광견병 사례가 보고되었지만, 진단은 임상 관찰9에의해서만 이루어졌다. 중앙아시아에서는 1991년 키르기스스탄의 작은 쥐귀박쥐(Myotis blythi)에서아라반 리사바이러스가 확인되었고, 쿠자드 리사바이러스는 2001년 타지키스탄에서 수염박쥐(Myotismystacinus)에서확인되었다. 남아시아에서는 2015년 스리랑카의 인도 비행 여우(Pteropusmedius)에서간노루와 박쥐 리사바이러스가 확인되었다 3. 동남 아시아에서, 필리핀, 태국, 방글라데시, 캄보디아, 베트남에서 박쥐에 대한 여러 혈청학 연구는 가변 혈청 11,12,13,14, 15. 이르쿠트 리사바이러스는 2012년 중국 지린성에서 더 큰 튜브코가트(Murinaleucogaster)에서확인되었지만, 동아시아 박쥐 집단의 정확한 종과 위치는 아직 알려지지 않았다.
대만 박쥐 인구에 있는 lyssavirus의 존재를 평가하기 위하여는, 직접 FAT와 RT-PCR를 둘 다 채택한 감시 프로그램이 시작되었습니다. 대만 박쥐 리사바이러스는 2016~2017년 일본 피피스트렐(Pipistrellusabramus)4의 두 사례에서 확인되었다. 본 기사에서는 대만의 박쥐 인구의 lyssavirus 감시를 위해 실험실 표준 운영 절차가 도입되었습니다. 우리의 실험실에서 박쥐 lyssavirus 진단의 흐름도는 그림1에 제시되어 있습니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>2.5% Trypsin (10x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15090046</td>
			<td>Trppsin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 cm2 flask</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>690160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>32201-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose I</td>
			<td>VWR Life Science</td>
			<td>97062-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>NIHON SHIYAKU REAGENT</td>
			<td>NS-32294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMV Reverse Transcriptase</td>
			<td>Promega</td>
			<td>M5101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic(100X)&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240-062</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blade</td>
			<td>Braun</td>
			<td>BA215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>5424R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemilumineance system</td>
			<td>TOP BIO CO.</td>
			<td>MGIS-21-C2-1M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection tube</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>990381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection tube</td>
			<td>SSI</td>
			<td>2341-SO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slide</td>
			<td>Muto Pure chemical Co., LTD.</td>
			<td>24505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA analyzer</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>3700XL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10437028</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Anti-Rabies Monoclonal Globulin</td>
			<td>Fujirebio Diagnostic Inc.</td>
			<td>800-092</td>
			<td>FITC-conjugated anti-rabies antibodies: reagent B</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Four-well Teflon-coating glass slide</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>30-86H-WHITE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel Electrophoresis System</td>
			<td>Major Science</td>
			<td>MJ-105-R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS (1x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14175095</td>
			<td>Trppsin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>ASTEC</td>
			<td>SCA-165DS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX71</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine 200 mM (100x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A2916801</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIGHT DIAGNOSTICS Rabies FAT reagent</td>
			<td>EMD Millipore Corporation</td>
			<td>5100</td>
			<td>FITC-conjugated anti-rabies antibodies: reagent A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagNA Pure Compact Instrument</td>
			<td>Roche</td>
			<td>03731146001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagNA Pure Compact NA Isolation Kit 1</td>
			<td>Roche</td>
			<td>03730964001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM (10x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11430030</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM NEAA (100x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140050</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM vitamin solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11120052</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.06329.0500</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>NN*2332R9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Medicago</td>
			<td>09-8912-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer synthesis</td>
			<td>Mission Biotech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNasin ribonuclease inhibitor</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N2111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sequencing service</td>
			<td>Mission Biotech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>AA00008032E00MNT10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate (100 mM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11360070</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Beads</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>69989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile absorbent pad</td>
			<td>3M</td>
			<td>1604T-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>171-0045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq polymerase</td>
			<td>JMR Holdings</td>
			<td>JMR-801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal cycler</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>2720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TissueLyser II</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>85300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tongue depressor</td>
			<td>HONJER CO., LTD.</td>
			<td>122246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezer</td>
			<td>Tennyson medical Instrument developing CO., LTD.</td>
			<td>A0601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tylosin Tartrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T6271-10G</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

standard operating procedure for lyssavirus surveillance of the bat population in taiwan

속 Lyssavirus 내의 바이러스는 동물성 병원체이고, 적어도 7개의 lyssavirus 종은 인간적인 케이스와 연관됩니다. 박쥐는 대부분의 lyssaviruses의 자연 저수지이기 때문에, 박쥐의 lyssavirus 감시 프로그램은 박쥐에 있는 이 바이러스의 생태를 이해하기 위하여 2008년부터 대만에서 실시되었습니다. 이 프로그램에서는 비정부 박쥐 보호 단체와 지역 동물 질병 통제 센터가 협력하여 약점이나 질병으로 죽어가는 죽은 박쥐 나 박쥐를 수집했습니다. 박쥐의 뇌 조직은 부검을 통해 수득되었고, 용해바이러스 항원 및 핵산의 검출을 위해 직접 형광 항체 검사(FAT) 및 역전사 중합효소 연쇄 반응(RT-PCR)을 실시하였다. FAT를 위해, 적어도 2개의 다른 광견병 진단 접합관이 추천됩니다. RT-PCR의 경우, 두 세트의 프라이머(JW12/N165-146, N113F/N304R)가 용이사바이러스 핵단백질 유전자의 부분 서열을 증폭시키는 데 사용된다. 이 감시 프로그램은 박쥐에서 lyssaviruses 및 기타 동물 성 에이전트를 모니터링합니다. 대만 박쥐 리사바이러스는 2016-2017년 일본 피피스트렐(Pipistrellusabramus)의두 사례에서 발견된다. 이 사실 인정은 박쥐 및 그밖 야생 동물을 접촉의 잠재적인 리스크의 대중, 건강 전문가 및 과학자를 알려야 합니다.

2014년부터 2017년 5월까지 13종의 박쥐 시체 332마리가 감시를 위해 수집되었습니다. 두 가지 양성 반응을 나타. 첫 번째 박쥐 의 경우, 뇌 인상은 상용 FITC-컨쥬게이트 항 광견병 항체중 하나와 FAT를 사용하여 부정적인 테스트 (그림 2), 두 프라이머 세트의 각각을 사용하는 RT-PCR 동안 (JW12 / N165-146, N113F / N304R) 산출 긍정적 인결과 (그림 3). 428 bp 의 앰플리컨 ...

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Standard Operating Procedure for Lyssavirus Surveillance of the Bat Population in Taiwan

이 프로토콜은 대만의 박쥐에서 lyssavirus 항원의 진단 테스트를위한 표준 실험실 운영 절차를 소개합니다.

대만 박쥐 인구의 Lyssavirus 감시를위한 표준 운영 절차

Viruses within the genus Lyssavirus are zoonotic pathogens, and at least seven lyssavirus species are associated with human cases. Because bats are ...

리사바이러스는 동물원이 없는 병원균입니다. 대만 박쥐 인구에서 Lyssavirus의 존재를 평가하기 위해, 우리는 감시 프로그램을 시작했다. 그리고 2016년부터 2018년까지 4개의 리사바이러스를 성공적으로 확인했습니다.이 프로토콜은 대만의 vi-al Lysavirus 감시에 대한 단계별 소개입니다. 우리는 vi-al Lyssavirus 감시에 관심이있는 연구에 유용 할 수 있기를 바랍니다. 올바른 탁통 기호를 연결하는 것이 중요합니다.죽은 박쥐 또는 죽어가는 박쥐는 Lyssavirus 감시를위한 라이브 박쥐보다 더 적합합니다. 실험실이 위치한 국가의 바이오 안전 규정에 따라 적절한 생체 안전 수준 실험실에서 다음과 같은 절차를 수행합니다. 그리고 연구원이 현재 자격을 갖추고 적절한 개인 보호 장비를 착용하도록 하십시오.약하거나 아픈 박쥐 또는 시체의 수집시, 박쥐 생태학자는 표본의 형태학적 특성에 의해 박쥐 종을 식별해야합니다. 수집 부위, 종, 임상 징후 및 각 박쥐 표본과 함께 기타 관련 데이터를 포함하여 실험실에 정보 시트를 제출하십시오. 괴사 검사를 시작하기 전에 모든 외부 오리피스를 검사하고 박쥐 외부 기능, 특히 종 분화를위한 머리, 귀 및 날개를 촬영합니다.구강 면봉 샘플을 수집하려면 멸균 해부 보드에 복부 용재에 박쥐를 배치하고 핀셋으로 머리를 고정합니다. 메스를 사용하여 종아리 부위의 중간선을 따라 피부를 자르고, 피부를 측면으로 끌어당겨 종아리 부위의 중간선을 따라 두개골에 절개를 합니다. 핀셋으로 두개골을 열어 뇌 조직을 노출시키고 핀셋을 사용하여 뇌 조직을 연결된 신경 조직으로부터 부드럽게 분리합니다.뇌의 단면을 자르고 뇌 의 줄기와 소뇌를 포함한 절단을 가볍게 유리 슬라이드로 뇌 조직의 절단 표면을 터치하여 얼룩 인상을 줍니다. 렌즈 조직의 슬라이드를 눌러 과도한 조직을 제거하고 30 분 동안 영하 20도 아세톤에서 얼룩 인상 슬라이드를 수정합니다. 그런 다음 포르말린에서 조직 병리학 검사를 위해 신선한 뇌 조직의 작은 조각을 수정합니다.그리고 핵산 추출을 위해 나머지 조직을 emi-em 10에 배치한다. 다음으로, 바디의 중간선을 따라 항문에 매니폴드에서 피부를 절개하고, 핀셋을 사용하여 피부를 들어 올리고 분리하고 근육 조직을 밑줄로; 하악 뼈 근처에 있는 타액 땀샘의 수집을 허용합니다. 핀셋으로 흉골을 약간 들어 올리고 메스를 사용하여 흉골과 복부 벽을 중간선을 따라 자르고 클라비클을 자른다.바늘을 사용하여 왼쪽과 오른쪽 갈비뼈케이지를 해부 보드에 고정하여 흉부 구멍을 엽니다. 그리고 총 군단과 사후 모템 변화의 정도를 기록합니다. 그런 다음 핀셋과 메스를 사용하여 계획된 다운스트림 분석에 적합한 내장 조직을 제거합니다.고정의 끝에 직접 형광 항체 테스트를 수행하기 위해, 얼룩 인상 슬라이드를 건조하고 분석을 위해 적어도 두 개의 형광 접합 항광견 병 항체를 선택합니다. 0.45 마이크로미터 여과기를 통해 각 슬라이드에 하나의 항체를 필터링합니다. 그리고 습한 챔버에서 섭씨 37도에서 30 분 동안 슬라이드를 배양하십시오.인큐베이션이 끝나면 여분의 컨쥬게이트를 빼내고 PBS로 슬라이드를 씻으십시오. 그런 다음 소량의 10%의 글리세롤을 사용하여 커버 슬립을 슬라이드에 장착하고 형광 현미경 으로 슬라이드를 이미지합니다. 형광 항체 검사 또는 RT-PCR 분석이 양성을 나타내는 경우, emi-en 10에서 10% 현탁액에서 뇌 표본을 균질화하고 퇴적조직은 원심분리에 의해 조직을 벼룩-리리를 날화한다.슈퍼 낫엔의 마이크로리터 200개에 3회 10~6번째 마우스 신경모세포종 세포와 37°C에서 1시간 동안 에미앙 10밀리리터를 37°C와 이산화탄소 1%로 접종하였다. 그리고 뇌균질 세포 현탁액을 25센티미터 제곱 플라스크로 옮기고, 신선한 emi-en 10의 6밀리리터를 함유한다. 직경 6mm의 테플론 코팅 유리 슬라이드로 뇌 균질 세포 서스펜션의 1 밀리리터에서 3 ~4 일 동안 섭씨 37도 및 1 %의 이산화탄소로 슬라이드를 배치합니다.100% 아세톤으로 고정한 후, 형광 항체 검사에 사용되는 것과 동일한 두 개의 형광으로 슬라이드를 염색한다. 그리고 형광 현미경 검사법에 의해 슬라이드를 시각화하여 내산성 플라스 마이크 포함의 수를 결정합니다. 표준 프로토콜에 따라 접종된 세포 배양을 트립시화 및 하위 배양한 후, 100%의 감염성에 도달할 때까지 입증된 바와 같이 감염된 세포의 수를 반복적으로 계산하여 3~4일 동안 세포 배양 배양에 감기 배양을 반환한다.2014년 1월부터 2017년 5월까지 13종의 박쥐 시체가 332마리의 시체가 수집되었습니다. 2개의 양성 박쥐 케이스의 이 대표적인 분석에서, 뇌 인상은 상업적, 적합 sy 공주 항광견 항체 중 하나를 가진 형광 항체 시험을 사용하여 부정적인 시험, RT-PCR는 각각 2개의 다른 프라이머 세트를 채택하는 동안, 긍정적인 결과를 산출했습니다. Gen bank 데이터베이스에서 스래스팅 쿼리를 폭발시키는 데 얻어진 증폭기 서열의 주관은 시퀀스가 검출된 Lysaviruses의 ID를 지원하는 79% 미만의 ID를 가진 리사바이러스와 유사하다는 것을 밝혀냈습니다.2개의 Lyssaviruses는 형광 항체 시험 및 순서에 의해 확인된 대로 그 후에 성공적으로 두 개의 두뇌에서 격리되었습니다. Lyssavirus 양성을 결정하기 위한 중요한 단계는 형광 항체 시험 및 RT-CPR 분석입니다. 프라이머 세트에서 두 개 이상의 항광견 항체를 사용하는 것이 좋습니다.Lyssavirus 이외에 다른 동물원 -비-서적인 박쥐 병원체폐쇄 진단 방법을 사용 하 여 모니터링할 수 있습니다. 그런 다음 데이터를 사용하여 대중에게 박쥐와의 접촉을 피하는 것에 대해 알릴 수 있습니다. 우리가 박쥐 Lyssavirus를 연구할 수록, 우리는 그것의 진화와 공중 보건에 미치는 영향을 더 이해할 수 있을 것입니다.

Research

JoVE Journal

Environment

A Small Volume Procedure for Viral Concentration from Water

물에서 바이러스 농도에 대한 작은 볼륨 절차

Small-scale concentration of viruses (sample volumes 1-10 L, here simulated with spiked 100 ml water samples) is an efficient, cost-effective way to ...

연구

환경과학

Clean Sampling and Analysis of River and Estuarine Waters for Trace Metal Studies

클린 샘플링 및 추적 금속 연구 강 하구 바다의 분석

Most of the trace metal concentrations in ambient waters obtained a few decades ago have been considered unreliable owing to the lack of contamination ...

An Ultra-clean Multilayer Apparatus for Collecting Size Fractionated Marine Plankton and Suspended Particles

크기 분류 한 해양 플랑크톤과 중단된 한 입자를 수집 하기 위해 매우 깨끗 한 다층 기구

The distributions of many trace elements in the ocean are strongly associated with the growth, death, and re-mineralization of marine plankton and those ...

A Novel Method for the Pentosan Analysis Present in Jute Biomass and Its Conversion into Sugar Monomers Using Acidic Ionic Liquid

당 분석에 대 한 새로운 방법을 황 바이오 매스 및 산 성 이온 성 액체를 사용 하 여 설탕 단위체로 그것 변환에

Recently, ionic liquids (ILs) are used for biomass valorization into valuable chemicals because of their remarkable properties such as thermal stability, ...

Optimized Procedure for Determining the Adsorption of Phosphonates onto Granular Ferric Hydroxide using a Miniaturized Phosphorus Determination Method

소형 인 결정 방법을 사용 하 여 세분화 된 제 2 철 수산화에 Phosphonates의 흡착을 결정 하기 위한 최적화 된 절차

This paper introduces a procedure to investigate the adsorption of phosphonates onto iron-containing filter materials, particularly granular ferric ...

A Video Surveillance System to Monitor Breeding Colonies of Common Terns (Sterna Hirundo)

A Video Surveillance System to Monitor Breeding Colonies of Common Terns Sterna Hirundo

일반적인 제비 갈매기 (Hirundo)의 식민지를 사육을 모니터링 하는 영상 감시 시스템

Many waterbird populations have faced declines over the last century, including the common tern (Sterna hirundo), a waterbird species with a widespread ...

Use of Autometallography to Localize and Semi-Quantify Silver in Cetacean Tissues

지역화를 Autometallography 및 Cetacean 조직에 실버 반 계량의 사용

Silver nanoparticles (AgNPs) have been extensively used in commercial products, including textiles, cosmetics, and health care items, due to their strong ...

A Telemetric, Gravimetric Platform for Real-Time Physiological Phenotyping of Plant&ndash;Environment Interactions

A Telemetric, Gravimetric Platform for Real-Time Physiological Phenotyping of PlantÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬Å“Environment Interactions

식물-환경 상호 작용의 실시간 생리적 페노티핑을 위한 텔레메트릭, 중력 플랫폼

Food security for the growing global population is a major concern. The data provided by genomic tools far exceeds the supply of phenotypic data, creating ...

A Standardized Procedure for Monitoring Harmful Algal Blooms in Chile by Metabarcoding Analysis

메타바코딩 분석을 통해 칠레의 유해한 조류 꽃을 모니터링하기 위한 표준화된 절차

Harmful algae blooms (HABs) monitoring has been implemented worldwide, and Chile, a country famous for its fisheries and aquaculture, has intensively used ...

An Application for Pairing with Wearable Devices to Monitor Personal Health Status

개인 건강 상태를 모니터링하기 위해 웨어러블 장치와 페어링하는 응용 프로그램

The current protocol aims to showcase the technology integration, providing a detailed description of adopting the HealthCloud app, developed by the ...